植物多倍体的诱发和鉴定

可编辑ppt
11
2 讨论： ① 选择合适的材料是实验成功的首要因素， 请问该实验选材时注意什么问题？ ② 酶解时酶液的组成及浓度如何确定？ ③ 研究原生质体的意义是什么？
可编辑ppt
12
药品：蒸馏水、卡诺氏固定液、45%醋酸、秋 水仙素、改良苯酚品红染液等。
实验步骤：
1 培养根尖：将大蒜瓣放在盛有清水的培养皿
中，让根部接触水，在20~25℃光照下培养，待根 尖长到0.5~1cm时备用。
可编辑ppt
3
2 多倍体诱导：将水换成0.1%的秋水仙素溶液， 在阴暗处培养2天左右。
3 固定：11：30左右将剪取根尖1~2cm冲洗后 转移至卡诺氏固定液中，室温下处理3~8小时。
用高温、低温、射线照射、等物理化学方法人工诱
发多倍体植物。其中，以应用化学试剂更为有效和
方便，如秋水仙素、异生长素、富民农等，使用最
广泛、效果最好的是秋可水编辑仙ppt素。
2
实验材料：
洋葱、大蒜等。本实验选用大蒜。
实验用品：
用具：显微镜、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、 盖玻片、酒精灯、铅笔、吸水纸等。
和果胶酶分离原生质体可。编辑ppt
7
实验材料：
菠菜、油菜等。
实验用品：
用具：显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、尼 龙过滤网、离心管、剪刀、镊子、吸水纸等。
药品：70%乙醇、甘露醇、CPW缓冲液、纤维素 酶、果胶酶、20%蔗糖溶液等。
实验步骤：
1 选取叶片：选取充分伸展的幼嫩叶片，自来 水清洗后，用吸水纸吸干水分。
请注意比较该实验结果与 有丝分裂实验结果有何不 同？
实验报告：
1 说明秋水仙素诱发多倍体的原理是什么？ 2 画出在显微镜下看到的多倍体细胞的图像；
3 了解诱发多倍体在育种方面的意义。
可编辑ppt
5
实验9 植物原生质体的分离 与纯化
可编辑ppt
6
实验目的：
1 学习植物原生质体的分离和纯化技术； 2 了解原生质体在细胞工程中的应用。
4 解离：将冲洗后的根尖放入1mol/L的盐酸中， 室温下处理10~15min。
5 染色：切取1~2mm的分生区，用改良苯酚品 红染液染色10~20min。
6 压片：盖上盖玻片，在酒精灯上烤片。然后 固定盖玻片，用铅笔垂直、用力敲击盖片几下，将 材料压成一层细胞。
可编辑ppt
4
8 镜检：先在低倍镜下找到细胞，再换成高倍 镜仔细观察。
可编辑ppt
9
过滤后的混合液，500rpm,3min离心
吸出上清液，沉淀用2ml8%甘露醇盐溶液悬浮
在新的离心管中加入约8ml20%蔗糖盐溶液，将上 面的原生质体悬浮液用滴管轻轻地加载蔗糖溶液上
1000rpm，3min离心后，原生质体漂浮在蔗糖溶液 上，吸取原生质体于一新的离心管中
加入8ml8%甘露醇盐溶液，500rpm，3min离心后， 弃上清，用甘露醇盐溶液悬浮沉淀。
实验11 植物多倍体的诱发和 鉴定
可编辑ppt
1
实验目的：
1 了解人工诱导植物多倍体的原理、方法及其 在植物育种上的意义；
2 鉴定诱导后染色体数目的变化。
实验原理：
各种生物染色体的数目、形态和结构都是恒定
的。绝大多数的生物是二倍体，在植物界多倍体普
遍存在，已知被子植物中有1/3或更多的物种是多
倍体。除了自然界存在的多倍体物种以外，可以采
可编辑ppt
10
6 镜检：将原生质体悬浮液滴在载玻片上，轻 轻盖上盖玻片，先在低倍镜下找到原生质体，再换 成高倍镜仔细观察。
实验报告：
1 画出在显微镜下看到的原生质体的图像；
2 在整个实验操作过程中需要注意哪些问题？
结果与讨论：
1 预期结果：完整的原生质体形态上是圆球状 的，颜色鲜艳，富含细胞质。
实验原理：
原生质体是指去除了细胞壁的植物细胞。原生
质体是植物体细胞遗传学研究的一重要实验系统，
无论在理论方面还是在实践方面都有重要的研究价
值。去除细胞壁一般通过酶解的方法，植物细胞壁
是由纤维素、半纤维素、果胶质和少量的蛋白质和脂类组成的。由于这些不同物质的化 Nhomakorabea键，必须使
用混合酶液以降解细胞壁。通常混合使用纤维素酶
可编辑ppt
8
2 撕下表皮：用钟表镊子将叶子的下表皮撕掉， 注意不要损伤叶肉细胞。
3 酶解：在培养皿中放入混合酶液，将去掉下 表皮的叶片剪成小块，去下表皮面向下铺于酶液中， 充分接触酶液。25~30℃，酶解2~3小时。
4 过滤：酶解后的混合物用双层漏斗进行过滤， 只允许单细胞和原生质体通过。
5 纯化：用比原生质体比重大的20%蔗糖溶液， 离心后原生质体漂浮在溶液的表面。