蛋白质浓度测定——考马斯亮蓝染色法(实验报告)

考马斯亮蓝法测定(实验报告)

考马斯亮蓝法测定苹果组织微量可溶性蛋白含量吴凡郭梦雨摘要:本实验以苹果果肉为研究对象，采取考马斯亮蓝比色法测定蛋白质的吸光度值，通过对果实可溶性蛋白提取缓冲液、缓冲液浓度、pH值、外源添加物对果肉可溶性蛋白提取效率的影响的研究，优化苹果果实可溶性蛋白含量测定方法，以期优化果实可溶性蛋白测定条件，为客观反映果实可溶性蛋白水平提供一种可行的方法。

结果表明：外源添加PVP和EDTA以是苹果可溶性蛋白提取率的主要影响因素。

实验最终确定的提取条件为0.1mol/L pH9.0 Tris-HCl提取缓冲液(内含1mmol/L EDTA和1% PVP),此条件下苹果果实可溶性蛋白的有效测定含量为34.93%。

关键词：苹果、考马斯亮蓝法、Tris-HCl缓冲液、外援添加物1 实验部分1.1 实验原理果蔬可溶性蛋白质含量(soluble protein content)是一个重要的生理生化指标，也是果蔬品质和营养的重要评价指标之一。

许多可溶性蛋白是构成果蔬中酶的重要组成部分，参与果蔬多种生理生化代谢过程的调控，与果蔬的生长发育、成熟衰老，抗病性、抗逆性密切相关。

考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。

在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。

该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度高，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

但该方法线性范围窄，需要选择适宜的提取缓冲液及缓冲液浓度、pH值和外源添加物等，以使测定方法有较高的灵敏度，测定值与真值相近。

考马斯亮蓝法测蛋白质含量实验报告

考马斯亮蓝法测蛋白质含量实验报告考马斯亮蓝法是一种常用的蛋白质含量测定方法，通过与蛋白质结合形成复合物，使蛋白质呈现出特定的吸收峰，从而进行含量的测定。

本实验旨在利用考马斯亮蓝法对蛋白质含量进行测定，并撰写实验报告，以总结实验过程和结果。

首先，我们需要准备实验所需的材料和试剂。

材料包括待测蛋白质样品、考马斯亮蓝试剂、标准蛋白质溶液、比色皿、移液器等。

试剂的配制需要严格按照实验指导书上的要求进行，特别是考马斯亮蓝试剂的配制需要注意其浓度和稀释倍数，以确保实验结果的准确性。

接下来，我们进行实验操作。

首先，取一定量的标准蛋白质溶液，用比色皿进行稀释，制备出一系列不同浓度的标准曲线。

然后，取待测蛋白质样品，与考马斯亮蓝试剂按照一定的比例混合，使蛋白质与试剂充分结合。

接着，将混合液加入比色皿中，利用分光光度计测定吸光度，并根据标准曲线计算出待测样品中蛋白质的含量。

在实验过程中，我们需要注意一些操作细节。

比如，在样品与试剂混合的过程中，需要轻轻摇匀而不能搅拌过于剧烈，以避免气泡的产生影响测定结果。

另外，在使用分光光度计时，需要注意对比色皿中的混合液进行空白对照，以消除其他物质对测定结果的干扰。

实验结果显示，我们成功地测定出了待测蛋白质样品中蛋白质的含量。

通过与标准曲线的比对，我们得出了样品中蛋白质的浓度，并计算出了相应的含量。

这些数据为我们提供了有力的支持，证明了考马斯亮蓝法在蛋白质含量测定中的可靠性和准确性。

总的来说，本次实验通过考马斯亮蓝法成功测定了蛋白质含量，并得出了准确的实验结果。

实验过程中，我们严格按照操作规程进行，保证了实验结果的可靠性。

通过本次实验，我们对考马斯亮蓝法的原理和操作有了更深入的理解，也为今后的科研工作提供了重要的参考和支持。

蛋白质浓度测定——考马斯亮蓝染色法(实验报告)

