条件性基因敲除的策略

条件性基因敲除的策略

条件性基因敲人是在特定的时期、特定的组织和器官中使某个基因获得表达，可用于研究致病基因的功能或者构建在特定的条件下、特定的组织和器官中表达某个基因的转基因动物模型。其基本原理和实施方法与前面介绍的条件性基因敲人非常相似，只不过在构建loxP 转基因动物时，靶基因与启动子之间含有一段具有翻译终止密码的基因序列，导致靶基因不能正常翻译。而这段分割序列的两侧各有一个loxP位点，在Cre重组酶存在的情况下可以使loxP位点之间的分割序列缺失，从而使靶基因获得开放。

这样一个含有靶基因、分割序列和loxP位点的基因片段通常被置于一些持续表达基因(如p―肌动蛋白、还原磷酸甘油醛脱氢酶)的启动子的调控之下，从而使这样一个功能单位在生物体内的各个时期、各种组织和器官中都能够持续获得转录。但是由于分割序列的存在，靶基因并不能在这些组织中翻译出有功能的蛋白质。

分割序列一般选择绿色荧光蛋白(EGFP)或lacZ的编码序列，这两种基因的产物都可以作为一种标记物，在loxP转基因动物体内标记靶基因的存在。具体设计如图所示。

条件性基因敲入时，靶基因、分割序列、loxP位点和启动子的排列

构建好这样一个loxP的转基因小鼠后，只要让它和特定的Cre转基因小鼠进行杂交，就可以实现在目标基因的条件性敲人。条件性基因敲人的具体实施方法与条件性基因敲除大同小异，在此不赘述。