实验6 细菌的革兰氏染色
实验六、酵母菌染色和细菌的革兰氏染色
实验六、酵母菌染色和细菌的革兰氏染色一、实验目的1、学习并掌握革兰氏染色法。
2、了解革兰氏染色原理二、实验原理革兰氏染色法可讲细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。
前者细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘—结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘—结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。
而后者细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘—结晶紫复合物容易洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂（番红）染色后又变为复染剂染色。
三、实验材料1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌2、溶液和试剂：草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液等。
3、仪器和其他用品：酒精灯、载玻片、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、试管架、镊子、滤纸、滴管和无菌生理盐水等。
四、实验方法与步骤(1)革兰氏染色步骤：1、制片取菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥、固定。
2、初染滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出无色。
3、媒染先用卢戈氏碘液冲去残留水迹象，再用碘液覆盖1min，倾去碘液4、95%酒精脱色在白色背景下用滴管流加95%乙醇脱色（一般25-30s），当流出液无色时立即用水洗去乙醇。
4、复染将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色1min，水洗，吸去残水晾干。
5、镜检将制好的片在显微镜下观察。
6、混合涂片染色在载玻片同一区域用大肠杆菌和枯草芽孢杆菌混合涂片，其他步骤同上，显微镜下观察。
（2）酵母菌的普通染色1、制片取菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥、固定。
2、染色滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出无色。
3、显微镜下观察五、思考题1、革兰氏染色法操作下的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在显微镜下的颜色是怎么样的，他们分别属于什么菌（G+ 、G﹣）。
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告
细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌是微生物中最常见的一类生物，它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气等。
为了更好地了解细菌的形态和结构，科学家们开展了许多实验，其中包括细菌的简单染色和革兰氏染色。
一、细菌的简单染色实验细菌的简单染色是一种常用的染色方法，通过给细菌染色，可以使其在显微镜下更加清晰可见。
这种染色方法主要使用了一种叫做甲基蓝的染料。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片。
将一根无菌的钢丝棒蘸取一小滴细菌悬液，然后将其均匀地涂抹在玻璃片上。
待涂片干燥后，将其固定在火焰上加热的玻璃柱上，以使细菌附着在玻璃片上。
接下来，将制备好的涂片放入染色盒中，加入适量的甲基蓝染料，浸泡片刻。
然后，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
最后，用纸巾轻轻吸干涂片上的水分，将其放入显微镜下观察。
在显微镜下观察，我们可以清楚地看到细菌的形态和结构。
不同种类的细菌可能会呈现出不同的形状，例如球状、杆状、螺旋状等。
通过简单染色，我们可以更好地观察和研究细菌的特征。
二、革兰氏染色实验革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
这种染色方法主要使用了紫晶染料和碘酒。
在实验中，首先需要制备好细菌的涂片，方法与简单染色相同。
然后，将涂片放入染色盒中，加入适量的紫晶染料，浸泡片刻。
接着，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。
接下来，将碘酒滴在涂片上，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
随后，滴入乙醇或酒精醛溶液，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。
最后，滴入蓝色染料，浸泡片刻后用蒸馏水冲洗涂片。
在显微镜下观察，我们可以看到细菌的染色效果。
革兰氏阳性菌会呈现紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌则呈现红色或粉色。
这是因为革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胆固醇，可以吸附紫晶染料和碘酒，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，无法吸附这些染料。
实验六、酵母菌染色和细菌的革兰氏染色