蛋白质浓度测定——考马斯亮蓝染色法（实验报告）实验日期：2015年4月28日实验温度：室温实验地点：生物化学与遗传学实验室指导老师：***班级：2013级生物技术1班姓名：** 学号：********I. 实验目的1.学习考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理和方法；2.熟悉蛋白质含量测定的影响因素。

II. 实验原理考马斯亮蓝是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的，这是一种迅速、可靠的通过染色法测定溶液中蛋白质浓度的方法。

考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大吸收波长465nm，与蛋白质结合后变为蓝色，最大吸收波长595nm，在一定的蛋白质浓度范围内吸光度与蛋白质含量成正比。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合，反应2min即可到达平衡，复合物在室温下1h内保持稳定。

蛋白质—考马斯亮蓝G-250复合物吸光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，可测微克级蛋白质含量。

III. 实验试剂与仪器1.实验试剂(1) 100μg/mL标准蛋白质溶液5mg酪蛋白溶于50mL 的0.1mol/L氢氧化钠溶液。

(2)考马斯亮蓝G-250试剂50mg考马斯亮蓝G-250溶于25mL的95%乙醇中，加85%的磷酸50mL，蒸馏水定容至500mL。

(3)正常人血浆。

2.实验器材可见分光光度计，100μL微量移液器16支，5mL刻度吸管8支，中试管。

IV. 实验操作步骤1.绘制标准曲线取中试管8支，按下表加入各种试剂混匀，室温放置5min后即可比色。

以“0”号管为空白，记录于下表，绘制标准曲线。

标准曲线绘制数据表012345样1样2标准蛋白μg数020*********A59500.5170.8050.941 1.157 1.192 1.465 1.4402.样品测定中试管2支分别加未知浓度蛋白质（或人正常血浆）0.4mL，各加5.0mL考马斯亮蓝试剂摇匀，室温放置5min，以“0”号管为空白比色，以所测A595于标准曲线查蛋白质含量。

考马斯亮蓝法测定蛋白

考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度蛋白质浓度测定的方法有很多，考马斯亮蓝测定蛋白质是实验室最常见的一种方式，它利用比色法和色素法混合方法、操作简便，下文介绍了考马斯亮蓝测定蛋白质浓度的原理、优缺点、操作以及注意事项。

实验原理考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。

这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。

这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。

考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰(lmax)的位置，由465nm变为 595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。

通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。

研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。

考马斯亮蓝染色法的突出优点是：(1)灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。

这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。

(2)测定快速、简便，只需加一种试剂。

完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。

由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。

因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。

(3)干扰物质少。

如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。

此法的缺点是：(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。

(2)仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)等。

蛋白质含量测定实验报告

一、实验目的1. 理解并掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理和操作步骤。

2. 学习使用分光光度计进行比色分析。

3. 通过实验，掌握蛋白质含量测定的实际操作，提高实验技能。

二、实验原理考马斯亮蓝法是一种快速、简便的蛋白质定量方法。

该法基于蛋白质与考马斯亮蓝G-250染料的结合，蛋白质含量与染料结合程度呈线性关系。

通过测定溶液在特定波长下的吸光度，可以计算出蛋白质的含量。

实验原理：蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与考马斯亮蓝G-250染料发生结合，形成有色的复合物。

该复合物在特定波长下有特征性吸收峰，其吸光度与蛋白质含量呈线性关系。

三、实验材料1. 蛋白质标准品（如牛血清白蛋白）。

2. 考马斯亮蓝G-250染料。

3. 6.0mol/L NaOH溶液。

4. 双蒸水。

5. 分光光度计。

6. 试管、移液器、吸管等实验器材。

四、实验步骤1. 标准曲线制作：将不同浓度的蛋白质标准品配制成溶液，分别加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度，绘制标准曲线。

2. 样品处理：取待测样品，按照一定比例稀释，加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度。

3. 数据处理：根据标准曲线，计算待测样品中的蛋白质含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程。

