大鼠PKA免疫组化试剂盒

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即用型大鼠VEGFSP免疫组化染色试剂盒

即用型大鼠VEGF SP免疫组化染色试剂盒产品编号：QD82178试剂的保存：短期于4℃保存，长期于-20℃保存。

工作原理血管内皮生长因子(VEGF)是相对分子质量为(34～45) ×103的同源二聚体糖蛋白。

人体内可形成多种异构体可以特异性地促进血管内皮有丝分裂的因子。

VEGF是一种选择性促内皮细胞有丝分裂原,它能增加血管通透能力,促进内皮细胞增殖,对肿瘤的浸润和转移有重要影响。

链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量47000。

同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍。

亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。

链霉亲和素等电点接近中性，IP=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。

根据研究，SP（StreptAvidin-Biotin Complex）大约可形成上百个左右的过氧化物酶和数十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。

应用范围适用于免疫组织化学方法以显示待测抗原的分布，本试剂盒适用于常规石蜡包埋切片、冰冻切片，培养固定的细胞切片以及新鲜制备的血涂片、爬片等。

试剂盒中内容1.山羊血清封闭液：1ml(效价1：10，临用前用TBS或PBS稀释10倍)。

用于组织切片的封闭。

2.二抗：1ml（效价1：10，临用前用抗体稀释液稀释10倍)。

亲和纯化抗体，标记长臂生物素，生物素标记抗兔IgG。

3.SP：1ml（效价1：10，临用前用SP稀释液稀释10倍）。

链酶亲和素-过氧化物酶复合物。

用户自备试剂：1.粘片剂APES或Poly-L-Lysine。

2.0.01M PBS，0.01M 枸橼酸盐缓冲液。

3.DAB显色试剂盒。

4.免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。

石蜡切片染色程序:1.载玻片防脱片剂处理:可选择APES或Poly-Lysine。

大鼠前列腺特异性抗原(PSA)酶联免疫分析试剂盒说明书本试剂

大鼠前列腺特异性抗原（PSA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：312pg/ml-20000pg/ml最低检测限：78pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠PSA，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中PSA 含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗PSA抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PSA抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的PSA呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

大鼠PKA-Cβ(PKA-Cβ)ELISA试剂盒操作说明

大鼠PKA-Cβ(PKA-Cβ）ELISA试剂盒操作说明大鼠PKA-Cβ(PKA-Cβ）ELISA试剂盒操作说明大鼠PKA-Cβ(PKA-Cβ）ELISA试剂盒实验原理大鼠PKA-Cβ(PKA-Cβ）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被大鼠PKA-Cβ(PKA-Cβ）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的大鼠PKA-Cβ(PKA-Cβ）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。

将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。

为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。

最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

immunoway cd141 免疫组化检测试剂盒说明书

CD141免疫组化检测试剂盒【产品货号】 IHCM6830【产品名称】1、通用名称：CD141 mouse mAb ABT145免疫组化检测试剂盒2、英文名称：CD141 High Sensitive and Rapid Immunohistochemical Kit【主要组成成份】编号名称规格保存试剂 9A 脱蜡修复二合一溶液20X 60 mL 2~8°C 试剂 B 过氧化物酶封闭缓冲液 3 mL 2~8°C 试剂 C HRP 多聚合抗兔/鼠二抗 3 mL 2~8°C 试剂 D 超敏DAB 浓缩液20X 150μL 2~8°C 试剂 E 超敏DAB 缓冲液 3 mL 2~8°C 试剂 F 苏木精染色缓冲液 3 mL 2~8°C 试剂 G即用型抗体溶液3 mL2~8°C【预期用途】免疫组织化学染色。

【作用原理】超敏快速免疫组化检测试剂盒，摆脱传统免疫组化实验条件对实验的限制和束缚，无需通风厨和传统的脱蜡修复缸，将传统的三次二甲苯脱蜡、三到五次梯度乙醇水化和抗原修复整合成一个溶液，有效的缩短了操作时间，简化了繁琐的操作步骤，同时，减少了操作中的变量，提高了染色的稳定性。

脱蜡抗原修复二合一试剂应用新的环保技术，不仅把对身体的危害降到了最低，而且对环境不会造成任何污染。

免疫组化实验用到的试剂一站式配齐，具有高灵敏度的 HRP 多聚合物二抗(Anti-Rabbit/Mouse)和 D AB 显色液配套使用，使得该试剂盒具有操作方便、快速、灵敏度高等特点。

【包装规格】3mL 装。

标准可染色30张切片。

【储存条件及有效期】1、储存要求：2℃～8℃密封保存。

2、有效期：一年。

【适用仪器】手工操作【自备材料】 1、合适的加热装置，染缸，移液器，盖玻片等常用耗材2、无水酒精3、中性树胶4、 PBS 、纯水等常用试剂【样本要求】新鲜活检或外科样本组织，甲醛固定，固定时间8-24小时要求取材、脱水、石蜡包埋并制成蜡块。

基于PKA-CREB信号通路探讨涤痰化瘀开窍法对血管性痴呆大鼠的影响

基于PKA-CREB信号通路探讨涤痰化瘀开窍法对血管性痴呆大鼠的影响基于PKA/CREB信号通路探讨涤痰化瘀开窍法对血管性痴呆大鼠的影响引言血管性痴呆（vascular dementia，VD）是一种以脑动脉病变为主要病变的痴呆综合症。

其临床特点包括逐渐进行性的认知和记忆功能障碍，与脑血管病变相关的临床症状，如局部缺血、脑栓塞和血液动力学改变等。

涤痰化瘀开窍法作为中医药的一种治疗方法，在临床实践中显示出一定的效果。

本文旨在通过研究PKA/CREB信号通路，探讨涤痰化瘀开窍法对血管性痴呆大鼠的影响。

一、PKA/CREB信号通路在血管性痴呆中的作用PKA/CREB信号通路是参与细胞增殖、分化和存活的重要通路之一。

研究发现，血管性痴呆患者的海马和前额叶皮质的神经细胞存在PKA/CREB信号通路功能异常的情况。

具体来说，PKA/CREB信号通路失活会导致神经元的突触可塑性降低，从而影响学习和记忆功能。

因此，研究PKA/CREB信号通路在血管性痴呆中的作用，有助于进一步理解该疾病的发生机制，并寻找潜在的治疗靶点。

二、涤痰化瘀开窍法对血管性痴呆治疗的临床应用涤痰化瘀开窍法作为中医药的一种治疗方法，通过调节体内的生命活动进行治疗。

在临床应用中，涤痰化瘀开窍法被广泛应用于治疗血管性痴呆。

该疗法通过疏散风热、清热解毒、化痰止咳、活血化瘀、开窍醒脑等药性作用，改善血管性痴呆患者的认知和记忆功能。

三、涤痰化瘀开窍法对血管性痴呆大鼠的实验研究为了进一步探究涤痰化瘀开窍法对血管性痴呆的影响，我们设计了一系列的实验。

首先，将健康大鼠随机分为正常对照组、模型组和涤痰化瘀开窍法干预组。

其中，模型组和涤痰化瘀开窍法干预组均经右颈总动脉栓塞诱导血管性痴呆模型。

然后，我们在涤痰化瘀开窍法干预组中进行三周的治疗。

治疗期间，我们通过行为学测试（如Morris水迷宫测试、新目标探索测试）评估大鼠的认知和记忆功能，并通过实时定量PCR和免疫组化检测PKA/CREB信号通路相关基因和蛋白的表达。

免疫组化(DAB试剂盒标准)

免疫组织化学技术一，流程图：二，详细操作：（一）制作石蜡切片（详见后面的材料）（二）脱蜡，透明，水化1）脱蜡前先60度烘片30-40min;2）二甲苯脱蜡透明：将切片置于二甲苯中（3缸），各15min。

