9经典免疫学试验,沉淀反应
医学免疫学沉淀反应
医学免疫学沉淀反应在医学免疫学的广袤领域中，沉淀反应是一项具有重要意义的检测技术。
它如同一位默默耕耘的“侦探”，帮助我们揭示体内免疫反应的奥秘，为疾病的诊断和研究提供了有力的支持。
要理解沉淀反应，首先得明白什么是抗原和抗体。
抗原就像是一个个“目标嫌疑人”，它们可能是细菌、病毒的一部分，也可能是体内异常产生的蛋白质等。
而抗体则是免疫系统派出的“抓捕能手”，能够特异性地识别并结合抗原。
沉淀反应的发生，正是基于抗原和抗体的这种特异性结合。
当抗原和抗体在适当的条件下相遇，它们会形成肉眼可见的沉淀物，就好像是“嫌疑人”和“抓捕能手”相互纠缠在一起，形成了一个明显的“团伙”。
常见的沉淀反应有多种类型，其中之一是环状沉淀反应。
想象一下，在一个小玻璃管中，先将抗血清小心地铺在底部，然后再将含有抗原的溶液轻轻地叠加在上面。
由于抗原和抗体的比重不同，它们会形成一个清晰的界面。
如果存在对应的抗原，就会在界面处形成白色的沉淀环，就像是给这个“犯罪现场”圈出了关键的证据。
还有一种是絮状沉淀反应。
把抗原和抗体溶液混合在一起，如果它们相互匹配，就会逐渐形成肉眼可见的絮状沉淀物，如同天空中飘落的雪花，纷纷扬扬地聚集在一起。
免疫比浊法也是沉淀反应中的重要一员。
它利用抗原和抗体结合后形成的免疫复合物，引起溶液浊度的变化。
通过专门的仪器测量这种浊度的改变，可以定量地测定抗原或抗体的含量。
这就好比是给“嫌疑人”和“抓捕能手”的“纠缠程度”进行精确的测量和计算。
沉淀反应在医学实践中的应用十分广泛。
在临床诊断中，它可以帮助检测各种疾病相关的抗原或抗体。
比如，对于某些传染病，通过检测患者血清中的特异性抗体，就能判断是否感染了相应的病原体。
对于自身免疫性疾病，检测体内自身抗体的存在和水平，有助于明确诊断和评估病情。
在药物研发和质量控制方面，沉淀反应也发挥着重要作用。
新药的研发过程中，需要对药物的免疫原性进行评估，沉淀反应可以提供有关药物与免疫系统相互作用的重要信息。
免疫学和免疫学检验：沉淀反应.
免疫学和免疫学检验：沉淀反应沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反。
早在1897年Kraus就发现，细菌培养液与相应抗血清混合时可发生沉淀反应（precipetaiton）是可溶性抗原与相应抗体特异性结合所出现的反。
早在1897年Kraus就发现，细菌培养液与相应抗血清混合时可发生沉淀反应。
1905年Bechhold把抗体放在明胶中，将抗原加于其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行。
Oudin（1946）报告了试管免疫扩散技术，Mancini（1965）提出单向免疫扩散技术，使定性免疫试验向定量化发展。
另一方面，免疫浊度法的出现，使沉淀反应达到快速、微量、自动化的新阶段。
沉淀反应分两个阶段，第一阶段发生抗原抗体特异性结合，第二阶段形成可见的免疫复合物（参见第九章）。
经典的沉淀反应在第二阶段观察或测量沉淀线或沉淀环等来判定结果，称为终点法；而快速免疫浊度法则在第一阶段测定免疫复合物形成的速率，称为速率法。
现代免疫技术（如各种标记免疫技术）多是在沉淀反应的基础上建立起来的，因此沉淀反应是免疫学方法的核心技术。
第一节液体内沉淀试验一、絮状沉淀试验絮状沉淀试验为历史较久，又较有用的方法。
该法要点是：将抗原与抗体溶液混合在一起，在电解质存在下，抗原与抗体结合，形成絮状沉淀物。
这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响，因而产生了两种最适比例的基本测定方法。
（一）抗原稀释法抗原稀释法（Dean-Webb法）是将可溶性抗原作一系列稀释，与恒定浓度的抗血清等量混合，置室温或37℃反应后，产生的沉淀物随抗原的变化而不同。
表12-1系以牛血清白蛋白为例的实验结果。
表12-1Dean-Webb定量沉淀试验管号抗原抗体总沉淀量反应过剩物抗原沉淀量抗体沉淀量沉淀中Ab/Ag1 0.003 0.68 0.093 Ab 0.003 0.090 30.02 0.005 0.68 0.145 Ab 0.005 0.140 28.03 0.011 0.68 0.249 Ab 0.011 0.238 21.74 0.021 0.68 0.422 Ab 0.021 0.401 19.15 0.032 0.68 0.571 Ab 0.032 0.539 16.86 0.043 0.68 0.734 － 0.043 0.691 16.17 0.064 0.68 0.720 Ab －－－8 0.085 0.68 0.601 Ag －－－9 0.171 0.68 0.464 Ag －－－10 0.341 0.68 0.368 Ag －－－单位：mmol/L 从表12-1可以看出，1～5管为抗体过剩管，7～10管为抗原过剩管，唯第6管沉淀物最多，两者之比为16:1，即最适比。
