固体组织蛋白提取
组织蛋白提取步骤
组织蛋白提取步骤组织蛋白提取是一种常见的实验方法，在生物医学研究中广泛应用。
通过组织蛋白提取，可以获取到目标蛋白质，并进行后续的分析和研究。
本文将详细介绍组织蛋白提取的步骤及注意事项。
一、实验前准备1.准备所需材料：待提取组织样本、PBS缓冲液、RIPA裂解缓冲液、PMSF（丙烯酰氨基苯甲酸）、SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒等。
2.消毒工作台和实验器具，保证实验环境干净卫生。
3.根据所需样本量选择合适的试管或离心管，标注好编号和样品信息。
二、样品收集1.收集新鲜组织样品，尽可能避免冷冻保存，因为长时间冷冻会对蛋白质结构产生影响。
2.将组织放置在PBS缓冲液中进行清洗和去除表面污物。
3.将组织切成小块或粉碎成粉末状，以便更好地进行裂解。
三、裂解1.将组织样品加入RIPA裂解缓冲液中，按比例加入PMSF，PMSF的浓度一般为1mM。
2.将混合物放置在冰上静置30分钟，使细胞膜破裂，并释放出蛋白质。
3.使用离心机进行离心，离心速度一般为12000rpm，离心时间约为10-15分钟。
四、收集蛋白1.将上清液收集到新的离心管中，去除沉淀和杂质。
2.使用SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒进行蛋白质浓度检测和电泳分析。
3.根据实验需要进行后续处理，如Western blot、ELISA等实验。
五、注意事项1.操作过程中需保持洁净卫生，避免污染样品。
2.PMSF是一种有毒化学物质，在使用时需佩戴手套和防护眼镜，并注意避免吸入或接触皮肤。
3.组织样品应尽可能新鲜，并在保持完整性的情况下进行裂解。
如果组织保存时间过长或受到损伤，则可能会影响蛋白质提取的效果。
4.离心时应注意离心速度和时间，避免过度离心导致蛋白质损失。
5.在蛋白质浓度检测和电泳分析中，应根据实验需要选择合适的试剂盒和仪器，并按照说明书进行操作。
总之，组织蛋白提取是一项重要的实验技术，在生物医学研究中具有广泛的应用。
通过正确的操作步骤和注意事项，可以提高蛋白质提取的效率和准确性，为后续实验打下坚实的基础。
动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤
动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤步骤一：收集和处理样品首先，需要收集要研究的动物细胞或组织样品。
样品可以是从细胞培养物中收集的细胞，也可以是从动物体内收集的组织。
在收集样品之前，可以用生理盐水冲洗样品，以去除与研究无关的物质。
步骤二：细胞破碎和组织研磨接下来，需要将细胞破碎或组织研磨，以释放细胞内或组织内的蛋白质。
对于细胞破碎，可以使用一些方法，如机械破碎、超声波破碎或冻融破碎等。
对于组织研磨，可以使用搅拌器或研磨器等工具进行研磨。
步骤三：离心步骤四：蛋白质提取将经过离心的上清液取出，即为蛋白质提取物。
蛋白质提取液可以选择不同的组成，以适应研究的目的。
一般来说，一个典型的蛋白质提取液可能包含以下成分：蛋白酶抑制剂（如PMSF）、还原剂（如DTT或β-巯基乙醇）、溶解剂（如甲醇或异丙醇）、洗涤剂（如Triton X-100或Tween-20）以及缓冲液（如磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液）等。
这些成分对于蛋白质的稳定性、可溶性和抽提效果起着重要作用。
步骤五：蛋白质浓缩为了浓缩蛋白质，可以使用一些方法，如醋酸沉淀、有机溶剂沉淀或钙盐沉淀等。
这些方法可以使蛋白质从提取液中沉淀下来，以减少液体体积并提高蛋白质浓度。
步骤六：蛋白质分析最后，可以对蛋白质抽提物进行分析。
常用的蛋白质分析方法包括SDS-凝胶电泳、Western blotting、质谱分析等。
这些方法可以用于分析蛋白质的分子质量、浓度、结构和功能等。
总结起来，动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤包括：收集和处理样品、细胞破碎和组织研磨、离心、蛋白质提取、蛋白质浓缩和蛋白质分析。
这些步骤的选择和优化将根据具体的实验目的和要求进行调整。
蛋白提取方法
蛋白提取方法蛋白质是生物体内一种非常重要的有机物质，它参与了许多生物体内的生命活动。
蛋白质的提取是生物化学和分子生物学研究中的一个非常重要的步骤，因此蛋白提取方法的选择和优化对于科研工作至关重要。
在蛋白提取的过程中，要克服细胞壁的障碍，破坏细胞膜，使蛋白质从细胞内释放出来。
本文将介绍几种常见的蛋白提取方法，希望能对相关研究工作有所帮助。
1. 直接破碎法。
直接破碎法是一种较为常见的蛋白提取方法，它适用于细胞壁较薄、易破碎的样品。
首先，将待提取的样品加入破碎缓冲液中，再通过高速离心或超声波破碎等方式使细胞破碎，释放出蛋白质。
这种方法操作简单，但需要注意的是破碎缓冲液的选择和破碎条件的控制，以避免蛋白质的降解和失活。
