溶血程度与补体含量和活性相关
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第十九章 补体检测及应用
第一节 概述 一、补体成分的含量与理化特性 二、补体的活化途径
第二节 补体总活性测定
第三节 单个补体成分的测定 一、免疫溶血法 二、免疫化学法
第四节 补体结合试验 一、试验原理 二、试验方法 三、方法评价 第五节 补体受体的测定 第六节 补体测定的应用 思考题 小结
第一节 概 述
（二）CH50测定方法
1.红细胞浓度的调整
绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或 用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使 用前，调制成2%～5% SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化，
可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm 波长处测定吸光值以调整红细胞浓度。
190
180 190 128 120 163
β1
β2 β2 β2 β2 γ1
1300
430~600 75 60 55 200
150
1100 93 159 88
α
180
250
C4bp I因子 H因子 S因子
β β α
50 400~480 500
二、补体的活化途径
经典途径
经典激活途径
激活物质 起始分子 参与补体成分 所需离子 C3转化酶 C5转化酶 生物学作用 抗原抗体复合物 C1q C1、C4、C2、C3、C5C9 Ca2+、Mg2+ C4b2b C4b2b3b 参与特异性免疫的 效应阶段,感染后期 发挥作用
可测知补体总溶血活性
在适当、稳定的反应系
统中，溶血反应与补体的 剂量依赖关系呈现“S”形 曲线 在轻微溶血和接近完全 溶血时，补体量的变化对 溶血程度的影响不大，即 溶血对补体量的依赖不敏 感。但在30％～70%溶血 时，补体含量仅出现较小 的变动，溶血程度也会发 生较大的改变
溶血程度与补体含量的关系
补体：
具酶样活性、不耐热的糖蛋白 其存在与抗原性异物的刺激无关 在正常人血清中含量相对稳定 某些疾病时，含量及其活性可发生改变
一、 补体成分的含量与理化特性
分 类
根据补体系统的生物学功能，可将其分为： 补 体固有成分、补体调节蛋白、补体受体 (complement receptor, CR)三大部分。
第三节 单个补体成分的测定
常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和 C1酯酶抑制物等
测定方法： 免疫溶血法 （检测单个补体成分的活性） 免疫化学法（检测单个补体成分的含量） 自动化免疫散射比浊法
一、免疫溶血法
定义:是根据补体参与抗体介导溶细胞作用的级联效应特征
建立的单一补体成分检测法 指示系统:以SRBC-抗SRBC为激活物和指示系统
替代激活途径
肽聚糖、酵母多糖、脂多糖 C3
C3、C5-C9、B因子、D因子
MBL途径
MBL相关的丝氨酸蛋白酶
C2、C4 百度文库2-C9、 MASP Ca2+ C4b2b C4b2b3b 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用
Mg2+ C3bBb C3bnBb 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用
2.溶血素滴定
溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化
试验前需先行加热56℃ 30min或60℃ 3min以灭活补体 溶血素有商品销售，可按标识效价稀释使用 自行制备的溶血素需进行滴定，确定使用浓度，在补体活 性测定中，大多使用2个单位。 溶血素效价稳定，一般使用3个月后再作重新滴定
补体理化性质
由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生 均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球蛋白 含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、D因 子含量最低 固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因子最 小。 对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10 °C条件下 活性只能保持3～4d。 多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加 剂等均可破坏补体
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
C1q
390
γ2
70
C9
79
α
240
C1r
C1s C2
95
85 117
β
α β1
35
35 20~30
B
D P
C1INH
95
25 220
β
α γ2
210~240
2 25
C3
C4 C5 C6 C7 C8
3.稀释缓冲液 4. 50%溶血标准管 5. 50%溶血总补体值的计算
（三）方法评价与临床意义
方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积 成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温 度有关 总补体活性的参考范围为50～100U/ml CH50增高见于： 急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等 CH50降低见于： 系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎 、 急性肾小球肾炎等
（一）CH50测定法的原理
应用绵羊红细胞（sheep red blood cell, SRBC）和其相应
的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径的指示物
和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊红细胞溶解， 当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和 活性相关。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系， 测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，
参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为参照
结果判度:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺 乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分的量呈正比，仍以50 ％溶血为终点
参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除 某种补体成分之意。已能筛选到的血清有人 C2缺乏、 豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清 免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体 成分的检测。其中以C3、C4两成分的检测更为常见
第二节 补体总活性测定
补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示，以50%溶血 为判断终点，称为CH50 补体活化途径不同，应用不同的激活物可活化不同的补体 途径 基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目） 应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验常规） MBL途径活性测定的可靠方法暂未建立