2. 样品处理：取待测样品，按照一定比例稀释，加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度。

3. 数据处理：根据标准曲线，计算待测样品中的蛋白质含量。

实验结果显示，待测样品中的蛋白质含量为XX g/L。

六、实验讨论1. 实验过程中，应注意操作规范，避免污染和误差。

2. 在制作标准曲线时，应选择合适的浓度范围，保证线性关系良好。

3. 待测样品的稀释倍数应根据实际浓度选择，以保证在检测范围内。

4. 在测定吸光度时，应注意仪器校准和操作，避免误差。

七、实验总结本次实验通过考马斯亮蓝法测定了待测样品中的蛋白质含量，实验结果准确可靠。

蛋白质浓度测定(考马斯亮蓝法)

三、主要仪器：
（1）分析天平、台式天平（2）具塞刻度试管（3）吸管（4）研钵（5）漏斗（6）离心机、离心管（7）容量瓶（8）微量取样器（9）分光光度计
四、试剂：
（1）标准蛋白质溶液称取10mg牛血清白蛋白，溶于蒸馏水并定容至100ml，制成 100 μg／ml的原液。
（2）考马斯亮蓝G－250蛋白试剂称取100mg考马斯亮蓝G－ 250，溶于50ml 90％乙醇中，加入 85％（m／v）的磷酸 100ml，最后用蒸馏水定容到 1000ml。
（1）准确称取约200mg新鲜绿豆芽下胚轴，放入研钵中，加入5ml蒸馏水在冰浴中研成匀浆，离心（4000r／min，10min），将上清液倒入 10ml容量瓶，再向残渣中加入2ml蒸馏水，悬浮后再离心10min，合并上清液，定容至刻度。（2）另取2支具塞试管，准确加入0.5 ml样品提取液，再加入0.5 ml蒸馏水，4ml考马斯亮蓝G－250试剂，充分混合，放置2min后，以标准曲线1号试管做参比，在595 nm波长下比色，记录吸光度。
剂法（Lowry法）
2．制作标准曲线及测定样品时，为什么要将各试管中溶液纵向倒转混
合？（将各试管中溶液纵向倒转混合目的是使反应充分，并且使整个反应液均一，否则在比色测
定时，结果会有较大偏差，使ห้องสมุดไป่ตู้准曲线的制作不标准，后续的测定结果就不可靠。）
3．如何正确使用分光光度计？
八、实验报告：按常规。
分光光度计的使用与注意事项
1. 接好电源线。 2. 启动电源开关，仪器显示“F7230”，预热20分钟（要打开比色皿盒盖）。 3.（1）设置年、月、日、时、分：按“CLEAR”键，仪器显示“YEA”进入年份设置，按数字键，输入

蛋白质浓度测定实验报告

实验报告课程名称：医学生物化学实验指导老师：成绩： ___________________实验名称：动物细胞蛋白质的提取和含量测定实验类型：生物化学同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得一、实验目的1.学习掌握从动物样品中提取细胞总蛋白的基本方法2.掌握三种常用的蛋白质左虽:分析方法，并了解各自的优缺点二、实验原理（一）小鼠肝脏细胞蛋白质提取蛋白质是生命现象的物质基础之一，是生物体最重要的组成部分。