2. 化学溶解法。
化学溶解法是利用化学试剂破坏细胞膜和蛋白质的非共价键，将蛋白质从细胞内释放出来的方法。
常用的化学试剂包括SDS（十二烷基硫酸钠）、尿素、甲醇等。
这种方法操作简便，但需要注意的是化学试剂的浓度和作用时间的控制，以避免对蛋白质的影响。
3. 超声波法。
超声波法是利用超声波的机械作用和热效应破坏细胞膜，将蛋白质释放出来的方法。
超声波破碎不需要添加化学试剂，对蛋白质的影响较小，因此在保持蛋白质活性方面具有一定优势。
但需要注意的是超声波功率和破碎时间的控制，以避免对蛋白质的热性变性和氧化损伤。
4. 离心法。
离心法是利用不同蛋白质在离心过程中的沉降系数差异，将蛋白质分离提取的方法。
通过连续离心，可将蛋白质从细胞内提取出来。
这种方法操作简单，但需要注意的是离心条件的选择和沉淀物的重新悬浮，以避免蛋白质的丢失和沉淀物的污染。
5. 亲和层析法。
亲和层析法是利用蛋白质与特定配体之间的亲和作用，将蛋白质从混合物中选择性提取出来的方法。
通过在层析柱中填充亲和配体，可实现对特定蛋白质的纯化和提取。
这种方法操作复杂，但对蛋白质的选择性较好，适用于对蛋白质纯度要求较高的研究工作。
综上所述，蛋白提取是生物化学和分子生物学研究中的一个重要环节，选择合适的蛋白提取方法对于科研工作至关重要。
组织蛋白提取步骤
组织蛋白提取步骤概述组织蛋白提取是一种重要的实验操作，用于研究生物体中的蛋白质组成和功能。
在这篇文章中，我们将深入探讨组织蛋白提取的步骤和方法。
准备工作在进行组织蛋白提取之前，需要进行一些准备工作，以确保实验的顺利进行。
1. 选择合适的组织样本选择合适的组织样本非常重要。
样本的选择应基于研究的目的和问题。
常用的组织样本包括肝脏、肾脏、心脏等。
2. 通过冰冻保存样本在进行组织蛋白提取之前，将组织样本冰冻以保持其蛋白质的完整性和稳定性。
样本应在-80°C的低温下保存。
3. 研磨组织样本在进行提取之前，将组织样本研磨以释放蛋白质。
可以使用试管中的研磨棒、液氮或机械研磨仪等方法进行研磨。
组织蛋白提取步骤下面将详细介绍组织蛋白提取的具体步骤。
1. 组织样本溶解首先，将冷冻的组织样本迅速解冻放入冷蛋白提取缓冲液中。
缓冲液的选择应根据研究的目的而定。
可以选择含有各种缓冲剂（如Tris-HCl和EDTA）和蛋白酶抑制剂的缓冲液。
2. 组织样本裂解接下来，需要将组织样本裂解，以使细胞膜破裂并释放细胞内容物。
可以通过以下方法进行组织样本的裂解： - 超声波裂解：使用超声波处理器将样本暴露在高频超声波中，以破裂细胞膜。
- 高压裂解：使用高压细胞破碎机将样本加压，使其破裂。
- 液氮冻融：将样本在液氮中冷冻并迅速解冻，通过重复操作破裂细胞膜。
3. 蛋白质提取在组织样本裂解后，可以使用离心等方法将细胞碎片与蛋白质分离。
主要的提取方法包括： - 离心：将组织样本在高速离心中离心，并采集上清液中的蛋白质。
- 柱层析：利用蛋白质的性质，将蛋白质从样本中提取出来。
- 倒置电泳：利用电泳的原理，将蛋白质从样本中分离。
4. 蛋白质的定量和分析最后，对提取得到的蛋白质进行定量和分析。
常用的方法包括： - 低丰度蛋白质的富集：通过使用富集柱等方法将低丰度蛋白质从样本中提取出来。
- SDS-PAGE：使用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质，并通过染色等方法进行定性或定量分析。
不同组织的蛋白提取方法99
不同组织的蛋白提取方法2017-07-18不同组织的蛋白提取方法一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！或者用三氯醋酸―丙酮沉淀法，离子浓度小的1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3-204℃8000rpm以上13、的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上14、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000r pm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的'DTT65ul/ml。
二、组织：肠黏膜应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于BLOT存在的问题：加入1％SDS4度离心后又多了白色沉定，SDS左右。
固体组织蛋白提取
固体组织蛋白提取•相关推荐固体组织蛋白提取固体组织蛋白提取1. 每100mg固体组织剪碎后加入0.5 ml裂解液，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次；或用高速机械匀浆器12,000 rpm 破碎组织。
注意：初始组织的量应在10-100mg范围。
肝肾组织蛋白含量高，提取时应加较少量的组织，否则形成的蛋白膜厚、致密且难溶。
