默克密理博生物制药整体解决方案-11372316723pdf

10
8.4
2 4.25 6.45
12
14
0 0
34 58 82 114 138 162 186 212 培养时间（小时）
16
人用疫苗
---微载体放大工艺培养种细胞在狂犬疫苗生产的应用
放大
6个3L转瓶
10L生物反应器 （微载体培养）
60L生物反应器 （微载体培养）
优势:
• 能够培养下一级反应器所需的种细胞。 •密闭管道连接、在线放大，降低污染风险。 • 节省人力及其他资源 •更加符合法规发展趋势及要求。
个性化培养基
培养基配置
培养基过滤
CHO/BHK/昆虫细胞培养基 一次性反应器3L, 50L, 200L 不锈钢反应器10L—4000L
贴壁细胞培养
药用级原材料 添加物，酚红 Emprove法规支持
培养基生产、优化
反应器培养细胞技术 Vero无血清培养基
流加培养
流加培养基 葡萄糖、氨基酸
收获
Emprove原材料 缓冲液
23
容易放大---从ml 至 m3 放大
实验室
Screening 500 ml
23 cm2
选型 2 to 20 L
270 - 540 cm2
0.1, 0.5, 1.1 m2
中试
20 to 500 L
大规模生产
24
500L to 12000 L
5 - 33 m2
Mobius FlexReady 解决方案 –澄清步骤
4000L在位清洗、在线灭菌生物反应器
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管道布局合理、简洁、 简单方便，灭菌效果可 靠；
具有优良的系统密闭 性，保证反应器长时间 无菌安全运行；
深层微泡通气，通过 设计优化，通气及氧传 递效果良好；
在线清洗、在线灭菌， 一键自动化操作。
细胞大规模培养制药工艺技术开发和转让
实现中国疫苗行业从转瓶工艺升级到反应器工艺的突破 开创中国第一个反应器低血清悬浮培养BHK21细胞制备口蹄疫病毒技术：1200L
CDM: 化学成分限定细胞培养基
培养基单一成分或添加物 (EMPROVE® bio)
高质量的原 材料
多年来在固 体粉末生产 技术上的经 验
多年来在培 养基研究及 开发中的经 验
行业金牌标 准 QC / QA /
Reg
默克密理博一直被认为是可靠的、高价值的原料供应商
默克密理博生物制药上游技术中心
细胞培养基
EMPROVE® bio
矿物质 缓冲液 各种辅助化学物质
生物制剂过程中所需的 各种物质
药物输送物质 聚乙二醇化修饰技术 微脂粒药物代谢技术
在线清洗液
氢氧化钠, 异丙醇 客户定制化清洗液（高纯水配置，符合欧盟、美国药典要求的清洗剂）
生物制药解决方案——细胞培养基
客户定制化 细胞培养基
DPM: 干粉培养基
细胞培养基应用示例
序号 细胞株
1 BHK21
2 CHO 3 Marc-145 4 ST 5 PK-15
6 Vero
疫苗品种
常用基础CCM
口蹄疫/兽用狂犬 猪乙型脑炎
/猪伪狂犬/
MEM
清大天一对应基础 CCM代码
MD600
重组蛋白/单抗
猪蓝耳 猪瘟 /猪细小 猪圆环/猪细小
无血清培养基/CD培 养基
DMEM MEM
生物反应器
澄清
柱保护 蛋白A亲和 病毒灭活 层析
柱保护
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层析 柱保护
层析
除病毒过 滤
TFF超滤 无菌过滤
澄清步骤
澄清
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Millistak Pod – 革命性的创新设计
更高装载密度 更小体积，更少的保留体积 提高产率 减少缓冲液 更方便的操作 更安全的虑壳，更小体积 安装简单
创新的设计-更适用于大规模生产
MEM
MEM DMEM
/
MD202 MD600 MD600 MD600 MD202
清大天一个性化CCM （低血清/无血清）
MD611（低血清贴壁） MD910/MD920(低血清悬浮） SAF200（无血清悬浮） SAF108、SAF110、SAF112、 D100、 Cellvento CHO200/Feed-200 MD210 MD611
---化学成分限定的细胞培养基Cellvento-CHO/Feed
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生物仿制药/单克隆抗体
---工艺开发+中试服务（临床前/临床Ⅰ期样品）
CHO细胞流加培养
细胞密度×106 细胞活率 %
培养天数
批培养第7、8天
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培养上清的SDS-PAGE电泳分析