因此，对蛋白质的结构与功能研究，是生命科学的核心问题。

要研究蛋白质的结构与功能，往往从细胞中提取蛋白质开始，而对蛋白质含呈:的测定则是蛋白质相关研究中的必备技术。

1.动物肝脏细胞比较脆弱，易于破碎，故本实验选用小鼠肝脏细胞作为实验材料。

小鼠肝脏采用匀浆法将英破碎，然后加入样品提取液使蛋白质溶解，用高速离心法弃去细胞碎片。

收集上淸液后可进行蛋白质定量分析。

2.蛋白质提取中最常见的问题是目的蛋白质发生变性和被蛋白酶降解。

基本的防范措施是尽可能缩短提取时间和在尽可能低的温度下进行提取。

1）为了防止蛋白酶的破坏，可在提取液中加入蛋白酶抑制剂。

例如加入苯甲磺酰氟（PMSF）可以抑制幺攵氨酸蛋白酶和某些半胱氨酸蛋白酶；胃蛋白酶抑制剂，可抑制酸性蛋白酶；乙二胺四乙酸（EDTA）可抑制金属蛋白酶。

2）为了防I上蛋白质的兢基发生氧化，可加入一泄量的还原剂如兢基乙醇、二硫苏糖醇。

考虑到溶液中如存在重金属离子（如铝、铜、铁离子）可能会与蛋白质形成不溶复合物，可在溶液中加入一定浓度的EDTAo（-）蛋白质浓度的测定1.目前蛋白质的含量测左常用的方法有泄氮法、双缩尿法（Biuret法）、Folin —酚试剂法（Lowry法）、考马斯亮蓝法（Bradford法）和紫外吸收法。

英中Bradford法和Lowry法灵敏度较髙，比紫外吸收法灵敏10~20倍，比Biuret法灵敏100倍。

实验三-考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

水产示范中心
思考题
（1）试比较该法与其他几种常用蛋白质定量测定方法的有缺点。
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实验三考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
一.目的:掌握考马斯亮蓝G－250染色法测定蛋理和操作.
二.原理三.仪器与用具四.实验试剂五.实验操作六实验报告
白质的原
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二.原理:
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
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五.实验操作
1
(蛋白质含量为0～100μg／ mL)的绘制
牛血清蛋白溶液:浓度为100 μ g／ mL,按照表格配制
混合数次，放置5Min后，用1CM光径比色杯在595nM下比色。以蛋
白质浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
水产示范中心
2.样品提取液中蛋白质浓度的测定
吸取样品提取液1.0 ml( why?) ，放入试管中，加入
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三.仪器与用具
721分光光度计；10 mL量筒1个；研钵；烧杯；量瓶；移液管：1 mL 3支，0 1 mL 3支；10 mL具塞刻度试管14支。
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四.实验试剂
标准蛋白质溶液：用牛血清白蛋白配成含蛋白质 50溶液：称取100μg考马斯亮蓝G250，溶于50 mL 90％乙醇中，加入85％的磷酸 100 mL ，最后用蒸馏水定容到1000 mL ，贮放在棕色瓶中，此溶液在常温下可放置1个月。

考马斯亮蓝测蛋白实验报告

考马斯亮蓝测蛋白实验报告
马斯亮蓝测蛋白实验是化学分析技术中应用最为广泛的技术之一，其原理是利用马斯
亮蓝将蛋白中的氨基酸氧化，产生具有一定的比色性的氧化物，通过计算氧化物的吸光度
来直接测定蛋白质的含量。

马斯亮蓝测蛋白实验根据特定实验条件和工艺，可以准确定量蛋白质含量。

在实验中，研究人员先使用8.5pH碱性缓冲液将样品稀释到一定浓度，然后加入溶液彻底混匀，使原
有蛋白受到最大程度的破坏。

之后加入一定量的马斯亮蓝将样品进行氧化处理，在得到的
氧化物中可以测得蛋白质的吸光度，蛋白质浓度与马斯亮蓝的加入量之间的关系可以进行
定量分析，从而得到实验报告。

马斯亮蓝测蛋白实验的光谱测定结果，表示得到的样品中的蛋白浓度在一定限度之内，可以得到较准确的实验数据。

因为影响马斯亮蓝测蛋白实验结果的诸多因素，包括温度，
时间，pH，样品浓度等，研究人员必须要有严谨的工作态度，控制实验过程，以期得到准
确的结果。

注意：
1.马斯亮蓝测蛋白实验要求使用核酸的处理显示更令人印象深刻的比色性能，因此，
在选择核酸提高反应效果时，必须使用天然的硫酸盐，而不能使用过量神经酸合成有机化
合物。

2.使用高浓度马斯亮蓝，要特别注意实验过程中样品原有物质，不同物质之间的性质，可能会阻碍实验结果。

3.样品应该在柔和条件下恒温，不能长时间受热或冷却，以确保测试不受干扰。

总之，马斯亮蓝测蛋白实验应用广泛，具有精确、快速、经济等特点。

将会在生物化
学实验室的研究中发挥重要作用。

准确的测试方法和技术操作，是实验的基本要求，实验
结果更好地反映出所测样品的性质特点。

考马斯亮蓝法测定(实验报告)

