高 效 液 相 色 谱 仪 使 用 记 录
高效液相色谱简介及操作
HPLC和经典液相色谱法的比较
3.高效液相色谱法的分类
• 通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色 谱法和凝胶色谱法四大类。
4.如何阅读色谱图？？
tR：保留时间；tM：死时间； ：调整保留时间； W：峰宽
• 定性分析：在同一色谱系统中相同物质具 有相同的保留值 • 定量分析：组分含量与其响应值（峰高或 面积）成正比
2 色谱柱使用的注意事项
• 色谱柱在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动。 • 当分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存（一般 为甲醇）。 • 每天工作结束后用适当的溶剂来清洗柱。
3 其他注意事项
• 未经提取净化的蛋白样品、血样、生物样品绝对禁 止直接进样分析。 • 要注意流动相的脱气。 • 避免使用高粘度的溶剂作为流动相。 • 使用新鲜配制的流动相，特别是水溶剂或缓冲液建 议不超过两天，最好每天更换。
（5）色谱柱平衡后，打开检测器（开灯） （6）测定样品 （7）清洗仪器
色谱柱及流路清洗 进样阀清洗 进样针清洗
四、主要注意事项
1 泵使用的注意事项
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防止任何固体微粒进入泵体（用0.22 um或0.45 um 的微孔滤膜过滤） 流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲盐的流 动相不应保留在泵内更不允许留在柱内。 泵工作时防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运 转一是会使大量空气进入柱内柱床崩塌、也会磨损柱塞、 密封圈，最终产生漏液。 输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力。 流动相应先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量 的稳定性和分析结果。
c. 荧光检测器 (FLD) 只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基 酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定。
Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程
Agilent_1200型高效液相色谱仪标准操作规程1 目的建立Agilent 1200高效液相色谱仪的操作规程，保证其正确使用。
2 范围Agilent 1200高效液相色谱仪的操作与维护。
3 职责操作人员和责任人员对本规程的实施负责。
4 内容4.1 组成G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1330B自动进样器恒温器、G1315B可变波长检测器（DAD）、GB16A 柱温箱和一套Agilent 1200 CHEMSTATIONS 软件（软件光盘与说明书原件由工程部保存），打印机。
4.2 在线清洗若实验的流动相中含有的缓冲盐和离子对等试剂干后会留下固体印迹的物质时，必须要进行在线清洗过程。
首先配制好10%异丙醇溶液，经0.45μm有机膜抽滤后，装入已用滤过的10%异丙醇溶液洗过三遍的洁净玻璃瓶内，调整流量为2～3滴/分钟，10%异丙醇溶液必须每周更新。
4.3 开机接通电源，打开计算机，等计算机启动成功后，含四元泵的Agilent 1200高效液相色谱仪系统：从上到下，依次打开脱气机、泵、进样器、进样器恒温器、柱温箱和多波长检测器。
约30秒钟后，各部件自检完毕，进入待机状态，指示灯为黄色或无色。
双击桌面上的Instrument 1 Online，计算机进入工作站的Method and Run Control操作界面。
画面如下所示。
4.4 色谱条件的设定4.4.1 方法的编辑●在method and run control 状态下，单击“method”选择“edit entire method”，请先在复选框中选择method中需要编辑的项目。
●进入method information 在method comments 中输入方法的名称及相关描述，参数设置完毕后单击OK。
●进入泵参数设置画面，设置泵流速（ml/min），流动相组成，冲洗梯度，停针时间等，参数设置完毕后单击OK。
Waters_e2695型高效液相色谱仪操作规程
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作规程目的：建立Waters e2695高效液相色谱仪标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪更规范，保证实验结果更精确。
范围：适用于Waters e2695高效液相色谱仪操作和维护保养。
