鞭毛染色液配制及使用方法
北京华越洋生物提供QQ1733351176
鞭毛染色液（试剂盒）
试剂盒成分：
产品说明：
细菌鞭毛为细菌的运动器官，主要成分是蛋白质。其形态细长，直径约10-20nm，需用电子显微镜才能观察到。所以鞭毛染色时先经媒染剂处理，使鞭毛增粗，然后再进行染色，则可在普通光学显微镜下观察。
操作步骤：
取鞭毛染色液 A 液9 份和 B 液 1 份混合配成工作液，现用现配，建议过滤后使用。
(1) 细菌标本制备：变形杆菌接种于琼脂平板，37℃培养18-24h，仔细从菌膜迁徙生长的边缘处挑取菌体少许，轻轻放入无菌蒸馏水试管中，经数分钟使其自行分散，再37℃放置约10min。
(2) 涂片：取上述菌液一接种环，轻轻滴于载玻片上，使成薄膜。涂抹时接种环随水滴移动，切勿与玻片相磨，以免鞭毛脱落。
(3) 染色：涂片自然干燥(勿用火焰固定)后，滴加鞭毛染色液数滴覆盖菌膜，染色5-10min ，水洗、吸干、镜检。
预期结果：
鞭毛呈淡红色，菌体呈红色。
注意事项：
1. 避免菌液浓度过高，否则鞭毛交叉粘连，菌体量过多，不能充分着色，不利
于观察。
北京华越洋生物提供QQ1733351176
2. 菌悬液37℃处理时间过长会导致菌体鞭毛膨胀过大与脱落，处理时间过短，
鞭毛纤细不易着色。
3. 若染色过浅可适当延长染色时间。
产地：国产
提示：本品仅用于科研实验，不能用作医疗及临床诊断。
储存条件：室温避光保存，有效期至少 1 年。
关键词：鞭毛染色液
鞭毛染色液相关染色产品:
细菌鞭毛染色及活菌运动观察
微生物实验报告——细菌鞭毛染色及活菌运动观察摘要 关键词 前言 实验目的 实验原理 A.细菌鞭毛染色法的基本原理 B.压滴法观察活菌运动的基本原理实验器材 实验内容 (一)压滴法观察活菌运动 (二)细菌鞭毛染色 实验结果
参考文献 报告编写人：张行润 生命科学学院生科四班 200900140177 细菌鞭毛染色及活菌运动观察 摘要 鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细茵的一项重要形态特征．细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0 . 01 ~0.02um ，所以，除了很少数能形成毛束（由许多根鞭毛构成）的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察．要用普通光学显微镜观查细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。 细菌形态学观察包括细菌染色标本检查法和不染色标本检查法。压滴法属于最常用的不染色标本检查法，主要用于检查细菌的运动性。 关键词 鞭毛（flagellum）细菌（bacteria）鞭毛染色法（flagellum staining） 光学显微镜（Optical microscope）压滴法（Pressure drop method） 前言 细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察。但是由于设备限制，我们希望能够在普通的光学显微镜下就能够看见细菌鞭毛。于是，便产生了鞭毛染色法。1958年Rhodes根据Fontana的螺旋体改良镀银染色法，建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。试剂分为媒染剂和银染剂。但是试剂的稳定性低，容易变质。2002年谷海瀛发明了一种新的细菌鞭毛镀银染色法。该法将媒染剂分为A、B两种。A液为酸化FeCl3溶液，B液为15%单宁酸，含甲醛1 ml，用时A、B液等量混合，轻微加热，染片40s，再用银染液涂片加热至微冒蒸汽，染色10 s。这种方法不仅染色效果好，而且解决了试剂稳定性差的问题，此种试剂常温下至少可保存1年。通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一，根据鞭毛的这些特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。有了这种简易的鞭毛染色方法，对于我们的细菌研究来说就更加方便容易了。 一．实验目的 1、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征
菌种鉴定方法
1. 菌落形态观察 观察菌落的大小、形状、隆起度、边缘、表面性状、颜色与透明度、质地和干湿度。 2. 革兰氏染色 按照革兰氏染色方法进行制片、初染、媒染、脱色、复染、干燥、镜检；干燥后，用油镜观察。 3. 鞭毛染色 挑取18~30 h新鲜平板培养物制备菌悬液，制片，室温自然干燥。滴加硝酸银染色A液覆盖3~5 min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。自然干燥后用油镜观察。菌体呈深褐色，鞭毛显褐色。 4. 糖类分解试验 将被检菌接种于糖发酵培养基中，37℃培养2－3天。如果培养基变黄，说明产酸；如变黄的同时，还有气泡，说明既产酸又产气。培养基仍呈蓝色，说明未产酸。选取木糖、葡萄糖、半乳糖和蔗糖。 5. 吲哚（靛基质）试验 将待检菌种接种于邓享氏蛋白质的胨溶液中，37℃培养1－2天。