实验六、酵母菌染色和细菌的革兰氏染色一、实验目的1、学习并掌握革兰氏染色法。
2、了解革兰氏染色原理二、实验原理革兰氏染色法可讲细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。
前者细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘—结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘—结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。
而后者细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘—结晶紫复合物容易洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂（番红）染色后又变为复染剂染色。
三、实验材料1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌2、溶液和试剂：草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液等。
3、仪器和其他用品：酒精灯、载玻片、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、试管架、镊子、滤纸、滴管和无菌生理盐水等。
四、实验方法与步骤(1)革兰氏染色步骤：1、制片取菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥、固定。
2、初染滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出无色。
3、媒染先用卢戈氏碘液冲去残留水迹象，再用碘液覆盖1min，倾去碘液4、95%酒精脱色在白色背景下用滴管流加95%乙醇脱色（一般25-30s），当流出液无色时立即用水洗去乙醇。
4、复染将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色1min，水洗，吸去残水晾干。
5、镜检将制好的片在显微镜下观察。
6、混合涂片染色在载玻片同一区域用大肠杆菌和枯草芽孢杆菌混合涂片，其他步骤同上，显微镜下观察。
（2）酵母菌的普通染色1、制片取菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥、固定。
2、染色滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出无色。
3、显微镜下观察五、思考题1、革兰氏染色法操作下的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在显微镜下的颜色是怎么样的，他们分别属于什么菌（G+ 、G﹣）。
细菌革兰氏染色实验报告
细菌革兰氏染色实验报告实验细菌的革兰氏染色实验八、细菌革兰氏染色实验一、实验目的和内容目的:1.熟悉油镜的使用与保养。
2.掌握细菌革兰氏染色法的原理及实验操作。
3.了解革兰氏染色实验在细菌分类鉴定上的重要性。
内容:1.学习显微镜(油镜)的使用和保养。
2.学习细菌革兰氏染色实验。
3.用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片并判断其结果。
二、实验原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C(Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。
染色前必须先固定细菌，其目的有二:一是杀死细菌，使细胞质凝固，菌体粘附于玻片上;二是增加其对染料的亲和力。
常用的有加热和化学固定两种方法。
固定时应尽量维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。
三、实验材料和用具(1)菌种:培养12-16h的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)或者枯草杆菌(Bacillus subtilis)，培养24小时的青枯假单胞杆菌。
(2)染色液和试剂:吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液、结晶紫、鲁哥尔碘液、95 %酒精、复染剂(蕃红)、二甲苯、香柏油。
(3)器材:废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、打火机、记号笔、擦镜纸、显微镜。
四、实验步骤:?涂片:取干净载玻片一块，在载玻片的加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，做成菌液。
干燥(可过火3—4次)制成薄的涂面，注意取菌不要太多，过火速度要快。
? 初染:在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1 min，倾去染液，流水冲洗至无色。
? 媒染:先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1 min，后水洗。
? 脱色:除去残水后，滴加95 %酒精进行脱色约15,20 sec，后立即用流水冲洗。
? 复染:(来自: 写论文网:细菌革兰氏染色实验报告)滴加复染剂——番红染色液，染3,5 min，水洗后用吸水纸吸干。
细菌革兰氏染色的实验报告
细菌革兰氏染色的实验报告细菌革兰氏染色的实验报告一、引言细菌革兰氏染色是一种常用的实验方法，用于区分细菌的结构和特性。
通过革兰氏染色，可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类，从而在临床诊断和疾病治疗中起到重要的作用。