沉淀反应名词解释免疫学
沉淀反应名词解释免疫学
嘿，咱说说免疫学里的沉淀反应是啥。
有一回啊，我去实验室找我一个学免疫的朋友玩。
他正在做实验，我就好奇地凑过去看。
他跟我说他在做沉淀反应的实验呢。
沉淀反应呢，简单来说就是在免疫学里一种能让两种东西结合然后产生沉淀的现象。
就好像两个小伙伴见面了，手拉手变成一个大东西，然后沉到下面去了。
比如说，朋友在实验里把一种抗体和一种抗原放在一起。
这抗体和抗原就像两个互相找的小伙伴，一见面就紧紧抱在一起，然后因为太重了就沉到试管底下去了。
这就是沉淀反应。
我看着那个试管，一开始啥也没有，过了一会儿就看到下面有一些沉淀物出现了。
朋友说这就是沉淀反应的结果。
所以啊，沉淀反应在免疫学里很重要呢，可以帮助我们检测一些疾病啥的。
下次你听到沉淀反应这个词，就可以想象两个小伙伴见面然后沉下去的画面啦。
沉淀反应临床免疫学和免疫检验
沉淀反应沉淀反应蛋白质、多糖、毒素等可溶性抗原与相应抗体在特定条件下特异性结合，出现的沉淀现象，称为沉淀反应。
沉淀反应的特点液体内沉淀试验凝胶内沉淀试验免疫电泳技术沉淀反应的特点差异凝集反应沉淀反应抗原性质颗粒性抗原可溶性抗原反应时间数分钟数小时反应产物凝集物沉淀物敏感性高低液体内沉淀试验受抗原抗体比例的影响非常明显，常用作测定抗原抗体的最适比例。
有抗原稀释法、抗体稀释法和棋盘滴定法。
免疫浊度测定应用抗原、抗体在液相中反应后形成的免疫复合物微粒对光线的干扰，利用仪器进行定量检测的一种方法。
在一定范围内，吸光度与免疫复合物的量呈正相关。
免疫浊度测定的影响因素1.抗原抗体比例当反应液中抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论。
2.抗体的质量要求：抗体的特异性强、效价高、亲和力强。
R型＞H型。
3.抗原抗体反应的溶液pH6.5～8.5，磷酸盐缓冲液。
4.增浊剂聚乙二醇（PEG）、吐温-20，可消除抗原或抗体分子周围的电子云和水化层，促进抗原、抗体分子靠近，结合形成大分子复合物。
免疫比浊方法分类透射和散射免疫比浊法免疫胶乳比浊法凝胶内沉淀试验单向免疫扩散试验Mancini曲线：适用大分子抗原和长时间扩散（＞48小时）的结果；公式：c／d2＝k。
Fahey曲线：适用于小分子抗原和较短时间（＜24h）扩散的结果处理，用半对数纸画线。
公式：logc／d＝k。
双向免疫扩散试验免疫电泳技术免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。
1.加快了反应速度2.集中了扩散方向3.分开了不同的蛋白火箭免疫电泳免疫电泳免疫固定电泳免疫固定电流模式图沉淀反应在医学检验中的应用方法评价应用经典沉淀反应操作繁琐、敏感度低、精密度差、时间长和难以自动化逐渐减少【习题】下列哪项不是沉淀反应的特点A.其特性与经典抗原抗体反应相同B.抗原是可溶性抗原C.反应可分为两个阶段D.抗体是McAbE.需一定电解质『正确答案』D『答案解析』沉淀反应抗体不是单克隆抗体。
医学免疫学沉淀反应
医学免疫学沉淀反应在医学免疫学的领域中，沉淀反应是一项十分重要的实验技术。
它不仅有助于我们对疾病的诊断和监测，还在科研领域发挥着关键作用。
沉淀反应的原理其实并不复杂。
简单来说，就是当可溶性抗原与相应抗体在特定条件下结合时，会形成肉眼可见的沉淀物。
这一过程基于抗原与抗体的特异性结合，只有当两者的结构和电荷相互匹配时，才能发生有效的反应。
沉淀反应的类型多种多样。
其中，环状沉淀反应是比较经典的一种。
在这种反应中，将抗原溶液小心地叠加在抗体溶液之上，在两者的界面处，如果存在对应的抗原抗体，就会形成白色的沉淀环。
这种方法虽然简单直观，但灵敏度相对较低，如今在实际应用中已经不那么常见。
另一种常见的沉淀反应是絮状沉淀反应。
在这个实验中，抗原和抗体溶液混合后，会出现肉眼可见的絮状沉淀物。
然而，这种反应的结果判断往往比较主观，容易受到多种因素的影响，比如溶液的浓度、温度以及混合的方式等。
相较于上述两种方法，免疫比浊法在现代医学中的应用更为广泛。