于培养液中加入戊醇或二甲苯2－3ml，摇匀，静置片刻后，沿管壁加入试剂2ml，如出现红色沉淀，表示为阳性。 6. 淀粉水解试验 将LB琼脂加热融化，使冷到50℃，加入淀粉溶液，混匀后，倾注平板。将细菌划线接种于平板上，37℃培养24小时，生长后取出，在菌落处滴加革兰氏碘液少许，培养基呈深蓝色，能水许解淀粉的细菌菌落周围有透明环。 9. V－P试验 将被检菌接种于试验培养基中（葡萄糖、K2 HPO4、蛋白胨各5g，溶于1 000ml 水中，分装于试管中，0.075MPa灭菌10分钟），培养2－7天后，于培养物中加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。数小时后，培养基表面的下层出现红色者，为阳性。 10.甲基红（M.R）试验 接种细菌，于37℃培养2－7天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液（0.1g 甲基经溶于300ml 95%乙醇中，加蒸馏水至500 ml），如呈红色，表示阳性。 11. 柠檬酸盐利用试验 将被检菌接种到Simmons固体柠檬酸盐培养基上，37℃下培养2－4天，能利用柠檬酸盐的细菌表现为有细菌生长，培养基变为蓝色，不能利用柠檬酸盐的细菌不生长，培养基不变色。 12. 硝酸盐还原试验 将被检细菌接种于硝酸盐培养基中，37℃培养1－2天，每管中先加入甲试剂0.1ml，再加乙试剂数滴，如出现红色，表示阳性。 13. 接触酶试验 将1ml 3%的H2O2倾注于生长物（菌落或菌苔）上，有气泡（O2）发生者为阳性。也可于清洁小试管中加少量H2O2（30%），再用清洁无菌的细玻棒（或火焰封口的毛细管或镍铬做成的接种环）醮细菌少许，插入H2O2液面下，有气
染色方法概述
染色方法概述) 染色方法的实施是在染色设备上完成的 按染色方法可分为：浸染机、卷染机、轧染机 按被染物形态：散纤维染色机、纱线染色机、织物染色机、成衣染色机 按染色温度及压力：常温常压染色机、高温高压染色机 按设备运转方式：间歇式染色机及连续式染色机 一匀染和移染 广义的匀染是指染料在染色织物表面以及在纤维内各部分分布的均匀度 染料在纤维内均匀分布，透染 分为4种情况 (1)在纤维束及纤维内分布均匀，理想状态 （2）在纤维束内分布均匀，但只分布在单纤维表面，纤维环染，近似匀染，染色结果较第一种情况浓 （3）纤维束环染（白芯） （4）纤维束外围纤维环染或不均匀染色，内部纤维不染色 影响匀染因素 (一)纤维及及其结构均匀性 不同成熟度的棉 不同产地、不同生长部位的毛 化学纤维 前处理 （2）上染条件 初染速率太高或上染速率太快 浸染控制匀染手段 缓染——控制上染速度和加入缓染剂 移染——上染较多部位的染料通过解吸转移到上染较少的部位
轧染控制匀染手段 浸轧均匀性 防泳移 散纤维染色：多用于混纺织物、交织物和厚密织物 纱线染色：纱线制品、色织物或针织物 成衣染色：小批量、交货短、适应变化 原液着色：有色纤维，如丙纶 根据把染料施加于染色物和使染料固着在纤维上的方式不同，染色方法可分为浸染（或称竭染）和轧染两种 （一）浸染 将纺织品浸渍于染液中，经一定时间使染料上染纤维并固着在纤维上的染色方法 在染色过程中，染料逐渐上染纤维，染液中染料浓度相应地逐渐下降 适用于各种形态的纺织品染色，尤其适用于不能经受张力或压轧的染色物 浸染时，染液及被染物可以同时循环运转，也可以只有一种循环 一般为间歇式生产，设备比较简单，操作比较容易，生产效率较低 主要有：散纤维染色机、绞纱或筒子纱染色机、经轴染色机、卷染机、绳状染色机、喷射溢流染色机、气流染色机等 浴比：浸染时，染液质量与被染物质量之比 染色浓度：染料用量一般用对纤维质量的百分数（o.m.f.）表示 影响染色因素： （1）保证染液各处的染料、助剂的浓度均匀一致 （2）控制上染速率，通过调节温度及加入匀染助剂来达到 调节温度使染浴各处温度均匀一致，升温速率必须与染液流速相适应 加入匀染剂可控制上染速率，或增加染料的移染性能 （3）浴比大小 （4）消除织物内应力 （二）轧染 将织物在染液中经过短暂的浸渍后，随即用轧辊轧压，将染液挤入纺织物的组织空隙中，并除去多余染液，使染料均匀分
常用染色液配方
实验室常用染色液配方 1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液 A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升 B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。 2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液 A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升 B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升 将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。将两者混合即成。 