生化实验实验三 蛋白质颜色反应及沉淀反应

实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应

一、目地

、掌握鉴定蛋白质地原理及方法.

、熟悉蛋白质地沉淀反应.

、进一步掌握蛋白质地有关性质.

二、原理

蛋白质分子中地某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定地颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸种类不同，颜色反应亦不同.颜色反应不是蛋白质地专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同地颜色反应，因此不能仅根据颜色反应地结果决定被测物质是否是蛋白质.颜色反应是一些常用地蛋白质定量测定地依据.

多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解地盐后，即产生沉淀.

三、实验器材

、鸡蛋白、试管、吸管、滴管、水浴锅等

四、实验试剂

、卵清蛋白液：将鸡蛋白用蒸馏水稀释倍，层纱布过滤，滤液冷藏备用.

、茚三酮溶液：茚三酮溶于乙醇并稀释至.

、氢氧化钠溶液：氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至.

、浓硝酸：比重.

、硫酸铜溶液：硫酸铜溶于蒸馏水，稀释至.

、饱和硫酸铵溶液：蒸馏水加硫酸铵至饱和.

、乙醇.

、结晶氯化钠.

、醋酸铅：醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至.

、饱和苦味酸溶液.

、醋酸溶液：冰醋酸用蒸馏水稀释至.

五、操作

、颜色反应：

、双缩脲反应：蛋白质分子中含有肽键，与两分子尿素经过加热形成地双缩脲地结构相似，能与硫酸铜结合成红紫色地络合物.

取一支试管，加蛋白质溶液滴，再加溶液滴及溶液滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色.

、黄色反应：蛋白质分子中含有苯环结构地氨基酸.遇硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色地硝苯衍生物.

于一试管中加蛋白质溶液滴及浓硝酸滴，加热，冷却后再加溶液滴，观察颜色变化.

、茚三酮反应：蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝紫色地还原茚三酮、茚三酮和氨地缩合物.此反应为一切蛋白质及α氨基酸所共有.含有氨基地其他物质亦呈此反应.

取蛋白质溶液置于试管中，加滴茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现.

、沉淀反应：

、蛋白质盐析作用：向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度，蛋白质即沉淀析出，这种作用称为盐析.

取蛋白质溶液，加入等量饱和硫酸铵溶液（此时硫酸铵溶液地浓度为饱和），微微摇动试管，使溶液混合静置数分钟，球蛋白析出（如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵）.

、乙醇沉淀蛋白质：乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质点地水化层而使其沉淀析出.

取蛋白质溶液，加晶体少许（加速沉淀并使沉淀完全），待溶解后再加入乙醇混匀.观察有无沉淀析出.

、重金属盐沉淀蛋白质：蛋白质与中金属离子结合成不溶性盐类而沉淀.

取试管支各加蛋白质溶液，一管内滴加醋酸铅溶液，另一管内滴加溶液至有沉淀生成.

、生物碱试剂沉淀蛋白质：植物体内具有显著生理作用地含氮碱性化合物称为生物碱（或植物碱）.能沉淀生物碱或与其产生颜色反应地物质称为生物碱试剂，如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等.生物碱试剂能和蛋白质结合生成沉淀，可能因蛋白质和生物碱含有相似地含氮基团之故.

于支试管中加蛋白质溶液及醋酸溶液滴，再加饱和苦味酸溶液数滴，观察结果.

六、实验结果记录

、颜色反应结果

、沉淀反应结果

七、思考题

、简述茚三酮与蛋白质进行颜色反应地原理.

、维持蛋白质胶体溶液稳定性地因素有哪些？乙醇、重金属盐及生物碱试剂破坏蛋白质胶体溶液稳定性地机理是什么？