PCR实验室管理制度-PCR实验室检查指南合规版

1.目的：

建立PCR实验室分区管理规定，保证检验结果的真实性。

2.范围：

适用于PCR实验室管理。

3.职责：

质量部。

4. 工作流程：

4.1 实验室按照功能分以下区域：

4.1.1试剂准备区（体系室）：为PCR体系配制区域。

4.1.2标本制备区（模板室）：为模板DNA制备、扩增体系模板添加的区域。

4.1.3扩增区（扩增室）：为PCR模板进行扩增区域。

4.1.4扩增产物分析区（产物分析室）：为PCR模板进行扩增、电泳检测或扩增产物分析的区域。本区域为PCR产物污染区。

4.2实验室要求：

4.2.1实验室着装要求

4.2.1.1试剂准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区，四个区域配备有不同颜色的防静电实验服和专用鞋套。进入实验室区域后，需更换对应区域的实验服及鞋套。

4.2.1.2各区域工作服及鞋套不能混穿。

4.2.1.3离开当前实验区域时，应在黄色警戒线内脱掉该区实验服和鞋套，再进入其他区域，更换相应区域的工作服和鞋套。

4.2.2各实验室内试验仪器、耗材、移液器使用规则：

4.2.2.1在各操作间配有专用仪器、耗材、移液器，绝不能混用以避免污染。

4.2.2.2每个房间都有功能标识，根据房间功能进行实验，不能混用。如试剂准备区不能用于模板DNA制备。

4.3 日常清洁要求：

4.3.1 各个实验室应配备专用的清洁设施，不得混用。

4.3.2 实验员每月用1mol/L盐酸（50ml 12mol/L盐酸（即浓盐酸）和550ml纯化水混合）擦拭操作台、门把手及移液器、离心机等设备外表面，30分钟后用清水擦拭。注意金属表面不能用本试剂进行擦拭，可用水代替反复擦洗。

4.3.3每个房间实验服在相应房间洗手盆中清洁，在相应房间自然晾干。各区域服装不能混洗，洗涤时以单件形式进行洗涤。

4.3.4 实验室紫外消毒要求：

实验室使用频率大于1次/月，则每周用屋顶紫外灯过夜照射1次，照射时间一般在15～16小时；如实验室使用频率小于1次/月，可在使用前再进行此操作。

4.4 污染源监控：每半年监控一次。

4.4.1 监控方法：对各实验室设施进行取样，将所取样品等同于一份临床样本，不同产品污染源检测应按照相应的产品“说明书”进行体系配制、加样、扩增等操作，依据扩增结果判断是否存在污染。

4.4.2 取样方法：准备22个装有1.0ml灭菌水的1.5ml离心管，将灭菌棉签沾湿后，涂抹采样部位，面积在20cm2左右,将棉签放回盛有无菌水的离心管中，折断棉签木棒部分，扣好管盖待检。

4.4.3取样部位：试剂准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。

试剂准备区：门把手1点、台面1点、超净工作台2点、移液器1点、冰箱门把手1点、地面1点；标本制备区：门把手1点、台面1点、生物安全柜2点、移液器1点、冰箱门把手1点、地面1点；扩增区：门把手1点、台面1点、PCR仪表面1点、地面1点；扩增产物分析区：门把手1点、台面1点、电泳仪表面1点、地面1点。共取样22个点。

4.4.4 监测结果判定标准：

PCR类：依照现有产品检验操作规程进行操作，产品中的相应阳性对照有特异扩增，产品中的相应阴性对照无扩增，取样点样品无扩增，则判定试剂准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区无污染，检验结果可信；取样点有扩增则证明相应区域有污染，需对相应部位进行清洁（用1mol/L盐酸擦拭），清洁后再次取样进行检验操作，取样点样品无扩增则证明实验室无污染。

4.5实验操作注意事项

4.5.1操作过程中应工作服、帽、鞋、手套等穿戴齐全，各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染。

4.5.2实验过程中若出现标本及试剂污染工作台或移液器，应及时用酒精处理。实验结束后应立即清洁工作台，并定期对实验台及各种实验用品进行消毒。

4.5.3实验过程中的废弃样本及实验废弃物，需作为医疗废物统一回收处理。

4.6实验室日常管理按照《质检组实验室管理制度》《实验室安全管理制度》执行。

4.7 实验室压力要求：

4.7.1 实验室4个功能房间均为直排负压。

4.7.2 PCR检验实验室的空气流向应当按照试剂准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向进行，4个区域均为直排负压，压差梯度逐级增加，并安装压差监测装置，以有效证明空气流向，实验室对缓冲间压差不低于5帕。实验室直排风扇开启的顺序是扩增产物分析区→扩增区→标本制备区→试剂准备区，关闭直排风扇顺序则反之进行，以防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。空气流向为单向，禁止下游污染上游。

4.7.3 每天上午填写1次《PCR实验室压差记录》。

5. 相关文件：

《质检组实验室管理制度》

《实验室安全管理制度》

6. 相关记录：

《QF-PCR实验室污染监控记录》

《PCR实验室清洁记录》

《PCR实验室清洁剂配制记录》

《PCR实验室压差记录》