3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升 B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升 将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合即成。 4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。 5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升 6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。 7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。 8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升 9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.0 10、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。 11动物组织石蜡切片染色方法 苏木精-伊红(HE)染色：二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min，依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min，蒸馏水洗；入苏木精染液10 min，盐酸酒精分色4 s，自来水洗10 min；依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min，入伊红染液染色 10 min；入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明，中性树脂封片. 一、常用染色液的配制 ⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。 配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。 ⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。 配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2）先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。 （3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。 ⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。
伊红染色液溶液的配制方法
伊红染色液配制方法 溶液的配制方法如下： 华越洋伊红染色液：100ml 伊红染料配方较多在常规配方中，有的染色效果好，但操作较繁琐，且消耗较多试剂。有的操作简单，但染色时间长，染液有效期短，常需加入冰醋酸，但加入剂量不易掌握，量少达不到促染作用，加入过多染液易沉淀，且引起色调不正，特别是容易褪色，染色结果不能长期保存。为此，对伊红Y染色液配制进行了改进。改进后的方法具有操作简便、经济、染色性质稳定、着色力强且持久颜色鲜艳等优点； 制备方法：伊红Y1G，蒸馏水90ML，苦味酸饱和水溶液10ML。将蒸馏水加入伊红，待其全部溶解后，加入苦味酸饱和水溶液。 染色结果观察：染色时间0.5-1分钟。伊红所着的颜色鲜艳，层次分明，与蓝色的细胞核对比突出。 伊红Y（四嗅荧光素二钠盐，分子式：C20-H6O5Br4NO2）是一种酸性红色胞浆性染料，室温下，在水中的溶解度度远大于在酒精中的溶解度。它在溶液反应中，由于钠离子的存在而呈碱性状态。苦味酸[分子式：（NO2）3C6HOH]是一种较强的酸性染料，它的颜色是由硝基发色团所致，染色性能是由羟基助色团产生的。苦味酸具有三种作用：1本身是一种胞浆染料，具有染色作用。2又是一种酸，加入伊红Y染色液中，使染色造成比胞浆等电点略为酸性的环境，抑制了部分氨基酸中羟基官能团，从而使氨基酸中氨基官能团和酸性染料结合，增加了染液与组织间的亲和力，起到促染作用。3苦味酸又是一种氧化剂，在染色体中经过氧化物作用后，使染色剂与组织成份结合的更牢固。组织着色鲜艳，染色后不易褪色，因而切片可长期保存。 华越洋伊红染色液操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色。 本伊红染色液染色后细胞浆呈粉红色或红色。 本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在本伊红染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行伊红复染。 本染色液可以重复使用，直至认为效果不佳时再换用新的染色液。一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。
细胞各种染色方法