本次实验旨在探究细菌革兰氏染色的原理和操作方法，并通过观察染色结果，进一步了解细菌的特性。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 细菌培养物：选择两种细菌菌株，一种为革兰氏阳性细菌，另一种为革兰氏阴性细菌。
- 革兰氏染色试剂：包括紫晶染液、碘液、脱色剂和红色染色液。
- 玻璃片和显微镜片：用于制作细菌涂片和观察染色结果。
2. 实验方法：- 步骤一：取两种不同的细菌培养物，分别在玻璃片上制作细菌涂片。
- 步骤二：将制作好的细菌涂片分别加入紫晶染液，静置5分钟。
- 步骤三：用蒸馏水冲洗玻璃片，使其清洁。
- 步骤四：加入碘液，静置1分钟。
- 步骤五：用脱色剂冲洗玻璃片，直到无色流出。
- 步骤六：加入红色染色液，静置1分钟。
- 步骤七：用蒸馏水冲洗玻璃片，使其清洁。
- 步骤八：将玻璃片放在显微镜片上，用显微镜观察细菌染色结果。
三、实验结果与讨论通过观察细菌染色结果，可以清晰地看到两种细菌的差异。
革兰氏阳性细菌在染色后呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌则呈红色。
这是因为细菌细胞壁的结构不同导致的。
革兰氏阳性细菌具有较厚的层状细胞壁，由多层的胞外多糖和蛋白质组成。
在染色过程中，细菌细胞壁的多糖会与紫晶染液结合，形成复合物。
而碘液的加入会使复合物更加稳定，不易被脱色剂去除。
因此，革兰氏阳性细菌在染色后仍保持紫色或蓝色。
相反，革兰氏阴性细菌细胞壁较薄，主要由一个薄层的胞外脂多糖组成。
在染色过程中，细菌细胞壁的脂多糖无法与紫晶染液结合，因此无法形成复合物。
碘液的加入也无法稳定脂多糖，使其被脱色剂去除。
因此，革兰氏阴性细菌在染色后会被红色染色液覆盖，呈现红色。
细菌革兰氏染色的结果可以帮助我们快速区分细菌的类型，从而指导临床的诊断和治疗。
细菌革兰氏染色的实验报告
细菌革兰氏染色的实验报告
《细菌革兰氏染色的实验报告》
实验目的：
通过革兰氏染色技术对细菌进行染色，观察细菌的形态特征，以便对细菌进行初步分类。
实验材料：
1. 革兰氏染色试剂盒
2. 玻璃载玻片
3. 蒸馏水
4. 火焰灼烧器
5. 染色盘
6. 无菌吸管
7. 细菌培养物
实验步骤：
1. 取一块玻璃载玻片，用火焰灼烧器消毒，待其冷却后放置在染色盘中。
2. 用无菌吸管取少量细菌培养物，滴在玻璃载玻片上。
3. 将玻璃载玻片放置在染色盘中，加入革兰氏染色试剂，按照说明书上的步骤进行染色处理。
4. 将染色好的载玻片在蒸馏水中冲洗干净，待其干燥后即可进行观察。
实验结果：
经过革兰氏染色处理后，观察到细菌在载玻片上呈现出不同的颜色。
革兰氏阳性细菌呈紫色或蓝紫色，而革兰氏阴性细菌呈粉红色。
实验结论：
通过革兰氏染色技术，我们成功地对细菌进行了染色处理，并观察到了细菌的形态特征。
这为我们对细菌的初步分类提供了重要的依据，也为后续的实验研究奠定了基础。
实验总结：
革兰氏染色是一种简单而有效的细菌染色技朋，通过这种技术，我们可以快速地对细菌进行初步分类和鉴定。
在今后的实验研究中，我们将继续运用这一技术，深入研究细菌的形态、生长特性及代谢功能，为人类的健康和环境保护做出更大的贡献。
细菌的革兰氏染色法实验报告
细菌的革兰氏染色法实验报告摘要：革兰氏染色法是一种常用的细菌分类和鉴定方法。
通过本实验，我们成功地利用革兰氏染色法对不同类型的细菌进行了染色，并观察到了细菌在显微镜下的形态特征。
实验结果表明，革兰氏染色法能够有效地将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类，为细菌的鉴定提供了重要的依据。
引言：细菌是一类微生物，广泛存在于我们周围的环境中。
了解细菌的分类和鉴定对于研究细菌的生理特性、病原性以及药物敏感性具有重要意义。
革兰氏染色法是一种常用的细菌分类和鉴定方法，通过染色后细菌在显微镜下的形态特征，可以将其分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
材料与方法：1. 细菌培养物：本实验选择了两种细菌培养物，分别是革兰氏阳性菌A和革兰氏阴性菌B。
2. 革兰氏染色试剂：结晶紫、碘液、酒精、脱色剂、苏木精。
3. 显微镜：用于观察染色后的细菌样品。
实验步骤：1. 取两株细菌培养物，分别进行涂片制备。
2. 将制备好的涂片用结晶紫染色液浸泡5分钟，然后用蒸馏水冲洗。
3. 加入碘液浸泡1分钟，然后用蒸馏水冲洗。
4. 用酒精滴加在涂片上，使其脱色，然后用蒸馏水冲洗。
5. 加入脱色剂浸泡30秒至1分钟，然后用蒸馏水冲洗。
6. 将涂片用苏木精染色液浸泡1分钟，然后用蒸馏水冲洗。
7. 涂片晾干后，放入显微镜下观察。
结果与讨论：经过革兰氏染色法染色后，我们观察到了明显的差异。
革兰氏阳性菌A呈紫色，而革兰氏阴性菌B呈红色。
根据革兰氏染色法的原理，我们可以解释这种差异。
革兰氏染色法中，结晶紫染色液首先染色细菌细胞的细胞壁。
革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胞外多糖和胞外蛋白质，能够吸附结晶紫，形成紫色。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，胞外多糖和胞外蛋白质含量较少，无法吸附结晶紫，因此在后续的染色步骤中无法保留紫色，最终呈现红色。
革兰氏染色法的原理是通过染色后细菌在显微镜下的形态特征来进行分类和鉴定。
革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，呈紫色，在显微镜下观察到细胞形态较大、圆润。
实验六微生物的简单染色及革兰氏染色
细菌制片及简单染色 涂片：将玻片分成两个区域，各滴上一小滴蒸馏水，再
用无菌操 作的方法挑菌少许枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球
