细菌类疫苗 (2)PPT讲稿
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3
附表：目前用于人群的细菌性 疫苗
• 卡介苗 • 百日咳疫苗 • 脑膜炎球菌疫苗 • 伤寒疫苗 • 精制破伤风疫苗（类毒素） • 霍乱弧菌疫苗 • 痢疾疫苗
用法：i.d., s.c., d.s., i.m., p.o.
4
第二节 细菌灭活疫苗
基本流程
菌液
灭 活
灭活菌液 + 佐剂
配置 原料
乳化
分装和保存
准后即为种子液，用于菌苗生产。
•
种子液通常保存于2-8C冷暗处，不得超过规程规定
的使用期限。
7
2.生产方法
（1）固体培养法：克氏瓶、茄形瓶
（2）液体静置培养法、液体深层通气培养 法
3.细菌采集
（1）固体培养法采集时逐瓶检查，污染杂 菌者废弃。
（2）液体培养法采集时应做纯菌试验，确
定无杂菌生长。
8
4. 杀菌、脱毒（灭活） 杀菌剂对疫苗的质量至关重要，通常根据细菌的特性加入最
细菌类疫苗 (2)课件
细菌类疫苗
第一节 概述
• 定义：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生
物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应 细菌能力的生物制品——细菌类疫苗
• 种类：
（1）减毒活疫苗 （2）灭活疫苗 （3）亚单位疫苗或成分疫苗
2
（3）亚单位疫苗或成分疫苗 主要指在细菌培养液中提取，用化学方法脱毒的类 毒素，如破伤风类毒素、白喉类毒素。 成分疫苗：主要指从荚膜细菌纯化的细菌多糖疫苗， 其诱导机体产生的抗体可抵抗荚膜菌的感染。
养特性、菌型、抗原性和免疫原性鉴定，合格菌种准许用于制苗。
6
• 灭活疫苗的生产工艺与检定
1. 菌种检定与制备
2）菌种制备 菌种启开：接种于适宜的培养基上，37±1°C一代培养； 扩量转种：一代菌种的扩量接种，于37±1°C二代培养。
• 将经鉴定符合标准的菌种接种于菌苗生产规程中所规定
的培养基进行增殖培养，经纯粹检查、活菌计数达到标
由百日咳杆菌引起的急性呼吸道传染病，主 要
侵犯婴幼儿，全病程较长，可持续几个月， 故
名百日咳。百日咳菌可分四种相变：Ⅰ相菌 毒
力最强，有免疫原性；Ⅳ相毒力消失，无免 20
2）百日咳死疫苗的生产工艺与检定
15
①菌株
我国现用两个菌株生产疫苗：
国际通用Ty2株
国内代表株
②培养基及培养方法
采用马丁琼脂、肉汤琼脂或其他经批准的培 养
基，主要采用固体培养法，也可进行发酵生
产
接种后35~37℃培养18~24h。
16
③成品检定
鉴别试验、外观、化学检定、无菌试验、异 常
毒性试验、菌形及纯度检查
④疫苗规格及有效期
无杂菌 凝集试验：血清型定型凝集试验，应呈阳性反应 无菌试验: 需氧菌、厌氧菌及真菌试验应阴性 免疫力试验： 原液保存：（2-8℃，3-4年有效）
11
7.配苗及分装
• 由于灭活菌苗所用的佐剂不同，所以配苗方法也不
相同。
• 氢氧化铝菌苗：可在加入甲醛灭活的同时，按比例加入氢氧化铝胶配制；
也可在菌液经甲醛灭活后再按比例加入氢氧化铝胶配苗。
莢膜（Vi）抗原:即荚膜多糖（CPS）,是伤寒杆菌细胞外壁的一 种荚膜抗原, Vi抗原与其致病性有关Vi来源于毒力的缩写。
18
（4）伤寒Ty21a口服减毒活疫苗 德国学者将野生型菌株Ty2经化学突变剂亚
硝 基胍处理而获得的突变株，在提供较高免疫
保 力的同时具有很高的安全性。
19
3.百日咳疫苗 1）概述
位 重组霍乱毒素B亚单位（sBS）具有黏膜免疫 佐剂特性，该疫苗安全有效且无明显不良反 应，保护力持久。
14
2.伤寒疫苗 （1）概述 由伤寒沙门杆菌引起的急性全身感染，患者出 现高热，胃肠炎，败血症等。含有三类抗原: LPS，荚膜多糖(vi)，鞭毛抗原，耐药性比较严重。 （2）生产工艺与检定 全菌体死疫苗分三种，按杀菌剂不同可分为丙 酮灭活苗，加温加酚灭活苗，甲醛灭活苗。
有效的灭活剂，我国多用甲醛，终浓度不超过1%。 杀菌检查：取样接种于不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基、琼脂
斜面及碱性琼脂斜面各一支，37℃培养5 d，应无本菌生 长。
表 几种灭活菌苗的灭活方法
9
5浓缩 为提高某些灭活菌苗的免疫力，在培养过程中采取提高
菌数的基础上，再通过浓缩方法达到目的。
常用的浓缩方法：氢氧化铝胶吸附沉淀法 离心沉降法 羧甲基纤维沉淀法
每安瓿瓶5ml，每人用剂量含伤寒菌 6×107~
3×108，2~8℃避光保存和运输，有效期1.5
年。
17
（3）伤寒Vi多糖疫苗 早期乙酸处理Vi多糖，抗原性明显降低，经溴化-16-烷基-3-甲
基氨处理Vi多糖，得到的非变性多糖可显示较好的免疫原性， 但是对2岁以下儿童无效，且多糖是T淋巴细胞非依赖性抗原， 不具有加强免疫记忆的作用，蛋白质-Vi多糖结合疫苗正在研 制当中。
以上方法可使菌液浓缩一倍以上。
