第九章 细菌类疫苗
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②培养及收获 生产用培养基采用牛肉汁琼脂或其他批准培养 基 ③半成品配置及分装 用灭菌的50%甘油将原液稀释成每ml含菌数 4×109 ④成品检定 鉴别试验、外观、纯菌试验、特异性毒性试验 活菌数测定、浓度测定、效力测定
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⑤疫苗规格及有效期 安瓿瓶装，10人份含菌2×109， 2~8℃避光 保存运输，有效期两年。 （3）目前人用炭疽疫苗的缺点 ①毒力不稳定 ②采用划痕接种，免疫效果不均一 ③副反应较大 ④免疫保护力持续时间比较短
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1、炭疽疫苗 1）概述：
定义：由炭疽杆菌引起的人畜共患的一种急性传染病。 特点：潜伏期3-5d。临床表现为皮肤、肺部、脑膜和肠
道等处的急性感染。
临床分型： ①体表感染型
②消化道感染型 ③呼吸道感染型
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皮肤型炭疽
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2）炭疽菌的病原学 ①革兰氏阳性，个体最大的杆菌之一，呈竹节 状，无鞭毛，在机体内或特殊培养条件下能形 成荚膜。 ②营养要求不严，需氧，最适温度34~37℃ 炭疽杆菌的营养细胞抵抗力不强，芽孢抵抗力 强，过氧乙酸、高锰酸钾、和甲醛对芽孢的杀 灭力较强。
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2.生产方法 （1）固体培养法 （2）液体通气培养法（大规模生产用） 3.细菌采集 （1）固体培养法采集时逐瓶检查，污染杂菌 者废弃。 （2）液体培养法采集时应做纯菌试验，确定 无杂菌生长。
5
4.杀菌/脱毒 终浓度不超过1%的甲醛37℃或者2~8℃处理 一定时间杀菌，之后还要进行杀菌检查，接种 于合适培养基培养，应无本菌生长。 5.原液检定及保存 （1）浓度测定（2）镜检（3）凝集试验 （4）无菌试验（5）免疫力试验（6）保存
6
6.配合稀释及分装 按要求稀释，或与其他疫苗成分按比例混合 后加入吸附剂。 7.成品检定 按规程进行
7
常用灭活细菌疫苗 1.霍乱疫苗 （1）霍乱简介
由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病，霍乱弧菌在小肠分泌 霍乱毒素（cholera toxin），引起腹泻及其他症状。
（2）抗原
鞭毛抗原：不耐热，无分型意义，有免疫保Hale Waihona Puke Baidu作用。 菌体抗原：主要成分为LPS，耐热，根据其抗原决定基 可分为 200多钟血清型，O1和O139为流行血清型。
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③抗原 菌体抗原：多糖组分，耐热性强。 荚膜抗原：由质粒决定，可以抵抗细胞的吞噬 作用，引起感染，对动物没有免疫保护力，不 能作为疫苗。 毒素抗原：水肿因子（EF）；致死因子（LF） ；保护性抗原（PA）；单独组分无毒性，成对 结合才能获得毒素活性。
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3）炭疽疫苗 （1）目前人用炭疽疫苗 ①减毒活疫苗 ②铝胶培养上清液疫苗 （2）炭疽疫苗的生产工艺与检定 ①生产用菌株 人、兽用的炭疽活疫苗生产均采用无荚膜具毒 素（cap-tox+）菌株，我国采用的的A16R菌 种均由药品生物制品检定所分发。
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3.百日咳疫苗 1）概述 由百日咳杆菌引起的急性呼吸道传染病，主要 侵犯婴幼儿，全病程较长，可持续几个月，故 名百日咳。百日咳菌可分四种相变：Ⅰ相菌毒 力最强，有免疫原性；Ⅳ相毒力消失，无免疫 原性；Ⅱ、Ⅲ相菌介于Ⅰ、 Ⅳ之间。
