人蛋白制品中辛酸与乙酰色氨酸稳定剂的定量测定

,
过 氯 酸混合
,
于室 温放
定 剂 白蛋 白 或盐水 溶 液 相 混 合 庚 酸 平 均 回 收率是 9 7 % 样 品 用 作重 复分 析 其 中 2
的
,
。
而后在 酸 化
,
置
分钟 然 后 以
,
离心
。
分钟 上清
,
和 提 取 以 前 或 以 后 加入 固 定 量 辛 酸 来 完 成
。 。
液 轻轻 倾 入 另 一 容 器 用 一 分 光光 度 计 于
钟 以 外 其 它 条 件是 相 同 的 庚 酸 与 辛 酸 保 留 时 间分 别 为
一 一
,
内标 准 柱是
但是 某 些 对 白蛋 白制 品 已 遭 受 过 敏 样 反
,
用
应 的患 者 肤 反应
。
对 含 辛酸 处 理 的 白蛋 白 呈 阳 性皮
,
与一
分钟
。
。
分钟
,
用
柱 是
与
测
相反
。
对 于 乙 酞色 氨酸 则 没 有 有害
储 备液
置避 光 冷 处 可 至 少 稳 定
不 含 稳 定 剂的 白 蛋 白
, ,
个月
加
。
曾 做如 下 试 验
在 加 入 无 稳定剂 白
包 括 用 高 氯酸 酸
,
蛋 白时进 行 全 部 提 取 程 序
至 体积 为
再 加
过
代 替 不 含稳 定
化 或 是 在 无 白 蛋 白 存在 时 加 入 过 氯 酸 得 结 果 和 上 述 方法 是 相 同 的 可 在 定 温 保 存 两 个 月之 久
白蛋 白
然 后 用 水 稀释
制 品 时
,
分 别
取。
或
。
样 品
,
加
,
进 一步 用 水
倍 稀释 后 溶 液 最
。
至 体积 为
、 、 、
的吸收 相 当于一 克分 子 吸收 系数 即
每 次 分 析要 制 备 辛 酸 的 五 点 标 准 曲 线
分别 取
和
,
终的 稀 释 用
开 始 实验 时 线
,
、 、 、
过筑酸
,
表 明这 些
测 定 分 析 溶 液 的 制备 将 化
体 积 中 的 任何 一 个 都 可 以采 用
。
常规 分 析 一
直使用 的 是 4 m l 氯 仿 同样 地
。
,
. 1 2
. 8 m 与1 3
衍 生 物 制备 后 的 气 相 层 析 分 析
。
其 中有 一 种
,
柱给 出 了 相 同 结 果
围〔 图 Z B 略)
,
、
低 血糖
,
、
对某 些 品 种 动
℃ 检 测器 的 ℃
氮 气载 体 气 流 通 速 度 压缩 空 气
。
以 及 长 链 脂 肪 酸 的肝 清 除 的
检 测器压 力 是
抑制
述
。
。
当 辛 酸 存在 时
某 些 个体 血 清 对于 所
已 被 一 些 研 究 者所 描
氢气或 样 器 压 力是
品 体积 注 入量 为
。
低浓 度
,
或 小时
。
环绕
,
的 任 何 稳 定 剂 都能 影 响 白蛋 白 的 热稳 定 性
内径
,
按 前面 所 述 装 填
口
于
℃ 载体
,
气 氮气 流 通
喷射 气
,
柱
℃
关 于 辛酸 的 生 物 学 效 应 已 有 报 导
包括
工 作 条 件如 下 分钟
温 度
柱
血 小板 聚 合 的 抑 制
物 的 麻 醉作 用
。 。
所
氯酸
收值
。
,
于
。
测 定 上 清 液 离心 以 后 的 吸
,
辛 酸 标 准 溶液
然后
改用
,
。
剂 的 白 蛋 白溶液
得到 一 条 相 同 的 标 准 曲
。
本 研 究 用 的 设 备 能 将 每 个 峰 面 积 自 动地 统计 与 扫描
。
线 后 者 标 准 曲线 重 复 性 良好 仅 需 根 据 克 分
,
剂 包 括异 丙醇 三 氯 乙 酸
, , ,
,
验 最终 选 中 了 后 者 因 为 它 能 基 本上 使 沉 淀 完全 分 析 结 果 一 致 并 且 对 乙 酞 色氯 酸 的 回 收好 于 4 ℃ 进 行 沉 淀 未能 得 到 更 好 的 改
。
8 批 制品 的 辛 商品 的 分 析一 一 测 定 了 1 3 : 6 酸 浓 度 仅 批 不 符 合规 定 超 过 标 示 量 的
。
,
是 一 个 宽 的 辛酸 浓 度 范
。
方 法对 辛 酸 的 测 定作 了 特 别 的 设 计 利 用 〔 1
在 填 料上 因 为有 较 大 的 稳 定
,
一一 “C 〕 标 记 的 辛 酸 钠 作为 内 标准 去 校 正