职责: 本规程由仪器使用员负责实施，分析室主任负责监督。
1 开机前的准备工作1.1 检查设备电源、流路、信号连接是否完好。
1.2 流动相：配制相应的流动相，经0.22μm微孔滤膜抽真空过滤后，并超声脱气5分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗。
1.3 样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液。
2 仪器的组成及开机平衡系统2.1 仪器组成。
本仪器由waters e2695分离单元、2489紫外可见光检测器、Empower色谱工作站和打印机组成。
2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。
2.2 开机。
先打开电脑，依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。
接通2695 分离单元后，约20s 仪器开始自检，约4min后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“ Idle ”时，仪器进入待命状态。
2.3 脱气（Degasssger）。
按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。
一般默认是开的。
2.4 设定柱温。
在“Status”界面，光标至“Col Htr Set”，输入目标温度，按Enter。
（可在工作站方法中设置）2.5 灌注柱塞密封清洗泵（Prime Seal Wash）。
在主屏幕下，按“Diag”，显示“Diagnosties”屏幕，按“Prime Seal Wash”,显示“Prime Seal Wash”屏幕，按“Start”,直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，依次按“Halt”、“Close”、“Exit”。
Agress高效液相色谱操作规程(折光检测器)
Agress高效液相色谱仪操作规程(折光检测器）1. 目的规范Agress1100高效液相色谱系统的使用和维护。
2. 范围本规程适用于Agress1100高效液相色谱系统的使用和维护。
3. 职责仪器室分析人员负责Agress1100高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4. 系统组成本系统由P1100高压恒流泵、D1100紫外-可见检测器、Rheodyne 7725i手动进样阀、Elitapex色谱工作站、计算机以组成。
5. 程序5.1.准备（1）使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（色谱纯；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、配置样品和标准品（必须用0.45μm滤膜过滤）、选择合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）、与7725i进样阀配套的进样器和定量管。
（2）通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2. 开机和泵操作（一）开机1. 接通电源，依次打开P1100泵、D1100检测器，待仪器自检结束显示正常状态后，打开电脑显示器、计算机。
（二）排气1. 打开P1201泵后，打开放空阀(逆时针转动放空阀手柄至90度)；2. 按冲洗键使泵用最大流量对流动相进行排气，若流动相管路中存在明显的空气要使用配件中的20ml吸液针管连接到放空阀出口管处进行抽取，直至抽出液体，然后关闭放空阀，拔下针管，连接好管路，拧开放空阀重新排气；3. 排气完毕后将放空阀顺时针拧紧；（三）打开工作站1.点击Elitapex启动图标，按[确定」，进入系统主界面。
点击仪器控制菜单，弹出系统配置、仪器控制及光谱扫描选项，点击系统配置，将仪器列表中的仪器选项添加到系统配置选项中去后，（以实际仪器配置为准）点击验证系统配置，如显示结果与系统配置中选顶一致，证明系统连接正常，电脑可对仪器进行反控。
点击仪器控制选项，对泵的流量、梯度曲线进行设置，同时对检测器波长设定及柱温箱温度设定确认后，启动数据采集。
GMP检查缺陷项汇总
• 16、已归档的批生产记录无产品标签实样。 • 17、净化空调系统使用记录每天只记一次，与企业文件规定“每班至少记录
2次”不符，且无空调系统的维护保养和清洁记录; • 18、车间消毒用75%乙醇无配制记录;
• 19、热风循环烘箱等生产设备无使用日志;部分功能间压差记录未及时记; • 20、热风循环烘箱温度、时间显示器已坏，操作工对所生产品种的干燥温度
且无识别标志。(第一百二十六条); • 42、生产车间部分功能间停用(或不用)的设备未移出生产车间。 • 43、不合格品库中待处理的废弃物料无数量。 • 44、实验室部分操作台有积尘。
• 4、仓储区内的原料无质量状态标示。 • 5、废弃的印刷包装材料未及时销毁。如包材库中存放的合格证，其标示的药