菌于玻 片的水中，并充分混匀涂成薄膜
枯燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然枯燥 固定：涂面朝上，通过微火2-3次 染色：玻片泠却后加结晶紫滴于涂片上，覆盖涂面染色1
双层瓶
香柏油 二甲苯
分钟 水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至洗出水
变无色为止 〔注：勿冲去菌体〕
枯燥：自然枯燥，或用吸水纸吸干 镜检：显微镜下观察并记录
四、实验步骤
1、菌落形态观察：
2、➢细注滴菌加意少简：量单水菌染落颜色色：、湿度、形状、大小、透明度 3、、➢➢细染涂颜菌色片色革过→、兰程枯边氏：燥缘→染是固色否定规。→那染么色等〔特1征m。in〕→水洗→枯
二、根本原理〔革兰氏染色〕
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理 ChristainGram氏创立的，可将细菌区分为革 兰氏阳性菌〔G+〕和革兰氏阴性菌〔G-〕 革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法 革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和
革兰氏阴性，是由这两类细菌细 胞壁的构造和组成不同决定的
三、实验器材与试剂
一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上 二是增加其对染料的亲和力
常用的有加热和化学固定两种方法 固定时尽量维持细胞原有的形
常用碱性染料进展简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及 弱酸性溶液中常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色 局部带正电荷，因此碱性染料的染色局部很容易与微生物细胞结 合使其着色。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红 等。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带
正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红
细菌革兰氏染色实验报告
细菌革兰氏染色实验报告细菌革兰氏染色实验报告引言：细菌革兰氏染色是一种常用的细菌分类和鉴定方法，通过染色技术可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
本实验旨在通过观察细菌在革兰氏染色过程中的变化，进一步了解细菌的特性和结构。
实验材料与方法：1. 细菌培养物：从实验室中获取两种不同类型的细菌培养物。
2. 细菌涂片制备：取适量的细菌培养物，滴在玻璃片上，用铅笔头均匀涂抹成薄片。
3. 革兰氏染色试剂：包括革兰氏染色碱液、革兰氏碘液、酒精洗涤液和苏木精染色液。
4. 显微镜和油浸镜头。
实验步骤：1. 将细菌涂片放置在实验台上，用革兰氏染色碱液滴在细菌涂片上，静置1分钟。
2. 用蒸馏水冲洗细菌涂片，使碱液流失。
3. 加入革兰氏碘液，静置1分钟。
4. 用蒸馏水冲洗细菌涂片，使碘液流失。
5. 加入酒精洗涤液，静置10-30秒，直至洗涤液不再有颜色溢出。
6. 用蒸馏水冲洗细菌涂片，使洗涤液流失。
7. 加入苏木精染色液，静置1分钟。
8. 用蒸馏水冲洗细菌涂片，使苏木精染色液流失。
9. 将细菌涂片放在显微镜上，用油浸镜头进行观察。
实验结果与讨论：经过革兰氏染色处理后，观察到两种不同类型的细菌在显微镜下呈现出不同的颜色和形态。
其中，革兰氏阳性菌呈现紫色或深蓝色，而革兰氏阴性菌呈现红色或粉红色。
革兰氏阳性菌的细胞壁较为厚实，富含多糖和多肽聚合物，因此在革兰氏染色过程中能够吸附和保留革兰氏染色碱液和苏木精染色液。
这些染色液与细菌细胞壁中的大量多糖和多肽结合，形成紫色或深蓝色的复合物。
典型的革兰氏阳性菌包括葡萄球菌和链球菌等。
相反，革兰氏阴性菌的细胞壁较为薄弱，富含脂质和蛋白质，因此无法吸附和保留革兰氏染色碱液和苏木精染色液。
这些染色液会被酒精洗涤液洗去，导致细菌呈现红色或粉红色。
典型的革兰氏阴性菌包括大肠杆菌和沙门氏菌等。
通过细菌的革兰氏染色结果，可以初步判断细菌的分类和特性。
革兰氏阳性菌多数为球状或梭状，常见于皮肤和黏膜表面，有些能够引起感染。
微生物实验-革兰式染色
细菌的革兰氏染色与显微观察一、实验原理革兰氏染色原理：细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结，当用乙醇处理时，由于脱水而引发网状结构的孔径变小，通透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。
革兰氏阴性菌的细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。
显微镜成像原理：现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
在载玻片与镜头之间加滴镜油主要是为了增加照明亮度和增加显微镜的分辨率。
以油代替空气作为光的传播介质，减少光线的折射或全反射，使观察到的像更加清晰。
二、实验器材1.菌落：大肠杆菌24h营养琼脂斜面培养物、金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物、枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物。
2.溶液或试剂：蒸馏水、碘液、结晶紫染色液、95%酒精、番红染色液、香柏油。
3.仪器：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、镊子、擦镜纸。