细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法，本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。 第一节培养细胞的常规检查和观察方法 细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。细胞常规检查观察的内容为： 一、肉眼观察 一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。正常情况下，培养液pH介于7.2～7.4之间，呈桃红色清亮透明。加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时，随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长，甚至造成细胞退变死亡。所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代。一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次，生长缓慢的细胞3～4天换液一次。培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。用含磷酸盐缓冲系统培养时，可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，只致使细胞难以生长，甚至死亡。细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净。贴壁细胞培养时若出现混浊，多为污染。悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染，也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。 二、显微镜观察 生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构。若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物。若细胞营养不良状况没有得到及时纠正，进一步发展可见到部分细胞死亡，崩解漂浮在培养液中。发现这种情况应及时处理，只有生长良好的细胞才能进行传代培养和实验研究。 三、细胞的生长状态 细胞培养时，经初代培养或传代培养，都有一长短不同的潜伏期，在培养过程中注意观察细胞增殖生长的状态极为重要。各种细胞增殖的时间不尽一致。传代细胞系，胚胎组织或幼体细胞潜伏期短，一般在接种培养第二天即可见细胞生长增殖，3～4天便可连接成片。成体组织的潜伏期长，老年组织和癌组织潜伏期更长，可达一周左右。原代细胞培养中最先可见从组织块中边缘“长出”细胞，这种细胞是从原代组织块中游走出来的，并不是细胞增殖产生。这种早期游出的细胞多以成纤维细胞为主，其易生长，适应性强，呈放射状或旋涡状分布，很快生长并互相连接成网状。传代细胞在传代后，一般经过悬浮、贴壁伸展很快进入潜伏期，对数生长期，细胞大量繁殖，逐渐相连成片而长满瓶底。一旦发现细胞长满瓶底80%就应及时传代，否则会影响细胞生长甚至脱落。悬浮细胞当发现生长显著、密度增大、分布稠密、培养液变黄时也应及时传代。 四、微生物污染 细胞接种、传代、换液加药后应经常观察，密切注意是否有微生物污染发生。一旦发现培养液混浊、液体内漂浮着菌丝或细菌，或生长明显变缓，胞质内颗粒增多，有中毒表现等
液体配制及实验方法
（一）液体配制 1.完全培养基 DMEM+10%FBS+1%双抗+（1%HAPS液） 若放置时间长于2周加1%谷氨酰胺 2.PBS 1000ml去离子水中溶解8.0gNaCl、0.2gKCl、2.89gNa2HPO4、0.26gNaH2PO4 3.胰酶 用之前调节PH值至7.6 4.CaCl2 将0.165gCaCl2粉末溶于10ml去离子水中配制成50X的溶液 每5ml胶原酶中加入100μl CaCl2溶液（终浓度3μmol/L）用于激活胶原酶的活性 5.双抗 终浓度：青霉素100万U/100ml 链霉素100万U/100ml 青霉素0.6μg为1个单位链霉素 1.2195μg为一个单位 称取青、链霉素粉末各0.6、1.2195g溶于10mlPBS中再定容至100ml 6.两性霉素B 100mg两性霉素B粉末溶于40mlPBS中，制成浓度为2.5mg/ml(1000X)的浓缩液 每100ml完全培养基中加入100μl 浓缩液，稀释为终浓度2.5μg/ml 7.细胞冻存液 20%DMSO+80%FBS(1mlDMSO+4mlFBS) 8STZ溶液 STZ溶于柠檬酸和柠檬酸三钠的盐溶液中 称取柠檬酸0.105g溶于5mlPBS 称取柠檬酸三钠0.145g溶于5mlPBS中混合两者制成10毫升的溶解液. 再将100mgSTZ粉末溶于该溶解液中制成浓度1%的STZ溶液，调节PH值至4.5，4°避光保存，由于STZ水溶性不稳定，溶液最好在半小时内使用完毕. 9油红O 原液：油红O 0.6g溶于异丙醇（99% ）100ml 。 稀释液：油红O 原液20ml ，蒸馏水20ml ，过滤后使用。 10茜素红 称取0.1g茜素红粉溶于100mlPBS，调节PH值到7.2，过滤后使用.