操 作 中所 丢 失 的 此 分 析 中 气 相 层 析 步 骤 如 . B w rn ett等所叙 述 在 一 个 1 85 m 柱 中进 行 5 % 二 乙撑 填 料 使 用 8 0/ 1 0 目气 相 色 谱 P 用 1 二 甘 醇 丁 二 酸钦涂 覆 或使 用 100/ l 2 0 目C h ro m so r b W A W 用 20 % S P 涂 覆
,
,
所 得 图形 不变
辛酸 标 准 溶
此 分 析包 括 一 条 标 准 曲 分 别 取
件
液
,
加
。
时 庚 酸 内 标 准 溶液
,
氯仿
,
,
曲 线 制 备是 将 以 下 溶 液 混 合
和
时 异戊 酷 酸盐
蒸 发 作 程序
,
置 玻塞 离 心 管 中
然后
乙酞 色 氨 酸
为 了 简 化 制 备 标 准 曲 线 的 操
所 有 白 蛋 白 粉末
℃
。
乙 酚色氨 酸
清 白蛋 白 与 血 浆 蛋 白组 份 保存 于 一
,
,
钠 与辛 酸 钠 各
与 人 白蛋 白缔 合
缔 合的 强 度 依 据脂 肪 酸 碳
,
气 相 层 析 条 件 一 一 备有 火 焰 电 离 检 测 器 积 分 仪 自动取 样 器
玻 璃柱
一
。
链 的 长 短 和 色 氨 酸 的 三 维 结构 而 异 也 与实 验 条 件 有 关
自动 取 样
分
有 人 红 细 胞 凝 集能 力
,
压缩空 气
如用
。
虽 然 对 于 具有 这 种 脂 肪 酸 一 一 依 检 辛
,
柱 除了
,
酸 盐 一一 依 赖 抗 体 的 接 受 者 施 用 含 有 辛 酸
柱 温是
,
℃ 和 氮气 载体 气 流 速 为
稳定 剂 的 白蛋 白
应
,
没 有 引出 不 幸 的 应 答 反
,
。
性
,
故 常规 使 用 较 短 的 柱 子 为证 实 分 析 的 准 确 性
。 (
辛 酸标 准 与 庚 酸
,
,
,
内 标 准被 单 独 地 层析
的 负 载上
,
在本 研 究 中 使 用 的
它
。
,
除 了 由 溶剂 系 统 产 生 的 以 外
)
,
们 各仅 显 出一 个单 独 的 峰 辛 酸 标 准 溶液 用 : v el R a n 的 方 M a r 与 s d 法滴定 微 量 浓 度 8 0
S u p e ico p o r t
,
分 别 对 辛 酸 作 五 次 重 复 分 析 重 复测 定 的 变 . . . 异 系 数是 2 1 一 5 5 % 平 均为3 9 %
, ,
。
用 5 % 二 乙 撑二 甘 醇 丁 二 酸
。
盐涂覆)
,
,
来自百度文库
产 生 与前 述 相 似 的 结 果
, , ,
为试 验 回 收 率
,
。
反应 的报 导
当 从 静 脉注 射 入人 体 时
右旋
。
辛 酸的 分 析 程 序 一 用
与左 旋 两 者 都 很少 被 利 用 而 迅 速 排 泄 掉
定 法
蛋 白 质溶 液 过 氯酸
, ,
,
,
卜
内标准 溶 液 每
氯仿溶 液 中 含 庚 酸 置 一带 玻 璃 塞
用 涡 流 棍 合器 强 力 搅 动 分 混 合 物 用 涡 流混 合 器 再 搅 动
,
,
加 入一 系 列递增 量的辛
,
。
乙 酞 色氨酸分 析
儿种 不 同的蛋 白沉 淀 过 氯酸 都经 过 试
酸 重 复 测 定 正 常血清 白蛋 白样 品 其最 大 加 入 量 约 为 两 倍 辛酸 浓 度 这 些样 品分 析 结果 . . 表 明 加 入 辛 酸 的 回收 率为 95 5 士 4 2 % ( s D )
本研 究 中 描 述 的 方 法
,
— 既 不 需要 辛酸 衍
, 。
23 30
。
m M 溶液 是 由 溶解 辛 酸 钠 于 水 制 成 经 滴 定 . 用 火 焰光 度 法 测 定 钠 而 辛 酸 为 78 7m M : 则 按 上 述 气相 层 析 法 测 定 其 浓 度 火 焰 光 . . 度 法 为 78 5 m M 气 相 层 析 法 为 79 3m M 平 . 均 偏差 1 0 %
测 定 其 吸 收值
,
其后
、 4 6
一 系列
8 m l
若分 析
或
白蛋
。
、
、
氯
白 溶液 时 于 测 定 前 稀 释 至 光 度计 于
,
的 蛋 白浓 度
,
仿 系 用 于 提取 步 骤 从 得 到 的 辛 酸 值来 看 所
,
乙 酞 色 氨 酸 的 克 分 子 吸 收 系 数是 用 分 光
用 氯 仿 的 体 积 没 有 可 辨别 的 影 响
,
为减
。
乙 酞色 氨酸 和 〔 一
〕辛 酸
,