注意：若标本放入二甲苯后出现水雾或标本不呈现透明色，说明脱水没有脱干净，可重新放置二甲苯中；液体一定要没过标本3）梯度乙醇入水：将切片依次置入100%乙醇，95%乙醇，90%乙醇，80%乙醇，70%乙醇中，纯水（自己接），各5min;（三）抗原修复操作：1）6min45s烧开修复液(柠檬酸0.2g+柠檬酸三钠 1.5g蒸馏水稀释至500mL,PH为6.0)2）将组织放入修复液置于微波炉中焖5分钟3）将修复液1min20s再烧开4）组织再焖5分钟5）取出烧杯，使液体和组织自然冷却6）PBS冲洗3分钟1次,0.1%triton 10min(破坏细胞膜)，PBS 冲洗3分钟1次（四）孵育操作：1）阻断内源性过氧化物酶：将切片置于3%过氧化氢10min，PBS冲洗3分钟x3次；2）封闭（非特异性染色阻断剂）：每个脑片35ul山羊血清，室温下孵育30分钟（注意：此步操作后不用PBS冲洗）；3）加一抗(PCNA兔抗大鼠)：滴加适当比例稀释的一抗工作液（1:200比较好）2h，PBS冲洗3分钟⨯ 3次；加完一抗后，最好4度冰箱过夜，注意标本要保持湿度，可放在湿盒，第二天在37度或者室温复温30—40min，复温也要放在湿盒内4）加二抗（生物素标记的羊抗兔IgG复合物）：室温孵育10分钟，PBS冲洗3分钟⨯ 3次；5）加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶：室温孵育10分钟，PBS冲洗3分钟⨯ 3次；（五）显色1）DAB染色：每个脑片35ul新鲜配制的DAB显色液，室温孵育10-20s（颜色有变就好，条件要自己摸）→大量自来水冲洗。

2）苏木素复染：苏木素染色30s（可以用塑料架子浸泡或者枪头滴）→自来水冲洗→PBS溶液返蓝10-20min（还可以浸泡10min的纯水）3）脱水，透明，封片：梯度乙醇脱水→二甲苯透明2-3分钟→中性树胶封片（现用电吹风吹干片，直接用中性树脂封片，晾干，观察片有脏时，可以用二甲苯擦洗背面）备注：1、PBS配制：团队常用一包PBS粉末，配制2000ml纯水，加6ml 的NAOH，PH在7.2-7.4，（不同的粉末，配制不一样，加入的NAOH 或者酸量不同，但是PH一般是一样的）2、一抗工作液，一般配制成5ml，0.3%的牛血清（0.15g），5%的羊血清（250ul），余加纯水3、一抗的浓度，不同的实验，浓度，物质都是不一样的4、DAB：缓冲液：底物：色源=20:1:1，每次配制都要有预留的部分，防止误差5、用枪：不要触及液体的地步，一档吸二档打完。

二步法抗兔、鼠通用型免疫组化检测试剂盒

⼆步法抗兔、⿏通⽤型免疫组化检测试剂盒FOR RESEARCH USE ONLY.Code No:GK500705Storage: Store vial at 2-8.℃Intended UseChemMate? EnVision? Detection Kit, Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse, is intended for use inimmunocytochemistry together with the TechMate? and Autostainer Instruments. The kit is employed in atwo-step procedure where the first step is incubation of the tissue with an optimally diluted primary rabbit ormouse antibody, and the second step is incubation with the ChemMate? EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse(ENV) reagent of the kit. This reagent is a peroxidase-conjugated polymer, which also carries antibodies torabbit and mouse immunoglobulins. The reaction is visualized by the ChemMate? DAB+ Chromogen alsoincluded in the kit.Reagents Materials providedBottle A ChemMate? DAKO EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse (ENV)5 mL, ready-to-useDextran coupled with peroxidase molecules and goat secondary antibody molecules against rabbit andmouse immunoglobulins. In buffered solution containing stabilizing protein and preservative.Bottle B ChemMate? Substrate Buffer2*6.25 mLBuffered solution containing hydrogen peroxide and preservative.Bottle C ChemMate? DAB+ Chromogen1*0.25mL, 50 x concentrated3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride in organic solvent. The colour of this reagent may vary from strongviolet to colourless without having any influence on the performance of the kit.Precautions ：1. Bottle A , ChemMate? EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse (ENV), contains material of animal origin and it cannot be excluded that trace amounts of human material could be present due to manufacturing procedures. As with any product derived from biological sources, proper handling should be used.2. Do not expose Bottle C , ChemMate? DAB+ Chromogen or the Substrate Working Solution (CHROM) to strong light.3. Bottle C , ChemMate? DAB+ Chromogen contains 1.5% 3,3’-diaminobenzidine tetrahydrochloride, and is labelled: Harmful.Storage ：Store the kit at 2-8 . The prepared Subs ℃trate Working Solution (CHROM) should be stored at 2-8 and used℃within 5 days.Quality Control ： Each staining run should include a known positive control specimen to ascertain a proper performance of all the applied reagents. If the positive control specimen fails to demonstrate positive staining, labelling of test specimens should be considered invalid. A negative control reagent should be used with each specimen to identify any non-specific staining. If non-specific staining cannot be clearly differentiated from the specific staining, the labelling of the test specimen should be considered invalid.Please contact us for more information about this product.EnVision? Detection Kit,Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse⼆步法抗兔/⿏通⽤型免疫组化检测试剂盒剂型：⼯作液编号：GK500705适⽤：⼀抗为兔抗或⼩⿏抗的免疫组化检测储存：2-8℃该试剂盒是⼀个特别敏感的⼆步法免疫组化试剂盒，适合与兔抗抗体或⼩⿏抗抗体配⽤。

常用免疫组化试剂介绍

常用免疫组化试剂介绍概述免疫组化（IHC）是一门通过检测特定抗原在组织切片中的表达程度来揭示组织形态和细胞化学等方面信息的技术。

由于IHC是一种定性分析技术，所以该方法需要与定量技术（如分子生物学）结合使用，从而得到更准确的数据。

IHC涉及到多种试剂，其标记原理和表现形式各异，能够检测的抗原种类也不同。

本文将对常用的IHC试剂进行介绍，以此为指导，让大家更好地了解和应用IHC技术。

常用的免疫组化试剂抗原修复试剂抗原修复试剂（Antigen Retrieval）用于在组织样本中使细胞内蛋白与抗体亲和性和特异性增加。

这种试剂可通过热处理（如高压）或化学处理（如酶样蛋白和酸性处理）来复原被检测抗原的结构和功能。

常用的抗原修复试剂包括：EDTA、Tris、Citrate等。

原位杂交试剂原位杂交试剂（In Situ Hybridization）可检查DNA或RNA分子的特异性结合情况。

这种试剂可将RNA等分子与特定热稳定的蛋白质结合，用于检测基因突变等。

常用的原位杂交试剂包括：流式胶体金试剂、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、双链RNA原位杂交等。

细胞计数试剂细胞计数试剂（Cell Counting）用于获得细胞数量或结构变化。

这种试剂通常用于确定某一类细胞的数量、细胞计数和分离、细胞生长和分裂的应用。

常用的细胞计数试剂包括：皮质醇、14C-labeled thymidine等。

细胞信号转导试剂细胞信号转导试剂（Cell Signaling）用于研究细胞分子级别的通讯系统，并采取措施以确定物质在细胞内的作用机理。

常用的细胞信号转导试剂包括：抗体、试剂原和阻断类似物等。

同型抑制剂同型抑制剂（Isotype Control）用于在IHC实验中作为实验设计的对照组，以检测所观察的抗原与探测剂结合的特异性表现。

常用的同型抑制剂包括：IgG1、IgG2a和IgG2b等。

情况控制试剂情况控制试剂（Condition Control）用于确定IHC试验的最佳条件，包括温度、缓冲液、酸碱程度等。

免疫组化试剂盒说明书

(HopeBiot) 镇江厚普生物科技有限公司Zhenjiang Hope Biotechnology Co.，Ltd订货电话：*************传真：*************网站：http:// E-mail ：*******************Histostain-Plus Kits免疫组化染色试剂盒货号：SP-9002简介: 本试剂盒为美国ZYMED 公司SP 系列试剂盒，全称为过氧化物酶标记的链霉卵白素（Streptavidin/Peroxidase ）染色试剂盒。

由美国ZYMED 公司于1986年首建。

由于链霉卵白素的分子量是60kDa ，有四个亚基和生物素结合，等电点为6.5，所以该方法具有灵敏度高、特异性强、背景清晰、成本低廉的优点，是理想的免疫组化染色方法。

包装：试剂（无色液体）： 3％ H 2O 2去离子水， 6ml ；试剂A （蓝色液体）：封闭用正常山羊血清工作液， 6ml ；试剂B （黄色液体）：生物素化山羊抗小鼠IgG 二抗工作液， 6ml ；试剂C （橙色液体）：辣根酶标记链霉卵白素工作液（S-A/HRP ），6ml 。