第一节 概述 一、补体成分的含量与理化特性 二、补体的活化途径
第二节 补体总活性测定
第三节 单个补体成分的测定 一、免疫溶血法 二、免疫化学法
第四节 补体结合试验 一、试验原理 二、试验方法 三、方法评价 第五节 补体受体的测定 第六节 补体测定的应用 思考题 小结
第一节 概 述
（二）CH50测定方法
1.红细胞浓度的调整
绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或 用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使 用前，调制成2%～5% SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化，
可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm 波长处测定吸光值以调整红细胞浓度。
190
180 190 128 120 163
β1
β2 β2 β2 β2 γ1
1300
430~600 75 60 55 200
150
1100 93 159 88
α
180
250
C4bp I因子 H因子 S因子
β β α
50 400~480 500
二、补体的活化途径
经典途径
经典激活途径
激活物质 起始分子 参与补体成分 所需离子 C3转化酶 C5转化酶 生物学作用 抗原抗体复合物 C1q C1、C4、C2、C3、C5C9 Ca2+、Mg2+ C4b2b C4b2b3b 参与特异性免疫的 效应阶段,感染后期 发挥作用
可测知补体总溶血活性
在适当、稳定的反应系
统中，溶血反应与补体的 剂量依赖关系呈现“S”形 曲线 在轻微溶血和接近完全 溶血时，补体量的变化对 溶血程度的影响不大，即 溶血对补体量的依赖不敏 感。但在30％～70%溶血 时，补体含量仅出现较小 的变动，溶血程度也会发 生较大的改变
溶血程度与补体含量的关系
补体：
具酶样活性、不耐热的糖蛋白 其存在与抗原性异物的刺激无关 在正常人血清中含量相对稳定 某些疾病时，含量及其活性可发生改变
一、 补体成分的含量与理化特性
分 类
根据补体系统的生物学功能，可将其分为： 补 体固有成分、补体调节蛋白、补体受体 (complement receptor, CR)三大部分。
第三节 单个补体成分的测定
常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和 C1酯酶抑制物等
测定方法： 免疫溶血法 （检测单个补体成分的活性） 免疫化学法（检测单个补体成分的含量） 自动化免疫散射比浊法
一、免疫溶血法
定义:是根据补体参与抗体介导溶细胞作用的级联效应特征
建立的单一补体成分检测法 指示系统:以SRBC-抗SRBC为激活物和指示系统
替代激活途径
肽聚糖、酵母多糖、脂多糖 C3
C3、C5-C9、B因子、D因子
MBL途径
MBL相关的丝氨酸蛋白酶
C2、C4 百度文库2-C9、 MASP Ca2+ C4b2b C4b2b3b 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用
Mg2+ C3bBb C3bnBb 参与非特异性免疫的 效应阶段,感染早期 发挥作用
2.溶血素滴定
溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化
试验前需先行加热56℃ 30min或60℃ 3min以灭活补体 溶血素有商品销售，可按标识效价稀释使用 自行制备的溶血素需进行滴定，确定使用浓度，在补体活 性测定中，大多使用2个单位。 溶血素效价稳定，一般使用3个月后再作重新滴定
补体理化性质
由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细胞产生 均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球蛋白 含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、D因 子含量最低 固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因子最 小。 对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10 °C条件下 活性只能保持3～4d。 多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某些添加 剂等均可破坏补体
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
补体 成分
分子量
电泳 区带
血清含量参考值 （μg/ml）
C1q
390
γ2
70
C9
79
α
240
C1r
C1s C2
95
85 117
β
α β1
35
35 20~30
B
D P
C1INH
95
25 220
β
α γ2
210~240
2 25
C3
C4 C5 C6 C7 C8
3.稀释缓冲液 4. 50%溶血标准管 5. 50%溶血总补体值的计算
（三）方法评价与临床意义
方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积 成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温 度有关 总补体活性的参考范围为50～100U/ml CH50增高见于： 急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等 CH50降低见于： 系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎 、 急性肾小球肾炎等
（一）CH50测定法的原理
应用绵羊红细胞（sheep red blood cell, SRBC）和其相应
的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径的指示物
和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊红细胞溶解， 当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和 活性相关。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系， 测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，
参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为参照
结果判度:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺 乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分的量呈正比，仍以50 ％溶血为终点
参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除 某种补体成分之意。已能筛选到的血清有人 C2缺乏、 豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清 免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体 成分的检测。其中以C3、C4两成分的检测更为常见
第二节 补体总活性测定
补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示，以50%溶血 为判断终点，称为CH50 补体活化途径不同，应用不同的激活物可活化不同的补体 途径 基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目） 应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验常规） MBL途径活性测定的可靠方法暂未建立