考马斯亮蓝法测定苹果组织微量可溶性蛋白含量吴凡郭梦雨摘要:本实验以苹果果肉为研究对象，采取考马斯亮蓝比色法测定蛋白质的吸光度值，通过对果实可溶性蛋白提取缓冲液、缓冲液浓度、pH值、外源添加物对果肉可溶性蛋白提取效率的影响的研究，优化苹果果实可溶性蛋白含量测定方法，以期优化果实可溶性蛋白测定条件，为客观反映果实可溶性蛋白水平提供一种可行的方法。

结果表明：外源添加PVP和EDTA以是苹果可溶性蛋白提取率的主要影响因素。

实验最终确定的提取条件为0.1mol/L pH9.0 Tris-HCl提取缓冲液(内含1mmol/L EDTA和1% PVP),此条件下苹果果实可溶性蛋白的有效测定含量为34.93%。

关键词：苹果、考马斯亮蓝法、Tris-HCl缓冲液、外援添加物1 实验部分1.1 实验原理果蔬可溶性蛋白质含量(soluble protein content)是一个重要的生理生化指标，也是果蔬品质和营养的重要评价指标之一。

许多可溶性蛋白是构成果蔬中酶的重要组成部分，参与果蔬多种生理生化代谢过程的调控，与果蔬的生长发育、成熟衰老，抗病性、抗逆性密切相关。

考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。

在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。

该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度高，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

但该方法线性范围窄，需要选择适宜的提取缓冲液及缓冲液浓度、pH值和外源添加物等，以使测定方法有较高的灵敏度，测定值与真值相近。

生化综合实验报告--测定蛋白质含量的三种方法及其比较

tris铵盐对测定有干扰有大量脂肪性物质同时存在时会产生混浊的反应混合考马斯亮蓝染色法标准曲线的制作取12支试管按下表加入试剂od595蛋白质浓度gml303030303030考马斯亮蓝010203041009nacl0504030201以的od值为纵坐标各标准液浓度为横坐标作标准曲线未知样品蛋白质含量的测定准确吸取05ml所制备的蛋白质样品稀释液加入30ml考马斯亮蓝g250试剂后所有的操作完全与标准曲线相同测定样品的od值
若样品中含有大量吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
5.实验数据处理方法
双缩脲法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
O．D540
0
0.021
0.052
0.160
0.316
0.345
0.08
0.029
标准蛋白质浓度(mg/ml）
0
1
2
3
4
5
X
Y
考马斯亮蓝染色法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
蛋白质浓度（ug/ml）
考马斯亮蓝染色法
标准曲线的制作
1取12支试管，按下表加入试剂
2混匀，室温静置３min，以第１管为空白，于波长595nm处比色，测定OD值，
以的OD值为纵坐标，各标准液浓度为横坐标作标准曲线。
未知样品蛋白质含量的测定
准确吸取0.5 ml所制备的蛋白质样品稀释液，加入3.0 ml考马斯亮蓝G-250试剂后，所有的操作完全与标准曲线相同，测定样品的OD值。平行两份。从标准曲线上查出其蛋白质浓度，再根据稀释倍数计算样品的蛋白质含量。

生物化学实验报告

实验一考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质的含量（p24）一、目的要求掌握考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质含量原理和方法。

二、实验原理考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质─染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。

这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。

这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。

考马斯亮兰G-250染料在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色。

在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰（lmax）的位置，由465nm变为595nm。

且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。

研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。

考马斯亮蓝染色法的突出优点是：（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。

这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。

（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。

完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。

由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。

因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。

（3）干扰物质少。

如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。

此法的缺点是：（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。

（2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）等。

考马斯亮蓝测蛋白实验报告

考马斯亮蓝测蛋白实验报告Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】实验二：分光光度计的学习之考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）测定蛋白质含量定一实验目的学习分光光度计的基本原理和使用方法，并使用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量。