标本染色步骤：1，石蜡切片，常规脱蜡至水。

2，蒸馏水冲洗，PBS 浸泡5分。

（如需采用抗原修复，在此步骤后进行） 3， 3％ H 2O 2去离子水（无色液体）孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。

4，滴加试剂A （蓝色液体）室温孵育10-15分钟，倾去，勿洗。

5，滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3小时或4℃过夜。

6， PBS 冲洗，3分钟×3次。

7，滴加试剂B （黄色液体），室温或37℃孵育10-15分钟。

8， PBS 冲洗，3分钟×3次。

9，滴加试剂C （橙色液体），室温或37℃孵育10-15分钟。

10，PBS 冲洗，3分钟×3次。

11，显色剂显色DAB 。

12，自来水充分冲洗。

MK-801处理青春期大鼠制作精神分裂症认知损伤模型和非经典抗精神病药物治疗机制研究

MK-801处理青春期大鼠制作精神分裂症认知损伤模型和非经典抗精神病药物治疗机制研究第一部分MK-801对青春期大鼠认知功能和海马神经细胞突触的影响背景：认知障碍是精神分裂症的核心症状之一。

研究发现突触生长缺陷与认知障碍有关。

尸检研究也发现精神分裂症患者海马神经细胞也存在突触生长缺陷。

NMDA受体在青春期大脑发育的关键时期通过调节突触修剪和稳定而对大脑发育起了关键作用。

非竞争性NMDA受体阻断剂常被用来制作精神分裂症认知障碍动物模型。

目的：探索青春发育期阻断NMDA受体是否会导致海马神经细胞的突触生长缺陷,并最终导致认知障碍。

方法：雄性青春期大鼠接受14天MK-801(0.2mg/kg i.p qd)或相等容积的生理盐水的腹腔注射后,观察它们的空间记忆能力、树突棘形态变化、突触前和突触后标志物(SYP和PSD-95)的蛋白表达量以及突触生长相关因子RhoA、Rac1和Cdc42基因表达水平的变化。

结果：我们发现亚慢性MK-801使青春期大鼠认知功能损伤,海马神经细胞的树突棘头直径缩小。

同时,亚慢性MK-801使青春期大鼠海马神经细胞内的突触素和PSD-95的蛋白表达量明显下降,RhoA mRNA表达水平上升但是Rac1和Cdc42的mRNA水平明显下降。

结论：青春发育期如果NMDA受体受到阻断会导致海马神经细胞的突触生长缺陷这次的研究结果为探索精神分裂症认知障碍的发病机制提供了一个新的研究方向。

第二部分奥氮平、利培酮和喹硫平对MK-801精神分裂症模型大鼠认知和海马小清蛋白阳性中间神经元的影响背景：认知障碍是精神分裂症的核心症状之一。

非经典抗精神病药物能用来治疗认知障碍。

但是非经典抗精神病药物(APDs)改善认知损伤的机制至今不明。

尸检和关联研究均证明PV中间神经元的突触抑制功能障碍与精神分裂症患者认知障碍密切相关。

亚慢性MK-801能诱导青春期大鼠出现类似于精神分裂症认知障碍症状和PV 中间神经元数量下降等神经病理学改变。

免疫组化原理步骤及试剂

免疫组化原理步骤及试剂免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种广泛应用于生物医学领域的实验技术，用于检测组织切片中特定抗原的分布和表达水平。

它结合了免疫学和组织学的原理，能够在组织切片上定位和检测抗原，并通过染色方法将抗原可视化，从而实现对抗原的定性和定量分析。

免疫组化实验的步骤通常包括固定、脱脂、抗原修复、抗体和检测步骤。

下面将详细介绍每个步骤的操作和常用试剂。

1.组织固定：组织固定的目的是保持组织结构完整并固定细胞的抗原。

常用的固定试剂包括10%中性缓冲福尔马林（10% neutral buffered formalin，NBF）和乙醇等。

2.脱脂：脱脂是将组织切片中的脂质去除，以提高抗体对抗原的结合效率。

常用的脱脂试剂包括二甲苯、甲醛和乙醚等。

3.抗原修复：抗原修复是为了使被固定的组织恢复原样，增强抗原的可检测性。

抗原修复的方法包括热处理、酶解法和pH调整等。

常用的抗原修复试剂包括热解剂例如EDTA缓冲液、Tris-EDTA缓冲液，酶解剂例如胰蛋白酶和蛋白酶K，以及甲酸、盐酸等酸性溶液。

4.抗体：5.检测：检测步骤用于将抗原-抗体复合物可视化。

这通常通过染色方法完成。

常用的染色方法包括免疫酶标记、免疫荧光和免疫金标记等。

免疫组化实验所需的试剂种类繁多，下面列举一些常用的试剂：1. NBF（10% neutral buffered formalin）：用于组织固定，保持组织形态完整。

2.二甲苯：用于脱脂步骤，去除组织中的脂质。

3.甲醛：用于脱脂步骤。

4.乙醚：用于脱脂步骤。

5.EDTA缓冲液：用于抗原修复的热解剂。

6. Tris-EDTA缓冲液：用于抗原修复的热解剂。

7.胰蛋白酶：用于抗原修复的酶解剂。

8.蛋白酶K：用于抗原修复的酶解剂。

9.盐酸：用于抗原修复的酸性溶液。

10.一抗：选择特异性良好的一抗抗体，常用的有多克隆和单克隆抗体。

11.二抗：用于检测一抗结合的抗体，常用的二抗有反兔、反小鼠或反人的多克隆抗体。

免疫组化知识普及、二抗免疫组化试剂盒

Anti-Mouse, Anti-Rabbit
包装规格种类品名
描述
包含
15ml 60ml
HRP UV Quanto HRP （ DAB DAB ）
UV Quanto HRP
DAB Quanto （Stable for Peroxide Block, UV-Block, Amplifier , HRP
免疫组化知识普及、二抗免疫组化试剂盒
优宁维缪娓
直接法
• 直接法是将酶（如HRP）标记在特异性一抗上，然后用酶标记抗体直接与相应抗原特异性结合，形成抗原-抗体HRP复合物，最后用酶底物显色。
• 优点：简单、步骤少、省时、特异性高。 • 缺点：敏感性差
间接法
• 我这边的讲的间接法就是酶标记在二抗上，再与一抗反应，然后进行显色反应。
60ml 125ml
Storage: 2-8℃,18months
Permanent Fast permanently mounted red
Tablet Fast red aqueous mounted
DAB Quanto 1 2
DAB Quanto 1 DAB Plus 2
DAB Quanto 优势: Long stability 稳定性强，混合后可在室温保存一周， 2-8 度保存2 周
Antibody
n 30min
n
20min
s
s
e
e
R i s MOM Polymer n 10min s e
R
i s DAB Quanto n 5min
s
e
R i s Counterstain n s e
IHC Staining-MOM Detection System

免疫组化实验步骤

免疫组化实验步骤免疫组化操作步骤一、实验原理与意义免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。

它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。

（一）、仪器设备1. 18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.2.水浴锅（二）、试剂1. PBS缓冲液（ph7."2―7."4）：NaC137mmol/L，KCl2."7mmol/L ,Na2HPO44."3mmol/L, KH2PO41."4mmol/L.2．"0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6."0,1000ml）：柠檬酸三钠3g,柠檬酸0."4g。

3．0."5mol/L EDTA缓冲液（ph8."0）：700ml水中溶解186."1g EDTA& 8226;2H2O,用10mmol/L NaOH调至ph 8."0,加水至1000ml.4. 1mol/L的TBS缓冲液（ph8."0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH 8."0,加水1000ml。

5.酶消化液：a.0."1%胰蛋白酶:用0."1%CaCl 12(ph7."8)配制。

b.0."4%胃蛋白酶液：用0."1N的HCl配制。

6. 3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制7.风裱剂：a.甘油和0."5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9."0–9."5）等量混合b油和TBS(PBS)配制8．"TBS/PBS PH9."0–9."5,适用于荧光纤维镜标本;ph7."0-7."4适合光学纤维标本（三）、操作流程1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。

大鼠磷酸化IKBa(P-IKBa)酶联免疫分析

大鼠磷酸化IKBa（P-IKBa）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中磷酸化IKBa（P-IKBa）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠磷酸化IKBa（P-IKBa）水平。

