细菌的分离、接种和培养
实验五 微生物的分离、接种及培养法
实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。
2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。
二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。
在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。
三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。
2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。
3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。
四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。
具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。
（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。
（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。
然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。
细菌的分离培养
细菌的分离培养实验目的：掌握在各种培养基上的接种方法并观察生长现象。
实验材料：菌种、普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基、接种环、接种针、酒精灯。
实验内容：一、平板划线接种法（分离培养法）原理：通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。
若需从平板上获取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。
用途：分离出纯种细菌，以利作纯培养。
操作方法（三区划线法）：1、右手拿接种环，烧灼冷却后，取菌液一环。
2、左手抓握琼脂平板（让皿盖留于桌上），在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入，右手将已沾菌的接种环在琼脂表面密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/5-1/6，此为第一区。
划线时接种环与琼脂呈30-40度角轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。
3、接种环上多余的细菌可烧灼（每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定），待冷后，在划线末端重复2-3根线后，再划下一区域（约占1/4面积），此为第二区。
4、第二区划完后可不烧灼接种环，用同样方法划第三区，划满整个平皿。
5、划线完毕，将平板扣入皿盖并作好标记，置37°C温箱孵育18-24小时观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征（如大小、形状、透明度、色素等）。
二、液体培养基接种法用途：凡肉汤、蛋白胨水，各种单糖发酵均用此法接种。
可以观察细菌不同的生长性状、生化特性以供鉴别之用。
操作方法：右手执笔式握住接种环，灭菌冷却后取单个菌落。
1、左手拇指、食指、中指托住液体培养基之下端，右手小指和无名指（或手掌）拔取试管塞，将管口移至火焰上旋转烧灼。
2、将沾菌的接种环移入培养基管中，在液体偏少侧接近液面的管壁上轻轻研磨，沾取少许液体与之调和，使菌液混合于培养基中（图5）。
3、管口通过火焰，塞好试管塞，将接种环灭菌后放下，经37C温箱孵育18-24小时，取出观察生长情况。
细菌的分离培养实习报告
细菌的分离培养实习报告一、实验目的通过本次实习，掌握细菌的分离培养和接种技术，了解细菌的形态特征及生长习性，并能够正确使用细菌培养基和培养设备。
二、实验原理细菌的分离培养和接种技术是一种将混合菌液中的不同种类的细菌分离出来并进行单独培养的方法。
该方法主要是通过对细菌的生长特性进行观察和分析，从而将不同种类的细菌分离开来。
三、实验材料与设备1. 实验材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎球菌等。
- 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基、斜面培养基等。
- 接种工具：接种环、接种针等。
- 实验仪器：高压蒸汽灭菌器、生物安全柜、显微镜、培养箱等。
2. 实验步骤1) 菌种的准备：将各种菌种分别接种在斜面培养基上，37℃培养24小时。
2) 培养基的制备：按照配方制备牛肉膏蛋白胨琼脂平板、肉汤培养基、半固体培养基等，高压蒸汽灭菌法灭菌。
3) 接种方法：a) 平板划线法：将菌种接种环在琼脂平板表面划线，使细菌分散生长，形成单个菌落。
b) 稀释涂布平板法：将菌种接种环在液体培养基中稀释后，涂布在琼脂平板表面。
4) 培养：将接种后的琼脂平板倒置放入培养箱中，37℃培养24小时。