三、实验步骤革兰氏染色：1.涂片取出载玻片，点燃载玻片，燃尽载玻片上的酒精和灭菌，在中间轻轻点一小滴蒸馏水，用接种环在试管的斜面培养基上，轻轻挑取少量菌体，整个过程试管口都要处在酒精灯的上方，而且速度要快，以防污染培养基。
然后在载玻片的小水滴以转圈的动作涂片，待水滴混浊后停住，等其干燥、固定。
2.初染滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于菌落上，染色1～2min ，倾去染色液，有细水从载玻片上方向下冲洗，至洗出液为无色，将载玻片上水甩净。
3.媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。
4.脱色将载玻片上面的水甩净，将载玻片倾斜，在白色背景下，用滴管加95%的酒精脱色，直至流出的酒精刚好不出现蓝色，立即用水冲净酒精，将载玻片上水甩净。
细菌的革兰氏染色
革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革 兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短， 革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。
四、实验报告
1.实验结果 分别绘出你在油镜下观察到的微生物形态图， 并注明该菌的革兰氏染色的反应性。 2.分析与讨论 对实验结果与存在的问题进行总结与简要分 析。
细菌的革兰氏染色
实验性质：验证 实验类别：本科基础实验 实验学时：2 实验教师：陈兴都
一、实验目的及实验原理
实验目的 掌握细菌的涂片及染色的基本方法和步骤。 实验原理 革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别 染色法。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质， 而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶 解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和 碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染 后就成红色。 G+ 菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类 脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小， 通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
二、实验器材
菌种 枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌。 染色液和试剂 结晶紫、卢哥氏碘液、95%酒精、蕃红、 二甲苯、香柏油。 器材 载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜、显微摄 像系统。
三、实验方法
革兰氏染色操作步骤：
（1）涂片晾干固定。 （2）结晶紫色初染：滴加适量（以盖满细菌涂面）的结晶 紫染色液染色1～2分钟，水洗。 （3）碘液媒染：滴加卢哥氏碘液，媒染1min，水洗。 （4）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色15s至 流出液无色，立即水洗。 （5）复染：滴加蕃红复染2min，水洗。 （6）晾干镜检。
细菌的革兰氏染色实验
细菌的革兰氏染色实验实验目的：学习并初步掌握革兰氏染色，了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
实验原理：革兰氏染色法的原理是通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙。
因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差。
在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
实验所需试剂和仪器：器材：大肠杆菌，枯草芽孢杆菌试剂：生理盐水，95%乙醇，碘液，结晶紫，番红，吕氏碱性美蓝，石炭酸复红，蒸馏水仪器：载玻片，盖玻片，显微镜，吹风机，滤纸，无菌操作台实验步骤：（1）挑菌和涂布取一洁净的载玻片，滴一小滴生理盐水于玻片中央，以无菌操作分别挑取1种革兰氏阴性菌和1种革兰氏阳性菌于液滴中涂布开来，用吹风机吹干菌液。
（2）初染滴加结晶紫（以刚好覆盖菌膜为宜）初染时，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色，染色1～2min后用水洗去结晶紫。
（3）媒染用卢戈氏碘液覆盖1min左右，水洗。
（碘作为媒染剂，与结晶紫结合成结晶紫－碘的复合物，增强了染料与细菌的结合力）（4）脱色①将玻片倾斜，吸取一整管95％乙醇，用滴管流加脱色（乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。
脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌）②迅速水洗。
（5）复染用番红复染，2min，水洗。
革兰氏阳性菌仍保留初染剂的蓝紫色，而革兰氏阴性菌被染上复染剂的红色。
（6）干燥镜检①倒去染液，用自来水冲洗，直至涂片上流下的水无色为止。
②用电吹风吹干，或自然干燥。
③涂片完全干燥后，用油镜观察。
实验细菌的革兰氏染色
结果判断的注意事项
观察时需注意染色结果是否清晰、准确，避免因操作不当或染色时间过长导致颜色 过深或过浅。
对于某些特殊细菌，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等，革兰氏染色结果可能与其他 细菌不同，需结合其他实验结果进行鉴别。