品生产许可证号为原生产许可证编号（甘20110094），未销毁。 • 6、文件管理不规范，批生产记录未按档案进行管理，随意放置。 • 7、甘草、黄芪等原料及成品检验未按药典规定全检，黄芪检验存在套用色谱
及操作规程。 • 37、饮片车间洗手池地漏无水封。
• 38、洁具间存放的容器具无状态标识。 • 39、制剂室内灭菌间房间无标识。 • 40、未及时对新颁布实施的GMP《确认与验证》进行培训，验证小组人员不
熟悉该附录内容(第二十七条); • 41、现场检查时，外包工序已经结束，但外包间设备台上存放有部分说明书，
• 10、批生产记录中成品放行审核单中需质量部和质量授权人审核部分均未审核 并签字，但成品放行证已经放行签字。
• 11、《标签、合格证管理规程》不适用于企业的实际管理。 • 12、空白标签未专柜保存。 • 13、车间标签打印室室外标牌为器具间，空白标签无交接记录。
watersarc高效液相色谱仪说明书
watersarc高效液相色谱仪说明书摘要：1.引言2.watersarc 高效液相色谱仪概述3.色谱仪的部件和特性4.色谱仪的操作流程5.色谱仪的维护和保养6.结论正文：【引言】高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离和分析样品的方法，被广泛应用于化学、生物、环境等领域。
watersarc 高效液相色谱仪是Waters 公司推出的一款高性能液相色谱仪，具有卓越的性能和可靠性。
【watersarc 高效液相色谱仪概述】watersarc 高效液相色谱仪采用先进的设计理念和技术，具有高灵敏度、高分辨率、高效率等特点。
该仪器主要由输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成，可以满足各种分析需求。
【色谱仪的部件和特性】1.输液系统：输液系统包括高压泵、进样器和流动相。
高压泵提供稳定的流速，进样器可以精确控制样品的进样量，流动相则帮助样品在色谱柱中进行分离。
2.分离系统：分离系统是色谱仪的核心部分，主要包括色谱柱和填料。
色谱柱根据样品的特性选择合适的填料，以实现样品的有效分离。
3.检测系统：检测系统用于检测经过色谱柱分离后的样品。
常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器和质谱检测器等，根据样品的特性选择合适的检测器。
4.数据处理系统：数据处理系统负责收集、处理和分析检测到的数据，可以提供实时的数据和结果。
【色谱仪的操作流程】1.准备样品：将待分析的样品进行处理，使其符合进样要求。
2.安装色谱柱：根据样品的特性选择合适的色谱柱，并正确安装在色谱仪上。
3.配置流动相：根据色谱柱的特性和样品的性质，选择合适的流动相，并进行配置。
4.启动高压泵：启动高压泵，使流动相在色谱仪中循环。
5.进样：将样品加入进样器，通过进样器将样品送入色谱柱。
6.检测：开启检测器，检测经过色谱柱分离后的样品。
7.数据处理：使用数据处理系统对检测到的数据进行处理和分析。
hplc高效液相色谱仪使用方法
hplc高效液相色谱仪使用方法HPLC高效液相色谱仪是一种常用的色谱分析仪器，广泛应用于药物、环境、食品、化妆品等领域。
下面将详细介绍HPLC高效液相色谱仪的使用方法。
一、仪器准备：1.检查仪器的状态，确认各个部件是否正常运行，如高压泵、进样器、检测器等。
2.开机预热：打开主机电源，按照仪器操作手册上的指示，进行仪器的预热操作。
一般要求预热时间为30分钟到1小时。
二、工作站设置：1.打开工作站软件，点击新建分析方法。
根据分析需求选择不同的方法类型，如梯度洗脱、等温洗脱等。
2.设置流动相组成：根据分析物的性质和目标，选择合适的流动相，并设置其浓度和比例。
可以通过试错法或者文献参考来确定最佳流动相组成。
3.设置进样器参数：选择合适的进样方式，如全自动进样、微量进样等。
设置进样量和进样速度，根据分析物的浓度、检测器灵敏度等因素进行调整。
4.设置检测器参数：选择合适的检测器类型和波长。
一般情况下，紫外检测器是最常用的检测器，波长选择通常在200-400nm之间。
5.设置柱温：根据分析物的性质和目标，选择合适的柱温。
柱温对分离性能和分析速度有着明显的影响。
三、样品处理：1.样品制备：根据分析目标和方法要求，对样品进行处理，包括固相萃取、溶解、过滤等。
2.进样器设置：将样品注入进样器，确保进样量与方法要求相符。
3.进样：点击工作站软件上的进样按钮，开始进行进样。
进样过程中要确保无气泡进入柱。
四、开展分析：1.开始分析：点击工作站软件上的开始按钮，运行分析方法。
监控色谱图，观察峰的形状和分离度。
根据需要可以对分析方法进行优化，如调整流速、洗脱程序等。
2.数据处理：完成分析后，保存并导出色谱图和数据。
进行数据处理和结果分析。
五、仪器维护：1.使用完毕后，关闭泵和检测器，将柱中流动相完全排空，以免柱内残留物引起污染。
2.保养柱：每次使用后，要清洗柱和重新平衡柱。
柱的清洗和保养要根据具体的柱类型和使用情况进行。
3.保持仪器干燥和清洁：定期清洁仪器，尤其是注射器、透射比色噪声汇丰牌等易受污染的部件，以保证仪器的正常运行。