3. 实验结果与分析1) 菌落的观察：观察不同菌种在琼脂平板上的生长情况，记录菌落的形状、大小、颜色等特征。
2) 菌种的鉴定：根据菌落的特征和生长习性，对不同菌种进行鉴定。
四、实习心得通过本次实习，我对细菌的分离培养和接种技术有了更深入的了解。
在实验过程中，我学会了如何准备菌种、制备培养基、进行接种操作以及观察菌落等技能。
同时，我也明白了细菌分离培养的重要性，它不仅可以帮助我们研究细菌的生物学特性，还可以为临床诊断和防治疾病提供依据。
在实验过程中，我注意到了无菌操作的重要性，严格遵循无菌操作规程，避免交叉污染。
同时，我也学会了如何使用显微镜观察细菌的形态特征，从而对菌种进行初步鉴定。
总之，本次实习让我对细菌的分离培养和接种技术有了更全面的了解，也为我今后的科研和工作打下了坚实的基础。
细菌分离培养实验报告
细菌分离培养实验报告
实验目的：
通过对样品的细菌分离和培养，观察和鉴定细菌种类及其生长特征，为日后的研究奠定基础。
实验原理：
细菌分离培养是指将样品中的微生物通过特定的方法分离出来，并且在适宜的培养基上进行培养。
主要步骤包括选择样品、消毒、接种、分离和鉴定。
实验步骤：
1.选择样品：本次实验选用的是口腔拭子样品。
2.消毒：将口腔拭子放入细菌营养液中，充分均匀振荡，将细
菌营养液倒入灭菌瓶中。
3.接种：将灭菌瓶中的细菌营养液，均匀地涂抹在培养基平板上，用铁环进行接种。
4.分离：将铁环进行细菌分离，标记好分离点。
5.鉴定：根据样品的菌落形态、生长特征及其他相关检测方法，进行初步鉴定和筛选，待进一步的鉴定。
实验结果与分析：
在培养基平板上观察到了菌落的生长，初始生长时间为48小时。
根据菌落的形态、颜色、大小和特征等，初步判断菌落为链球菌属（Streptococcus）。
结论：
通过细菌分离培养实验，成功分离出一株链球菌属的菌落，并进行初步鉴定，为日后的进一步研究提供了基础。
细菌的接种分离与培养实验报告实验结论
细菌的接种分离与培养实验报告实验结论下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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实验四：细菌的接种、培养和分离技术
实验四：细菌的接种、培养和分离技术一、实验目的与要求：（1）掌握从环境土壤、水体、活性污泥等中分离培养细菌的方法;从而获得若干种细菌纯培养技能（2）掌握细菌纯种分离的方法：稀释平板分离法和平板划线法..（3）掌握几种接种技术：斜面接种技术、穿刺接种、稀释平板涂布法等..二、实验原理在土壤、水、空气或人及动、植物体中;不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一起;当我们希望获得某一种微生物时;就必须从混杂的微生物类群中分离它;以得到只含有这一种微生物的纯培养;这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化..为了获得某种微生物的纯培养..一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同;而供给它适宜的培养条件;或加入某种抑制剂造成只利于此菌生长;而抑制其他菌生长的环境;从而淘汰其他一些不需要的微生物;再用稀释涂布平板法或稀释混合平板法或平板划线分离法等分离、纯化该微生物;直至得到纯菌株..三、实验器材1、牛肉膏蛋白胨培养基2、盛9ml无菌水的试管;盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶;1ml和5ml无菌吸管;无菌培养皿；3、接种环;土样;酒精灯等..四、操作步骤1、倒平板将加热融化的牛肉膏蛋白胨培养基倒平板;并标明培养基的名称..2、贴标签接种前在试管上贴上标签;注明菌名、接种日期、接种人姓名等..贴在距试管口径2-3厘米的位置..3、点燃酒精灯..4、接种取接种环右手拿接种环如握钢笔一样、在火焰上将环端烧红灭菌;然后将有可能伸入试管的其余部分;均用火烧过灭菌..环冷却将灼烧过的接种环伸入菌种管;先使环接触边壁;使其冷却..取菌种待环冷却后轻轻沾取经稀释10倍的土壤悬液-环;然后将接种环移出菌种管;注意不要使环的部分碰到管壁;取出后不可使环通过火焰..接种在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环在平板上划线..划线的方法很多;但无论哪种方法划线;其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释;使形成单个菌落..常用的划线方法有下列二种：⑴用接种环以无菌操作挑取土壤悬液一环;先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条;再转动培养皿约70°角;并将接种环上剩余物烧掉;待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线;再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线图A..划线完毕后;盖上皿盖;倒置于温室培养..⑵将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线图 B..划线完毕后;盖上皿盖;倒置温室培养..环灭菌将接种环烧红灭菌..5、挑菌将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到上述三种培养基的斜面上;分别置25℃和28℃温室中培养;待菌苔长出后;检查菌苔是否单纯;也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物;若有其他杂菌混杂;就要再一次进行分离、纯化;直到获得纯培养..四、注意事项1、实验操作过程中无菌操作..。