学习革兰氏染色的操作步骤
结晶紫染色
涂片上滴加结晶紫染液，染色 1-2分钟，水洗去多余染液。
复染
涂片上滴加复染液，染色30秒 左右，水洗去多余复染液。
涂片
将待测细菌均匀涂布在载玻片 上。
脱色
涂片上滴加脱色液，脱色30秒 左右，水洗去多余脱色液。
干燥
将涂片自然干燥或用吸水纸吸 干。
掌握革兰氏染色的结果判断
据。
实验中遇到的问题及解决方案
问题
染色过程中出现颜色不均 的现象。
问题
部分细菌在染色后形态不 清晰。
问题
部分细菌在染色过程中脱 落。
解决方案
调整染色时间或染色液的 浓度，确保染色均匀。
解决方案
优化制片步骤，确保细菌 均匀分布在载玻片上，以
便观察。
解决方案
增加固定步骤，使用更好 的固定剂，以保持细菌在
在观察革兰氏染色结果时，需注意区分污染菌和实验菌，避免误判。
06
实验结论
实验总结
实验过程顺利，染色效果明显， 成功地进行了细菌的革兰氏染色。
通过实验，我们掌握了革兰氏染 色的基本原理和操作方法，了解 了不同细菌在染色后的形态特征。
实验中，我们观察到了革兰氏阳 性菌和阴性菌在染色后的明显差 异，为后续的细菌鉴定提供了依
革兰氏染色的重要性
细菌的革兰氏染色实验报告
细菌的革兰氏染色实验报告细菌的革兰氏染色实验报告细菌是微生物界中最为常见的一类生物，它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气中等。
然而，由于细菌的微小体积和相似的形态特征，对于细菌的鉴定和分类一直是微生物学研究的难点之一。
革兰氏染色实验作为一种常用的细菌鉴定方法，被广泛应用于实验室和临床医学中。
革兰氏染色实验是由丹麦细菌学家克里斯蒂安·革兰于1884年首次提出的。
该实验通过染色剂的作用，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两类。
在实验中，我们需要准备好革兰染色试剂盒，包括革兰碘液、革兰紫液、脱色剂和酒精等。
接下来，我们将详细介绍实验的步骤和观察结果。
首先，我们需要取一支无菌的玻璃杆，沾取待检测的细菌样品，将其涂抹在玻璃片上。
然后，将玻璃片放入火焰中进行固定，使细菌附着在玻璃片上。
接下来，将固定的玻璃片浸入革兰碘液中，静置一段时间，使细菌吸收碘液。
在碘液作用后，将玻璃片取出，用脱色剂进行漂洗。
漂洗过程中，注意控制时间，以免过度漂洗导致革兰阳性菌染色不明显。
漂洗完成后，将玻璃片放入酒精中，进行脱色处理。
酒精的作用是去除革兰阴性菌的外膜，使其染色结果呈现出浅粉红色。
完成脱色后，将玻璃片取出，用水进行彻底冲洗，以去除残留的染色剂。
最后，将玻璃片放入革兰紫液中，静置片刻，使细菌染色。
革兰紫液的作用是使革兰阳性菌呈现出紫色，而革兰阴性菌则呈现出浅粉红色。
完成染色后，将玻璃片取出，用纸巾轻轻吸干水分。
然后，将玻璃片放在显微镜下观察。
在显微镜下，我们可以清晰地看到细菌的形态特征和染色结果。
革兰阳性菌呈现出紫色或暗紫色的颜色，而革兰阴性菌则呈现出浅粉红色。
通过观察染色结果，我们可以初步判断细菌的类型。
革兰阳性菌多为球形或椭圆形，细胞壁较厚，染色结果呈现出紫色。
而革兰阴性菌多为杆状或弯曲形，细胞壁较薄，染色结果呈现出浅粉红色。
然而，需要注意的是，革兰氏染色实验只能初步鉴定细菌的类型，对于某些特殊的细菌，可能需要进一步的鉴定方法。
细菌的简单染色与革兰氏染色实验报告（共4篇）
细菌的简单染色与革兰氏染色实验报告(共4篇)细菌的简单染色和革兰氏染色实验细菌的简单染色和革兰氏染色实验实验目的1. 学习微生物涂片，染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。
、2. 巩固显微镜的使用方法。
基本原理1. 简单染色法:用单一染料对细菌进行染色的方法。
此法操作简单，适用于一般形态的观察。
在中性，碱性或酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以用碱性染料进行染色。
碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易于带负电荷的细菌结合而是细菌着色。
带正电的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。
通常的碱性染料除了美蓝外，还有结晶紫，碱性复红，番红等。
细菌体积较小，较透明，如未经染色常不易识别，而经染色后与背景形成鲜明的对比，是易于在显微镜下观察。
2. 革兰氏染色法:将所有的细菌分成革兰氏阳性菌G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以将细菌分为G+和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同决定的。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙酸溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄，交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使染色的结晶紫和碘的复合物易于渗透，结果细菌被脱色，在经复红染色后就成了红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时颜色。
革兰氏染色需要四种不同的溶液，碱性染料初染液，煤染剂，脱色剂和复染液。
碱性染料初染液的作用像在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或付着力，即已某种方式帮助染料固定在细胞上，是不易脱落，碘是常用的媒染剂。
脱色剂是被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精。