二实验原理考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。

考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。

其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。

该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

三实验材料1. 实验材料：未知浓度的牛血清样品2. 主要仪器：试管、移液枪、分光光度计等。

3. 试剂：蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。

此溶液在常温下可放置一个月。

四实验步骤标准曲线制作：取6 支10mL 干净的试管，按表1 取样。

摇匀后放置2min ，用1cm 光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。

表1 低浓度标准曲线制作上图数据标准曲线如下：拟合标准方程：y=+2．未知蛋白质浓度的测定另取2 支10mL 试管，按下表取样。

吸取测定液，蒸馏水 mL放入试管中，加入5mL 考马斯亮蓝G-250 蛋白试剂，充分混合，放置2min 后用1cm 光径比色杯在595nm 下比色，记录光密度OD595nm，并通过标准曲线查得待测品提取液中蛋白质的含量X（μg）。

考马斯亮蓝法实验报告

考马斯亮蓝法实验报告实验目的，通过考马斯亮蓝法对蛋白质的浓度进行测定，探究其原理和操作方法。

实验原理，考马斯亮蓝法是一种常用的蛋白质浓度测定方法，其原理是将蛋白质与考马斯亮蓝反应生成蓝色化合物，通过测定蓝色化合物的吸光度来计算蛋白质的浓度。

实验步骤：1. 制备标准曲线，分别取不同浓度的蛋白质标准溶液，加入考马斯亮蓝试剂，混合均匀后测定吸光度，得到吸光度与蛋白质浓度的标准曲线。

2. 测定样品，将待测样品加入考马斯亮蓝试剂，混合均匀后测定吸光度。

3. 计算浓度，根据标准曲线，通过样品的吸光度值计算出样品中蛋白质的浓度。

实验结果，根据实验操作和测定数据，得到了样品中蛋白质的浓度。

实验分析，通过考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的实验，我们可以了解到该方法的操作步骤和原理，同时也可以得到样品中蛋白质的浓度数据。

这对于生物化学、生物医学等领域的研究具有重要意义。

实验结论，考马斯亮蓝法是一种简单、快速、准确的蛋白质浓度测定方法，通过本次实验可以得到样品中蛋白质的浓度数据，为后续的实验和研究提供了重要参考。

实验注意事项：1. 实验操作要严格按照步骤进行，避免操作失误导致数据不准确。

2. 蛋白质标准溶液的制备要准确，避免因为标准曲线不准确而影响样品浓度的计算。

3. 实验中的试剂使用要注意安全，避免接触皮肤和吸入气体。

实验改进方向：1. 可以尝试使用其他蛋白质浓度测定方法进行对比实验，验证考马斯亮蓝法的准确性和可靠性。

2. 可以尝试对不同类型的样品进行测定，了解不同样品中蛋白质的浓度差异。

通过本次实验，我们对考马斯亮蓝法有了更深入的了解，同时也得到了样品中蛋白质浓度的数据，为后续的研究工作提供了重要参考。

希望本实验报告能够对相关领域的研究工作有所帮助。

蛋白定量测定——考马斯亮蓝法

实验九、蛋白质浓度的测定——考马斯亮蓝染色法
•实验目的：学会用考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度 •实验原理：考马斯亮蓝与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高度敏感性，考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm，当与蛋白质形成复合物最大吸收峰在595nm，在一定时间内稳定结合。 •实验试剂与器材： 1、0.9%NaCl溶液 2、标准蛋白BSA（0.1ug/ml） 3、考马斯亮蓝G250染色液，称取100mg考马斯亮蓝 G250，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml 85%磷酸稀释至1L
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
4
4
4
4
4
4
0.110
0.159
0.198

四、操作步骤：摇匀：1h内从0号试管内为空白对照在A595nm处比色，一OD595nm为纵坐标，标准蛋白质为横坐标绘标准曲线 •蛋白定量测定：以0.9%NaCl稀释样品A595nm测定并计算含量
试管编 0 号 BSA标准 0 溶液（ml） 0.9%Na 1.0 Cl （ ml ）考马斯 4 染液（ml） A395nm 0 1 0．1 2 0．2 3 0．3 4 0.4 5 0.5 6 0.6 样1