细菌分离培养、接种技术及培养方法-精品医学课件
革兰染色法
Gram staining
临床微生物与免疫学检验教研室
一、实验目的
1.掌握细菌涂片制作方法； 2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态； 3.了解革兰染色法的临床意义。
二、革兰染色原理
原理
细胞壁学说 等电点学说 化学学说
革兰阳性菌 细胞壁肽聚糖形成网状 结构，乙醇处理时，脱水 引起网状结构孔径变小， 通透性降低，结晶紫-碘 复合物不易脱去
实验步骤和方法
1)连续划线分离法：①将接种环火焰灭菌，待冷后取标 本少许；②左手持平板，五指固定平皿盖边缘，向外反 转手掌，装有培养基的平板于手掌内用拇指、小指和 无名指固定，并将平板边缘稍微提高呈现30～45度角， 置酒精灯前上方5～6cm；③右手持已取材的接种环， 先在平板一端涂布，然后快速大幅度左右来回以密而 不重的曲线形式作连续划线接种，使整个平板布满曲 线④划线完毕，将平板作好标记，置35℃孵育18-
革兰阴性菌
细胞壁肽聚糖含量低， 脂类物质含量高，乙醇处 理时，脂类物质溶解，细 胞壁的通透性增加，结晶 紫-碘复合物易脱去
三、实验器材和试剂
1.标本 ：金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。 2.试剂 ：革兰染液。 3.其他 ：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。
四、操作步骤
1. 细菌涂片制备 ⑴涂片：取洁净载玻片一张，按无菌的方法取1~2环生 理盐水于载玻片上，按无菌的方法各取葡萄球菌和大肠埃 菌 培养物少许，在生理盐水中均匀研磨，涂好的菌膜直径 1cm左右。 ⑵干燥：室温下自然干燥或于酒精火焰半尺高处烘干。 ⑶固定：火焰加热法。目的是杀死细菌，并使菌体与载 玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉。
培养方法
2 二氧化碳培养法 (1)二氧化碳孵箱：能自动调节二氧化碳的含量和温度， 使用较为方便。 (2)烛缸法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨 口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，点燃 缸内蜡烛，加盖密封。当蜡烛燃烧时会消耗缸内氧气并 产生CO2，随着缸内氧气的逐渐减少，蜡烛会自行熄 灭，此时缸内CO2浓度约为5％左右。 (3)化学法(重碳酸钠一盐酸法)：（自学）
微生物的分离、接种和培养技术
微生物的分离、接种和培养技术一、实验的目的和内容目的：掌握微生物接种和分离纯化技术，掌握无菌操作技术。
内容：用平板划线法分离微生物；学习斜面接种及穿刺接种等无菌操作技术。
二、基本原理在自然界中，各种微生物是在互为依赖的关系下共同生活的。
因此，为了取出特定的微生物进行纯培养，必须从中把他们分离出来。
微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。
无菌操作是微生物接种技术的关键。
接种是将微生物或微生物悬液引入新鲜培养基的过程。
由于实验目的、培养基种类及实验器皿等不同，所用接种方法不尽相同。
斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。
分离培养微生物时，要考虑微生物对外界的物理、化学等因素的影响。
即选择该类微生物最适合的培养基和培养条件。
在分离、接种、培养过程中，均需严格的无菌操作，防止杂菌侵入，所用的器具必须经过灭菌，接种工具无论使用前后都要经过灭菌，且在无菌室或无菌箱中进行。
三、材料及器材（一）菌种：大肠杆菌、枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，酵母菌。
（二）培养基：肉汤培养基试管斜面，肉汤半固体培养基，肉汤固体培养基试管斜面，肉汤固体培养基平板，查氏培养基试管斜面，查氏培养基平板。
易（三）仪器及其他工具：接种环，接种针，接种钩，镊子，酒精灯，火柴，酒精棉，试管架，标签纸，恒温培养箱等。
四、方法与步骤（一）接种。
1、试管菌种转接：试管细菌菌种转接主要用于菌种的活化、分离、纯化。
（1）将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与其他四指之间，用右手的无名指与小指和手掌边拔出棉塞并挟住。
（2）置试管口于酒精火焰附近。
（3）将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰3次，然后再放入有菌试管中，在管壁上停留片刻待其冷却。
（4）取少许菌种置于另一支试管中，按一定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。