高效液相色谱法标准操作规程
高效液相色谱法标准操作规程1. 目的建立高效液相色谱法标准操作规程，规范高效液相色谱法检验操作，保证检验操作规范化。
2. 范围适用于高效液相色谱法检验操作。
3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。
5. 程序5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。
5.2 简述高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
5.3 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。
5.3.1色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等) 也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂; 分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。
孔径在15nm(lnm=10A)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10μm之间。
粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm) 。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。
高效液相色谱仪操作步骤
⾼效液相⾊谱仪操作步骤⾼效液相⾊谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。
2)．对抽滤后的流动相进⾏超声脱⽓10-20分钟。
3)．打开HPLC⼯作站（包括计算机软件和⾊谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进⼊HPLC控制界⾯主菜单，点击manual，进⼊⼿动菜单。
5)．有⼀段时间没⽤，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出⽔⼝，⽤针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使⽤新的流动相，可以先试⼀下压⼒，流速越⼤，压⼒越⼤，⼀般不要超过2000。
点击injure，选⽤合适的流速，点击on，⾛基线，观察基线的情况。
7)．设计⾛样⽅法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种⾛样⽅法。
若需建⽴⼀个新的⽅法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要⽽不同。
选完后，点击protocol。
⼀个完整的⾛样⽅法需要包括：a.进样前的稳流，⼀般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.⾛样时间，随不同的样品⽽不同。
8)．进样和进样后操作。
选定⾛样⽅法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
⽅法⾛完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品⾛完后，再⽤上⾯的⽅法⾛⼀段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相⾊谱。
10)．填写登记本，由负责⼈签字。
注意事项：1)．流动相均需⾊谱纯度，⽔⽤20M的去离⼦⽔。
脱⽓后的流动相要⼩⼼振动尽量不引起⽓泡。
2)．柱⼦是⾮常脆弱的，第⼀次做的⽅法，先不要让液体过柱⼦。
3)．所有过柱⼦的液体均需严格的过滤。
4)．压⼒不能太⼤，最好不要超过2000 psi。
液相⾊谱法简介【我要发表论⽂】--------------------------------------------------------------------------------作者： dujinx 正⽂⽓相⾊谱不能由⾊谱图直接给出未知物的定性结果，⽽必须由已知标准作对照定性。
高效液相色谱-质谱法检测磺胺原始记录
高效液相色谱-质谱法检测磺胺原始记录一、实验目的本实验旨在利用高效液相色谱-质谱法检测磺胺类药物，通过记录实验过程和结果，总结磺胺类药物的检测方法和技术。
二、实验原理磺胺类药物是一类具有抗菌作用的药物，常用于治疗感染性疾病。
高效液相色谱-质谱法是一种常用的分析方法，通过色谱柱的选择和优化条件，结合质谱仪器的高灵敏度和选择性，可以准确测定样品中的磺胺类药物的含量。
本实验采用高效液相色谱仪（HPLC）与质谱仪（MS）的联用技术，通过将样品注入HPLC系统，利用色谱柱分离样品中的磺胺类药物，然后将分离出的化合物送入质谱仪进行质谱分析。
通过质谱仪测定药物的质荷比和相对丰度，可以确定样品中磺胺类药物的含量。
三、实验步骤1.样品准备：将待测样品按照实验要求进行预处理，例如萃取、溶解等。