细菌鞭毛染色
细菌鞭毛染色 一、实验目的 学习并掌握鞭毛染色方法，并观察鞭毛的形态。 二、实验原理 细菌的鞭毛极纤细，直径一般为0.1—0.2um，只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。 鞭毛染色的基本原理：即在染色前先用媒染剂(如单宁酸或明矾钾)处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色（如碱性复红、硝酸银、结晶紫）。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。（本次实验用硝酸银当染色剂） 三、实验器材及试剂 1.菌种：枯草芽孢杆菌（鞭毛周生）、铜绿假单胞菌（鞭毛端生）。 2.溶液和试剂：硝酸银鞭毛染色剂A液和B液、95%乙醇、蒸馏水。 3.仪器和其他物品：载玻片、酒精灯、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊 子、电热炉、大烧杯、洗衣粉 四、实验步骤 鞭毛染色——硝酸银染色法 1.载玻片准备：将载玻片用洗衣粉洗涤后，置于95%的乙醇溶液中浸泡20min，使用时取出再火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。 2.制片：取一块载玻片，在一端滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌（铜绿假单孢菌)斜面上挑取菌种在载玻片液滴上轻轻蘸一下，使液滴表面形成一薄层菌膜，随后倾斜玻片，使悬菌液缓慢流向另一端，用吸水纸在载玻片边缘处吸去多余菌悬液，自然干燥。 3.染色：滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3-5min后用蒸馏水充分洗去A液，之后用B液洗去残留水分，再滴加B液覆盖菌面数秒至1min，其间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。 4.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查，菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
四、实验结果记录 枯草芽孢杆菌鞭毛染色观察图 铜绿假单胞菌鞭毛染色观察图 五、实验结果分析 1.理论结果： 2.实验结果：
棉织物染色三种常见方法
棉织物染色三种常见方法 棉织物是染整加工常见的面料。常采用：直接染料、活性染料以及硫化染料的染色加工方法。 一、棉织物直接染料染色 特性： 1、直接染料是一类能在中性染浴中，直接上染纤维素纤维的水溶性染料。 2、直接染料色谱齐全，应用方便、价格低廉、耐洗牢度不好，日晒牢度欠佳。常需要采用固色剂处理。
性能和方法： 1、染色性能： 1.1 直接染料都溶于水,溶解度随温度的升高而显著增大。 1.2 直接染料染色中经常使用的促染剂为食盐和元明粉。选用元明粉作促染剂能得到较鲜艳的色泽。 1.3 直接染料不耐硬水，必须采用软水染色。 2、染色方法 2.1 一般在普通绳状染色机上进行，染色浴比为1:15-30浅色的浴比要比深色的大些。 2.2 染色温度一般采用近沸点染色,以获得良好的移染性，（所谓移染是指染料从纤维上浓度高地方向浓度低的地方扩散）以及良好的色光和牢度。染色一般由常温开始（深色的可由60℃-80℃开始）。
3、直接染料的固色处理 1、利用阳离子固色剂，以固色剂Y 和固色剂M处理，来提高其牢度。棉针织物活性染料染色 二、棉织物活性染料染色 特性： 1、活性染料能溶于水，分子结构中含有活性基因，在一定条件下，能与纤维素纤维上的羟基，发生共价键结合。
2、活性染料具有色泽鲜艳，湿处理牢度和摩擦牢度较好，匀染性好，色谱较齐，应用方便，耐晒牢度较好。 影响活性染料染色的主要因素： 1、亲和力的影响 1.1 在使用亲和力很大的染料进行染色时,具有比较高的上染百分率,有利于提高染料的利用率,但必须加强洗涤,否则会影响染色物的水洗和摩擦牢度. 2、浴比的影响 2.1 活性染料染色时，在不影响匀染的条件下，应尽量减少浴比，这一方面提高了固色率，同时也减少活性染料在染浴中的水解。 3、温度的影响 3.1 K型活性染料，就有必要在较高温度下染色。 X型活性染料，随着温度的升高，可促进染料的水解，则不能在高温
常用染色液的配制
常用染色液的配制 1.吕氏（Loefflev）美蓝染色液 A液：2%美蓝（Methylene blue）95%酒精溶液 B液：10%KOH溶液 取A液30ml、B液0.1ml与100ml蒸馏水混合。 2.石炭酸复红染色液 A液：4%碱性复红（basic fuchsin）95%酒精溶液 将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解、 配成A液。 B液：5%石炭酸溶液 取A液10ml、B液90ml混合即可。一般可将此溶液稀释5-10倍使用。 但稀释液易变质失效，一次不宜多配。 3.革兰氏（gram）染色液 （1）草酸铵结晶紫染液： A液：1%结晶紫（Crystal violet）95%酒精溶液 B液：1%草酸铵（Ammonium oxalate）溶液 取A液20mlB液80ml，静置48/小时后使用。 （2）路哥氏（Lugol）碘液： 碘片1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液另，待碘全部 溶解后，加够水即成。 （3）95%酒精溶液 （4）蕃红（沙黄）复染液： 2.5%蕃红（Safranlne O）95%酒精溶液。 取此液10ml与90ml蒸馏水混匀即成。 4.芽孢染色液 （1）5%孔雀绿(Malachite green)溶液。 （2）0.5%蕃红溶液。 （3）苯酚品红溶液 称取11g碱性品红溶于100ml无水酒精中。 再取上述溶液10ml与100ml 5%的苯酚溶液混合，过滤备用。 （4）黑色素(nigrosin)溶液 10%黑色素溶液，置沸水浴中30min后，滤纸过滤二次，补加水到100ml，
染色方法总结
mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00 AgNOR染色法: 1、试剂配制： （1）AgNOR染色液： 甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。 乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。 （2）AgNOR工作液 取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤： （1）切片脱蜡至水 （2）双蒸水洗2次 （3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次 （5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。 B 鞭毛染色法: １．试剂配制： 甲液：丹宁酸５克 氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克 福尔马林（１５％）２．０毫升 氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升 乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克 蒸馏水１００毫升 制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。 ２．染色方法： （１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。 （２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。 （３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。 （４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