用纯化的大鼠磷酸化IKBa（P-IKBa）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入磷酸化IKBa（P-IKBa），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的磷酸化IKBa（P-IKBa）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠磷酸化IKBa（P-IKBa）浓度。

样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

加入一定量的PBS，PH7.4。

免疫组化实验--全套试剂耗材

免疫组化实验试剂耗材大全华越洋---------------------------- 0.1%胰蛋白酶消化液waryong 10ml 110多聚甲醛merk 25g 504%多聚甲醛waryong 500ml 22010X多聚赖氨酸waryong 10ml 260抗荧光衰减封片剂waryong 25ml 230防脱载玻片waryong 50片310mayer'苏木素染液（免疫组化）waryong 100ml 410封闭用正常绵羊/山羊/兔/人血清waryong 10ml 75弗氏不完全佐剂sigma 10ml 180弗氏完全佐剂sigma 10ml 200柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L PH6.0 waryong 1L 10DAB amresco 1g 13520XDAB显色液 A，B液各1.5ml waryong 3ml 95NBT amresco 100mg 95BCIP amresco 100mg 310BCIP/NBT底物显色试剂盒waryong 25ml 210PBST(PH7.4)抗体稀释液waryong 1ml 25一抗稀释液waryong 100ml 390HRP标记抗体稀释液waryong 100ml 390AP标记抗体稀释液waryong 100ml 390荧光抗体稀释液waryong 50ml 110免疫组化名称规格价格Super Polymer-二步法IHC试剂盒3ml35818ml1598兔Streptavidin-HRP试剂盒3ml19818ml998鼠Streptavidin-HRP试剂盒3ml19818ml998兔∕鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒3ml25818ml1198山羊抗兔IgG,Biotin(IHC工作液)3ml6818ml298山羊抗鼠IgG,Biotin(IHC工作液)3ml6818ml298山羊抗兔∕鼠IgG,Biotin(IHC工作液)3ml9818ml498 Streptavidin-HRP(IHC工作液)3ml9818ml49860ml258 AEC底物显色试剂盒20ml98 BCIP∕NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(40x)40ml198 BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂40ml229改良型苏木素(IHC常用复染试剂)10ml68柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液,100x)100ml68EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50x)100ml68封闭用正常山羊血清工作液(免疫组化封闭液)10ml68内源性过氧化物酶封闭液10ml68内源性碱性磷酸酶封闭液10ml68Biotin标记抗体稀释液20ml中性树胶100g98水性封片剂10ml98 Super Polymer-二步法IHC试剂盒（带DAB显色液）3ml39818ml1698兔Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）3ml25818ml1098鼠Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）3ml25818ml1098兔∕鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）3ml29818ml1298。