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2）百日咳死疫苗的生产工艺与检定 ①菌种 生产用菌种采用百日咳Ⅰ相含1型、2型、和3 型凝集原的菌株。 ②培养方法 固体培养采用半综合碳琼脂培养基，也可发酵 生产。
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（3）伤寒Vi多糖疫苗 早期乙酸处理Vi多糖，抗原性明显降低，经溴化-16烷基-3-甲基氨处理Vi多糖，得到的非变性多糖可显示 较好的免疫原性，但是对2岁以下儿童无效，且多糖是 T淋巴细胞非依赖性抗原，不具有加强免疫记忆的作用 ，蛋白质-Vi多糖结合疫苗正在研制当中。
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（4）伤寒Ty21a口服减毒活疫苗 德国学者将野生型菌株Ty2经化学突变剂亚硝 基胍处理而获得的突变株，在提供较高免疫保 力的同时具有很高的安全性。
8
（3）目前最常用的霍乱疫苗 口服霍乱灭活全菌体+重组霍乱毒素B亚单位 重组霍乱毒素B亚单位（sBS）具有黏膜免疫 佐剂特性，该疫苗安全有效且无明显不良反 应，保护力持久。
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2.伤寒疫苗 （1）概述 由伤寒沙门杆菌引起的急性全身感染，患者出 现高热，胃肠炎，败血症等。含有三类抗原: LPS，荚膜多糖，鞭毛抗原，耐药性比较严重。 （2）生产工艺与检定 全菌体死疫苗分三种，按杀菌剂不同可分为丙 酮灭活苗，加温加酚灭活苗(收取的菌液经56度加温 灭活1小时后，再加入酚（最终含量为0.5%)作为 防腐剂），甲醛灭活苗（收取菌液加入甲醛（最终 含量为1%，置于36度24小时灭活后进一步加工。。
2
附表：目前用于人群的细菌性疫苗
卡介苗 百日咳疫苗 脑膜炎球菌疫苗 伤寒疫苗 精制破伤风疫苗（类毒素） 霍乱弧菌疫苗 痢疾疫苗
用法：i.d., s.c., d.s., i.m., p.o.
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第二节 细菌灭活疫苗
灭活疫苗的生产工艺与检定 1. 菌种检定与制备 1）菌种检定：包括 培养特性、血清学特性、毒 力试验、抗原性试验、免疫力试验 2）菌种制备 菌种启开：接种于适宜的培养基上，37±1°C 一代培养； 扩量转种：一代菌种的扩量接种，于37±1°C 二代培养。
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（3）鼠疫疫苗的生产工艺与检定
①菌种：采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株 ②培养及收获：培养基：厚金格尔琼脂培养基（pH6.8~7.2）
肉眼检查及纯菌试验合格方可收获。
③半成品配制及冻干
细菌比浊标准调整原液浓度，加冻干保护剂，分装。
④成品检定：鉴别试验、理化实验、纯菌试验、特异性毒性试验、
活菌数测定、浓度测定、菌形检查、效力测定
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2、结核疫苗
病原菌为结核杆菌，能引起人畜共患结核病 （1）流行概况
全世界约1/3人口感染； 每年约1600万人患病， 其中300多万人死于结核病。 中国治疗难题： ①发现率低； ②无法接受正规治疗或没钱治疗； ③耐药性
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（2）传染与传播方式
主要由呼吸道传染， 少数由消化道和皮肤粘膜的损伤处侵入。 传播方式：①飞沫传染 ②痰液传染 ③食物传染 ④接触传染
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③半成品配置及冻干 用特定的保护剂稀释成半成品，无菌分装到安 瓿瓶内 ④成品检定 鉴别试验、外观、溶解时间、水分、纯菌试验 、无有毒分枝杆菌试验、活菌计数、效力测定 ⑤疫苗规格及有效期 10人份含卡介菌0.4~0.6mg， 2~8℃避光 保存运输，有效期一年。
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（4）新型结核疫苗的研究方向
第九章 细菌类疫苗
第一节 概述
温州医学院 药学院 生物制药系 林绍强 Dr. Prof.