（5）取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。
（6）重新塞上棉塞。
（7）烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。
微生物实验中的接种分离和培养操作步骤
微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤一、目的要求1、掌握各种分离、接种方法。
2、掌握无菌操作基本环节。
二、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。
在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。
微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。
然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。
三、实验材料1、恒温培养箱。
2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。
3、培养基（上次实验配制的）。
4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。
四、方法步骤（一）接种的操作1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。
（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。
（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。
（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。
（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。
（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。
从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。
有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。
（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。
细菌的纯种分离培养和接种技术实验报告
细菌的纯种分离培养和接种技术实验报告一、实验目的本实验旨在掌握细菌的纯种分离培养和接种技术，了解细菌的形态特征及生长习性，并能够正确使用细菌培养基和培养设备。
二、实验原理1. 细菌纯种分离：将混合菌涂于琼脂平板上，经过培养后，可以观察到不同形态和颜色的菌落。
选取单个菌落进行多次传代，最终得到纯种菌株。
2. 细菌培养基：含有必需营养物质的液体或固体培养基，可以提供适宜的环境促进细菌生长繁殖。
3. 细菌接种：将细菌转移到新的培养基中，以便于观察其生长情况。
三、实验步骤1. 准备工作：清洁工作台、消毒琼脂平板和试管等设备。
2. 分离纯种：取一支无菌铅笔，在琼脂平板上划出几条直线。
用无菌铅丝在混合液体中沾取少量后，在平板上均匀涂抹，避免相互重叠。
将琼脂平板倒置在恒温箱中，以适宜的温度和时间进行培养。
3. 传代：观察到菌落后，用无菌铅笔在菌落周围划出一圈。
用无菌铅丝沾取少量菌落，划过圈内，再均匀涂抹于新的琼脂平板上。
重复以上步骤多次，直至得到纯种细菌。
4. 培养：将培养基加热消毒后倒入试管中，待其冷却后，在试管口处焊接一根无菌铁针。
用无菌铁针沾取少量细菌接种于培养基中，放入恒温箱中进行培养。
5. 观察：观察培养基上的细菌生长情况、形态特征和颜色等。
四、实验注意事项1. 实验前要进行必要的清洁和消毒工作。
2. 操作时要保持无菌状态，避免污染。
3. 培养箱应设置适宜的温度和湿度，并定期消毒。
4. 实验结束后要及时清理和消毒设备和工作台。
五、实验结果经过分离和传代，成功得到纯种细菌。
在培养基上观察到细菌的形态特征、颜色和生长情况，并能够正确进行接种操作。
六、实验总结本实验通过对细菌纯种分离培养和接种技术的学习和掌握，使我们更加深入地了解了细菌的形态特征和生长习性，同时也提高了我们的操作技能。
在今后的学习和研究中，这些知识和技能将会发挥重要作用。
实验三：细菌分离接种技术和培养
实验三 细菌分离、接种技术和培养法
目的要求：
1、掌握细菌分离培养的基本要领和方法。
2、掌握平板划线、斜面培养基等接种方法。
3、熟悉细菌分离培养的环境和条件。
实验内容：
1、 细菌划线分离培养：连续划线分离培养法 分区划线分离培养法
2、 纯培养获得与移植：试管间的斜面移植； 可疑菌落纯培养移植
Staphylococcus epidermidis on blood agar With on hemolysis
细菌纯培养
细菌斜面 纯培养法
细菌纯培养
液体培养基
半固体培养基穿刺培养
实验报告：
1、细菌分离培养和纯培养的实验过程。 2、本次细菌分离培养的结果。
细菌划线分离培养
Streptococcus pyogenes on blood agar, illustration b-hemolysis.
