临床微生物实验室基本操作总体流程
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你看见多少种形态？
呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸 杆菌
呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？
肺中的结节吸出物，不规则“球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都证 明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织的 标本）
呼吸道标本的涂片评估模式
肺炎-可接受的
很少的鳞状上皮细胞 <10个每低倍视野
不合格标本
许多鳞状上皮 >10个/低倍视野
评述
可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明在采集时受 到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。
很多的中性粒细胞
很少有或没有中性粒细胞 免疫抑制的病人也会出现中 性粒细胞减少
中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养
很多中性粒细胞混合有形态多样的细 菌（革兰氏阴性杆菌，纺锤形，革兰 氏阳性球菌）
1小时内接种 •室温下放置>1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的分离率而 定植于上呼吸道的非致病菌则会过度生长。 •下呼吸道标本勿放冰箱或运输时勿置于冰块中
痰液标本
•采集时间：用抗生素前 •采集方法：
自然咳痰：必须用清水漱口3次，应包括咽喉部，立即用力咳出痰， 于灭菌容器或输送培养基中。
支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，建议直接种入输送培养基。
下呼吸道标本 Lower Respiratory Tract Specimens
下呼吸道标本
Lower Respiratory Tract Specimen
自然咳痰 诱导痰 气管内吸取物 肺部组织
支气管肺泡灌洗液 保护性毛刷 支气管灌洗液
下呼吸道标本收集
•所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至微生物室，并于
尼龙植绒拭子
传统的人造纤维拭子
鼻拭子
•深部鼻拭子一般与咽拭子的信息等值。 •相对于诊断深部感染，鼻拭子更适用
于侦测健康携带者。
•深部鼻拭子可用于诊断化脓链球菌和
白喉棒状杆菌感染，或金黄色葡萄球菌 与化脓性链球菌暴发感染时调查用。
鼻窦炎标本
采集脓液或窦吸出液/盐水清洗 液进行革兰氏染色和需氧、厌氧 平板培养。
血培养污染
Blood Culture Contamination
血培养存在的主要问题
•如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这
些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并 在瓶中生长
•这些细菌(主要为凝固酶阴性葡萄球
菌) 引起导管相关性败血症 (住院患者 血培养第一位)
•医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染
和皮肤定植菌“污染”相区分，因此他 们很可能会用万古霉素治疗患者。
结果审核和批准 危急值报告
分析前 分析中 分析后
微生物标本采集过程中
临床医师和护士
血培养 Blood Culture
采集时间
• 根据研究表明细菌通常在寒战和发烧前1小时入血 • 考虑到可操作性，血培养标本应同时采集或在尽量短的
间隔期内采集。
• 间隔式采血法仅适用于确诊持续性菌血症
如：细菌性心内膜炎或其他脉管内感染 如导管相关性感染
细胞内细菌
源自文库
柱状纤毛上皮细胞
肺泡巨噬细胞
滑石颗粒
见于迁延长时间的呼吸道疾病
淀粉样小体
弹性纤维
库什曼螺旋体
呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上 皮细胞提示混合厌氧菌感染
几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。如果是呼吸道标本 可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示吸入性肺炎”
吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养只会培养 出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。
许多或中等量的中性粒细胞，以一种 形态的细菌为主
酵母菌样，酵母菌是一种很 少引起肺炎的细菌，常由口 腔污染
成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌 革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌 革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肠道菌 革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌
养。
• 可疑为持续性菌血症：如心内膜炎、导管相关血流感染，间隔
(1--24h)几次取血监测、捕捉、指导治疗。
采血量
•成年患者：推荐的采血量为每套不少于10ml，每瓶 不少于5ml；
•婴幼儿患者：推荐的采血量，每瓶不少于2ml。
•备注：如果实验室收到采血量不足的标本仍需进行培养，则需在
报告单上注明：“送检血液标本量未达到要求，会影响结果的灵 敏度”。
血培养的采集
•从静脉取血； •不宜从静脉导管或静脉留置口取血； •如必须从留置导管内采血，应同时从外周静脉采集另
外一个血培养标本，以帮助阳性结果判读。
•不主张换针头入瓶 •有血的培养瓶不可放入冰箱
和冻箱保存。
血培养的运送
• 采集后血培养瓶应立即送往实验室（2小时内） • 接种前后的血培养瓶不得冷藏或冷冻。 • 任何延误送入自动连续监测血培养仪的行为将会延误或阻止细 菌生长的检测； • 血培养瓶保留在室温不得超过数小时；
污染细菌
血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养下 列细菌阳性: 凝固酶阴性葡萄球菌 棒状杆菌 微球菌 丙酸杆菌 芽孢杆菌
呼吸道标本 Respiratory Cultures
上呼吸道标本
Upper Respiratory Tract Specimens
咽拭子运送培养基
•可以运送需氧、厌氧、苛养菌 • 4℃或RT • 24或48小时
临床微生物实验室基本操作总体 流程
标本前处理 标本筛选 药敏试验 报告
实验室质量控制环节
分析后
危急值 报告
标本采集、 运送
分析前
标本合格判定 培养基、试剂
仪器设备
分析中
室间质评
微生物结果的影响因素
针对性的检验申请 病人准备 标本的采取 标本的运输
标本的保存和处理
4-15% 18.5-47%
标本检验
虽然血培养阳性率与体温变化看上去相关性不大，但临床 仍应遵从“（下一次）用药前”或“停药24小时后”采血！
推荐的血培养组合的数量
血培养次数
• 怀疑菌血症的成人患者：采集2-3套血培养标本（不同部位） 。 • 婴幼儿患者：采集2次血培养标本（不同部位） • 除特殊情况外，在采取血培养后的2-5天内，无需重复采取血培
•运送要求
于2小时内送达检验室 如无法马上送出，标本置于4℃保存
标本质量
脓痰
唾液or诱导痰 (?)
粘液样痰 带血痰
用革兰氏染色来评估 呼吸道标本是否合格
痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收
有PMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，进行培养
粘液丝
胞内细菌 ——提示感染
呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸 杆菌
呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？
肺中的结节吸出物，不规则“球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都证 明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织的 标本）
呼吸道标本的涂片评估模式
肺炎-可接受的
很少的鳞状上皮细胞 <10个每低倍视野
不合格标本
许多鳞状上皮 >10个/低倍视野
评述
可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明在采集时受 到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。
很多的中性粒细胞
很少有或没有中性粒细胞 免疫抑制的病人也会出现中 性粒细胞减少
中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养
很多中性粒细胞混合有形态多样的细 菌（革兰氏阴性杆菌，纺锤形，革兰 氏阳性球菌）
1小时内接种 •室温下放置>1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的分离率而 定植于上呼吸道的非致病菌则会过度生长。 •下呼吸道标本勿放冰箱或运输时勿置于冰块中
痰液标本
•采集时间：用抗生素前 •采集方法：
自然咳痰：必须用清水漱口3次，应包括咽喉部，立即用力咳出痰， 于灭菌容器或输送培养基中。
支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，建议直接种入输送培养基。
下呼吸道标本 Lower Respiratory Tract Specimens
下呼吸道标本
Lower Respiratory Tract Specimen
自然咳痰 诱导痰 气管内吸取物 肺部组织
支气管肺泡灌洗液 保护性毛刷 支气管灌洗液
下呼吸道标本收集
•所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至微生物室，并于
尼龙植绒拭子
传统的人造纤维拭子
鼻拭子
•深部鼻拭子一般与咽拭子的信息等值。 •相对于诊断深部感染，鼻拭子更适用
于侦测健康携带者。
•深部鼻拭子可用于诊断化脓链球菌和