此外，有些细菌在生长过程中产生分子量小的可溶性抗原（如猪丹 毒杆菌产生的糖蛋白）也可经氢氧化铝吸附浓缩；将破伤风脱毒液按盐 酸—食盐法处理，以作进一步精制成提纯破伤风类毒素。
10
6. 原液检定及保存： 浓度测定：按“中国细菌浊度测定标准”测定浓度 镜检：涂片染色，至少观察10个视野，应菌型典型，
由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病，霍乱弧菌在小肠分泌 霍乱毒素（cholera toxin），引起腹泻及其他症状。
（2）抗原
鞭毛抗原：不耐热，无分型意义，有免疫保护作用。 菌体抗原：主要成分为脂多糖（LPS），耐热，根据其抗
原决定基可分为 200多钟血清型，O1和O139为流行血 清型。
13
（3）目前最常用的霍Βιβλιοθήκη Baidu疫苗 口服霍乱灭活全菌体+重组霍乱毒素B亚单
• 有的厂油佐剂菌苗的配制程序为：于灭菌的油乳剂135 m1 10号白油、
11.4m1 Span-85、3.6 ml Tween80混合液中，在边搅拌下加入等量甲 醛灭活菌液配制。
• 配苗和分装：应充分混匀，及时塞塞、贴签或印字
8.成品检定 按规程进行
12
• 常用灭活细菌疫苗
1.霍乱疫苗 （1）霍乱简介
5
• 灭活疫苗的生产工艺与检定
1. 菌种检定与制备
1）菌种检定：包括 培养特性、血清学特性、 毒力试验、抗原性试验、免疫力试验
• 制苗用菌种多数为毒力强、免疫原性优良的菌株，通常使用1-3个
品系，均由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所传代、鉴定、 冻干保存和供应。
•
各种用于制造菌苗的菌种应按规定定期复壮，并进行形态、培
附表：目前用于人群的细菌性 疫苗
• 卡介苗 • 百日咳疫苗 • 脑膜炎球菌疫苗 • 伤寒疫苗 • 精制破伤风疫苗（类毒素） • 霍乱弧菌疫苗 • 痢疾疫苗
用法：i.d., s.c., d.s., i.m., p.o.
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第二节 细菌灭活疫苗
基本流程
菌液
灭 活
灭活菌液 + 佐剂
配置 原料
乳化
分装和保存
准后即为种子液，用于菌苗生产。
•
种子液通常保存于2-8C冷暗处，不得超过规程规定
的使用期限。
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2.生产方法
（1）固体培养法：克氏瓶、茄形瓶
（2）液体静置培养法、液体深层通气培养 法
3.细菌采集
（1）固体培养法采集时逐瓶检查，污染杂 菌者废弃。
（2）液体培养法采集时应做纯菌试验，确
定无杂菌生长。
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4. 杀菌、脱毒（灭活） 杀菌剂对疫苗的质量至关重要，通常根据细菌的特性加入最
细菌类疫苗 (2)课件
细菌类疫苗
第一节 概述
• 定义：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生
物制成，进入人体后使机体产生抵抗相应 细菌能力的生物制品——细菌类疫苗
• 种类：
（1）减毒活疫苗 （2）灭活疫苗 （3）亚单位疫苗或成分疫苗
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（3）亚单位疫苗或成分疫苗 主要指在细菌培养液中提取，用化学方法脱毒的类 毒素，如破伤风类毒素、白喉类毒素。 成分疫苗：主要指从荚膜细菌纯化的细菌多糖疫苗， 其诱导机体产生的抗体可抵抗荚膜菌的感染。
养特性、菌型、抗原性和免疫原性鉴定，合格菌种准许用于制苗。
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• 灭活疫苗的生产工艺与检定
1. 菌种检定与制备
2）菌种制备 菌种启开：接种于适宜的培养基上，37±1°C一代培养； 扩量转种：一代菌种的扩量接种，于37±1°C二代培养。
• 将经鉴定符合标准的菌种接种于菌苗生产规程中所规定
的培养基进行增殖培养，经纯粹检查、活菌计数达到标
由百日咳杆菌引起的急性呼吸道传染病，主 要
侵犯婴幼儿，全病程较长，可持续几个月， 故
名百日咳。百日咳菌可分四种相变：Ⅰ相菌 毒
力最强，有免疫原性；Ⅳ相毒力消失，无免 20
2）百日咳死疫苗的生产工艺与检定
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①菌株
我国现用两个菌株生产疫苗：
国际通用Ty2株
国内代表株
②培养基及培养方法
采用马丁琼脂、肉汤琼脂或其他经批准的培 养
基，主要采用固体培养法，也可进行发酵生
产
接种后35~37℃培养18~24h。
16
③成品检定
鉴别试验、外观、化学检定、无菌试验、异 常
毒性试验、菌形及纯度检查
