青霉素酰化酶SOP

青霉素酰化酶SOP

1. 目的

1.1为了保证原材料检验的准确性和具有可追溯性，便于抽查、复查，满足监督管理

要求、分清质量责任，特制定本检验规程。

2. 职责

2.1 公司质管部负责本制度的编制、修订和解释。

3. 范围

3.1 本标准规定了本品的技术要求、试验方法、检验规则、贮存。

本标准适应于6-APA用原料。

5. 引用标准

HNPZ07-09《原辅材料质量标准附录—滴定液与标准液》

HNPZ07-010《原辅材料质量标准附录—指示液指示剂》

HNPZ07-05《化验采样、留样管理制度》

6. 技术要求

7. 检验方法：

7.1 外观：

取本品1g置透明玻璃容器中，室内自然光下目测。

7.2 粒径：

采用微钠粒度仪（winner 99）测定。

7.3 活力：

7.3.1 原理：青霉素(Pen G)在IPA作用下转化成6-APA和苯乙酸，用NaOH滴定苯乙

酸，根据NaOH消耗量计算出IPA酶活力。

7.3.2 定义：

一个IPA酶活单位定义为，每分钟转化1微摩尔Pen G成6-APA的所需酶量。

7.3.3 试剂

a) 磷酸盐缓冲液（0.02M PH 7.8），配置见HNPZ07-12《原辅材料质量标准附录

—缓冲液》

b) 青霉素G钾10%（用7.3.3.1缓冲液配制而成的溶液）。

c) NaOH滴定液（0.1mol/L），配置与标定见HNPZ07-09《原辅材料质量标准附

录—滴定液与标准液》

7.3.4 仪器

自动滴定装置（浆式搅拌，恒温，PH自动滴定仪）

7.3.5 检测

精确称取固定化酶样品200～300mg 于50mL 的烧杯中，加入预热到28℃的30~40ml 10%的青霉素钾溶液，开启搅拌，控制反应温度28℃，反应中用0.1M NaOH溶液调PH至8.0，控制反应PH8.0，记录约10分钟左右NaOH 的消耗体积。

酶活力计算公式：

V NaOH消耗体积（ml）×C NaOH摩尔浓度（μmol/ml）

酶活力（28℃）= ─────────────────────（u/g）

W酶重量（g）×H反应时间（min）

7.4β—内酰胺酶：

7.4.1试剂溶液

6-APA底物溶液：称取0.627g6APA，用100mL磷酸盐缓冲液（PH7.0）溶解。

磷酸盐缓冲液（PH7.0）：配置见HNPZ07-12《原辅材料质量标准附录—缓冲液》。

醋酸钠缓冲液（PH4.5）：配置见HNPZ07-12《原辅材料质量标准附录—缓冲液》。

硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）：配置与标定见HNPZ07-09《原辅材料质量标

准附录—滴定液与标准液》。

7.4.2 测定

量取6APA溶液50ml，置100~500mL的锥形瓶中，再加固定化青霉素酰化酶

0.5g，在37℃摇床上振荡1小时。精密量取2mL振荡液，立即加至已精密量

取的碘滴定液（0.01mol/L)25mL （精密量取0. 1mol/L的碘滴定液10 mL置100mL容量瓶中，用PH4.5的醋酸钠缓冲液稀释至刻度）。在室温暗处放置15分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液5滴，继续滴定至蓝色消失，记录消耗的硫代硫酸钠滴定液体积V

。

样空白试验：除不加0.5g固定酶外，其余操作同上，记录消耗的硫代硫酸钠滴。

定液体积V

空

开环值 = V空-V样 (ml)

8 检验规则

8.1 本标准采用常规检验。

外观、粒径、活力、ß-内酰胺酶应逐批检验。

8.2 取样方法：按照HNPZ07-05《化验采样、留样管理制度》。

8.3 判定：检验中若有不合格项目，可从该批产品中重新加倍抽样复检，并以复

检结果作为最后判定依据，或按检验细则的规定执行。

9 贮存

产品贮存在干燥、通风好，无腐蚀气体的仓库，贮存环境应不得有暖源，

贮存温度为2℃～8℃。保存期为一年。