常用免疫组化试剂介绍完整版

常用免疫组化试剂介绍完整版免疫组化试剂是一类用于检测细胞和组织中特定分子的试剂。

它们能够与目标分子发生特异性的结合反应，通过显色、荧光等方式实现目标分子的定位和检测。

常用的免疫组化试剂有抗体、底物、荧光染料等。

下面将详细介绍常用的免疫组化试剂。

一、抗体单克隆抗体：单克隆抗体是由单个克隆的B细胞分泌的抗体组成。

它们具有更高的特异性和一致性，适用于特定的免疫组化实验。

单克隆抗体一般通过酶联免疫吸附试验或杂交瘤技术获得。

二、底物底物是一种被特定酶催化后能够产生染色或荧光信号的化学物质。

在免疫组化实验中，常用的底物有DAB、VIP、AP、HRP等。

DAB：DAB（3,3'-二氨基联吡啶）是一种常用的免疫组化染色底物。

当DAB与过氧化物酶结合后，在特定条件下会产生棕色沉淀物，用于检测目标分子的位置。

VIP：VIP（维珍纳胶体阳离子）是一种特殊的底物，其在经过过氧化物酶催化后，形成带有阳离子电荷的胶体颗粒。

VIP用于染色后，可以形成黑色沉淀物。

AP：AP（碱性磷酸酶）是一种常用的底物，可以和特定基质反应生成可见或荧光信号。

AP基质有两种常用的类型，一种是快速红色溶液（Fast Red），另一种是紫色溶液。

HRP：HRP（过氧化物酶）是一种广泛使用的底物，在过氧化物酶的作用下可以产生明亮的荧光或染色信号。

HRP染色通常呈现为褐色或黑色。

三、荧光染料荧光染料是一种通过吸收特定波长的光线并在另一个波长下发射荧光的化合物。

免疫组化实验中常用的荧光染料有FITC、TRITC、Cy3、Cy5等。

FITC：FITC（荧光异硫氰酸酯或荧光同硫氰酸酯）是一种常用的绿色荧光染料，其在激发波长为488nm的波长下产生绿色荧光。

TRITC：TRITC（荧光异硫氰酸酯）是一种常用的红色荧光染料，其在激发波长为568nm的波长下产生红色荧光。

Cy3：Cy3是一种荧光发色团，其在激发波长为550nm的波长下产生黄绿色荧光。

Cy5：Cy5是一种荧光发色团，其在激发波长为650nm的波长下产生红色荧光。

益气逐瘀解毒颗粒对肝纤维化模型大鼠GIV_及下游信号通路PKA

㊃基础研究㊃基金项目:国家自然科学基金面上项目(82274323);四川省科技厅项目(2020YFS0379)作者单位:610072　成都中医药大学附属医院中心实验室[陶雨静(博士研究生)㊁李晖㊁陈婧㊁郭佳玲(硕士研究生)㊁张天洪㊁袁强华];成都中医药大学临床医学院[陶雨静(博士研究生)㊁郭佳玲(硕士研究生)]作者简介:陶雨静(1994-),2021级在读博士研究生㊂研究方向:肝纤维化基础与临床研究㊂E⁃mail:915114379@通信作者:李晖(1970-),博士,教授,中国防痨协会结核病与肝病专科分会常务委员㊂研究方向:肝纤维化基础与临床研究㊂E⁃mail:1400124746@益气逐瘀解毒颗粒对肝纤维化模型大鼠GIV 及下游信号通路PKA /CREB 表达的影响陶雨静　李晖　陈婧　郭佳玲　张天洪　袁强华【摘要】　目的　观察益气逐瘀解毒颗粒对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl 4)诱导的肝纤维化模型大鼠的抗纤维化作用及其对与Gα相互作用的囊泡相关蛋白(Gα⁃interacting vesicle⁃associatedprotein,GIV)㊁下游信号通路蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,CREB)表达水平的影响并探讨其作用机制㊂方法　SD 雄性大鼠予以CCl 4橄榄油混合物腹部皮下注射7周诱导肝纤维化模型,造模成功后随机分为益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组,扶正化瘀组及模型对照组,另设阴性对照组,共6组,每组大鼠8只㊂益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组分别予益气逐瘀解毒颗粒10.8g /(kg㊃d)㊁5.4g /(kg㊃d)㊁2.7g /(kg㊃d)灌胃给药,扶正化瘀组予扶正化瘀胶囊0.405g /(kg㊃d)灌胃给药,其余组等量蒸馏水灌胃,持续5周后处死大鼠收集标本㊂检测外周血丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)㊁天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST);肝组织苏木精伊红(hematoxylin⁃eosin,HE)㊁MASSON 染色检测肝纤维化程度;免疫组化法检测肝组织α⁃平滑肌激动蛋白(alpha smooth muscle actin,α⁃SMA)含量,并采用实时荧光定量PCR 法(real time quantitative PCR,RT⁃qPCR)和蛋白免疫印迹法分别检测大鼠肝组织中Ⅰ型胶原α1链(collagen type I alpha 1chain,Col1A1)㊁Ⅰ型胶原α2链(collagen type I alpha 2chain,Col1A2)㊁GIV㊁PKA㊁CREB mRNA 和蛋白表达水平㊂结果　益气逐瘀解毒颗粒可减少肝纤维化模型大鼠胶原纤维增生及肝细胞损伤,且与模型对照组相比,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组α⁃SMA 含量显著下降(P <0.05),Col1A1㊁Col1A2㊁GIV 表达显著下调(P <0.05),益气逐瘀解毒颗粒高㊁中剂量组PKA 表达上调(P <0.05),中剂量组CREB 表达显著上调(P <0.05);与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中剂量组α⁃SMA 含量显著下降(P <0.05),高剂量组GIV 表达下调(P <0.05),中剂量组PKA 表达上调(P <0.05)㊂结论　益气逐瘀解毒颗粒对CCl 4诱导的肝纤维化模型大鼠具有抗肝纤维化作用,可能与调节GIV 表达及其下游信号通路PKA /CREB 的表达有关㊂【关键词】　益气逐瘀解毒颗粒;　肝纤维化;　与Gα相互作用的囊泡相关蛋白;　蛋白激酶A /环磷酸腺苷反应元件结合蛋白信号通路【中图分类号】　R285.5　【文献标识码】　A　doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2024.01.002Study on the effect of Yiqi Zhuyu Jiedu granule by regulating GIV and PKA /CREB signal pathway on hepatic fibrosis in a carbon tetrachloride⁃induced rat modelTAO Yujing ,LI Hui ,CHEN Jing ,GUO Jialing ,ZHANG Tianhong ,YUAN QianghuaCentral Lab ,Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine ,Chengdu 610072,China Corresponding author :LI Hui ,E⁃mail :1400124746@【Abstract】　Objective　Study the effect and mechanism of Yiqi Zhuyu Jiedu granule by regulating GIV and PKA/CREB signal pathway on hepatic fibrosis in the carbon tetrachloride(CCl4)⁃induced rat model.Methods　Hepatic fibrosis was induced in male Sprague⁃Dawley rats by subcutaneous injection of mixture of CCl4and Olive oil twice a week for7weeks.The animals were randomly divided into six groups (each group,n=8)as follows:high,middle and low dose group each was treated with different dose of Yiqi Zhuyu Jiedu granule by gavage,the Fuzheng Huayu capsule group was treated with Fuzheng Huayu capsule,the model group and the control group was treated with distilled water.After5weeks,Alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST)were analyzed by ELISA and automatic biochemical instrument.The effect of Yiqi Zhuyu Jiedu granule on hepatic fibrosis was evaluated by histo⁃morphologically using hematoxylin and eosin(HE)staining and MASSON staining,and the collagen pro⁃portionate area was quantified.The content of alpha smooth muscle actin(α⁃SMA)in liver tissue was detected by immunohistochemistry.In addition,fibrosis⁃related factors,such as Collage typeⅠalpha1 chain(Col1A1),Collage typeⅠalpha2chain(Col1A2),Gα⁃interacting vesicle⁃associated protein (GIV),protein kinase(PKA)and cAMP response element binding protein(CREB)expression level, were evaluated using the method of real⁃time polymerase chain reaction and Western blot.Results　Yiqi Zhuyu Jiedu granules could decrease collagen fiber hyperplasia and hepatocyte injury in liver fibrosis model pared with the model group,the content ofα⁃SMA in each group of Yiqi Zhuyu Jiedu granules group was significantly decreased(P<0.05),and the expression of Col1A1,Col1A2and GIV was significantly down⁃regulated(P<0.05).The expression of PKA in the high and medium dose groups was up⁃regulated(P<0.05),and the expression of CREB in the medium dose group was significantly up⁃regulated(P<0.05).Compared with the Fuzheng Huayu group,the content ofα⁃SMA in the the high and middle dose groups of Chinese medicine compound was decreased significantly(P<0.05),the expression of GIV in the high dose group was down⁃regulated(P<0.05),and the expression of PKA in the middle dose group was up⁃regulated(P<0.05).Conclusion　Yiqi Zhuyu Jiedu granule has anti⁃hepatic fibrosis effect on CCl4⁃induced liver fibrosis model rats,which may be related to the regulation of GIV expression and its downstream signaling pathway PKA/CREB expression.