2. 取0.5ml组织匀浆液转移到1.5ml离心管，加2倍体积的(1 ml)抽提试剂充分混匀。
室温或4℃静置10分钟，偶尔晃动。
注意：(1)组织量<10mg且静置时间短30min，在下一步离心时所形成的蛋白膜易碎，此时可静置30min。
(2)提取脂肪组织时应4℃静置40min以上以充分去除油脂。
3. 10,000g 4℃离心10分钟，溶液分为两相，中间为蛋白膜。
吸除上层液体；随后用吸头或针头轻轻拨开蛋白膜，吸除下层液体。
蛋白膜将附着于离心管壁。
注意：(1)离心速度过高将使蛋白膜过于坚固，难以溶解。
(2)如果初始组织量较少(<10mg)，离心后难以得到完整的蛋白膜，此时可吸去上下层液体，加入0.5-0.8ml纯乙醇混匀，10,000g 4℃离心5分钟。
弃所有液体，蛋白沉淀在管底。
4. 敞开管口，室温10分钟空气干燥沉淀。
5. 每100mg组织所得到的蛋白加 200ml用户自备的缓冲液，95℃煮10分钟。
室温放置20分钟溶解沉淀。
注意：(1)可4℃过夜溶解沉淀，偶有少量不溶性组织纤维碎片可离心去除。
(2)有时染色体DNA可与蛋白质一起被抽提出来，溶解时则形成粘稠物。
延长95℃热变性时间、不时振荡、用注射针头反复抽吸，有助于彻底打断DNA。
3．样本组织RNA提取：取液氮保存的肺组织，研碎后加入RNAisoTMPlus，将研碎的样品完全覆盖，室温静置至样品完全融化，在研磨至裂解液呈透明状。
移至离心管后加入l／5l埘AisoTMPlus体积量的氯仿，用力振荡后移至离心管中，室温静置5min。
组织蛋白提取
鼠脑组织总蛋白提取一：蛋白提取1.脑组织称重，按照1：8（1g脑组织加8ml）的比例计算蛋白酶抑制剂的量(Aprotinin 、Pepstatin、NaF、Na3VO4、Leupeptin ，PMSF不稳定最后取出来加，都是1:100的稀释)和TNE的量，先在每个EP管中加入计算好的TNE再加蛋白酶抑制剂，每个ＥＰ管中加入３颗珠子，用匀浆器匀浆或用研磨棒研磨。
（蛋白酶抑制剂五种从-20拿到4度冰箱中溶解.各取100微升加入10毫升的TNE中（13层析柜中），TNE缓冲液（1.21g Tris,5.84g NaCl,0.37g EDTA/升），2.匀浆完毕后用枪头将混合好的溶液吸入EP管，一般大块组织加600微，小块加300微，4°离心14000转/min，20min。
3.取上清移入新EP管(最好离两次) ，溴酚蓝·甘油·SDS·巯基乙醇等组成samplebuffer（4X），Sample Buffer与蛋白比为3:1，在97度煮5分钟。
防止盖子开，最好用东西盖住。
始终在冰盒中操作，最后蛋白放入-80。
二：测蛋白浓度计算所需BCA的量，按MA:MB:MC=25：24：1的比例配好，每个孔总量为300ul,BSA:A-I各加150ul,Mix加150ul因BSA是溶解在NaCl，故加样时蛋白溶液和0.9%NaCl共加150ul(蛋白3ul,NaCl 147ul)注意加样时要加复孔。
酶标仪震荡5s37°孵育2小时Western Blot的有效检测下限为0.1-1ng蛋白提取可以分为三个步骤：第一步获取材料。
第二步分离目的细胞或组织成份并破碎。
细胞破碎的方法分为机械法和非机械法，机械法可以是振动、搅拌、研磨、压滤、超声、匀浆，非机械法可以是干燥、改变渗透压、冻融、酶解（纤维素酶、溶菌菌、蜗牛酶）等，不同来源的材料对于不同的处理方法耐受程度是不一样的，例如超声波可以很容易破碎动物细胞，但是破碎酵母细胞就困难许多。
动物固体组织蛋白提取_Protocol
动物固体组织蛋白提取 Protocol1、 前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。
早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。
2、 裂解液配制：RIPA ：PMSF=100：1，现配现用。
（1000ulRIPA+10ulPMSF ）。
置入4℃冰上。
3、抽蛋白（应冰上进行）：a 、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。
一般10ml 管体系中加入：7-8粒磁珠、100mg 组织、1mlRIPA+10ulPMSF 、1 tablet Cocktail 。
b 、匀浆。
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min 上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。
c 、将组织匀浆转入1.5ml 的EP 管中（eppendorf 管、离心管）。
12000r/min 4°C 离心15min 。
d 、离心后EP 管中液体分三层，提取中间无色液相，移入新的EP 管中。
可-80℃保存。
4、蛋白浓度测定。
a 、配工作液：溶液A ：溶液B=50：1（200ul ：4ul ）。
动物固体组织蛋白提取-.