钠 未进
少 加 热 过 程 中蛋 白变性
要加 入 稳 定 剂
按
均为 商 品
。
规定
这 些 稳 定剂 的 允 许 量 是 每 克 蛋 白 中含 或联 合使 用 乙 酞 色 氨 酸 辛酸 和 乙 酞 色 氦 酸
。
一 步纯 化
。
被 分 析 的 人 白蛋 白溶 液 是 正 常血
实
材料 一 一 作 气 相 层 析 料是
目
验
用 的 柱子填
, ,
与
离心管中 钟 加 氯仿
, ,
以
几 分 钟 然 后 将这 些 离 心 管于
离心
,
吸 出水 层
,
氯 仿层 用 吸 管
。
小心 勿 将 主 要
吸 出 转移 到 一 个
,
合 物 于 真 空 干 燥 器 中乾 燥至 恒重 最 高 温 度
℃
。
含蛋 白 质 的 中 间 相 层 吸 出 新 的 内含
子 吸 收 系 数 即 能 测 定 计算 见 附 录
, ,
因此
,
,
对 于 每 个 样 品 与标 准 曲
后 者 是 由面 积 比 对加 入
因此
,
线 上 的 各个 点
辛 酸与 庚 酸 两 者峰 面 积 之 间
。
作 为 常规分 析 不 需 要 标 准 曲 线 当 同 一 样 品
分 析 时 无 论 用 与 不 用 标 准 曲线 乙 酞 色 氨 酸
人 蛋 白制 品 中辛 酸
与 乙酚 色 氨酸 稳定剂 的定 量 侧 定
“
,
在美国
品在
,
,
大 多 数 治 疗 用 的 人 白 蛋 白 制品
。
一
纯 氯仿
盐
,
,
涂覆
,
。
辛 酸
,
纯 过 氯酸
‘
,
庚 酸
,
是 正 常 血清 白蛋 白和 血 浆 蛋 白组 分
℃加 热
这些 制
,
异 戊基 醋 酸盐
,
,
小 时 以 灭 活 肝 炎病 毒
,
,
的 比可 被 计 算 出 来 的 一条 线
,
标 准 辛酸 的 量 作 图 而 获 得 图
从 它们 的 峰 面 积 比 而 测 得
。
略
,
较上
的 含量 测 定 值 是 一 致的 相差 在
,
以内
。
而 白蛋 白 样 品 中 的 辛 酸 含 量 是
但 是 一 条可 靠 的
略
,
结果 与讨 论
辛 酸 分 析之 前 混合
℃ 减 压 除去 氯 仿
。
此干 燥 化 合 物 由 半 微 量 凯 氏定 抓 法 测
,
异 戊 醋 酸盐 的 离 心 管 中
。
于
定 其 含 氮量 名为
化合 物 于 浓度
。
实测 为
残 留的异 戊 醋 酸 盐 溶
乙 酞 色 氨 酸 储备 液 的 制
,
备 溶解 干 燥
最终
。
,
液 直 接用 来 分 析
分 析
或
。
经 酸 化 与 提取 入 氯 仿 层 后
,
实 际上
所 得 计 教 表 明> 9 7 % 的 放 射 性 已 提 取 到 氯仿 层
全 部 吸 收 值是 表 示 由 于 制 品 中 乙 酞 色 氨 酸 的
由于 放射 标 记 的 庚酸是 无 效 的
,
所以回
被 分析 将
,
。
蛋 白 溶液
,
收 实 验 是 通 过 将 已 知 量 的 未 标 记 庚 酸 和 无稳
。
用 于 人 白 蛋 白 制 品 中辛 酸 的 分 析 时
。 ,
,
可 以获
为 评 价 此 方 法 的 精确 性 用 5 批 5 % 正 常血 清 白 蛋 白 与 6 批 2 5 % 正 常 血 清白 蛋 白
, ,
得 相 同的结 果 并 且 先前 已 测定 过的 制 品 . 3 m 柱 上 的 气 相 层 析 (10 / 12 0 目 包 括用 1 8
,
,
善
,
因此
,
分 析 中 的 全 部 操作 于 室 温 进 行
,
。
标 准 曲 线 可 由峰 高 比 图 条 线 作成
,
较 低的 一
。
同 时样 品中 辛 酸含 量 因 而 测 得
,
,
,
用
’
正常 血 清
〕 标记 的 辛 酸 钠
,
乙 酞 色 氨酸 的 分 析 程 序 一 一 乙 酞 色 氨酸
白 蛋 白样 品与 〔 一一
是 用 分 光 光 度 法 定 量 用 过 氯 酸 沉淀 蛋 白 然 后 测 定 酸可 溶 性 成 份 的 紫 外 吸 收 值
,
。
,
,
,
,
而 是 利用 一 . 当 以 较短 的 ( 这 样 更 易 于 掌握 )1 2 m 柱 . . 1 22 或 1 8 3 m 柱 ( 两 者 的 填料使 用 8 。八 00 目 ro so rb Ch m W A W 用 10 % S P 一 1000 涂 覆 )
,
生 物 也 不 需要 放射 性 标 记 探 针