Streptococcus pneumoniae on blood agar, illustration a-hemolysis.
Staphylococcus aureus on blood agar, illustration b-hemolysis.
3、 液体培养基增菌和培养（示教）
4、 半固体培养基穿刺培养（示教）
说明：
病原菌的人工培养一般采用35～37℃，培养时间多数为18～24 h，但有 时需根据菌种及培养目的作最佳选择，如细菌的药物敏感试验则应选用对数 期的培养物。将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散 作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开，称为分离培养。一般 经过18～24 h培养后，单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团，称为 菌落（colony）。挑取一个菌落，移种到另一培养基中，生长出来的细菌均 为纯种，称为纯培养（pure culture）。从混杂的微生物群体中获得只含有 某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。微生物在固体培养 基生长形成的单个菌落一般是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通过挑取 单菌落而获得一种纯培养。
实验三 细菌纯种分离、培养和接种技术
实验三细菌纯种分离、培养和接种技术一、实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。
(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。
(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
二、实验原理水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37°C24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称。
水的大肠菌群数是指lOOmL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。
三、实验材料1、菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌生理盐水。
2)器材：灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
2、大肠菌群的测定：1)培养基：①乳糖胆盐蛋白胨培养基：蛋白胨20g，胆盐(或牛、羊胆盐)5g,乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,水1000mL,pH7.4。
制法：将蛋白胨、胆盐、乳糖溶于水中，校正pH,加入指示剂，分装，每瓶50mL或每管5mL,,并倒置放入一个杜氏小管，121C灭菌15min。
②伊红美蓝琼脂培养基：制法：将伊红美蓝琼脂粉溶于水中，校正pH后分装.121C灭菌15min备用。
平板划线法：接种是采用平板划线的方法将初发酵的大肠杆菌进行接种。
四、实验方法1、水样的采集：1）自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，再开放水龙头使水流5min,以灭菌三角瓶接取水样以备分析。
微生物纯种分离,培养及接种技术实验原理
微生物纯种分离,培养及接种技术实验原理微生物纯种分离、培养及接种技术是微生物学中最基本的实验技术之一。
其目的是从混合的微生物菌群中分离出单一的微生物菌落，并在适宜的培养条件下进行纯化和生长，以获得纯种微生物。
一、实验器材和试剂1.灭菌针2.毛细胞计数板3.显微镜4.平板接种器、针头5.无菌匀浆棒、吸管6.细菌培养基7.消毒液二、实验步骤1. 样品处理及制备首先需要选择一份待测试的样品，包括土样、水样、空气、食品等，然后将样品采集到无菌容器中，再将其送到实验室。
在进行样品处理之前，需要先进行简单的初步处理，将样品进行稀释或者过滤，将其中的杂质和大颗粒物去除，以利于后续实验的操作。
接下来需要进行制备培养基，根据不同的微生物种类，需要选择适当的培养基进行培养。
通常情况下，我们可以使用凝胶培养基、液体培养基、甜菜汁培养基等，以满足微生物在不同环境下生长所需的营养物和成分。
2.分离纯化分离纯化是该实验的关键步骤。
将经过预处理的样品移到无菌试管中，打开试管口，加入适量的制备好的培养基，然后利用匀浆棒或吸管将混合物均匀混合。
然后利用平板接种器将混合物接种到培养基平板上，使其密切接触。