【Key words】　Yiqi Zhuyu Jiedu granule;　hepatic fibrosis;　GIV;　PKA/CREB 肝纤维化是由多种致病因素引起的慢性㊁持续性肝脏炎症或损伤后组织修复过程中的代偿反应,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成大于降解,导致过度沉积,形成肝纤维化[1]㊂其中,肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSCs)的激活是其发生的中心环节[2]㊂肝纤维化甚至早期肝硬化可以通过治疗发生逆转[3],及时进行有效的抗肝纤维化治疗是防止慢性肝病向终末期肝病转化的必要措施㊂益气逐瘀解毒颗粒由膈下逐瘀汤合小柴胡汤加减化裁而形成,作为临方制剂应用多年,治疗肝纤维化有确切疗效,可促进肝纤维化的消退㊂前期动物实验证实,益气逐瘀解毒颗粒可促进四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导肝纤维化大鼠模型的肝组织结构恢复,调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的平衡[4],降低促纤维化因子的表达[5],抑制HSCs的活化[6],从而确切改善肝纤维化程度[7]㊂但益气逐瘀解毒颗粒抑制HSCs活化的具体分子机制仍需要进一步明确㊂与Gα相互作用的囊泡相关蛋白(Gα⁃interacting vesicle⁃associated protein,GIV),又称微丝附着梁蛋白[8],是多结构域信号转导子,可以通过鸟嘌呤核苷酸交换因子基序激活Gαi蛋白调控下游多个受体相关信号通路[9⁃11]㊂研究发现,GIV是肝纤维化信号网络的关键枢纽,在损伤后的肝脏中表达,是HSC活化所必需的[12];且一旦表达,GIV抑制抗纤维化通路环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)-蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)-磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p⁃cAMP response element binding protein,pCREB),使信号网络偏向纤维化[13]㊂GIV位于多个肝纤维化受体信号系统的中心,在肝纤维化信号网络中起整合作用,有望成为肝纤维化治疗的重要靶点㊂本研究在构建CCl4诱导肝纤维化大鼠模型基础上,研究益气逐瘀解毒颗粒对该大鼠肝纤维化模型的治疗作用,并进一步探讨其对GIV表达及下游PKA/CREB信号通路的影响,明确其作用靶点㊂1　材料与方法1.1　实验动物健康SPF级雄性SD大鼠58只,7周龄,体质量(220±20)g,由成都达硕实验有限公司提供,实验动物许可证号:SCXK(川)2015⁃030㊂普通饮食,适应性喂养1周后开始实验㊂1.2　实验药物益气逐瘀解毒颗粒由成都中医药大学附属医院药剂科制备,由党参10份㊁黄芪15份㊁莪术10份㊁当归10份㊁川芎5份㊁赤芍10份㊁丹皮10份㊁丹参15份㊁柴胡5份㊁黄芩7.5份㊁甘草2.5份等组成㊂制备方法:全方药物加入8倍量水,浸泡40分钟,煎煮3次,每次50分钟,合并3次滤液,浓缩至相对密度1.3,加入糊精,混合,在75℃下鼓风干燥6小时,粉碎过筛,加入80%乙醇,制粒,65℃下鼓风干燥4小时,整粒,分包装至10g/袋(含生药21.25g);扶正化瘀胶囊购自上海黄海制药有限公司(批号:190912,规格:0.5g/粒)㊂1.3　实验试剂及主要仪器测定Ⅰ型胶原α1链(collagen type I alpha1 chain,Col1A1)多克隆抗体(84336)购自美国CST公司,大鼠GIV多克隆抗体(ab113890)㊁PKA单克隆抗体(ab75991)㊁CREB单克隆抗体(ab32515)㊁Ⅰ型胶原α2链(collagen type I alpha2chain,Col1A2)多克隆抗体(ab96723)及α⁃平滑肌激动蛋白(alpha smooth muscle actin,α⁃SMA)单克隆抗体(ab32575)购自英国abcam公司;上述蛋白的PCR引物序列见表1;7500荧光定量PCR仪为ABI公司产品㊂1.4　动物造模㊁分组与给药1.4.1　肝纤维化大鼠模型制备　对大鼠腹部皮下注射CCl4㊁橄榄油混合液(按2∶3配制而成),每周注射2次,前4周每次给予剂量4mL/kg,后3周每次给予剂量3mL/kg,共7周㊂第7周末随机处死造模组及阴性对照组大鼠各5只,收集外周血,4℃离心20分钟,血清检测生化指标,另取肝右叶组织标本,通过苏木精伊红(hematoxylin⁃eosin,HE)染色和MASSON染色以确定肝纤维化模型制备成功与否,具体参见文献[14]㊂CCl4皮下注射7周后,进行外周血生化指标的检测,结果提示,模型大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)㊁天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)均出现明显的增高,提示CCl4皮下注射后,模型组大鼠出现明显的肝功能损害,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)㊂见表2㊂表2　造模后大鼠生化指标结果比较(x±s,U/L)组别鼠只ALT AST模型组5364.20±58.12a515.00±83.51a阴性对照组547.20±12.07105.20±37.69注:与阴性对照组比较,a P<0.05㊂ALT正常范围:23.5~71.9U/L; AST正常范围:76.2~149.5U/L㊂肉眼观察肝脏标本表面明显颗粒样凸起,HE 染色见肝索排列紊乱,肝小叶结构损坏,肝纤维化弥漫整个视野;MASSON染色可见肝纤维化已从中央静脉和汇管区周围向周围延伸,有形成假小叶的趋势,参照Knodell肝纤维化分期标准,肝纤维化分级达3级,提示肝纤维化模型制备成功㊂1.4.2　动物分组及给药　造模结束后,肝纤维化模型大鼠随机分成益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组,扶正化瘀组及模型对照组,每组各8只,另设阴性对照组8只㊂大鼠用药剂量根据等效体表面积公式计算,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组服用生药分别为10.8g/(kg㊃d)㊁5.4g/(kg㊃d)㊁2.7g/ (kg㊃d),将颗粒用温水溶解后等体积灌胃;扶正化瘀组使用扶正化瘀胶囊,药量为0.405g/(kg㊃d),等体积灌胃浓度;阴性对照组㊁模型对照组也均以等体积的蒸馏水灌胃,每日灌胃1次,连续5周㊂表1　PCR引物序列基因名称引物序列(5'-3')上游下游GIV GCCTTCCGATCCAAGCAATT TGCTAGTGGATGTTCTGCCA Col1A1TCAAGATGGTGGCCGTTACT CATCTTGAGGTC ACGGCATG Col1A2CAAGGTTTCCAAGGACCTGC ATCCATCCAGACCGTTGTGT PKA TTCCCATCCCACTTCAGCTC AAGTTACTCGTGTCCCCAGG CREB GCTGGCTAACAATGGTACCG AGGACGCCATAACAACTCCA β⁃actin GGAGATTACTGCCCTGGCTCCTA GACTCATCGTACTCCTGCTTGCTG1.5　标本采集灌胃5周后,大鼠禁食12小时,用10%苯巴比妥腹腔注射麻醉,开腹充分暴露腹主动脉,采血,4℃离心20分钟,血清存于-80℃保存备用;然后取出肝脏,剪下大小约0.6cm×0.6cm×0.6cm的肝右叶组织,放入10%的中性甲醛中固定,常规石蜡包埋,切片备用㊂另取大小约0.1cm×0.1cm×0.1cm新鲜肝组织-80℃保存,以备实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT⁃qPCR)检测使用㊂1.6　检测指标1.6.1　外周血生化指标检测　ALT㊁AST检测采用速率法,全自动生化检测仪进行检测㊂1.6.2　HE染色㊁MASSON染色进行病理组织学观察　标本取自肝右叶,10%的中性甲醛固定,常规石蜡包埋,切片,分别进行肝组织的HE染色和MASSON染色㊂参照Knodell肝纤维化分期标准,对大鼠肝纤维化程度进行评估,并参照肝纤维化SSS 计分标准,给予每个样本半定量评分㊂1.6.3　免疫组化法检测大鼠肝组织中α⁃SMA的表达　样本切片进行抗原修复,用3%的过氧化氢阻断其内源性过氧化物酶活性,清洗后,按照说明书分别加入一抗㊁二抗,DAB试剂盒显色,脱水㊁透明㊁风干后用中性树胶封片,再加盖玻片,显微镜下观察㊂1.6.4　RT⁃qPCR法检测大鼠肝组织中目标蛋白mRNA的表达　Trizol®Reagent提取转染肝组织总RNA,取纯化后的总RNA进行逆转录,37℃水浴1.5小时以合成cDNA模板进行qPCR检测,经过95℃10分钟预变性,95℃变性15秒,60℃退火㊁延伸15秒,共40个循环㊂以β⁃actin为内参,Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB基因的相对表达情况㊂1.6.5　Western blot检测大鼠肝组织中目标蛋白的表达　RIPA裂解液及超声破碎,提取大鼠肝组织总蛋白,BCA检测蛋白浓度,SDS⁃PAGE电泳㊁转移至PVGF膜,5%脱脂奶粉封闭,分别加一抗㊁二抗孵育,经ECL发光,X线胶片曝光,显影及定影,并以计算机图像扫描进行图像分析,测定灰度值,代表蛋白的表达量㊂1.7　统计学分析实验所得数据为计量资料,使用SPSS21.0统计软件进行处理㊂以均数±标准差(x±s)来描述计量资料的结果㊂组间结果比较统计分析前,经检验数据符合正态分布且方差齐,采用t检验进行结果分析,P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2　结果2.1　生化指标比较灌胃治疗肝纤维化模型大鼠5周后,进行外周血生化指标的检测,结果提示,血清中ALT㊁AST 均在正常范围内,各组之间比较无显著差异(P>0.05)㊂见表3㊂表3　各组肝纤维化模型大鼠生化指标结果比较(x±s,n=8)组别ALT(U/L)AST(U/L)益气逐瘀解毒颗粒高剂量组31.83±4.1685.00±9.07益气逐瘀解毒颗粒中剂量组30.66±5.2786.60±16.05益气逐瘀解毒颗粒低剂量组36.00±3.0392.80±10.91扶正化瘀组41.16±1.8393.60±9.94模型对照组43.80±3.03101.00±17.89阴性对照组31.20±12.0775.50±6.34 2.2　肝组织病理学情况益气逐瘀解毒颗粒各剂量组肝小叶结构大多清晰,中㊁高剂量组胶原纤维主要分布在汇管区㊁中央静脉及其周围,高剂量组仅少数小叶周边可见有纤维组织增生,肝纤维化分级在1级左右;低剂量组中可见少数胶原纤维形成细条索状结构延伸至周围,延伸距离较短,未形成环状结构分割肝小叶㊂模型对照组肝索排列不整齐,纤维组织明显增生,形成较粗的纤维间隔向周围延伸分割肝小叶,同时肝细胞出现明显的空泡样变及点状坏死,汇管区可见扩大,肝纤维化分级多数在3级或以上㊂扶正化瘀组中,部分肝小叶结构被纤维间隔分割㊂见图1㊂与阴性对照组比较,模型对照组SSS评分显著升高(P<0.05);与模型对照组和扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组SSS评分显著降低(P<0.05);同时益气逐瘀解毒颗粒各剂量组SSS 评分比较,无显著差异(P>0.05)㊂见表4㊂2.3　肝组织中α⁃SMA含量比较与阴性对照组比较,模型对照组α⁃SMA含量显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组α⁃SMA含量显著下降(P<0.05);与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中剂量组α⁃SMA含量显著下降(P<0.05),低剂量组无显著差异(P>0.05)㊂结果见表5㊁图2㊂注:A:益气逐瘀解毒颗粒高剂量组;B:益气逐瘀解毒颗粒中剂量组;C:益气逐瘀解毒颗粒低剂量组;D:扶正化瘀组;E:模型对照组;F:阴性对照组㊂图1　各组肝纤维化模型大鼠肝组织病理情况(×100)注:A:益气逐瘀解毒颗粒高剂量组;B:益气逐瘀解毒颗粒中剂量组;C:益气逐瘀解毒颗粒低剂量组;D:扶正化瘀组;E:模型对照组;F:阴性对照组㊂图2　各组肝纤维化模型大鼠肝组织α⁃SMA表达情况(免疫组化,×100)表4　各组肝纤维化模型大鼠MASSON染色SSS评分结果比较(x±s)组别鼠只SSS评分(分)益气逐瘀解毒颗粒高剂量组8 2.00±0.63bc益气逐瘀解毒颗粒中剂量组8 4.16±1.33bc益气逐瘀解毒颗粒低剂量组8 5.33±1.21bc扶正化瘀组812.78±8.99b模型对照组826.00±3.28a阴性对照组80.75±0.46注:与阴性对照组比较,a P<0.05;与模型对照组比较,b P<0.05;与扶正化瘀组比较,c P<0.05㊂表5　各组肝纤维化模型大鼠α⁃SMA表达情况比较(x±s)组别鼠只α⁃SMA 益气逐瘀解毒颗粒高剂量组80.86±0.14bc益气逐瘀解毒颗粒中剂量组8 1.33±0.21bc益气逐瘀解毒颗粒低剂量组8 2.00±0.19b扶正化瘀组8 2.28±0.18b模型对照组8 3.69±0.21a阴性对照组8 1.00±0.00注:与阴性对照组比较,a P<0.05;与模型对照组比较,b P<0.05;与扶正化瘀组比较,c P<0.05㊂2.4　肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB 的mRNA表达比较与阴性对照组比较,模型对照组Col1A1㊁Col1A2及GIV的mRNA表达量显著升高(P<0.05),PKA的mRNA表达量显著下降(P<0.05),CREB的mRNA 