默克密理博生物制药整体解决方案—抗体、重组蛋白
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transfer to new tank
Virus inoculation and propagation
Add 30% fresh media
Start with 70% working volume
transfer to new tank
transfer to new tank
Virus inoculation and propagation
• 两种尺寸
– 适用于实验室规模(CL-1): 2 – 20L 装料体积 – 适用于中试规模 (CL-2): 20 – 250L装料体积
• 双头蠕动泵 • 拥有Millistak+ Pod 部件和固定尺寸的
Merck Millipore 除菌滤器 • 符合人体工程学设计的中试规模支架 • 压力传感器，高压切断开关
制剂、灌装
病毒破碎
离心
TFF浓缩 切向流过滤
病毒灭活
澄清
Emprove原辅料 氨基酸、二糖、多羟基化合物
缓冲液、表面活性剂、PH调节剂 Millipore Express无菌过滤 Access验证服务 Milliflex 微生物检测 Mobius灌装解决方案
Emprove原材料
Triton-X100 聚山梨醇酯
50 mL - 1 L
2 L and up
60L 反应器细胞培养
2
1.9
1.5
1.4
细胞密度×10⁶
1
0.8
0.6
Leabharlann Baidu0.5
0.24
0 0hr
24hr
48hr 培养时间（小时）
72hr
96hr
培养4天后，60L反应器中总细胞数量为9.5×1010cells，相当于250个3L转瓶培养。 细胞消化放大条件的摸索是整个工艺成功的关键因素之一。
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生物仿制药/单克隆抗体
9 鸡胚成纤维（CEF） 猪伪狂犬
MEM MEM MEM
MD600 MD600 MD600
MD610 MD504/MD611 MD611
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默克密理博生物制药上游技术中心
细胞生物反应器设计、制造
具有验证文件，包括： •用户需求标准（URS） •工厂验收测试（FAT） •设计确认（DQ） •安装确认（IQ） •运行确认（OQ） •性能确认（PQ）
生物反应器
技术开发、转让
6
适应疫苗、抗体药物行业技术 发展需要和生产需要
默克密理博生物制药上游技术中心
细胞培养基研发、制造
个性化细胞培养基，尤其是反应器培养用培养基、 各种无血清培养基、低血清培养基 定制细胞培养基，细胞培养基CRO/CMO
基础细胞培养基
细胞培养基年生产能力达140吨/年
7
默克密理博生物制药上游技术中心
Power Supply: 100 - 110 VAC, 60 Hz, 1 Phase Operating Temperature Range: 4 to 25°C Maximum Pressure: 1.7 bar (25 psi)
Typical Filtration Time: 1 to 2 hours
默克密理博生物制药上游技术中心——技术平台
BHK21悬浮细胞
贴壁细胞
CHO细胞
BHK21 细胞株 低血清工艺 无血清工艺
Vero/MDCK/ST/MARC145 细胞株 微载体培养及放大工艺 工艺开发
MDCK 细胞株 禽流感
Cellvento CHO 化学成分限定细胞培养 基 技术支持 培养基、工艺优化服务
默克密理博生物制药整体解决方案
默克密理博隶属于德国默克集团
默克密理博业务分布
默克密理博
生物科学
实验室解决方案
过程工艺解决方案
生物制药工艺
医药化学解决方案
上游中心（清大天一）
默克密理博生物制药整体解决方案
细胞株开发
克隆筛选
悬浮细胞培养
胎牛血清 液体培养基
药用原材料
胎牛血清 液体培养基 一次性3L反应器
一次性反应器
顶部机械搅拌
底部中心磁力搅拌 底部斜角磁力搅拌
底部机械搅拌
默克密理博上游技术中心专业技术人员能够根据您的细胞株特性、培养工艺及培养规 模推荐定制合适的搅拌系统，从实验室至大规模生产（4000L及更大规模），从一次性 反应器至不锈钢反应器，实现您上游设备的合理配置。
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默克密理博生物制药上游技术中心
生物反应器