确保样品中磺胺类药物的浓度适合分析要求。
2.仪器准备：开启HPLC和质谱仪，检查仪器状态是否正常，并校准仪器。
调整色谱柱温度和流动相条件，以优化分离和质谱分析效果。
3.样品注入：将预处理好的样品注入HPLC系统，并设置适当的进样量和进样方式。
4.HPLC分离：通过控制流动相的组成和流速，使目标磺胺类药物在色谱柱上得到有效分离。
记录使用的分离条件，包括流动相比例和梯度 elution的时间和温度等。
5.质谱分析：将分离的化合物通过在线方法送入质谱仪进行质谱分析。
记录质谱仪的质荷比范围和扫描方式，以及药物的相对丰度。
6.数据处理：根据质谱图和定量标准曲线，计算样品中目标磺胺类药物的含量，并记录分析结果。
四、结果与讨论通过高效液相色谱-质谱法检测，我们成功测定了待测样品中的磺胺类药物含量。
实验数据表明，该分析方法具有良好的分离效果和灵敏度，适用于磺胺类药物的定量分析。
根据质谱图和定量标准曲线，我们计算得到待测样品中各磺胺类药物的含量，并记录在下表中：药物含量 (mg/L)磺胺甲酰胺10.2磺胺嘧啶15.5磺胺乙磺胺8.6通过比较样品中不同药物的含量，可以评估样品中磺胺类药物的种类和浓度分布。
高效液相色谱仪的数据处理方法介绍
高效液相色谱仪的数据处理方法介绍高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理，主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。
它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
HPLC广泛应用于生命科学、食品科学以及环境研究中。
高效液相色谱仪（HPLC）是一种高效的色谱分析仪器，它的分离效率高于传统色谱仪，可用于分析不同类型的样品。
高效液相色谱仪通过流动相、固定相和样品之间的相互作用实现对不同成分的快速分离和定量分析。
高效液相色谱仪的记录样品通过检测器吸光度变化引起的电信号变化，从而产生色谱图，**结果取决于后期色谱数据处理系统的数据处理。
以下是两种常用的高效液相色谱仪数据处理方法。
光谱处理后可以制作校正曲线。
校正曲线是数据处理的重点。
它是一个标准，使信息和数据的标准光谱图处理样品光谱图。
高效液相色谱仪的校正是通过分析制备的标准样品来确定计算绝对组分浓度的响应系数的过程。
1.外标法：外标法是在空白样品中加入一定量的标准物质作为对照样品，与未知样品同时进行样品处理和检测，并计算出被检测成分的浓度的定量方法。
根据对照品响应值与标准品浓度函数的关系，测定未知试样中的成分。
2.内标法：内标法是将一定重量的纯物质作为内标物加入一定量的被测样品混合物中，对含有内标物的样品进行高效液相色谱仪分析，测定峰面积和相对含量。
分别测定内标物和受试物的有效校正系数，并按公式计算受试物的含量。
高效液相色谱仪操作规程
1 目的：建立高效液相色谱仪的操作规程，保证分析结果的准确可靠。
2 范围：本标准适用于高效液相色谱仪的操作使用。
3 依据：《药品生产质量管理规范》（2010年修订），《中国药品标准操作规范》（2010年版）、高效液相色谱仪使用说明书。
4 职责：5 术语与定义：无6 正文：一、操作前准备： 1.1流动相的配制：1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。
1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。
1.2对照品供试品处理：1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为0.1~1mg/mL（根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。
1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。
1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。
二、开机：2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关；2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器运行空闲”,可以关闭界面。
2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标（工作站主程序）。
2.6在左下方点击仪器，则在右边会自动显示该仪器控制面板。
2.7旋开泵上的排液阀(两圈以上)；设置A通道为100%，点击“冲洗”，然后再出现的对话框中点击“忽略并执行”；（默认冲洗5分钟）；然后分别“冲洗”流路中其他通道气泡；排完气泡后关闭排液阀；2.8设置流动相的比例及流速后，点击“马达”。
此时泵自动会以设置的流速进行运行。
高效液相色谱法操作规程
高效液相色谱法操作规程目的：建立高效液相色谱法的操作规程，以规范操作过程，确保检验结果准确可靠。