2011.09.27
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细菌类疫苗
定义：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生物 制成，进入人体后使机体产生抵抗相应细菌 能力的生物制品——细菌类疫苗 种类： （1）减毒活疫苗 （2）灭活疫苗 （3）亚单位疫苗或成分疫苗
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（3）结核杆菌的潜伏和复燃 结核杆菌类脂质等成分能对抗溶酶体中酶的破坏 作用，使细菌在巨噬细胞内繁殖，导致巨噬细胞 裂解死亡，病状扩散至邻近淋巴结，形成原发感 染灶，当机体抗感染力较强时，淋巴结病灶逐渐 纤维化和钙化，此时病灶内的结核杆菌处于休眠 期，并潜伏下来，几年或十几年后，结合杆菌可 以重新复燃，引起成年人肺结核。
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（4）结合杆菌抗药性 伴随着结核病回升的另外一个问题是抗药性的 产生，多重抗药性的发生率也越来越高，研制 和开发有效的结合新疫苗势在必行。
32
2）结核杆菌的病原学 ①革兰氏阳性，含分枝酸，具有抗酸性，胞壁 含大量脂质，有较强的抵抗力 ②灭菌方法 ③具有免疫佐剂活性
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3）结核疫苗——卡介苗的生产工艺与检定 卡介苗（BCG）是牛型结合杆菌经培养后，收 集菌体，加入稳定剂冻干后制成的，用于预防 结核病 ①菌种 卡介菌D2PB302菌株 ②培养和收集 生产用培养基采用苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培 样基或液体苏通培养基，搜集菌膜压干，低温研磨， 加入稳定剂，制成原液。
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①菌株 我国现用两个菌株生产疫苗： 国际通用Ty2株 国内代表株 ②培养基及培养方法 采用马丁琼脂、肉汤琼脂或其他经批准的培养 基，主要采用固体培养法，也可进行发酵生产 接种后35~37℃培养18~24h。
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③成品检定 鉴别试验、外观、化学检定、无菌试验、异常 毒性试验、菌形及纯度检查 ④疫苗规格及有效期 每安瓿瓶5ml，每人用剂量含伤寒菌6×107~ 3×108，2~8℃避光保存和运输，有效期1.5 年。
⑤疫苗规格及效期 10人份含菌8×109， 2~8℃避光保存运输，有效期一年。
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①以BCG为载体的基因工程结核疫苗 ②营养缺陷型结核减毒活疫苗（牛型/人型） ③结核亚单位疫苗 ④结核DNA疫苗
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3、鼠疫疫苗 （1）概述：
鼠疫是由鼠疫杆菌引起的自然疫源性烈性传染病。 主要以“鼠→蚤→人”为主要传播方式。
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（2）鼠疫杆菌的病原学
①鼠疫杆菌属肠杆菌科，耶尔森氏菌属。 革兰染色阴性短小杆菌。有荚膜，无鞭毛，无芽胞。 ②抗原和免疫原性
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③原液检定 浓度测定、镜检、血清学试验、无菌试验、特 异性毒性试验、效价测定。 ④原液保存 2~8℃，有效期3年 ⑤配合稀释及分装 按原液中具有1、2和3型菌株的配比混合，也 可制成百白破三联疫苗（百日咳、白喉、破伤风）
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第三节 细菌减毒活疫苗
一、生产工艺与检定
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二、常用细菌减毒活疫苗 炭疽疫苗 结核疫苗 鼠疫疫苗
②培养及收获 生产用培养基采用牛肉汁琼脂或其他批准培养 基 ③半成品配置及分装 用灭菌的50%甘油将原液稀释成每ml含菌数 4×109 ④成品检定 鉴别试验、外观、纯菌试验、特异性毒性试验 活菌数测定、浓度测定、效力测定
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⑤疫苗规格及有效期 安瓿瓶装，10人份含菌2×109， 2~8℃避光 保存运输，有效期两年。 （3）目前人用炭疽疫苗的缺点 ①毒力不稳定 ②采用划痕接种，免疫效果不均一 ③副反应较大 ④免疫保护力持续时间比较短
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1、炭疽疫苗 1）概述：
定义：由炭疽杆菌引起的人畜共患的一种急性传染病。 特点：潜伏期3-5d。临床表现为皮肤、肺部、脑膜和肠
道等处的急性感染。
临床分型： ①体表感染型
②消化道感染型 ③呼吸道感染型
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皮肤型炭疽