复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染剂，复染的目的是使被脱落的细胞染上不同于初染液的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的染色液是复红。
细菌的革兰氏染色实验报告
细菌的革兰氏染色实验报告实验目的，通过革兰氏染色实验，观察和比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的形态特征，了解其细胞壁的结构差异。
实验材料和方法：材料，革兰氏阳性菌（如葡萄球菌）、革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）、墨汁、碘酒、95%乙醇、碘液、革兰染色试剂盒、显微镜等。
方法：1. 取一片清洁的玻璃片，用酒精棉球擦拭干净，标记好样本编号。
2. 取一根无菌的接种环，在无菌条件下取一部分革兰氏阳性菌涂抹于玻璃片的一侧，用另一根无菌接种环取一部分革兰氏阴性菌涂抹于玻璃片的另一侧。
3. 将玻璃片放在通风处晾干，然后用火烧消毒。
4. 将墨汁涂抹在细菌上，静置1分钟后用水冲洗干净。
5. 用碘酒浸渍1分钟，倒去碘酒，用95%乙醇洗涤10秒钟，然后用水冲洗干净。
6. 最后用碘液浸染30秒钟，然后用水冲洗干净，晾干后即可进行观察。
实验结果：观察革兰氏阳性菌在显微镜下呈紫色，球状或椭圆形，细胞壁较厚，没有外膜；而革兰氏阴性菌在显微镜下呈红色，细胞形态多样，细胞壁较薄，有外膜。
两者在染色后呈现出明显的形态差异。
实验讨论：革兰氏染色是细菌学中的一种重要染色方法，通过染色后的观察可以初步判断细菌的分类，对于细菌的形态特征有着重要的参考价值。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后呈现出不同的颜色和形态特征，这与其细胞壁的结构有关。
革兰氏阳性菌的细胞壁主要由大量的肽聚糖组成，而革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的脂多糖，这也是它们在染色后呈现不同颜色的原因。
结论：通过本次实验，我们成功地进行了革兰氏染色实验，并观察到了革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的形态特征。
革兰氏染色是一种简单而有效的细菌分类方法，可以帮助我们初步了解细菌的结构和分类。
对于进一步的细菌鉴定和分类有着重要的意义。
实验注意事项：1. 在进行实验前要做好无菌操作，避免细菌的外源污染。
2. 实验中的染色试剂要注意保存，避免受到光照和高温影响。
3. 在观察细菌形态时，要注意调节显微镜的放大倍数，以便更清晰地观察细菌的形态特征。
实验六微生物的简单染色及革兰氏染色
实验六微生物的简单染色及革兰氏染色利用显微镜对微生物细胞形态、结构、大小和排列进行观察前，首先要将微生物样品置于载玻片上、染色，为观察到真实、完整的生物形态结构，根据不同微生物的特点采取不同的制片及染色方法。
微生物细胞个体微小且较透明，在光学显微镜下难以将其与背景区分开而看清。
所以，在利用光学显微镜对微生物进行观察前，需要利用染料对微生物进行染色，使着色细胞或结构与背景形成鲜明对比，以便更清晰地观察微生物细胞形态及结构特征。
微生物的另一个特点是种类繁多，不同微生物细胞结构各异，对各类细胞染料的结合能力不同，研究者必须根据所要观察的微生物特点及观察目标，选用适宜的染色技术。
（一）细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的制片和简单染色一、目的要求1.学习并掌握微生物制片及简单染色的基本技术。
2.初步了解细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态特征和相互区别。
3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。
二、基本原理对个体较小的细菌进行制片时采取涂片法，通过涂抹细胞个体在载玻片上均匀分布，避免菌体堆积而无法观察个体形态，通过加热固定使细胞质凝固，使细胞固定在载玻片上，这种加热处理还可以杀死大多数细菌而且不破坏细胞形态。
利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。
用于染色的染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。
发色基团赋予染料颜色特征，而助色基团使染料能够形成盐。
不含有助色基团而仅具有发色基团的苯化合物（色原）即使具有颜色也不能用作染料，因为它不能电离，不能与酸或碱性成盐，难以与微生物细胞结合使其着色。
常用的微生物细胞颜料都是盐，分碱性染料和酸性染料，前者包括美蓝（亚甲蓝）、结晶紫、碱性复红、沙黄（番红）及孔雀绿等，后者包括碱性复红、伊红及刚果红等。
通常采用碱性染料进行染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中常带负电荷，而染料电力红染色部分带正电荷，很容与细胞结合使其着色；当细胞处于弱酸条件下（如细菌分解糖类产酸）所带正电荷增加时，可采用酸性染料染色。
细菌的革兰氏染色实验报告
细菌的革兰氏染色实验报告实验名称：细菌的革兰氏染色实验
实验目的：通过细胞壁结构的不同，观察细菌的革兰氏反应，了解细菌的形态特征及分类情况。
实验原理：细菌细胞壁的结构不同，根据革兰氏染色方法可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，其中革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色，通过观察染色后的细菌颜色能够大致了解细菌的分类情况。
实验材料：
1. 革兰氏染色试剂（含靛派液、碘酒、脱色剂、碱性洗涤液）
