【CN109943539A】一种高亮表达红色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法和应
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910244928.7
(22)申请日 2019.03.28
(71)申请人 中国科学院武汉物理与数学研究所
地址 430071 湖北省武汉市武昌区小洪山
西30号
(72)发明人 贾凡 徐富强 李莉 缪欢 吕培
施祥玮
(74)专利代理机构 武汉宇晨专利事务所 42001
代理人 王敏锋
(51)Int.Cl.
C12N 7/01(2006.01)
C12N 15/85(2006.01)
A61K 49/00(2006.01)
A61K 35/76(2015.01)
C12R 1/93(2006.01)
(54)发明名称
一种高亮表达红色荧光蛋白的逆向神经环
路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法和应用
(57)摘要
本发明公开了一种高亮表达红色荧光蛋白
的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备
方法和应用，包括（1）制备表达红色荧光蛋白的
重组伪狂犬病毒；（2）在标记神经环路中的应用，
该平台成功制备高亮表达红色荧光蛋白的重组
伪狂犬病毒。本发明成功获得高亮表达红色荧光
蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒，在
神经环路标记、药物筛选平台的建立、药物抑制
病毒作用机制、病毒疫苗和诊断试剂的研发、动
物模型的建立、病毒复制和致病机制的分析等方
面具有广泛的应用价值。
权利要求书1页 说明书5页序列表8页 附图2页CN 109943539 A 2019.06.28
C N 109943539
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109943539 A
1.一种高亮表达红色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法，包括下述步骤：
1)具备高亮表达红色荧光蛋白能力的克隆：以pCDNA3.1(+)为载体，采用同源重组的方式将SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5顺次插入到载体，获得克隆命名为pCDNA3.1(+)-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA；
2)构建高亮表达红色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒：将SEQ ID NO.16插入到经过MluI和ClaI双切的pCDNA3.1(+)-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA，从而获得质粒pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA；将SEQ ID NO.19插入到经过AscI单切的pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA，从而获得质粒pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-mRuby3-F2A-mRuby3-T2A-mRuby3-WPRE-BGHpA-right arm；将所得的质粒转染BHK21细胞后感染伪狂犬病毒Bartha株，收集细胞培养基上清；纯化后即获得高亮表达红色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒。
2.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在建立伪狂犬病毒的药物筛选平台中的应用。
3.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在研究药物抑制伪狂犬病毒作用机制中的应用。
4.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒感染的动物模型的建立中的应用。
5.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒病毒复制和致病机制的分析中的应用。
6.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在对哺乳动物的脑神经环路进行示踪中的应用。
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