白喉棒状杆菌感染，或金黄色葡萄球菌 与化脓性链球菌暴发感染时调查用。
鼻窦炎标本
采集脓液或窦吸出液/盐水清洗 液进行革兰氏染色和需氧、厌氧 平板培养。
血培养污染
Blood Culture Contamination
血培养存在的主要问题
•如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这
些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并 在瓶中生长
•这些细菌(主要为凝固酶阴性葡萄球
菌) 引起导管相关性败血症 (住院患者 血培养第一位)
•医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染
和皮肤定植菌“污染”相区分，因此他 们很可能会用万古霉素治疗患者。
结果审核和批准 危急值报告
分析前 分析中 分析后
微生物标本采集过程中
临床医师和护士
血培养 Blood Culture
采集时间
• 根据研究表明细菌通常在寒战和发烧前1小时入血 • 考虑到可操作性，血培养标本应同时采集或在尽量短的
间隔期内采集。
• 间隔式采血法仅适用于确诊持续性菌血症
如：细菌性心内膜炎或其他脉管内感染 如导管相关性感染
细胞内细菌
源自文库
柱状纤毛上皮细胞
肺泡巨噬细胞
滑石颗粒
见于迁延长时间的呼吸道疾病
淀粉样小体
弹性纤维
库什曼螺旋体
呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上 皮细胞提示混合厌氧菌感染
几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。如果是呼吸道标本 可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示吸入性肺炎”
吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养只会培养 出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。
许多或中等量的中性粒细胞，以一种 形态的细菌为主
酵母菌样，酵母菌是一种很 少引起肺炎的细菌，常由口 腔污染
成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌 革兰氏阳性菌成群排列=金黄色葡萄球菌 革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌 革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肠道菌 革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌
养。
• 可疑为持续性菌血症：如心内膜炎、导管相关血流感染，间隔
(1--24h)几次取血监测、捕捉、指导治疗。
采血量
•成年患者：推荐的采血量为每套不少于10ml，每瓶 不少于5ml；
•婴幼儿患者：推荐的采血量，每瓶不少于2ml。
•备注：如果实验室收到采血量不足的标本仍需进行培养，则需在
报告单上注明：“送检血液标本量未达到要求，会影响结果的灵 敏度”。
血培养的采集
•从静脉取血； •不宜从静脉导管或静脉留置口取血； •如必须从留置导管内采血，应同时从外周静脉采集另
外一个血培养标本，以帮助阳性结果判读。
•不主张换针头入瓶 •有血的培养瓶不可放入冰箱
和冻箱保存。
血培养的运送
• 采集后血培养瓶应立即送往实验室（2小时内） • 接种前后的血培养瓶不得冷藏或冷冻。 • 任何延误送入自动连续监测血培养仪的行为将会延误或阻止细 菌生长的检测； • 血培养瓶保留在室温不得超过数小时；
污染细菌
血培养污染定义为在几次血培养中单个血培养下 列细菌阳性: 凝固酶阴性葡萄球菌 棒状杆菌 微球菌 丙酸杆菌 芽孢杆菌
呼吸道标本 Respiratory Cultures
上呼吸道标本
Upper Respiratory Tract Specimens
咽拭子运送培养基
•可以运送需氧、厌氧、苛养菌 • 4℃或RT • 24或48小时
临床微生物实验室基本操作总体 流程
标本前处理 标本筛选 药敏试验 报告
实验室质量控制环节
分析后
危急值 报告
标本采集、 运送
分析前
标本合格判定 培养基、试剂
仪器设备
分析中
室间质评
微生物结果的影响因素
针对性的检验申请 病人准备 标本的采取 标本的运输
标本的保存和处理
4-15% 18.5-47%
标本检验
虽然血培养阳性率与体温变化看上去相关性不大，但临床 仍应遵从“（下一次）用药前”或“停药24小时后”采血！
推荐的血培养组合的数量
血培养次数
• 怀疑菌血症的成人患者：采集2-3套血培养标本（不同部位） 。 • 婴幼儿患者：采集2次血培养标本（不同部位） • 除特殊情况外，在采取血培养后的2-5天内，无需重复采取血培
•运送要求
于2小时内送达检验室 如无法马上送出，标本置于4℃保存
标本质量
脓痰
唾液or诱导痰 (?)
粘液样痰 带血痰
用革兰氏染色来评估 呼吸道标本是否合格
痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收
有PMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少=接受，进行培养
粘液丝
胞内细菌 ——提示感染