2. 外部消毒液、无菌采样棒、无菌平板
3. 革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）
4. 革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）
实验步骤：
1. 将需要实验的细菌分别接种于无菌平板上。
2. 用外部消毒液将无菌采样棒消毒并晾干。
3 .取一个无菌采样棒分别在革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的菌落上轻轻刮取，避免沾到无关菌种。
4. 将采样棒沾有菌落的一端放入一滴靛派液中浸润，再在菌液上加2-3滴碘酒，静置1分钟，使靛派液和碘酒渗透到其内部。
5. 倒掉靛派液和碘酒，用脱色剂加水洗涤液一一洗去染色剂，每次洗涤2-3秒，规定洗4次，每次可以轻轻甩去液体。
6. 最后观察染色后的细菌颜色，革兰氏阳性菌为紫色，革兰氏阴性菌为红色。
实验结果：本次实验观察到革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）染后呈紫色，革兰氏阴性菌（大肠杆菌）染后呈红色。
实验结论：通过细菌的革兰氏染色实验，发现革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色，这种染色方法为快速鉴别大肠杆菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌提供了简单、快捷的方法。
16.实验六 细菌的革兰氏染色
《普通微生物学》 杨清香主编
其他资源
（中国大学MOOC）南京师范大学：微生物学模块化实验
课程教学平台
教学目标
知识目标：明确细菌的革兰氏染色原理及在细菌鉴定中的重要性
能力目标：熟练掌握细菌的革兰氏染色步骤；能根据原理掌握步骤中的关键细节点；能熟练使用显微镜观察并拍照获得实验结果
素质目标：培养个人独立思考与团队协作解决问题的能力
对教师提出的拓展问题进行反思与讨论
借助网络资源完成拓展知识学习
完成课后基本知识点测试，在平台上交流讨论
课程教学平台
视频
现场操作
现场示范
学生主动性较强，能在教学平台上互相交流学习与评价
学生操作；互相交流，积极性高
绝大部分同学根据要点，操作积极性高，能根据教师引导掌握相关实践技能
学生能主动对本次课进行归纳总结
课前：学生通过上网查找资料，进行知识的自主学习。
课内：以问题为主线进行教学。教师根据课前在线学习情况统计和学生在平台上讨论的主要问题，确定本次课需解决的问题为：将实验原理与实验步骤相联系，引导学生把握实验关键细节点；在显微镜下观察并拍照获得实验结果。
课后：学生完成实验报告，借助互联网进行拓展知识学习。
教学重点
根据原理精准把握步骤中的关键细节点；
熟练使用显微镜观察并拍照获得实验结果
教学难点
根据原理精准把握步骤中的关键细节点
教学方法
问题导向教学法、小组讨论教学法等
教学手段
翻转课堂、信息化教学、实践操作示范
教材处理
教学设计
采用问题导向、小组讨论等教学方法，让学生在实际学习中自主发现问题、分析问题和解决问题，遵循“学生主体、教师主导”的高职教育教学理念，运用信息技术，将细菌的革兰氏染色操作方法以视频形式直观呈现给学生；突破教学的重点与难点，实现理论与实践相结合，提高教学效果。
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实验6 细菌的革兰氏染色
一、实验目的和内容
目的：初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色法步骤。
内容：1．制作细菌染色装片。
2．进行革兰氏染色法操作。
二、实验材料和用具
金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌菌液，待测菌菌液1～2种。
革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液等)、香柏油、二甲苯；显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯。
三、操作步骤
(一)制片
1．涂菌用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而均匀、直径约lcm的菌膜。
涂菌后将接种环火焰灭菌。
2．干燥于空气中自然干燥。
亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。
3．固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。
此制片可用于染色。
(二)染色
l．初染于制片上滴加结晶紫染液，染lmin后，用水洗去剩余染料。
2．媒染滴加卢戈氏碘液，lmin后水洗。
3．脱色滴加95%乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时30s至lmin)，水洗。
4．复染滴加石炭酸复红液复染lmin，水洗。
5．滤纸吸干，油镜镜检。
(三)结果
革兰氏阳性菌染成蓝紫色，革兰氏阴性菌染成淡红色。
(四)检测未知菌
用以上方法对未知菌进行革兰氏染色，并绘图、记录染色结果。
四、注意事项
1. 涂片务求均匀，切忌过厚。
2．在染色过程中，不可使染液干涸。
3．脱色时间十分重要，过长，则脱色过度，会使阳性菌被染成阴性菌；脱色不够，则会使阴性菌被染成阳性菌。
4．老龄菌因体内核酸减少，会便阳性菌被染成阴性菌，故不能选用。
五、实验报告
(一)绘图
1．大肠杆菌革兰氏染色视野图。
2．金黄色葡萄球菌或苏云金杆菌革兰氏染色视野图。
(二)记录革兰氏染色法法步骤，并进行结果分析。
(三)未知菌的检测结果。
六、问题和思考
1．涂片后为什么要进行固定?固定时应注意什么?
2．什么是革兰氏染色法?染色过程应注意什么?
3．试分析革兰氏染色法在细菌分类中的意义。