动物固体组织蛋白提取-Protocol2017-07-18动物固体组织蛋白提取 Protocol1、前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。
早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。
2、裂解液配制：RIPA：PMSF=100：1，现配现用。
（1000ulRIPA+10ulPMSF）。
置入4℃冰上。
3、抽蛋白（应冰上进行）：a、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。
一般10ml管体系中加入：7-8粒磁珠、100mg组织、1mlRIPA+10ulPMSF、1 tablet Cocktail。
b、匀浆。
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。
c、将组织匀浆转入1.5ml的EP管中（eppendorf 管、离心管）。
12000r/min 4°C 离心15min。
d、离心后EP管中液体分三层，提取中间无色液相，移入新的EP管中。
可-80℃保存。
4、蛋白浓度测定。
a、配工作液：溶液A：溶液B=50：1（200ul：4ul）。
动物组织蛋白提取方法
动物组织蛋白提取方法一、准备工作1. 选取适当的动物组织：选择新鲜、无病变的动物组织，如肌肉、肝脏、肾脏等。
2. 清洗和切割组织：将选取的组织清洗干净，切成小块，便于提取。
二、提取步骤1. 浸泡：将切好的组织放入盛有清水的容器中，浸泡一段时间，以便于后续的提取操作。
2. 磨碎：将浸泡过的组织放入匀浆器中，进行充分磨碎，以便于蛋白的释放。
3. 提取：将磨碎的组织放入离心管中，加入适量的蛋白提取液，轻轻振荡离心管，使组织与提取液充分混合。
然后进行离心操作，将上清液去除，得到沉淀的蛋白。
4. 重复步骤3：为了得到更多的蛋白，可以重复步骤3，进行多次离心操作。
5. 保存和利用蛋白：将得到的蛋白保存好，可以用于后续的实验或生产用途。
三、注意事项1. 确保组织新鲜无病变，以避免提取过程中出现污染或无效提取。
2. 磨碎组织时要充分，以释放出更多的蛋白。
3. 提取液要适量，过多或过少都会影响蛋白的提取效果。
4. 离心时要确保离心速度和时间设置正确，以免影响蛋白提取的纯度和数量。
5. 保存蛋白时要确保环境适宜，避免蛋白变质或失效。
四、实验结果评估1. 观察沉淀物：通过观察沉淀物是否含有丰富的蛋白质，可以评估提取效果。
2. 测定蛋白质浓度：可以通过使用特定的蛋白质测定方法，如Bradford 方法等，来测定提取得到的蛋白质浓度。
3. 蛋白质性质分析：可以通过 SDS-PAGE、免疫印迹等方法，分析提取得到的蛋白质的性质和组成。
五、实验结论通过以上步骤，我们可以成功地从动物组织中提取出了蛋白。
这种提取方法简单易行，提取得到的蛋白可用于多种实验和生产用途。
需要注意的是，不同的动物组织和提取目的可能对提取方法有所影响，因此在实际操作中需要根据具体情况进行调整和优化。
六、拓展阅读建议1. 动物组织蛋白提取相关文献查阅：可以参考相关的科研论文和文献，了解更多关于动物组织蛋白提取的方法、影响因素和实验应用等方面的知识。
2. 实验室指南：可以参考实验室指南，了解更多关于实验室常用设备、试剂和实验方法等方面的信息。
动物固体组织蛋白提取_Protocol
动物固体组织蛋白提取 Protocol1、 前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。
早晨取出磁珠和匀浆管，自然晾干；也可放入烤箱中，速度较快。
2、 裂解液配制：RIPA ：PMSF=100：1，现配现用。
（1000ulRIPA+10ulPMSF ）。
置入4℃冰上。
3、抽蛋白（应冰上进行）：a 、适量组织（最好放入液氮中反复研磨成粉状）加入裂解液中。
一般10ml 管体系中加入：7-8粒磁珠、100mg 组织、1mlRIPA+10ulPMSF 、1 tablet Cocktail 。
b 、匀浆。
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min 上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。
c 、将组织匀浆转入1.5ml 的EP 管中（eppendorf 管、离心管）。
12000r/min 4°C 离心15min 。
d 、离心后EP 管中液体分三层，提取中间无色液相，移入新的EP 管中。
可-80℃保存。
4、蛋白浓度测定。
a 、配工作液：溶液A ：溶液B=50：1（200ul ：4ul ）。
组织蛋白提取步骤
组织蛋白提取步骤标题：组织蛋白提取步骤：从样本收集到蛋白质溶解的全面解析引言：组织蛋白提取是生物学和生物化学领域中非常重要的实验步骤之一。