然后将接种好的平板置于恒温箱中，以利于微生物的生长和营养物质的自我繁殖。
在接种后2-7天内，不同类型的微生物将在培养基平板上生长出不同的菌落，每一种菌落都代表一种单一的微生物。
将这些菌落分离提取，并再次进行培养，就能得到单纯的微生物菌种。
3.纯种微生物菌种接种在获得单纯的微生物菌种之后，需要将其再次接种到培养基中进行培育。
将相应体积的纯种菌种接种到培养基平板上，使其能够生长繁殖。
在接种后约24小时内，微生物将在培养基中生长出许多菌落。
根据菌落的特征和形态，可以对不同的微生物进行鉴定和分类。
如果需要进行更加深入的分析，可以对微生物菌种进行进一步培养、萃取定量和测序等工作，以获取更多的相关信息。
三、实验注意事项1. 实验前需要保证实验室内部环境和仪器均为无菌状态。
微生物的接种、分离和培养
实验六微生物的接种、分离和培养一、目的要求1．理解和掌握微生物接种、分离基本技术的原理与操作要领。
2．熟悉微生物接种、分离的无菌操作过程。
3．了解微生物需氧培养的方法。
4．学会观察和描述微生物的各种培养性状。
二、实验原理1. 微生物接种指将微生物纯种或含菌材料转移到另一营养基质上的过程。
根据不同的目的可采用的不同的接种方法，如平板划线法、斜面划线法、浸洗法、涂布法、倾注法、穿刺法、点植法和影印法。
2. 微生物分离指依据微生物的特征，采用各种方法从含菌样品中获得由单一个体（如单一菌体或孢子）或一段菌丝生长繁殖形成的微生物群体的过程。
常用的分离方法有：平板划线法、稀释涂布平板分离法、稀释倾注平板分离法和单细胞分离法。
平板分离法的基本原理包括两个方面：（1）选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧等要求或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
（2）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。
因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
值得指出的是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。
因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定方能得到。
3. 微生物培养指微生物被接种到营养基质后，在一定条件下生长繁殖的过程，分需氧培养法和厌氧培养法。
本实验所做的需氧培养法，是采用生化培养箱和恒温摇床进行的。
4. 微生物的培养形状培养性状是微生物在培养基上所表现的群体形态和生长情况。
平板菌落特征、斜面和液体培养特征、半固体穿刺培养特征等培养性状，是鉴定微生物的重要形态学依据。
菌落是由单个或少数细胞在固体培养基表面或里面生长繁殖所形成的眼可见的子细胞群体。
菌落形态会因菌种不同或菌种相同但所用培养基、培养温度和时间等条件不同而存在不同程度的差异。
实验5细菌的接种及分离培养
观察记录菌落形态和特征
01
菌落形态
观察并记录不同细菌在培养基上 形成的菌落形态，如圆形、椭圆 形、不规则形等。
菌落特征
02
03
菌落大小和颜色
记录菌落的色素、透明度、边缘 形状、表面特征（光滑或粗糙） 等。
观察并记录菌落的大小和颜色， 这些特征有助于鉴别不同种类的 细菌。
测定细菌的生长曲线
1 2
生长曲线绘制
观察与记录
定时观察细菌的生长情况，记 录菌落形态、颜色、大小等信 息，以便后续分析。
分离纯化
对于需要分离纯化的细菌，可 采用划线法、稀释涂布法等方 法进行分离纯化，获得单一菌 落。
保存菌种
将分离纯化后的菌种进行保存 ，以便后续实验使用。可以采 用甘油管藏、冷冻干燥等方法
进行保存。
04 实验结果分析
实验结果：通过实验，我们 成功地分离培养出了纯种的 细菌，并观察到了其在不同 培养条件下的生长情况。具
体数据如下表所示
| 培养条件 | 菌落数 | 生长情 况|
实验总结
| --- | --- | --- |
| 温度37℃、湿度适宜 | 120 | 良好 |
| 温度4℃、湿度适宜 | 0 | 无生 长|
结果分析
分析实验结果，比较不同细菌之间的差异，探究其原 因。
结论总结
根据分析结果，得出关于细菌接种及分离培养的结论， 并指出实验中可能存在的误差和不足之处。
05 注意事项与实验总结
注意事项
安全注意事项 实验应在无菌环境下进行，避免外界细菌污染。
使用后的器材和培养基应进行正确的消毒处理，避免交叉污染。
实验目的
本实验旨在学习细菌的接种及分离培养技术，掌握无菌操作技术和显微观察技 术，了解细菌的生长特性和培养条件。
培养细菌的一般方法
培养细菌的一般方法培养细菌是一项重要的实验技术，用于研究和繁殖细菌。
一般的细菌培养方法包括选择培养基、接种细菌、培养及分离纯种细菌。
选择培养基是培养细菌的第一步。
培养基的选择取决于所需的细菌特性。