表达量无显著差异(P>0.05)㊂与模型对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组Col1A1㊁Col1A2㊁GIV的mRNA表达量显著下降(P<0.05),高剂量组PKA的mRNA表达量显著升高(P<0.05)㊁CREB的mRNA表达量无显著差异(P>0.05),中剂量组PKA㊁CREB的mRNA表达量均显著升高(P<0.05),低剂量组PKA㊁CREB的mRNA表达量无显著性差异(P>0.05)㊂与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组Col1A1㊁Col1A2的mRNA表达量显著下降(P<0.05),高剂量组GIV的mRNA 表达量显著下降(P<0.05),中剂量组PKA的mRNA表达量明显升高(P<0.05),高剂量组PKA 的mRNA表达量无显著性差异(P>0.05),低剂量组PKA的mRNA表达量显著下降(P<0.05),中㊁低剂量组CREB的mRNA表达量显著降低(P<0.05),高剂量组CREB的mRNA表达量无显著性差异(P>0.05)㊂见表6㊂2.5　肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB 的表达比较与阴性对照组比较,模型对照组Col1A1㊁Col1A2㊁GIV表达量显著升高(P<0.05)㊂与模型对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组Col1A1㊁Col1A2㊁GIV表达量显著下降(P<0.05),高㊁中剂量组PKA的表达量显著升高(P<0.05),中剂量组CREB的表达量显著升高(P<0.05)㊂与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高剂量组GIV表达显著降低,PKA表达显著升高(P<0.05),中剂量组PKA㊁CREB的表达水平显著升高(P<0.05),低剂量组CREB的表达水平显著升高(P<0.05)㊂益气逐瘀解毒颗粒各剂量组之间Col1A1㊁Col1A2表达无显著差异(P>0.05)㊂见表7㊁图3㊂3　讨论3.1　益气逐瘀解毒颗粒具有抗纤维化作用肝纤维化的病理实质是各种致病原因导致ECM的过度沉积,其中ECM的主要来源是HSCs 的激活[15]㊂因此抑制HSCs的激活,有助于ECM 的减少,改善肝纤维化㊂HSC的活化受多种细胞因子的调控,表型活化改变后α⁃SMA表达是HSCs活化的一个重要标志[16]㊂α⁃SMA参与合成Ⅰ型胶原㊁Ⅲ型胶原㊁纤维连接蛋白等多种细胞外基质成分,促进肝纤维化的发生㊂同时,肝脏ECM成分以Ⅰ㊁Ⅲ和Ⅳ型胶原为主,其中Ⅰ型胶原是纤维间隔非常重要的来源,由Col1A1和Col1A2编码的两条链形成三螺旋结构㊂本实验为验证对ECM的影响,通过免疫注:A:益气逐瘀解毒颗粒高剂量组;B:益气逐瘀解毒颗粒中剂量组;C:益气逐瘀解毒颗粒低剂量组;D:扶正化瘀组;E:模型对照组; F:阴性对照组㊂图3　各组肝纤维化模型大鼠肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB表达情况表6　各组肝纤维化模型大鼠肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB的mRNA表达情况比较(x±s,n=8)组别Col1A1Col1A2GIV PKA CREB 益气逐瘀解毒颗粒高剂量组0.516±0.062bc0.012±0.004bc0.053±0.010bc67.678±17.436b 2.461±1.308益气逐瘀解毒颗粒中剂量组0.614±0.133bc0.017±0.005bc0.125±0.008b79.290±27.011bc 2.176±0.534bc 益气逐瘀解毒颗粒低剂量组0.591±0.079b0.020±0.005bc0.133±0.024b31.096±7.519ac 1.331±0.589c 扶正化瘀组 1.008±0.1650.066±0.004b0.116±0.017b48.316±16.461a 3.529±0.602ab 模型对照组 1.080±0.187a0.134±0.036a0.323±0.078a25.540±7.894a 1.560±0.470c 阴性对照组0.469±0.1730.041±0.0080.154±0.03887.159±45.490 2.250±1.123注:与阴性对照组比较,a P<0.05;与模型对照组比较,b P<0.05;与扶正化瘀组比较,c P<0.05㊂表7　各组肝纤维化模型大鼠肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB表达情况比较(x±s,n=8)组别Col1A1Col1A2GIV PKA CREB 益气逐瘀解毒颗粒高剂量组0.405±0.019b0.059±0.004b0.028±0.003bc 2.232±0.459bc 1.448±0.292益气逐瘀解毒颗粒中剂量组0.377±0.065bc0.235±0.012bc0.226±0.022b 3.282±0.668bc 4.036±0.873bc 益气逐瘀解毒颗粒低剂量组0.426±0.015b0.147±0.004bc0.202±0.136b 1.662±0.243 2.315±1.086ac 扶正化瘀组0.638±0.0120.346±0.018ab0.086±0.017b 1.645±0.477 1.014±0.263b 模型对照组0.814±0.007a0.969±0.014a0.322±0.039a 1.528±0.459 1.946±0.319c 阴性对照组0.374±0.0140.193±0.0190.024±0.009 1.240±0.223 1.191±0.197注:与阴性对照组比较,a P<0.05;与模型对照组比较,b P<0.05;与扶正化瘀组比较,c P<0.05㊂组化法检测大鼠肝组织中α⁃SMA含量,RT⁃qPCR 法和Western blot法检测Col1A1㊁Col1A2表达水平,发现益气逐瘀解毒颗粒各剂量组α⁃SMA含量显著下降,且可显著降低Col1A1㊁Col1A2的表达水平,病理组织学肝纤维化程度显著改善,优于扶正化瘀组和模型对照组㊂3.2　GIV/PKA/CREB在CCl4诱导的肝纤维化发病中的作用肝纤维化发生的中心环节是HSCs的激活, GIV的表达与HSCs的活化之间具有双向调节性㊂GIV通过影响HSCs的迁移㊁增殖及细胞骨架重构活化HSCs,同时活化的HSCs又使GIV的表达量增加,共同促进肝纤维化㊂当GIV表达下调时,可加速HSCs的凋亡,缓解肝纤维化[9]㊂作为G蛋白信号级联的第二信使,cAMP与GIV之间有着重要的关系㊂GIV表达量不足时,cAMP在HSCs中积聚,一方面使HSCs的趋化㊁增殖及胶原合成作用受到抑制,另一方面又可增强基质金属蛋白酶降解胶原的作用[17]㊂此外,GIV的下调还能够有效的调控PKA⁃CREB依赖途径,达到抑制转化生长因子⁃β(transforming growth factor⁃β,TGF⁃β)⁃SMAD蛋白信号的作用[18⁃19],通过负向调控使肝纤维化趋向消退㊂本实验采用RT⁃qPCR法和Western blot法检测大鼠肝组织中GIV表达情况,模型对照组GIV表达水平较其他组明显上调,说明GIV表达上调在肝纤维化发病中具有重要意义㊂经过益气逐瘀解毒颗粒及扶正化瘀胶囊的灌胃干预,发现益气逐瘀解毒颗粒高剂量组GIV表达水平显著降低,并优于扶正化瘀组;而中㊁低剂量组降低GIV表达水平不及高剂量组和扶正化瘀组㊂同时,益气逐瘀解毒颗粒中剂量组中PKA㊁CREB的蛋白表达水平显著上调,优于高㊁低剂量组和扶正化瘀组㊂上述结果说明益气逐瘀解毒颗粒在调控GIV㊁PKA㊁CREB表达方面具有剂量依赖性㊂此外值得注意的是,益气逐瘀解毒颗粒高剂量组显著抑制GIV的表达,但PKA/CREB的表达并没有相应的升高,不及中剂量组PKA/CREB的表达显著,这说明除GIV外,还有其他影响PKA/CREB升高的因素,需要进一步深入研究㊂3.3　益气逐瘀解毒颗粒抗纤维化作用机理分析课题组通过多年的临床及基础研究,结合四川盆地独特的湿热型地域特点,以及肝纤维化病机的复杂性,提出气虚血瘀,湿热未清”的病机学说,以健脾祛瘀㊁疏肝清热为基本治则,创立益气逐瘀解毒方㊂方中莪术破血逐瘀,黄芪益气扶正,共为君药;党参助黄芪益气,补脾气升清阳,当归㊁川芎补血㊁活血,行气,与逐瘀药同用,使瘀血祛而又不伤阴血;丹参助莪术活血祛瘀,赤芍㊁丹皮清热凉血,活血化瘀,以解未尽之热毒,共为臣药;柴胡㊁黄芩和解少阳,黄芩清泄少阳半里湿热,柴胡疏肝解郁,升达清阳,共为佐药;甘草为使,调和诸药㊂全方配伍得当,标本兼治,化瘀解毒不伤正,益气扶正不碍邪,在健脾祛瘀的同时,通畅气机,清解湿热余毒,可促进肝纤维化的消退㊂纵观本研究实验结果,得出初步结论,益气逐瘀解毒颗粒可显著改善CCl4诱导肝纤维化大鼠的肝纤维化程度,而GIV可能是其关键作用靶点之一,通过降低GIV表达水平,解除对下游抗肝纤维化PKA/CREB信号通路的抑制,使PKA㊁CREB表达水平上升,达到改善CCl4诱导肝纤维化大鼠的肝纤维化程度的目的㊂此外,益气逐瘀解毒颗粒尚可通过调控基质金属蛋白酶及其抑制剂的平衡㊁抑制HSCs的活化㊁降低TGF⁃β1的表达水平等方面达到抗肝纤维化的目的[7,14],表现为多靶点调控的特点,但对关键靶点确认,尚需进一步完善其作用机制㊂参考文献[1]　Ralf W,Sabine W,Frank T.Recent advances in understandingliver fibrosis:bridging basic science and individualizedtreatmentconcepts[J].F1000Res,2018,7:F1000Faculty Rev⁃921.[2]　Rosenbloom J,Macarak E,Piera⁃Velazquez S,et al.Humanfibrotic diseases:Current challengesin fibrosis research[J].Methods Mol Biol,2017,1627:1⁃23.[3]　Ebrahimi H,Naderian M,Sohrabpour A A.New concepts onreversibility and targeting of liver fibrosis:A review article[J].Middle East J Dig Dis,2018,10(3):133⁃148.[4]　谭勤锐.益气逐瘀解毒方抗肝纤维化作用及机制研究[D].成都:成都中医药大学,2017.[5]　杨琪.益气逐瘀解毒颗粒调节Th17/Treg细胞平衡的抗肝纤维化作用机制研究[D].成都:成都中医药大学,2018. [6]　韩朋丽.益气逐瘀解毒颗粒调节Girdin表达治疗大鼠肝纤维化的作用机制研究[D].成都:成都中医药大学,2018. [7]　李晖,谭勤锐,韩朋丽,等.益气逐瘀解毒方抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用研究[J].中华中医药学刊,2019,37(4):956⁃959,1045⁃1047.[8]　Eonomoto A,PING J,Tiakahashi M.Girdin,a novel actin⁃binding protein,and its family of proteins possess versatilefunctions in the Akt and Wnt signaling pathways[J].Ann N YAcad Sci,2006,1086:169⁃184.[9]　Garcia⁃Marcos M,Ghosh P,Farquhar M G.GIV is anonreceptor GEF for G alpha i with a unique motif that regulatesAkt signaling[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2009,106(9):3178⁃3183.[10]　Garcia⁃Marcos M,Ghosh P,Farquhar M G.GIV/Girdintransmits signals from multiple receptors by triggering trimeric Gprotein activation[J].J Biol Chem,2015,290(11):6697⁃6704.[11]　Ghosh P,Garcia⁃Marcos M,Farquhar M G.GIV/Girdin is arheostat that fine⁃tunes growth factor signals during tumorprogression[J].Cell Adh Migr,2011,5(3):237⁃248. [12]　韩朋丽,李晖,杨琪.Girdin与肝纤维化相关性研究进展[J].广东医学,2017,38(17):2725⁃2727,2731.[13]　Lopez⁃Sanchez I,Dunkel Y,Roh Y S,et al.GIV/Girdin is acentral hub for profibrogenic signalling networks during liverfibrosis[J].Nat Commun,2014,5:4451. 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DAB 工作液的配制：实验前按每毫升DAB 缓冲稀释液中加1滴〔或20微升〕DAB 原液的浓度配制所需要的用量，混合后备用。