常用染色液配制
常用染色液配制 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020
1．草酸铵结晶紫染色液 A液：结晶紫，95%乙醇25mL。 B液：草酸铵，蒸馏水1000mL。 制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合静止48h后，过滤后使用。 2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液 碘，，蒸馏水300mL。先用3~5mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。 3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL 4．沙黄（番红）染色液 ％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红），95%乙醇100mL。 此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。 5．％美兰染色液 溶解于100mL蒸馏水中。 6．吕氏碱性美蓝色染色液 A液：美蓝，95%乙醇30mL。 B液：，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。 7．瑞氏染色液 瑞氏染料粉未,甘油3mL，甲醇97mL。将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。 8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用） 孔雀绿,蒸馏水100mL。先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。 9．黑色素水溶液（荚膜负染色用） 黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）。将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。 10．硝酸银鞭毛染色液 A液：单宁酸，，福尔马林(15%)，1%，蒸馏水100mL。 B液：,蒸馏水100mL。 将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。 11．改良利夫森（Leifson’s）鞭毛染色液 A：20％单宁（鞣酸）；B：饱和钾明矾液(20%)；C：5％石炭酸；D：碱性复红酒精（95％）饱和液。 将以上各液于染色前1~3d，按B加到A中，C加到A、B混合液中，D加到A、B、C混合液中的顺序，混合均匀，马上过滤15~20次，2~3d内使用效果较好。 12．石炭酸复红染色液 A液:碱性复红，95%乙醇10mL；B液：石炭酸（苯酚）5g，蒸馏水95mL。 先将染料溶解于乙醇，将苯酚溶于水，AB两液混合即可。
GUS染色液配制
G U S染色液配制 Prepared on 24 November 2020
一染色液配制 1）X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100μL，保存于-20℃。 2）X－Gluc基液（50mM PBS，）。配制方法： 50mM NaH2PO4·100ml； 50mM Na2HPO4 100ml共同溶解； Na2EDTA （10mM，372mg）， Triton-100（％，100μl）, K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）（，） K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）（，） 染色液：50μl X-Gluc母液＋450μl基液 需要试剂：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）； N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ； NaH2PO4； Na2HPO4 ； Na2EDTA ；Triton-100； K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）； K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾） 二染色方法： 1.将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。 2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。 3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。
三实验原理 适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。 gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶 (GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。 gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。 四注意事项 用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1- 3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。
革兰氏染色液配制