④疫苗规格及有效期
无杂菌 凝集试验：血清型定型凝集试验，应呈阳性反应 无菌试验: 需氧菌、厌氧菌及真菌试验应阴性 免疫力试验： 原液保存：（2-8℃，3-4年有效）
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7.配苗及分装
• 由于灭活菌苗所用的佐剂不同，所以配苗方法也不
相同。
• 氢氧化铝菌苗：可在加入甲醛灭活的同时，按比例加入氢氧化铝胶配制；
也可在菌液经甲醛灭活后再按比例加入氢氧化铝胶配苗。
莢膜（Vi）抗原:即荚膜多糖（CPS）,是伤寒杆菌细胞外壁的一 种荚膜抗原, Vi抗原与其致病性有关Vi来源于毒力的缩写。
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（4）伤寒Ty21a口服减毒活疫苗 德国学者将野生型菌株Ty2经化学突变剂亚
硝 基胍处理而获得的突变株，在提供较高免疫
保 力的同时具有很高的安全性。
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3.百日咳疫苗 1）概述
位 重组霍乱毒素B亚单位（sBS）具有黏膜免疫 佐剂特性，该疫苗安全有效且无明显不良反 应，保护力持久。
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2.伤寒疫苗 （1）概述 由伤寒沙门杆菌引起的急性全身感染，患者出 现高热，胃肠炎，败血症等。含有三类抗原: LPS，荚膜多糖(vi)，鞭毛抗原，耐药性比较严重。 （2）生产工艺与检定 全菌体死疫苗分三种，按杀菌剂不同可分为丙 酮灭活苗，加温加酚灭活苗，甲醛灭活苗。
有效的灭活剂，我国多用甲醛，终浓度不超过1%。 杀菌检查：取样接种于不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基、琼脂
斜面及碱性琼脂斜面各一支，37℃培养5 d，应无本菌生 长。
表 几种灭活菌苗的灭活方法
9
5浓缩 为提高某些灭活菌苗的免疫力，在培养过程中采取提高
菌数的基础上，再通过浓缩方法达到目的。
常用的浓缩方法：氢氧化铝胶吸附沉淀法 离心沉降法 羧甲基纤维沉淀法
每安瓿瓶5ml，每人用剂量含伤寒菌 6×107~
3×108，2~8℃避光保存和运输，有效期1.5
年。
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（3）伤寒Vi多糖疫苗 早期乙酸处理Vi多糖，抗原性明显降低，经溴化-16-烷基-3-甲
基氨处理Vi多糖，得到的非变性多糖可显示较好的免疫原性， 但是对2岁以下儿童无效，且多糖是T淋巴细胞非依赖性抗原， 不具有加强免疫记忆的作用，蛋白质-Vi多糖结合疫苗正在研 制当中。
以上方法可使菌液浓缩一倍以上。
此外，有些细菌在生长过程中产生分子量小的可溶性抗原（如猪丹 毒杆菌产生的糖蛋白）也可经氢氧化铝吸附浓缩；将破伤风脱毒液按盐 酸—食盐法处理，以作进一步精制成提纯破伤风类毒素。
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6. 原液检定及保存： 浓度测定：按“中国细菌浊度测定标准”测定浓度 镜检：涂片染色，至少观察10个视野，应菌型典型，
由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病，霍乱弧菌在小肠分泌 霍乱毒素（cholera toxin），引起腹泻及其他症状。
（2）抗原
鞭毛抗原：不耐热，无分型意义，有免疫保护作用。 菌体抗原：主要成分为脂多糖（LPS），耐热，根据其抗
原决定基可分为 200多钟血清型，O1和O139为流行血 清型。
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（3）目前最常用的霍Βιβλιοθήκη Baidu疫苗 口服霍乱灭活全菌体+重组霍乱毒素B亚单
• 有的厂油佐剂菌苗的配制程序为：于灭菌的油乳剂135 m1 10号白油、
11.4m1 Span-85、3.6 ml Tween80混合液中，在边搅拌下加入等量甲 醛灭活菌液配制。
• 配苗和分装：应充分混匀，及时塞塞、贴签或印字
8.成品检定 按规程进行
12
• 常用灭活细菌疫苗
1.霍乱疫苗 （1）霍乱简介
5
• 灭活疫苗的生产工艺与检定
1. 菌种检定与制备
1）菌种检定：包括 培养特性、血清学特性、 毒力试验、抗原性试验、免疫力试验
• 制苗用菌种多数为毒力强、免疫原性优良的菌株，通常使用1-3个
品系，均由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所传代、鉴定、 冻干保存和供应。
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各种用于制造菌苗的菌种应按规定定期复壮，并进行形态、培