考马斯亮蓝法测蛋白质含量实验报告

考马斯亮蓝法测蛋白质含量实验报告考马斯亮蓝法（Bradford assay）是一种常用于测定蛋白质含量的实验方法。

本文将对考马斯亮蓝法进行详细介绍，并展示一个实验报告的范例。

1. 引言蛋白质是生命体中不可或缺的重要分子，因此准确测定蛋白质的含量对于生物学研究至关重要。

考马斯亮蓝法是一种常用的蛋白质测定方法，其原理基于蛋白质与考马斯亮蓝染料之间的非共价结合。

2. 实验目的本实验的目的是利用考马斯亮蓝法测定给定溶液中蛋白质的含量。

3. 实验步骤3.1 准备工作首先，准备好所需的试剂和设备，包括考马斯亮蓝试剂、蛋白质标准品、显微管、离心机等。

3.2 制备标准曲线按照给定的浓度，分别取一系列蛋白质标准品，加入不同的显微管中。

然后，加入适量的考马斯亮蓝试剂，充分混合。

将显微管放入离心机中离心，使液体沉淀。

离心后，取出显微管，观察颜色变化，并使用分光光度计测定吸光度。

3.3 测定待测样品将待测样品加入显微管中，加入适量的考马斯亮蓝试剂，充分混合。

然后，将显微管放入离心机中离心，使液体沉淀。

离心后，取出显微管，观察颜色变化，并使用分光光度计测定吸光度。

4. 结果与讨论通过测定标准曲线，我们可以得到各个蛋白质标准品的吸光度与浓度之间的关系。

利用这个关系，我们可以计算出待测样品中蛋白质的浓度。

在实验中，我们观察到显微管中的液体颜色会随着蛋白质浓度的增加而加深。

这是因为考马斯亮蓝染料与蛋白质发生非共价结合，形成复合物，使溶液变色。

吸光度的测定则是通过分光光度计来实现的。

需要注意的是，考马斯亮蓝法对于某些物质的干扰较大，因此在实验中应该选择适当的样品稀释倍数，以确保测定结果的准确性。

5. 结论通过考马斯亮蓝法，我们成功测定了给定溶液中蛋白质的含量，并得到了标准曲线。

通过标准曲线，我们可以计算出待测样品中蛋白质的浓度。

6. 结束语考马斯亮蓝法是一种简单、快速且准确的测定蛋白质含量的方法。

它被广泛应用于生物学研究和实验室工作中。

考马斯亮蓝法测定(实验报告)

考马斯亮蓝法测定苹果组织微量可溶性蛋白含量吴凡郭梦雨摘要:本实验以苹果果肉为研究对象，采取考马斯亮蓝比色法测定蛋白质的吸光度值，通过对果实可溶性蛋白提取缓冲液、缓冲液浓度、pH值、外源添加物对果肉可溶性蛋白提取效率的影响的研究，优化苹果果实可溶性蛋白含量测定方法，以期优化果实可溶性蛋白测定条件，为客观反映果实可溶性蛋白水平提供一种可行的方法。

结果表明：外源添加PVP和EDTA以是苹果可溶性蛋白提取率的主要影响因素。

实验最终确定的提取条件为0.1mol/L pH9.0 Tris-HCl提取缓冲液(内含1mmol/L EDTA和1% PVP),此条件下苹果果实可溶性蛋白的有效测定含量为34.93%。

关键词：苹果、考马斯亮蓝法、Tris-HCl缓冲液、外援添加物1 实验部分1.1 实验原理果蔬可溶性蛋白质含量(soluble protein content)是一个重要的生理生化指标，也是果蔬品质和营养的重要评价指标之一。

许多可溶性蛋白是构成果蔬中酶的重要组成部分，参与果蔬多种生理生化代谢过程的调控，与果蔬的生长发育、成熟衰老，抗病性、抗逆性密切相关。

考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。

在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。

该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度高，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

但该方法线性范围窄，需要选择适宜的提取缓冲液及缓冲液浓度、pH值和外源添加物等，以使测定方法有较高的灵敏度，测定值与真值相近。