革兰氏染色液 保质期：2-8度一年. 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。 操作步骤： 1、标本处理： （1）.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。（2）.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm 离心10min.，取沉渣涂片染色。 2、涂片制作：菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐水中涂布。制作的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定的温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。 3、染色方法： 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都可能会呈阴性反应。 （1）.加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。 （2）.加上碘液后染色1分钟，水洗。 （3）.加上95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约30-60秒，水洗,吸去水分。
（4）.加上蕃红后，染色1分钟，水洗。 （5）.吸干或在空气中凉干后，油镜镜检。 4．结果观察：紫色为革兰氏阳性，红色为革兰氏阴性。 注意事项： 1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。 2．玻片通过火焰温度不能太高。 3．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。 4．碘液变透明，则不能使用。 5.水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗,以免把菌体冲掉。 革兰氏染色液如果用量少，买现成的比较话算，如果用量大，自己配起来也溶液，就是试剂种类多了点。其配制方法如下： (1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。 (2)卢戈(Lugol)氏碘液：碘0.33g，碘化钾0.66g，蒸馏水100mL。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至100mL即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为黄色即不能使用。 (3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。 (4)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。
几种常用的染色方法
几种常用的染色方法 1．美蓝染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法 （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。 （2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。 （3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。 （4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。 （5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 3．抗酸性染色法 （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。 （2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。 （3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。 （4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。 以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。 对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法 （1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可
稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。 （2）另一方法抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法 （1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。 （2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法 （1）染色液配制 ①美蓝溶液美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ②碱性复红溶液碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 （2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ③水洗后、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。 7.结晶紫福尔马林荚膜染色法
常用染色液的配制
附录二：常用固定液和染色液的配制 常用染色液的配制 1. 番红水液 番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。 2. 番红酒液 番红0.5g或1g溶入50%酒精,定溶至100ml。 3. 固绿染液 固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml。 4. 碘-碘化钾染液 碘化钾溶入100ml蒸馏水，再加入1g碘，溶解后即可使用。 5. 苏丹Ⅲ（或Ⅳ）染液 将0.1g苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。6.改良苯酚品红染液 原液A：将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精，此液可长期保存。原液B：将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。 原液C：将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g 山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。 7. 间苯三酚染液 将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。 8. 中性红染液