它是为了研究组织中的蛋白质表达、功能和相互作用而必不可少的前提。
本文将从样本收集到蛋白质溶解的全过程，详细介绍组织蛋白提取的步骤和要点，旨在帮助读者更全面、深入地了解该领域的相关内容。
第一部分：样本收集与处理1.1 样本预处理：在进行组织蛋白提取前，首先需要进行样本预处理。
这包括以无菌的方法收集样本，如组织切片、细胞培养等，同时需避免样本受到污染和降解。
1.2 样本保存：为了保持蛋白质的完整性和稳定性，样本应尽快保存在适当的温度下，如低温或液氮中。
选择合适的保存缓冲液也是至关重要的。
第二部分：样品裂解与溶解2.1 细胞破碎：细胞破碎是为了破坏细胞膜，释放细胞内的蛋白质。
可以选择化学法、物理法或酶解法等方法进行细胞破碎，其中磁珠法和超声法是常用的技术。
2.2 组织破碎：与细胞破碎类似，组织破碎旨在释放组织内的蛋白质。
取决于样本特性，可以使用搅拌器、研钵、超声或高压等方式进行组织破碎。
2.3 组织裂解：组织裂解是将细胞或组织中的蛋白质从细胞核、细胞器等结构中溶解出来。
常用的方法有机械法、酸法、碱法以及使用细胞裂解液等。
具体的选择取决于研究的目的和样本特性。
2.4 蛋白质溶解：蛋白质溶解是将裂解后的蛋白质完全溶解于适当的缓冲液中，以便后续的实验操作，如电泳、质谱等。
在溶解过程中，需要注意取决于蛋白特性而添加的表面活性剂、螯合剂和保护剂。
第三部分：总结与回顾在本文中，我们详细介绍了组织蛋白提取的各个步骤。
我们强调了样本收集和处理的重要性，包括样本预处理和正确的保存方法。
我们着重介绍了细胞破碎和组织破碎的常用方法。
我们强调了组织裂解和蛋白质溶解的关键环节。
通过了解和掌握这些关键步骤，我们可以更好地提取和保护样本中的蛋白质，为后续的实验操作提供高质量的样品。
这对于研究蛋白质组学、蛋白质功能研究以及药物研发等领域都具有重要意义。
组织蛋白提取方法
组织蛋白提取方法•相关推荐组织蛋白提取方法组织蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格组织蛋白提取液蛋白酶抑制剂混合物BB-3122-1 50 assays 25ml 100ulBB-3122-2 100 assays 50ml 200ul储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；组织蛋白提取液室温保存。
有效期：一年。
产品简介：贝博组织总蛋白提取试剂盒适用于从各种纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取总蛋白。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。
该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的.降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。
提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
使用方法：1. 提取液制备：每500ul冷的组织蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100mg组织样本剪碎，加入组织蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显①肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到组织总蛋白。
5. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
参考文献：● Yaosheng Wang, Yihua Zhou, Lipeng He et al. Gene delivery of soluble vascular endothelial growth factor receptor-1 (sFlt-1) inhibits intra-plaque angiogenesis and suppresses development of atherosclerotic plaqueCLINICAL AND EXPERIMENTAL MEDICINE 2011 Volume 11, Issue 2, Pages 113-121 （IF=1.6）● Xin Yue, Baozhong Liu et al. An i-type lysozyme from the Asiatic hard clam Meretrix meretrix potentially functioning in host immunityFish & Shellfish Immunology 