痤疮丙酸杆菌的培养、鉴定及保存SOP文件

痤疮丙酸杆菌的培养、鉴定及保存SOP

1取材

用75%乙醇消毒面部皮损处，然后用无菌针挑出粉刺内容物，用无菌盐水浸润无菌拭子然后蘸取粉刺内容物，及时送检。

如不能及时送检，可以把拭子放入厌氧肉汤采样管中暂时保存,务必在30分钟内送检。

2 接种及培养

将标本接种三个血琼脂平板，三区划线后，以保证长出单个菌落。分别放置于有氧、无氧和含5%-10%二氧化碳环境中培养。需要注意接种完毕，应立即将平皿放至厌氧袋内，打开厌氧产气袋，将它和化学指示剂（亚甲基美兰或刃天青）一起置于厌氧袋内，赶走袋内空气，用2个塑料夹子密闭，置于35°C普通孵育培养。

3标本涂片

接种的同时，对标本做直接涂片革兰染色检查（通常拭子上的剩余标本是足够用来涂片的）涂片检查可看出有无细菌，一般痤疮丙酸杆菌为革兰阳性杆菌，微弯，呈棒状，一端钝圆．另一端尖细。无芽胞，无荚膜，无鞭毛。

4培养特性

当厌氧平板上有细菌生长时，为了确定是否为厌氧菌，必须做耐氧试验。从每个琼脂平板上挑取4-5个性状不同的菌落，每个菌落可分别转种2块需氧血琼脂平板和1块厌氧血琼脂（每个琼脂平板可划4-6区，每区种一个可疑菌落），然后将平板分别置在需氧、二氧化碳和厌氧环境中培养。经适当孵育后，从厌氧袋里取出所有平板，1次仅取空1个厌氧袋以减少平皿不必要的暴露，用放大镜检查平板上的细菌生长情况。将观察到的菌落类型记录下来。

耐氧试验及结果判读：如果厌氧培养生长物在厌氧环境和大气环境中均生长，说明该被检厌氧培养生长物为兼性厌氧菌；如果被检厌氧培养生长物在厌氧环境生长，而在大气环境中未生长，说明该被检厌氧培养生长物为专性厌氧菌。

痤疮丙酸杆菌为专性厌氧或微需氧，吐温80能刺激生长。在厌氧血琼脂平板上培养48h，形成较小、圆形、白或灰白色、不透明、光滑。不溶血的菌落。经过数次转种后，可变为兼性厌氧菌。

5生化反应将厌氧平板上的可疑菌落做生化试验，痤疮丙酸杆菌可以发酵葡萄糖产丙酸，不发酵乳糖、蔗糖，麦芽糖和鼠李糖；液化明胶，胆汁七叶苷和硝酸盐还原试验阴。

6仪器鉴定

应用全自动细菌鉴定仪VITEK MS （VITEK 质谱仪）进行鉴定，判定是否为痤疮丙酸杆菌。7临床意义

痤疮丙酸杆菌是皮肤上的优势菌群，栖居于毛囊皮脂腺内，可从人的鼻咽、口腔、肠道和泌尿道中分离。此外，该菌在植入修复物或器械引起的感染巾有重要作用，对原有心瓣膜损伤者可引起心内膜炎。

8菌种保存

分离、纯化并鉴定正确的菌株保存于装有1ml滚珠细菌保存管内，置于-80℃冰箱保存。