将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。 9. 钌红染液 将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。 10.龙胆紫染液 将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。现常用结晶紫代替。必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。 11.铁醋酸洋红染液 先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g洋红粉末（切记不可一次倒入）。待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min 后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。 12.苏木精染液 苏木精的配方很多，常用的有如下3种： 配方Ⅰ：苏木精水溶液 0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。 配方Ⅱ：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin） 甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml 乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml 丙液：甘油25ml + 甲醇25ml 分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加
鞭毛染色液(改良Ryu法)
鞭毛染色液(改良Ryu 法) 简介： 细菌鞭毛是细菌的运动器官，幽门螺杆菌能够从强酸性的胃内腔穿过胃上皮细胞上的黏液层达到胃上皮细胞的中性环境，这就是鞭毛运动作用的很好例证。通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一。 Leagene 鞭毛染色液采用改良Ryu 染色法，该染色法的优点是采用结晶紫作为核心染料，试剂比较稳定，操作简单，结果判断更可靠。 组成： 自备材料： 1、 载玻片 2、 蒸馏水 3、 接种环 4、 恒温箱 5、 显微镜 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制鞭毛染色工作液：使用前按试剂(A):试剂(B)=10:1混合，即为鞭毛染色工作液，室温保存待用。 2、 在洁净无油脂的载玻片上滴蒸馏水。 3、 用接种环挑取无菌蒸馏水，再与血平板上菌落接触，允许细菌游到接种环蒸馏水中，再将接种环移到玻片上蒸馏水顶部轻点。 4、 轻轻摇动玻片，使细菌分布均匀。切勿研磨和搅动，以防鞭毛脱落。 5、 置室温箱内干燥固定。 6、 滴加鞭毛染色工作液染色。 7、 轻轻水洗。 8、 自然晾干。 编号 名称 DM0030 50ml DM0030 100ml Storage 试剂(A): Ryu 稀释液 50ml 100ml RT 避光 试剂(B): Ryu 染色液 5ml 10ml RT 避光 使用说明书 1份
9、镜检：从涂片边缘开始，由外及里，逐渐移至中心。细菌分布少的地方，鞭毛容易观察。 细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。 染色结果：菌体和鞭毛皆为紫色，菌体染色较鞭毛为深。 注意事项： 1、固定时不宜用火焰固定。 2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：6个月有效。 相关： 编号名称 CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) DC0032 Masson三色染色液 DC0041 天狼星红染色液 DG0005 糖原PAS染色液 DM0002 姬姆萨染色液(1:9) PS0013 RIPA裂解液(强) PW0053 Western抗体洗脱液(碱性) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
丽春红(Ponceau S)染色液的配制及使用
丽春红（Ponceau S）染色液的配制及使用 丽春红（Ponceau S）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纤维素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。 丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。 注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。 使用说明 将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB 检测。 补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。 丽春红染色液的配制 常用的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制，另外一种用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水杨酸（5-Sulfosalicylic acid）配制。配制方法如下： 一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH2O。 4 ℃保存，不要冻上。也可以配成“0.2%（w/v）丽春红，3%（v/v）乙酸，ddH2O”。
二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分：2% （w/v）丽春红，30%的三氯乙酸，30%的5-磺基水杨酸。
实验室做细胞常用的细胞固定及染色方法(详细)
实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法 一、爬片前盖玻片处理方法 对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。 1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。 2、用自来水冲洗5min。 3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。 4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。 5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。 6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。 二、细胞固定常用方法 固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。 1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。 2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。 3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。如Mueller固定液、Flemming固液、FAA 固定液、Carnoy固定液、Rossman固定液、Altmann固定液、Bouing固定液等。