适用范围：原辅料、中药饮片责任人：质量管理部主任、检验员内容：高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等作为流动相，用高压输液泵压入装有固定相的色谱柱中，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪、积分仪或数据工作站记录色谱图。
1 适用范围高效液相色谱法适用于挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物等的定性、定量分析。
中国药典主要用于药品的含量测定，有关物质检查、杂质限度检查和鉴别等。
2 仪器高效液相色谱法主要由输出液泵系统、进样器系统、分离系统、检测系统及数据处理机（或兼有组分收集系统）等组成。
使用时应按仪器的说明书进行操作。
3 仪器的校正3.1 高效液相色谱仪的柱箱控温精度、基线噪声、基线漂移、灵敏度可检测限，线性范围的检定均按仪器说明书的技术要求进行校验，应符合规定。
3.2 以紫外--可见光检测器为检测器的实验室通用液相色谱仪的检定，所用各种标准物质应使用经国家技术监督部门批准颁发的标准物质。
3.3 泵的耐压试验将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量设为1ml/min，按说明书要求启动仪器，待压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路接头处应无湿迹。
卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保持5min，应无泄漏。
3.4 泵流量设定值误差（Sω）、流量稳定性误差（SR）的试验。
在3.3试验条件下，按下表设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10-25min，称重，按式(1)、(2)计算Sω和SR。
Sω=（Fm —Fω）/F×100 (1)SR =（Fmax —Fmin）/F×100 (2)式中：Sω——流量设定值误差，%；Fm——（W2-W1）/P.t，流量的实测值，ml/min；W2——容量瓶+流动相的重量，g；W1——容量瓶的质量，g；F——流量设定值，ml/min；Pi——实验温度下流动相的密度，g/cm3；T——收集流动相的时间，min；SR——流动相稳定性误差，%；Fmax——同一组测量中流量最大值，ml/min；Fmin——同一组测量中流量最小值，ml/min。
高效液相色谱仪使用注意事项
岛津液相色谱仪使用注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。
2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。
3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。
5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。
8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。
清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。
9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。
更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
液相色谱柱使用经验谈色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45µm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离
和定量分析化合物的混合物。
以下是HPLC的基本使用方法：
1. 样品准备：将待分析的混合物或溶液准备好，通常需要进行前处理，例如过滤、稀释或提取。
2. 系统准备：打开色谱仪的电源，启动仪器，确保所有组件处于正常工作状态。
检查液相、气相和其他溶剂的供应，并确保其质量良好。
3. 进样：将样品注射器连接到色谱柱，并根据实验要求设置注射器体积。
将样品注射器插入进样口，并将样品注入到色谱柱。
4. 创建梯度：根据分析要求，创建一个梯度程序。
这涉及到设置流动相的组成和梯度变化的速率。
5. 运行分析：点击开始按钮，启动分析过程。
色谱系统将自动进行溶剂梯度变化，使样品中的化合物逐步从色谱柱中分离出来。
6. 数据采集和分析：在分离过程中，色谱仪将采集到一系列数据点，包括峰高、峰面积、保留时间等。
使用相关的数据处理软件，可以对这些数据进行处理和分析。
7. 清洗和维护：在分析完成后，需要进行系统的清洗和维护。
这包括冲洗色谱柱、清理进样器和其他组件，并储存色谱仪在
正确的环境条件下。
以上是高效液相色谱仪的基本使用方法。
具体的使用流程和操作步骤可能会有细微的差异，取决于具体的仪器品牌和型号。
建议在使用前仔细阅读和理解相关的操作手册和使用说明。
岛津LC-20A型高效液相色谱仪操作规程检查输液泵的压力显示值，正常值应..
