大肠杆菌及沙门氏菌的微生物检查

青岛农业大学实验论文

题目：大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查姓名：

学院：动物科技学院

专业：动物科学

班级：

学号：

指导教师：任慧英

2014年 4 月 8 日

大肠杆菌和沙门氏菌的微生物检查

摘要：

大肠杆菌是肠杆菌科中埃希氏菌属的代表种。大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特性，如形态、染色特性等。但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。

关键词：生化特性、埃希氏菌、共同特性、鉴别诊断

引言：

根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌菌株分为不同的血清型。沙门氏菌属是由一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对人和多种动物均有致病性，对动物能致多种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。

1.材料与方法

1.1材料

菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液。

增菌液：亚硒酸盐亮绿增菌液、四硒酸钠增菌液。

普通培养基：肉汤、普通琼脂、

沙门试液诊断学清：A~E群多价O血清及单半固体培养基。

鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。

生化培养基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。

1.1.2 试剂

生化试剂：MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原剂等、革兰氏染液。

1.1.3器材

显微镜、吸管等。

1.2方法

1.2.1 直接分离培养：将A菌种与B菌种的混合菌液用常规划线方法，接种麦康凯琼脂平板和SS琼脂平板各一个，置37℃温箱内培养24h后取出，观察每种平板上两种菌的生长情况。

形态观察：以无菌接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板上新鲜培养的A菌种和B菌种的单个菌落，在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色，镜检。观察两种菌的形态、大小与排列方式，并作比较。这两种菌都是革兰氏阴性、两端钝圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不明显。

培养特性观察：将A菌种和B菌种的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。三糖铁琼脂接种时，先涂布斜面，后穿刺底层。置37℃温箱内培养24h后，取出观察两种细菌的培养特性并比较。

生化试验：生化试验前，须对菌种进行纯度检查，以保证不污染杂菌。检查方法同一般培养物的制片、染色、镜检。镜检时要适当多看几个视野，每个视野中细菌形态与染色特性均须符合该菌种的特性。凡污染杂菌者，此菌种不可使用。

糖发酵管接种：每种菌纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、卫矛醇微量生化反应管，每种糖一管，穿刺接种。

蛋白胨水接种：每种菌纯培养物接种一管，培养后作吲哚试验。

葡萄糖蛋白胨水接种：每种菌纯培养物接种两管，培养后作MR试验，另一管作VP试验。

尿素琼脂接种：每种菌纯培养物接种一管，接种量要大。

枸橼酸琼脂接种：每种菌纯培养物接种一管，接种量要少。

醋酸铅琼脂接种：每种菌纯培养物接种一管，接种时应靠近管壁穿刺，以便于观察结果。

半固体琼脂接种：每种菌纯培养物各穿刺接种一管，穿刺线应在培养基中央，一直刺到管底，拔出穿刺针时应顺原穿刺线取出，切不可左右滑动，以免影响观察结果。

1.2.5 生化试验

糖酵解试验：取经2~3d培养后的两种细菌的糖发酵管一一观察，凡培养基变成黄色者，表示该菌发酵此糖产酸（以+表示）；凡培养基变黄并含气泡者，表示该菌发酵此糖产酸产气（以⊕表示）；凡培养基不变色者，表示该菌不发酵此糖（以-表示）。

MR试验：取一支经2~3d培养的葡萄糖蛋白胨水培养管，加入MR试剂数滴（5滴左右），凡液体呈红色者为阳性反应（+），

呈黄色者为阴性反应（—），橙黄色者为可以反应（±） VP试验：取另一只葡萄糖蛋白胨水培养管，先加入VP试剂甲液（6%甲萘酚酒精溶液）3mL，再加VP试剂乙液（40%KOH溶液）1mL，充分摇匀后静置于试管架上，在数分钟内出现红色者为阳性反应，不出现红色者应放在37℃继续观察1~2h，仍然不变色者判为阴性。

吲哚试验：取蛋白胨水培养管先加乙醚少量，塞紧棉塞摇震试管，使乙醚与培养液充分混合，静置片刻，使乙醚浮于液面上层时，沿管壁加入吲哚试剂2~3滴。凡在乙醚层内出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者为阴性反应。

枸橼酸盐利用试验：观察经2~3d培养的枸橼酸盐琼脂管是否有细菌生长，并观察其颜色变化。凡有细菌生长，培养基变为天蓝色者，为该菌利用枸橼酸盐，否则为阴性反应。

硫化氢试验：观察经2~3h培养的醋酸铅琼脂管，凡沿穿刺线或其周围出现黑色沉淀者，为硫化氢阳性反应，无黑色者为阴性反应。

3.1 结果讨论

大肠杆菌的生长表现在普通琼脂上形成圆形、光滑、湿润、半透明。而在麦康凯琼脂上形成红褐色菌落。沙门氏菌在普通琼脂上生长不良，而在麦康凯琼脂上形成灰白色菌落。

3.2 注意事项

同一菌种不同血清型的菌株，生化反应结果可能不一致。

利用多价O血清及单因子血清进行血清学诊断也适用于其他细菌。

病原菌株的操作尤其要注意操作的严格性，防止病原的散播。