实验一 糖的呈色反应ppt课件

Molish反应
• 操作方法 • 取试管，编号，分别加入各待测糖溶液1 mL，然后加两滴Molish试剂，摇匀。倾斜 试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切 勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交 界处的颜色变化。用水代替糖溶液，重复 一遍，观察结果。
II、蒽 酮 反 应
实验原理:糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮 （10-酮-9，10-二氢蒽）作用生成蓝绿色复合物。该复合 物在630nm有最大的吸收峰，并且在一定范围内，颜色 与糖量的多少成正比，该方法可以用于测定几乎所有碳水 化合物的含量，包括戊糖、己糖，多糖等。
I、Molish反应——α-萘酚反应
实验原理:糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成 糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物， 在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫 环反应。
O H
O H H O H C 2 C
O
糖
H S O 浓 2 4
2
H O H C 2
O
O
C H O
H S O 浓 2 4
蒽 酮 反 应
• 操作方法 • 取试管，编号，均加入1ml蒽酮溶液，再向 各管滴加2 ~ 3滴待测糖溶液，充分混匀， 观察各管颜色变化并记录。
III、酮糖的Seliwanoff反应
（西列瓦诺夫反应） 实验原理:酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲 基糠醛。后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物， 反应仅需20-30秒。醛糖在浓度较高时或长时间煮 沸，才产生微弱的阳性反应。 该反应是鉴定酮糖的特殊反应。 果糖与Seliwanoff试剂反应非常迅速，呈鲜红色， 而葡萄糖所需时间较长，且只能产生黄色至淡黄 色。戊糖亦与Seliwanoff试剂反应，戊糖经酸脱 水生成糠醛，与间苯二酚缩合，生成绿色至蓝色 产物。 酮基本身没有还原性，只有在变成烯醇式后，才 显示还原作用。
Benedict试验
• 操作方法 • 取试管，编号，分别加入2mL Benedict试 剂和4滴待测糖溶液，沸水浴中加热5分钟， 取出后冷却，观察各管中的颜色变化。
VI、Barfoed试验
（巴弗德氏试剂 ）
实验原理：在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还 原速度有明显差异。Barfoed试剂为弱酸性。单 糖在Barfoed试剂的作用下能将Cu2+还原成砖红 色的氧化亚铜，时间约为3分钟，而还原二糖则需 20分钟左右。所以，该反应可用于区别单糖和还 原二糖。当加热时间过长，非还原性二糖经水解 后也能呈现阳性反应。
Fehling试验反应过程
将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化 铜沉淀：2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4
在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络 合物酒石酸钾钠铜：
在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒 石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：
糖酸
Fehling试验
• 操作方法 • 取试管，编号，各加入Fehlin试剂甲和乙 1mL。摇匀后，分别加入4滴待测糖溶液， 置沸水浴中加热2 ~ 3min，取出冷却，观察 沉淀和颜色变化。
V、Benedict试验
（本尼迪特试验） • 实验原理：Benedict试剂是Fehling试剂 的改良。Benedict试剂利用柠檬酸作为 Cu2+的络合剂，其碱性较Fehling试剂弱， 灵敏度高，干扰因素少。
实验一 糖的呈色反应
目的要求
(1) 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法 (2) 了解鉴定还原糖的方法及其原理
糖相关知识
• 单糖中的果糖是酮糖，而葡萄糖是醛糖。 • 所有的单糖都是还原糖； • 还原性的二糖有乳糖和麦芽糖，蔗糖是非 还原性二糖。
糖的呈色反应和定性鉴定
Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应 Ⅱ. 蒽酮反应 Ⅲ. 酮糖的Seliwanoff反应 Ⅳ. Fehling试验 Ⅴ. Benedict试验 Ⅵ. Barfoed试验
羟 甲 基 糠 醛
H O S 3
S O H 3 O H
糠醛 紫红色复合物
Molish反应
α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香 草酚溶液比较稳定，其灵敏度与α- 萘酚一样。 单糖、双糖、多糖一般都发生此反应，但氨基糖不发生 此反应。丙酮、甲酸、乳酸、草酸、葡萄糖醛酸、各种醛 糖衍生物、甘油醛等均产生近似的颜色反应。因此，阴性 反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖 存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确 定有糖的存在。 Molish反应非常灵敏，0.001％葡萄糖和0.0001％蔗糖 即能呈现阳性反应。因此，不可在样品中混入纸屑等杂物。 当果糖浓度过高时，由于浓硫酸对它的焦化作用，将呈现 红色及褐色而不呈紫色，需稀释后再做。
在测定水溶性碳水化合物含量时切勿将未溶解的沉淀部分 混入试剂中，否则会将细胞壁中的纤维和半纤维素混入样 品，造成所测定值的升高。 不同的糖类与蒽酮试剂反应后的颜色深度不同，果糖显色 最深，葡萄糖次之，半乳糖和甘露糖较浅，五碳糖更浅， 故在测定混合糖的含量时会应为混合物中不同糖的比例不 同造成误差。在测定单一糖类的时候可避免此类的误差。
酮糖的Seliwanoff反应
• 操作方法 • 取试管，编号，各加入Sediwanoff试剂1mL， 再依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀， 同时放入沸水浴中，比较各管颜色的变化 过程。
IV、Fehling试验
实验原理:费林试剂是含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶 液。硫酸铜与碱溶液混合加热，则生成黑色的来自百度文库化铜沉淀。 若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。 由于沉淀的速度不同，而形成的颗粒大小也不同，颗粒大的 为红色，颗粒小的为黄色。 为防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀， Fehlin试剂中加入酒石酸钾钠，它与Cu2＋形成的酒石酸钾钠 络合铜离子是可溶性的络离子，该反应是可逆的。平衡后溶 液内保持一定浓度的氢氧化铜。 费林试剂是一种弱的氧化剂，它不与酮和芳香醛发生反应。