提高Lipofectamine2000对PC12细胞转染效率的研究

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结果 ①对ＰＣ１２细胞转染，ＤＮＡ：Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００用量比例应控制在ｌ：４。② 当转染时间分别为１、２、４、８、２４ｈ时．ＰＣｌ２细胞转染率分别为３５．５％、３７．９％、４０．５％、４０．３％及３８．６％，４ｈ达到最大转染效率。 ③ 氯喹、亚精胺加入浓
・
论
著・
中同医药导报２０１４年１月第１１卷第３期
Ｃ１２细胞转染效率的Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００对Ｐ提高研究
邱烨
பைடு நூலகம்
浙江省湖州市南浔区中西医结合医院检验科，浙江湖卅ｌ３１３００９
度（５９０ｎｍ）分别为（０．４６６￣０．０４２）与（０．４５１￣０．０３８），差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），对ＰＣ１２细胞的活性无影响。
⑤ 加入氯喹、亚精胺前、后，ＰＣｌ２细胞的神经轴突生长数量与长度差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。ＦｕＧＥＮＥ、
ＰｏｌｖＪｅｔ、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＬＴＸａｎｄＰｌｕｓ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００４种脂质体转染试剂对ＰＣ１２细胞转染效率分别为１０．５％、８．６％、１１．８％及１５．３％．本法ＰＣ１２细胞转染率为４０．５％，差异有高度统计学意义（Ｐ＜０．０１）。结论加入氯喹及亚精胺，实现阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００对ＰＣ１２细胞的高效转染，为ＰＣ１２细胞进行神经细胞基因功能及开发遗传病治疗方案等生物学研究提供了一种安全、廉价的新方法。【关键词】ＰＣ１２细胞；Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００；阳离子脂质体／ＤＮＡ复合物；氯喹；亚精胺
ＱＩＵＹｅ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮａｎｘｕｎＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅｏｆＨｕｚｈｏｕＣｉｔｙ，
【中图分类号］Ｒ７３５．７
【文献标识码］Ａ
【文章编号】１６７３ — ７２１０（２０１４）０１（Ｃ）一００２０ — ０４
ＳｔｕｄｙｏｆｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｉｃｆｉｅｎｃｙｉｎＰＣ１２ｃｅｌｌｓｔｒａｎｓ－ｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００
度的增加，ＰＣｌ２细胞转染效率随之增加，当氯喹、亚精胺加入终浓度分别增至９￣ｚｍｏｌ／Ｌ和８ｔｘｍｏｌ／Ｌ时，ＰＣ１２细
胞的转染效率最高，转染效率为４０．５％。④加入终浓度为９ｔｚｍｏｌ／Ｌ氯喹与８Ｉｘｍｏｌ／Ｌ亚精胺前、后Ｍｒ丌试验吸光
ＺｈｅｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｈｕｚｈｏｕ３１３００９，Ｃｈｉｎａ
．
［Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｅｔｉｏｎｅｉｃｆｉｅｎｃｙｏｆＰＣ－１２ｃｅｌｌｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＣｅｌｌ
［摘要】目的探讨提高ＰＣ１２细胞转染效率的方法。方法细胞培养板用１０￣ｇ／ｍＬＩ型牛胶原蛋白包被，通过在
转染过程中加入９ｊｘｍ０ｌ／Ｌ趋溶酶体试剂氯喹及８Ｉｘｍｏｌ／Ｌ聚胺类试剂亚精胺，同时调整Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００与ＤＮＡ用量的比例和转染时间。考察ＤＮＡ与Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００的比例对ＰＣ１２细胞转染效率的影响，转染时１９对ＰＣｌ２细胞转染效率的影响，氯喹、亚精胺用量对ＰＣ１２细胞转染效率的影响，氯喹、亚精胺对ＰＣ１２细胞活性的影响．氯喹、亚精胺对ＰＣ１２细胞神经轴突生长的影响及与４种常用脂质体转染试剂对ＰＣ１２细胞转染效率的比较。