2011 Volume 30, Issue 2, Pages 550-558 （IF=3.044）● Liu Tao, Chen Suhua et al. In vitro study on human cytomegalovirus affecting early pregnancy villous EVT's invasion functionVirology Journal 2011, 8:114 （IF=2.55）相关产品：产品总蛋白提取试剂盒核蛋白提取试剂盒Bradford蛋白定量试剂盒ECL化学发光检测试剂盒细胞蛋白提取试剂盒组织蛋白提取试剂盒细菌蛋白提取试剂盒酵母蛋白提取试剂盒磷酸化蛋白提取试剂盒SDS-PAGE凝胶配制试剂盒产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702产品磷酸化蛋白富集试剂盒膜蛋白提取试剂盒BCA蛋白定量试剂盒蛋白Marker细菌膜蛋白提取试剂盒植物总蛋白提取试剂盒植物膜蛋白提取试剂盒蛋白酶抑制剂混合物磷酸酶抑制剂混合物 SDS-PAGE上样Buffer 产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703。
wb组织蛋白提取方法
wb组织蛋白提取方法WB组织蛋白提取方法引言：WB（Western Blotting）是一种常用的蛋白质检测方法，通过将待检测的蛋白质进行电泳分离，然后转移到膜上，再用特异性抗体进行检测。
WB组织蛋白提取是进行WB实验的重要前提，正确的提取方法能够保证蛋白质的完整性和浓度，从而获得准确可靠的实验结果。
一、准备工作1. 材料准备：组织样本、液氮、无菌离心管、摇床、离心机、清洗液（PBS）、RIPA裂解液、丙酮、蛋白酶抑制剂等。
2. 工具准备：离心管架、离心管盒、离心管架盖、冰桶、温度计等。
二、组织样本的采集和处理1. 组织样本的采集：将所需的组织样本取出并迅速置于液氮中，确保样本冷冻速度快，避免蛋白质降解。
2. 组织样本的处理：将组织样本放入无菌离心管中，加入适量的PBS缓冲液，用摇床低速摇动几分钟使组织均匀悬浮。
三、组织样本的裂解和离心1. 组织样本的裂解：将PBS悬浮液倒入离心管中，加入适量的RIPA裂解液和蛋白酶抑制剂，充分混合后放置冰上浸泡30分钟至1小时，使细胞完全裂解释放蛋白质。
2. 组织样本的离心：将裂解液离心10分钟，离心速度为12000rpm，将上清液转移到新的离心管中，避免沉淀物的污染。
四、蛋白质的沉淀和洗涤1. 蛋白质的沉淀：向上清液中加入4倍体积的丙酮，充分混合后放置-20℃冰箱中沉淀过夜，使蛋白质充分沉淀。
2. 蛋白质的洗涤：将离心管取出，离心10分钟，离心速度为12000rpm，将上清液倒掉，加入无菌PBS缓冲液洗涤2次，以去除丙酮等残留物。
五、蛋白质的溶解和浓度的测定1. 蛋白质的溶解：向离心管中加入适量的RIPA裂解液，用摇床低速摇动几分钟使蛋白质充分溶解。
2. 蛋白质浓度的测定：使用BCA或Lowry方法等蛋白质浓度检测试剂盒，按照说明书进行操作，得到蛋白质的浓度。
六、蛋白质的保存和使用1. 蛋白质的保存：将提取的蛋白质分装至无菌离心管中，分别存放于-80℃冰箱中或液氮中，避免蛋白质降解。
组织蛋白提取方法
组织蛋白提取方法
组织蛋白提取方法是研究生物学的一个重要分支。
组织蛋白提取技术
是一种重要的生物分离和纯化方法，它可以分离和纯化细胞内蛋白质，为生物学研究提供了重要工具。
随着科技的日益发展和生物学研究的
深入，组织蛋白提取技术的应用越来越广泛。
组织蛋白提取方法的选择取决于样品类型和蛋白的特性。
一般来说，
组织蛋白提取方法可分为机械法、化学提取法、复合提取法等。
机械法是最常用的蛋白质提取方法之一。
此法通过机械力量破碎组织
细胞结构，使蛋白质溶解于缓冲液中。
机械法的步骤包括组织研磨、
超声波振荡、高压融解等。
其中，超声波振荡法是目前最常使用的机
械法。
其优点是操作简单，易于掌握，但其缺点是易产生氧化和热量，可能造成蛋白质的失活。
化学提取法主要是利用化学方法分离蛋白质。
这种方法一般用化学溶
液（如三氯乙酸，甲醛等）沉淀蛋白质。
化学提取法的优点是高效，
稳定，且能够提取大量的蛋白质，但其缺点是蛋白质结构容易变性，
可能影响蛋白质的活性和稳定性。
复合提取法是机械法和化学法的结合。
这种方法一般将样品经过机械
法振荡或切碎，然后再用化学溶液进行沉淀和纯化。
该方法的优点是在保持蛋白质完整性和活性的前提下提取了一定量的蛋白质。
总之，对于不同种类的样品和不同的研究目的，选择不同的组织蛋白提取方法是十分重要的。
近年来，组织蛋白提取技术得到了广泛的应用，不仅可以在生物学领域中应用，还可以在医学、食品、环境等多个领域中应用，大大推进了相关学科的研究进展。
组蛋白提取方法
2012
（IF=3.322）
● Pin Huan et al.