现有产品
•10L •60L •120L •650L •1200L •4000L, CIP/SIP
新产品
10L机械搅拌式细胞培养反应器,1控4罐。 120L/650L/1200L机械搅拌式自动控制细胞培养反应器，具
有CIP、SIP功能。
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默克密理博生物制药上游技术中心
细胞生物反应器选择
3
去核酸
蔗糖
Mobius Flex Ready 解决方案
TFF浓缩
Pellicon 超滤膜
Benzonase核算内切酶
Emprove CIP 清洗液
Mobius Flex Ready 解决方案
TFF浓缩
Pellicon 超滤膜
Mobius Flex Ready 解决方案 Milistak_HC Pod Prostak MF TFF Emprove PEG
兽用疫苗
兽用疫苗/人用疫苗
重组蛋白&单克隆抗体
口蹄疫疫苗
化学成分限定的BHK21细胞培养 基及工艺开发
领先优势
兽用疫苗
•MDCK 细胞株/禽流感疫苗 •ST 细胞株/猪瘟疫苗 •Marc 145 细胞株/PRRS疫苗
人用疫苗
Vero 细胞株/狂犬疫苗
生物反应器（不锈钢）
重组蛋白/单抗
技术支持 放大工艺和表达服务 培养基优化/工艺开发
医药化学解决方案 为整个生物制药流程提供各种高效产品
上游过程
下游过程
制剂
细胞培养基 化学定制细胞培养基及添加剂 个性化细胞培养基 单一添加成分
重组或来源于动物的细胞培养 添加物
上有过程所需的其他化学品
过程中所需添加的物质 Benzonase® 核酸内切酶 酶及其他特别添加物
过程中所需的化学物质
MD611/MD614
MD611
狂犬/甲肝 /轮状病毒 /手足 口/乙脑 /禽用疫苗
MEM DMEM 199
MD600 MD202 MD500
MD611 199低血清培养基（MD503、 MD504、MD505）
7
二倍体（MRC-5、WI38、2BS、KMB17）
人用疫苗
8 地鼠肾（PHKC）
人用狂犬
25
TFF Ultrafiltration超滤
TFF超滤
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Pellicon 3: 单抗/重组蛋白
盒式Pellicon 滤器: 理想的切向流和微滤解决方案
筛选/可行性
放大/缩小
Ultracel PLC
10 kD 30 kD
中试/生产
Pellicon 2: 所有应用
Pellicon XL 50 Pellicon 3 88 cm² Pellicon 3 0,11 m² Pellicon 3 0,57 m² Pellicon 3 1,14 m²
兽用疫苗
---反应器无血清口蹄疫疫苗生产上游过程技术
含血清工艺
Cell Culture 48h
serum
Sedimentation 18h
Media change and
Cell Recovery 12h
PEG
media + serum 810%
无血清工艺
Cell Culture 48h
serum-free media
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14L固定床反应器 30L 反应器-微载体
DSP
人用疫苗
---微载体放大工艺培养种细胞在狂犬疫苗生产的应用
细胞株：Vero细胞 细胞培养基： MD504(MMBS)+10%NBS 生物反应器：10L,60L (MMBS) 微载体：Cytodex-1 (GEHC)，2g/L in 60L bioreactor
产业化 完成开发国际领先的反应器无血清悬浮培养BHK21细胞制备口蹄疫病毒技术并
成功技术转让. 完成国内首个采用微载体放大技术在反应器中培养MARC145细胞制备猪蓝耳病
病毒技术转让 Vero细胞反应器微载体放大培养制备人狂犬病疫苗生产种子细胞技术 ST细胞反应器微载体放大培养制备猪瘟病毒技术 正在开发生物反应器微载体放大培养MDCK细胞制备禽流感病毒技术 CHO细胞表达生物仿制药放大工艺开发、制备临床前和临床1期、2期用药服务
兽用疫苗
---反应器无血清BHK21细胞培养（批培养）
细胞活率 %
细胞密度×106
代谢浓度g/ L
15
培养天数
细胞数量 ×109
兽用疫苗
---120L反应器微载体培养Marc145细胞生产蓝耳弱毒（ 5L-60L-120L）
60
细胞消化过程 48
50
40 放大至120L
30
30
20
放大至60L
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