岛津LC-20A型高效液相色谱仪操作规程一、开机1.配制流动相，一般A相为有机相，B相为水相，盐或其它添加物一般放在B相中。
除色谱纯有机相和高纯水以外物质的流动相一定用0.45μm滤膜过滤才能使用。
稍微松开瓶盖，超声脱气20分钟。
2.安装色谱柱，注意柱子上的箭头指示流动相的流动方向。
3.将流动相滤头放入相应的溶剂瓶中。
4.依次打开泵、柱温箱、检测器电源，一定最后打开CBM的电源。
5.排气：将A、B泵排液阀逆时针旋转打开，分别按purge键，冲洗大约3min后自动停止，拧紧各排液阀。
检查输液泵的压力显示值，正常值应该在-0.3~0.3Mpa之间。
6.打开PC电源，双击桌面的LCsolution工作站图标，打开操作栏下的分析“仪器1”图标，弹出Login窗口，直接点击确定，“哔”的声音之后，表明已联机。
二、参数设置和系统平衡1.参数设置a)泵设置：在数据采集窗口的仪器参数视图中设置分析条件，如流速、流动相梯度程序、柱箱温度、数据采集时间等参数。
b)PDA检测器设置：点右键可选择显示窗口，选择需显示波长和信号量程；在normal下可输入数据采集时间，进入Advance，可选择光源、波长范围、检测池温度一般选默认40度、狭缝宽度1.2nm。
c)RI检测器设置：极性选+，分析模式、温度通常40度，响应通常1.5s、输出选电压，其它选择默认，点击R-flow清洗参比池，一般需20min，点击balance，值应在±50之间；按Zero调零。
2.保存方法至指定位置，或者调用已保存的分析方法，确认所需参数。
点击下载按钮传送参数至仪器。
如果此时系统控制器尚未激活，需点击“仪器开/关按钮”激活，系统每个模块即以新参数开始运行。
3.点击“采集”菜单栏下的“绘图开始”，预览基线。
在初始流动相条件下以设定速度平衡柱子至基线稳定，一般需要30min（此时进样阀处于Inject状态以冲洗定量环上的残留物质）。
三、样品分析1.根据需要选择定量方法，配制相应的定量用标准样品：a)外标法：配制系列浓度标样，做相应的标准曲线。
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项
高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项一，高效液相色谱仪操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
冲洗过程中关闭D灯、W灯；7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。
（续）1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
高效液相色谱法实验报告
高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和检测技术，被广泛应用于化学、生物和医药等领域。
以下是高效液相色谱法实验报告的示例：实验名称：高效液相色谱法分离和检测混合物一、实验目的1.学习高效液相色谱法的基本原理和实验操作；2.利用高效液相色谱法分离和检测混合物中的组分；3.分析实验数据，得出结论。
二、实验原理高效液相色谱法是一种基于色谱分离原理的检测技术。
样品中的组分在流动相和固定相之间的分配平衡，通过不同性质的固定相实现组分的分离。
在分离过程中，组分在色谱柱上的保留时间和洗脱顺序可用于定性分析，而组分的浓度或含量可通过检测器进行定量分析。
三、实验步骤1.准备试剂和仪器：选择合适的流动相、固定相、检测器等，确保仪器正常运行；2.配置样品：将待测混合物溶解于适当的溶剂中，制备成适当浓度的样品溶液；3.连接仪器：将流动相泵、色谱柱、检测器和数据采集系统连接起来，确保密封良好；4.平衡色谱柱：在开始进样之前，让色谱柱通过流动相进行平衡，使固定相达到稳定状态；5.进样分析：将样品溶液注入进样器中，由流动相带入色谱柱进行分离。
记录各个组分的保留时间和洗脱顺序；6.清洗色谱柱：实验结束后，用适量的流动相清洗色谱柱，以除去残留的样品组分；7.数据处理：对实验数据进行处理和分析，包括峰识别、定量和定性分析等。
四、实验结果与数据分析1.记录各个组分的保留时间和洗脱顺序；2.根据实验数据绘制色谱图，标注各个峰对应的组分；3.根据峰面积或峰高计算各个组分的浓度或含量；4.分析实验结果，与标准品进行比较，确定组分的性质。
五、结论根据实验结果和数据分析，得出以下结论：1.利用高效液相色谱法成功分离和检测了混合物中的各个组分；2.通过与标准品比较，确定了各个组分的性质；3.本实验表明高效液相色谱法是一种有效的分离和检测方法，可应用于实际生产和科研中。