操作说明：1、常规切片脱蜡至水。

2、于修复液中修复。

一般为EDTA-TRIS 或柠檬酸缓冲液。

3、过氧化物酶阻断剂〔常用3%过氧化氢〕于组织上避光孵育15分钟。

蒸馏水冲洗。

4、每张切片参加50-100ul 一抗工作液， 4℃过夜。

5、 PBS 冲洗三次，每次5分钟。

6、每张切片加50-100ul HRP ，兔/小鼠通用二抗液，室温下孵育30-60分钟。

7、 PBS 冲洗三次，每次5分钟。

8、每张切片加50-100ul 新鲜配制的DAB 溶液，室温下孵育。

显微镜控制具体显色时间。

9、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗。

苏木素复染，0.1%盐酸分化，自来水冲洗返蓝。

10 、切片经过梯度酒精〔70-100%〕脱水枯燥，二甲苯透明，中性树胶封片。

考前须知：1、如果为冰冻切片或细胞爬片，请将标本固定后自第3步开场。

2、以上步骤仅供参考，请根据实际情况调整。

基于中医“同病异治”理论探讨电针刺激对脊髓损伤大鼠的神经再生机制

基于中医“同病异治”理论探讨电针刺激对脊髓损伤大鼠的神经再生机制刘翔宇;魏卫兵;周宾宾【期刊名称】《针灸临床杂志》【年(卷),期】2022(38)10【摘要】目的:从中医“同病异治”理论角度出发,探讨电针分别刺激足阳明胃经、督脉对脊髓损伤大鼠的损伤部位蛋白激酶A(PKA)的表达,进一步探讨电针刺激对脊髓损伤大鼠中枢神经轴突再生的机制。

方法:将60只SPF级SD雌性大鼠随机分为对照组、督脉组与足阳明胃经组,每组大鼠分为1周、2周、3周、4周与5周共5个亚组,每个亚组4只大鼠。

督脉组给予电针刺激阿是穴,足阳明胃经组给予电针刺激“足三里”“伏兔”穴,对照组仅损伤脊髓,不给予治疗。

采用免疫组化、PCR与WB检测3组在各时间点阳性蛋白及蛋白激酶A的表达情况。

结果:免疫组化结果显示电针刺激足阳明胃经、督脉对比对照组阳性蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);电针刺激组的PKA的mRNA及蛋白表达较对照组显著升高(P<0.05),其中足阳明胃经组的阳性蛋白表达及PKA的mRNA及蛋白表达较督脉组高,在第3周时差异具有统计学意义,其他时间点差异无统计学意义。

结论:电针刺激足阳明胃经、督脉穴可以促进脊髓损伤局部阳性蛋白及PKA的表达,符合中医“同病异治”理论,在促进轴突再生方面发挥重要作用。

【总页数】7页(P57-63)【作者】刘翔宇;魏卫兵;周宾宾【作者单位】广西中医药大学附属瑞康医院;广西中医药大学附属第三医院;广西中医药大学第一附属医院【正文语种】中文【中图分类】R246.6【相关文献】1.电针刺激穴位对大鼠神经损伤后自残及神经再生的影响2.电针刺激脊髓损伤大鼠足阳明胃经脊髓受损节段Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白的表达3.电针刺激脊髓损伤大鼠足阳明胃经脊髓受损节段Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白的表达4.基于瞬时受体电位香草酸1通道探讨电针治疗骶上脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠的作用机制5.督脉电针联合重复经颅磁刺激对脊髓损伤后大鼠脊髓BDNF及其受体TrkB和p75 NTR表达的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。