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2）炭疽菌的病原学 ①革兰氏阳性，个体最大的杆菌之一，呈竹节 状，无鞭毛，在机体内或特殊培养条件下能形 成荚膜。 ②营养要求不严，需氧，最适温度34~37℃ 炭疽杆菌的营养细胞抵抗力不强，芽孢抵抗力 强，过氧乙酸、高锰酸钾、和甲醛对芽孢的杀 灭力较强。
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2.生产方法 （1）固体培养法 （2）液体通气培养法（大规模生产用） 3.细菌采集 （1）固体培养法采集时逐瓶检查，污染杂菌 者废弃。 （2）液体培养法采集时应做纯菌试验，确定 无杂菌生长。
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4.杀菌/脱毒 终浓度不超过1%的甲醛37℃或者2~8℃处理 一定时间杀菌，之后还要进行杀菌检查，接种 于合适培养基培养，应无本菌生长。 5.原液检定及保存 （1）浓度测定（2）镜检（3）凝集试验 （4）无菌试验（5）免疫力试验（6）保存
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6.配合稀释及分装 按要求稀释，或与其他疫苗成分按比例混合 后加入吸附剂。 7.成品检定 按规程进行
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常用灭活细菌疫苗 1.霍乱疫苗 （1）霍乱简介
由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病，霍乱弧菌在小肠分泌 霍乱毒素（cholera toxin），引起腹泻及其他症状。
（2）抗原
鞭毛抗原：不耐热，无分型意义，有免疫保Hale Waihona Puke Baidu作用。 菌体抗原：主要成分为LPS，耐热，根据其抗原决定基 可分为 200多钟血清型，O1和O139为流行血清型。
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③抗原 菌体抗原：多糖组分，耐热性强。 荚膜抗原：由质粒决定，可以抵抗细胞的吞噬 作用，引起感染，对动物没有免疫保护力，不 能作为疫苗。 毒素抗原：水肿因子（EF）；致死因子（LF） ；保护性抗原（PA）；单独组分无毒性，成对 结合才能获得毒素活性。
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3）炭疽疫苗 （1）目前人用炭疽疫苗 ①减毒活疫苗 ②铝胶培养上清液疫苗 （2）炭疽疫苗的生产工艺与检定 ①生产用菌株 人、兽用的炭疽活疫苗生产均采用无荚膜具毒 素（cap-tox+）菌株，我国采用的的A16R菌 种均由药品生物制品检定所分发。
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3.百日咳疫苗 1）概述 由百日咳杆菌引起的急性呼吸道传染病，主要 侵犯婴幼儿，全病程较长，可持续几个月，故 名百日咳。百日咳菌可分四种相变：Ⅰ相菌毒 力最强，有免疫原性；Ⅳ相毒力消失，无免疫 原性；Ⅱ、Ⅲ相菌介于Ⅰ、 Ⅳ之间。
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2）百日咳死疫苗的生产工艺与检定 ①菌种 生产用菌种采用百日咳Ⅰ相含1型、2型、和3 型凝集原的菌株。 ②培养方法 固体培养采用半综合碳琼脂培养基，也可发酵 生产。
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（3）伤寒Vi多糖疫苗 早期乙酸处理Vi多糖，抗原性明显降低，经溴化-16烷基-3-甲基氨处理Vi多糖，得到的非变性多糖可显示 较好的免疫原性，但是对2岁以下儿童无效，且多糖是 T淋巴细胞非依赖性抗原，不具有加强免疫记忆的作用 ，蛋白质-Vi多糖结合疫苗正在研制当中。
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（4）伤寒Ty21a口服减毒活疫苗 德国学者将野生型菌株Ty2经化学突变剂亚硝 基胍处理而获得的突变株，在提供较高免疫保 力的同时具有很高的安全性。
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（3）目前最常用的霍乱疫苗 口服霍乱灭活全菌体+重组霍乱毒素B亚单位 重组霍乱毒素B亚单位（sBS）具有黏膜免疫 佐剂特性，该疫苗安全有效且无明显不良反 应，保护力持久。
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2.伤寒疫苗 （1）概述 由伤寒沙门杆菌引起的急性全身感染，患者出 现高热，胃肠炎，败血症等。含有三类抗原: LPS，荚膜多糖，鞭毛抗原，耐药性比较严重。 （2）生产工艺与检定 全菌体死疫苗分三种，按杀菌剂不同可分为丙 酮灭活苗，加温加酚灭活苗(收取的菌液经56度加温 灭活1小时后，再加入酚（最终含量为0.5%)作为 防腐剂），甲醛灭活苗（收取菌液加入甲醛（最终 含量为1%，置于36度24小时灭活后进一步加工。。
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附表：目前用于人群的细菌性疫苗
卡介苗 百日咳疫苗 脑膜炎球菌疫苗 伤寒疫苗 精制破伤风疫苗（类毒素） 霍乱弧菌疫苗 痢疾疫苗
用法：i.d., s.c., d.s., i.m., p.o.