Comparative proteomic analysis of challenged Zhikong scallop (Chlamys
farreri): A new insight into the anti-Vibrio immune response of marine bivalves
pregnancy villous EVT's invasion function
Virology Journal
2011, 8:114
（IF=2.55）
● Weiwei Jianga, Bin Lia et al.
Artesunate in combination with oxacillin protect sepsis model mice challenged with lethal live
提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、组蛋白修饰实验比如乙酰化、甲 基化、sumoylation 试剂和仪器
● 移液器、吸头
● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器
● 冰箱，冰盒
使用方法：
细胞总蛋白提取： 1. 提取液制备：每 500ul 冷的总蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物和 2ul 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。 2. 取 5-10×106 个细胞①，在 4℃，1000rpm 条件下离心 5-10 分钟，小心吸取培养 基，尽可能吸干，收集细胞。 3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每 5×106 个细胞中加入 500ul 冷的总蛋白提取液，混匀后，在 4℃条件下振荡 15-20 分钟。 5. 在 4℃，14000rpm 条件下离心 15 分钟。
动物固体组织蛋白提取Protocol
的浓度。
蛋口酶抑制剂破碎细胞提取蛋口质的同时可释放出蛋口酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种常用的蛋口酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋口质的敬感性各不相同，因此需要调整各种蛋口酶的浓度。
由于蛋口酶抑制剂在液体中的洛解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋口酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
在宝灵曼公司的口录上可查到更完整的蛋口酶和蛋口酶抑制剂表。
常用抑制剂PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride （剧毒）1）抑制丝氨酸蛋白酶（如胰凝乳蛋白酶，胰蛋口酶，凝血酶）和疏基蛋白酶（如木瓜蛋白酶）;2）10mg/ml^于异丙醇中；3）在室温下可保存一年；2-8°C可以存放数月之久。
欲长期保存，可冻存在- 20°C 4）工作浓度:17~174ug/ml（0.1 -1 .Ommol/L）;储存液浓度为100 或200mM5）在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSFo EDTA1）抑制金属蛋口水解酶；2）0.5mol/L水溶液，pH8~9; 3）溶液在4°C稳定六个月以上；4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。
胃蛋白酶抑制剂(pepsta ntin)I)抑制酸性蛋白酶如胃蛋口酶，血管紧张肽原酶，组织蛋口酶D和凝乳酶;2)1mg/ml溶于甲醇中；3｝储存液在4 °C 一周内稳定，-20 °C稳定6个月；4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L) 5)在水中不溶解。
壳抑蛋白酶肽(leupeptin)1)抑制丝氨酸和葢基蛋口酶，如木瓜蛋口酶，血浆酶和组织蛋口酶B;2)IOmg/ml 于水；3)储存液4°C稳定一周，-20°C稳定6个月；4)工作浓度0,5mg/mlo胰蛋白酶抑制剂(aprotinin)1)抑制丝氨酸蛋口酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋口酶和胰凝乳蛋口酶;2)IOmg/ml 溶于水，pH7~83｝储存液4 °C稳定一周，-20 °C稳定6个月；4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01 -0.3umol/L); 5)避免反复冻融：6)在pH 12.8时失活。
组织总蛋白提取步骤
组织总蛋白提取步骤
组织总蛋白提取的步骤一般包括以下几个步骤：
1. 组织打碎：将组织样品切碎或打碎，以增加细胞膜的破裂程度，充分释放细胞内的蛋白质。
2. 组织裂解：将打碎的组织样品加入裂解缓冲液中，利用生物化学方法破裂细胞膜，释放细胞质内的蛋白质。
裂解缓冲液中一般包含盐溶液、洗涤剂和蛋白酶抑制剂等。
3. 离心：用离心机对裂解的组织样品进行离心，将细胞碎片和细胞核等固体残渣与蛋白质溶液分离开来。
收集上清液，即含有细胞蛋白的液相。
4. 蛋白质检测：使用蛋白质检测方法，如BCA法或Lowry法等，来测定蛋白质含量。
这样可以确定提取的蛋白质的浓度，并进行后续实验的稀释和计量。
5. 蛋白质存储：将提取的蛋白质分装存储，一般在低温条件下(-80°C) 长期保存。