常见的培养基包括固体培养基和液体培养基。
固体培养基使用琼脂糖等寒温糖作为凝固剂，制成平板或斜面培养基。
液体培养基常用于大规模繁殖细菌。
接种细菌是培养细菌的第二步。
接种细菌的方法包括无菌传递和接种环。
无菌传递是将细菌样品通过分离技术转移到无菌培养基上。
接种环则是使用采样环或细菌刷将细菌样品轻轻划过培养基表面。
细菌的培养可分为无氧培养和有氧培养。
无氧培养是将细菌培养在不含氧气的环境中，通常使用封闭的试管或培养皿。
有氧培养则是将细菌培养在含氧气的环境中，利用培养皿上开放的表面以及摇床或微孔膜供氧。
在培养过程中，细菌可能会被其他微生物污染，因此为了保持纯度，常需要进行单菌分离。
分离纯种细菌的方法有分离斑法和传代分离法。
分离斑法是通过制作稀释系列将细菌稀释至单菌状态，然后均匀涂抹在培养基表面，培养后形成单独的细菌群落。
传代分离法则是通过多次传代来分离并繁殖纯种细菌。
细菌培养的环境因素是培养成功的关键。
温度是最基本的要素之一，根据不同的细菌，选择适当的生长温度可以促进细菌生长。
光照也可能是细菌培养的关键，一些细菌对光照特别敏感。
pH值也是影响细菌生长的重要因素，不同细菌对pH的要求不同。
此外，也需要注意培养基的氧气含量、盐度以及营养物质的浓度等因素。
总结起来，培养细菌的一般方法包括选择适当的培养基、接种细菌、有氧/无氧培养以及纯种分离等步骤。
细菌培养的环境因素也需要根据实验需求进行调整。
通过良好的细菌培养技术，可以繁殖出高纯度和大量的细菌，为细菌学研究提供有效的实验手段。
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（三）平板划线分离法
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制备土壤稀释液
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倾注平板
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培养
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挑菌落
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接种和分离工具
1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接
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3. 培养与移植 待平板完全冷凝后，将平板倒置37℃恒温箱中培养
24～48小时，检查分离结果。将培养后长出的单个菌落 分别挑取接种到牛肉膏蛋白胨培养基的斜面上，然后置 于37℃恒温箱中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单 纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物， 若有其它杂菌混杂，就可再一次进行分离、纯化，直至 获得纯培养。
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六、作 业 1. 简述无菌操作过程中的注意点。 2. 拟出从土壤中分离细菌的主要实验步骤。 3. 如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？ 4. 培养时为什么要将培养皿倒置培养？
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纯化（平板划线法） 倒平板——划线——培养——挑菌落——纯种（纯培养）
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平板划线分离的方法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
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五、微生物实验技术操作规范示例 （一）斜面接种无菌操作技术 （二）倒平板及平板划线接种
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2. 平板制作 将无菌培养皿编上10-3、10-4、10-5号码，每一号码设
三个重复，用1ml无菌吸管按无菌操作要求吸10-5稀释液 各1ml，分别放入编号10-5的三个培养皿中。同法吸取10-5 稀释液各1ml，分别放入编号10-4的三个培养皿中。再吸 取10-3稀释液各1ml，分别放入编号10-3的三个培w1养皿中。 然后在9个培养皿中分别倒入15ml已融化并且冷却至45℃ 左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，加盖后轻轻摇动培养 皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝固后即成 平板，整个操作过程应严格按照无菌操作。