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第二节 细菌灭活疫苗
灭活疫苗的生产工艺与检定 1. 菌种检定与制备 1）菌种检定：包括 培养特性、血清学特性、毒 力试验、抗原性试验、免疫力试验 2）菌种制备 菌种启开：接种于适宜的培养基上，37±1°C 一代培养； 扩量转种：一代菌种的扩量接种，于37±1°C 二代培养。
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（3）鼠疫疫苗的生产工艺与检定
①菌种：采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株 ②培养及收获：培养基：厚金格尔琼脂培养基（pH6.8~7.2）
肉眼检查及纯菌试验合格方可收获。
③半成品配制及冻干
细菌比浊标准调整原液浓度，加冻干保护剂，分装。
④成品检定：鉴别试验、理化实验、纯菌试验、特异性毒性试验、
活菌数测定、浓度测定、菌形检查、效力测定
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2、结核疫苗
病原菌为结核杆菌，能引起人畜共患结核病 （1）流行概况
全世界约1/3人口感染； 每年约1600万人患病， 其中300多万人死于结核病。 中国治疗难题： ①发现率低； ②无法接受正规治疗或没钱治疗； ③耐药性
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（2）传染与传播方式
主要由呼吸道传染， 少数由消化道和皮肤粘膜的损伤处侵入。 传播方式：①飞沫传染 ②痰液传染 ③食物传染 ④接触传染
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③半成品配置及冻干 用特定的保护剂稀释成半成品，无菌分装到安 瓿瓶内 ④成品检定 鉴别试验、外观、溶解时间、水分、纯菌试验 、无有毒分枝杆菌试验、活菌计数、效力测定 ⑤疫苗规格及有效期 10人份含卡介菌0.4~0.6mg， 2~8℃避光 保存运输，有效期一年。
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（4）新型结核疫苗的研究方向
第九章 细菌类疫苗
第一节 概述
温州医学院 药学院 生物制药系 林绍强 Dr. Prof.
2011.09.27
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细菌类疫苗
定义：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生物 制成，进入人体后使机体产生抵抗相应细菌 能力的生物制品——细菌类疫苗 种类： （1）减毒活疫苗 （2）灭活疫苗 （3）亚单位疫苗或成分疫苗
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（3）结核杆菌的潜伏和复燃 结核杆菌类脂质等成分能对抗溶酶体中酶的破坏 作用，使细菌在巨噬细胞内繁殖，导致巨噬细胞 裂解死亡，病状扩散至邻近淋巴结，形成原发感 染灶，当机体抗感染力较强时，淋巴结病灶逐渐 纤维化和钙化，此时病灶内的结核杆菌处于休眠 期，并潜伏下来，几年或十几年后，结合杆菌可 以重新复燃，引起成年人肺结核。
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（4）结合杆菌抗药性 伴随着结核病回升的另外一个问题是抗药性的 产生，多重抗药性的发生率也越来越高，研制 和开发有效的结合新疫苗势在必行。
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2）结核杆菌的病原学 ①革兰氏阳性，含分枝酸，具有抗酸性，胞壁 含大量脂质，有较强的抵抗力 ②灭菌方法 ③具有免疫佐剂活性
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3）结核疫苗——卡介苗的生产工艺与检定 卡介苗（BCG）是牛型结合杆菌经培养后，收 集菌体，加入稳定剂冻干后制成的，用于预防 结核病 ①菌种 卡介菌D2PB302菌株 ②培养和收集 生产用培养基采用苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培 样基或液体苏通培养基，搜集菌膜压干，低温研磨， 加入稳定剂，制成原液。
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①菌株 我国现用两个菌株生产疫苗： 国际通用Ty2株 国内代表株 ②培养基及培养方法 采用马丁琼脂、肉汤琼脂或其他经批准的培养 基，主要采用固体培养法，也可进行发酵生产 接种后35~37℃培养18~24h。
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③成品检定 鉴别试验、外观、化学检定、无菌试验、异常 毒性试验、菌形及纯度检查 ④疫苗规格及有效期 每安瓿瓶5ml，每人用剂量含伤寒菌6×107~ 3×108，2~8℃避光保存和运输，有效期1.5 年。
⑤疫苗规格及效期 10人份含菌8×109， 2~8℃避光保存运输，有效期一年。
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①以BCG为载体的基因工程结核疫苗 ②营养缺陷型结核减毒活疫苗（牛型/人型） ③结核亚单位疫苗 ④结核DNA疫苗
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3、鼠疫疫苗 （1）概述：
鼠疫是由鼠疫杆菌引起的自然疫源性烈性传染病。 主要以“鼠→蚤→人”为主要传播方式。
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（2）鼠疫杆菌的病原学
①鼠疫杆菌属肠杆菌科，耶尔森氏菌属。 革兰染色阴性短小杆菌。有荚膜，无鞭毛，无芽胞。 ②抗原和免疫原性
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③原液检定 浓度测定、镜检、血清学试验、无菌试验、特 异性毒性试验、效价测定。 ④原液保存 2~8℃，有效期3年 ⑤配合稀释及分装 按原液中具有1、2和3型菌株的配比混合，也 可制成百白破三联疫苗（百日咳、白喉、破伤风）
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第三节 细菌减毒活疫苗
一、生产工艺与检定
19
20
二、常用细菌减毒活疫苗 炭疽疫苗 结核疫苗 鼠疫疫苗