以上是组织总蛋白提取的基本步骤，具体操作时可能会根据实验目的和方法的要求进行微调。
甲醛固定组织蛋白提取方法
产品组成：
产品组成 规格
试剂 A：蛋白提取液 A 试剂 B：蛋白提取液 B
BB-3165-1 50T 25ml
250ul
BB-3165-2 100T 50ml 500ul
组份编号
31650A 31650B
储存条件： 室温保存。
有效期： 一年。
注意事项： ● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。 ● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管 底，避免开盖时试剂损失。 ● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 ● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清 洗并彻底清除残留清洁剂。 ● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
1. 提取液制备：每 500ul 蛋白提取液中加入 5ul 蛋白提取液 B，混匀后备用。 2. 每 100mg 样本中加入 500ul 蛋白提取液，涡旋振荡 10 秒。 3. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中 100℃保温 20 分钟。 4. 涡旋振荡 10 秒混匀。 5. 在恒温器（Heat Block）或水浴锅中 60℃保温 1-2 小时。 6. 涡旋振荡 10103 BB-3106 BB-3401 BB-3154 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3127 BB-3311 BB-3703 BB-3182 BB-3185 BB-3191
产品简介： 贝博甲醛固定组织蛋白提取试剂盒适用于从各种经甲醛固定的组织样本中提取总蛋白，
提取过程简单方便，提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下 游蛋白研究。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头
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固体组织蛋白提取
1. 每100mg固体组织剪碎后加入0.5 ml裂解液，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次；或用高速机械匀浆器12,000 rpm 破碎组织。
注意：初始组织的量应在10-100mg范围。
肝肾组织蛋白含量高，提取时应加较少量的组织，否则形成的蛋白膜厚、致密且难溶。
2. 取0.5ml组织匀浆液转移到1.5ml离心管，加2倍体积的(1 ml)抽提试剂充分混匀。
室温或4℃静置10分钟，偶尔晃动。
注意：(1)组织量<10mg且静置时间短30min，在下一步离心时所形成的蛋白膜易碎，此时可静置30min。
(2)提取脂肪组织时应4℃静置40min 以上以充分去除油脂。
3. 10,000g 4℃离心10分钟，溶液分为两相，中间为蛋白膜。
吸除上层液体；随后用吸头或针头轻轻拨开蛋白膜，吸除下层液体。
蛋白膜将附着于离心管壁。
注意：(1)离心速度过高将使蛋白膜过于坚固，难以溶解。
(2)如果初始组织量较少(<10mg)，离心后难以得到完整的蛋白膜，此时可吸去上下层液体，加入0.5-0.8ml纯乙醇混匀，10,000g 4℃离心5分钟。
弃所有液体，蛋白沉淀在管底。
4. 敞开管口，室温10分钟空气干燥沉淀。
5. 每100mg组织所得到的蛋白加 200ml用户自备的缓冲液，
95℃煮10分钟。
室温放置20分钟溶解沉淀。
注意：(1)可4℃过夜溶解沉淀，偶有少量不溶性组织纤维碎片可离心去除。
(2)有时染色体DNA可与蛋白质一起被抽提出来，溶解时则形成粘稠物。
延长95℃热变性时间、不时振荡、用注射针头反复抽吸，有助于彻底打断DNA。
3．样本组织RNA提取：取液氮保存的肺组织，研碎后加入RNAisoTMPlus，将
研碎的样品完全覆盖，室温静置至样品完全融化，在研磨至裂解液呈透明状。
移至离
心管后加入l／5l埘AisoTMPlus体积量的氯仿，用力振荡后移至离心管中，室温静置
5min。
12，000rpm／min 4 0C离心15min，取出离心管吸取上清夜，移入新的离心管。
向
上清中加等体积的异丙醇，混匀后室温静置10min。
12，000rpm／min 4"C离心10min。
弃取上清，加入75％的乙醇lml，洗涤管壁后12，000 rpm／min4。
C离心5min，弃去乙醇。
室温干燥沉淀5min后加入适量RNase．free水溶解沉淀，完全溶解后置于--80℃
保存。
4．按照试剂盒说明在微管中配制反应混合溶液，将提取的RNA),II入微管后70℃
反应5min，离心收集。
依试剂盒说明依次加入5×reaction buffer，Ribolock Ribonuclease inhibitor和10 mM Dntp mix，混匀后离心收集。
置于25℃5min。
加入逆转录酶，然
后置于25℃10min，再置于42℃60min，加热到70℃10min停止反应。
组织剪碎，称重，加裂解液（含蛋白酶抑制剂）后匀浆，超声破碎也可以，注意要在冰上进行。
然后12000转，10分钟，4度，离心取上清，测蛋白浓度，加loading buffer煮沸5-10分钟，做western
天根有一款样本保存液，能迅速渗入组织细胞，高效抑制RNase活性。