• 一、视频演示 • 二、取自己做的培养皿，观察，并作图 • 三、挑取菌落，进行革兰氏染色，初步判别革兰
氏阴性或阳性菌 • 四、将自己的培养皿、试管清洗干净，放入抽屉 • 五、作业：从土壤中分离细菌的主要实验步骤。
三、实验试剂与器材 ① 土壤样品（环境样品） ② 牛肉膏蛋白胨培养基； ③ 无菌试管、无菌三角瓶、无菌玻
璃涂棒、无菌吸管、接种环、无 菌培养皿； ④ 超净工作台
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四、实验步骤 （一） 稀释混合平板法
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1. 土壤稀释液的制备
① 称取土样10g，放入盛90ml无菌水三角瓶中，振荡15～20
大家好
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实验五 细菌的分离、接种 和培养
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一．目的要求 二．实验原理 三．实验材料 四．实验步骤 五．操作规范示例 六．作 业
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一、目的要求
掌握从环境（土壤、水体、活性污泥等）中分离和纯化 微生物的方法和原理；
倒平板； 细菌纯种分离：稀释混合平板分离法、稀释涂布平板
分离法和平板划线法； 接种技术； 无菌操作技术；
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二、实验原理
在自然界中，不同种类的微生物绝大多数都是混杂生活在一 起的，为了生产和科学研究的需要，当我们希望获得某一种微生 物时，就必须从混杂的微生物类群中分离出它，以得到只含有这 一种微生物的纯培养物，这种获得纯培养物的方法称为微生物的 分离与纯化。
分钟，使微生物细胞分散，静置约20～30秒，即成10-1的土壤 悬液。 ② 另取装有9ml无菌水的试管，编号为10-2、10-3、10-4、10-5、 10-6，用无菌吸管吸取10-1土壤悬液l ml，加入编号10-2的无菌 试管中，吹吸三次，使之混合均匀，即成10-2的土壤稀释液。 再用另一支吸管吸取10-2试管中的土壤稀释液1ml，加入编号 10-3的无菌试管中，轻轻摇动，使之混合均匀，即成10-3的土 壤稀释液，一定要每次更换一支无菌吸管（连续稀释）。同 法依次分别稀释成10-4、10-5和10-6等一系列稀释度菌悬液。
种锄 8.小解剖刀
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移接斜面
常用的接种方法 划线接种 点接种 穿刺接种 涂布接种 液体接种 注射接种
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斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞
为了获得纯种的微生物，一般根据该微生物营养或培养特点 (微生物对营养、酸碱度、氧等条件)，或对某种抑制剂的耐受性不 同，或对某种环境条件要求不同，从而制作或设置一些选择性培 养基，或选择性培养条件，再用稀释涂布平板法或稀释混合平板 法或划线法分离，纯化该微生物，直至得到该纯种菌株。
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（一）斜面接种无菌操作技术
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(二）倒平板及平板划线接种
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（三）平板划线接种：
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（二）稀释涂布平板法
此法与稀释混合平板法基本相同，无菌操作也一样， 所不同的是先将牛肉膏蛋白胨培养基融化，在火焰旁注入 培养皿，摇匀后制成平板，然后用三支1ml无菌吸管分别 由10-4、10-5、10-6三管土壤稀释液中各吸取0.2ml对号放入 已写好稀释度的平板中，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻 轻地涂布均匀，然后分别倒置于37℃温箱中培养后，再挑 取单个菌落，直至获得纯培养。