它通过测量溶液中抗原抗体复合物形成后导致的浊度变化，来定量分析抗原或抗体的含量。
这种方法具有快速、准确、自动化程度高等优点，尤其适用于临床实验室对大量样本的检测。
在实际应用中，沉淀反应有着广泛的用途。
比如在疾病诊断方面，当我们怀疑一个人感染了某种病原体时，可以通过检测患者血清中针对该病原体的特异性抗体来辅助诊断。
如果检测结果显示存在相应的沉淀反应，就提示患者可能已经感染了该病原体。
再比如，在血液制品的质量检测中，沉淀反应可以帮助检测其中是否存在杂质或异常蛋白。
这对于保障血液制品的安全性和有效性至关重要。
不仅如此，沉淀反应在自身免疫性疾病的诊断中也发挥着重要作用。
自身免疫性疾病患者体内常常会产生针对自身组织或细胞的抗体，通过沉淀反应检测这些抗体的存在，可以为疾病的诊断提供有力的依据。
然而，沉淀反应也并非完美无缺。
它可能会受到一些因素的干扰。
比如，标本的采集和处理不当可能会影响抗原或抗体的活性，从而导致假阴性或假阳性结果。
临床免疫学检验课件第6章沉淀反应2
加入抗血清
各管抗体量不变
Ab
振摇 混匀、37℃孵育
Ag
沉淀量不同
轻摇
出现沉淀量最多的管为最适比例管。
表6-1 最适比方阵测定法
抗原稀释度
抗体 稀释度 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 对照
1/5
+
++ +++ +++ ++
+
±
—
1/10
+
++ ++ ++ +++ ++
•基本原理：电泳技术+沉淀反应 •优点：加快沉淀反应的速度；
提高灵敏度。 •应用： 主要用于细微成分的分析。
•电泳原理：带电质点在电场中向带有异相电荷的 电极移动。
•在常规血清蛋白电泳，一般选择可使所有蛋白质 分子均带负电荷的碱性缓冲液。
•电场中的作用力（碱性条件下） 电泳力：蛋白质由阴极向阳极移动。 电渗力：水分子向阴极移动。 若电泳力>电渗力, 向阳极移动(大多数Ag) 电渗力>电泳力, 向阴极移动（Ａb）。
• 对待检蛋白质样品定量测定的条件： 1、具有单价特异性抗血清 2、已知含量标准品（绘制标准曲线用） 3、待检含量>1.25ug/ml。（敏感度稍低）
• 单扩试验的应用范围： 常用于IgＧ、IgＡ、IgM、C3、C4等测定， 简易的抗原定量技术。
• 双环现象
抗原性相同、扩 散率不同的两个 组分：α重链病 人血清中的α重 链与正常IgA
抗体相遇，在界面处形 •临床意义：
成清晰的乳白色沉淀环。 鉴定血迹、
临床免疫学和免疫检验第六章沉淀反应讲义
第六章沉淀反应沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在特定条件下发生特异性结合时出现的沉淀现象。
第一节沉淀反应的特点沉淀反应中的抗原多为蛋白质、多糖、血清、毒素等可溶性物质。
沉淀反应分两个阶段，第一阶段为抗原抗体发生特异性结合，几秒到几十秒即可完成，出现可溶性小的复合物，肉眼不可见; 第二阶段为形成可见的免疫复合物，约需几十分钟到数小时才能完成，如沉淀线、沉淀环。
第二节液体内沉淀试验一、絮状沉淀试验抗原抗体溶液在电解质的存在下结合，形成絮状沉淀物，这种絮状沉淀 因此常用来作为测定抗原抗体反应最适比例的方法，常见类型有:抗原进行一系列稀释与恒定浓度抗血清反应。
抗体进行一系列稀释与恒定浓度抗原反应。
方阵滴定法即棋盘滴定法。
二、免疫浊度测定属于液体内沉淀反应，其特点是将现代光学测量仪器与自动化检测系统相结合应用于沉淀反应，可进 行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测。
（一）免疫比浊测定的影响因素1. 抗原抗体的比例 是浊度形成的关键因素。
当抗原过量时，形成的IC 分子小，而且会发生再解离，使浊度反而下降，光散射亦减少，这就是高剂量钩状效应。
当抗体过量时，IC 的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是 经典的海德堡曲线理论。
在反应体系中保持抗体适当过量，如形成抗原过量则造成测定的准确性降低。
2. 抗体的质量 对免疫比浊测定法的抗体要求（1） 特异性强 （2） 效价高（3） 亲和力强：则抗体的活性高，不仅可以加快抗原抗体反应的速度，而且形成的IC 较牢固，不易 发生解离。
在速率比浊法中尤为重要。
（4） R 型和H 型抗体：根据抗血清来源的动物种类不同，分为R 型抗体和H 型抗体。
R 型抗体是指以家兔为代表的小型动物 被注射抗原免疫后制备的抗血清。
这类抗血清的特点是 亲和力较强，抗原抗体结合后不易发生解离。
H 型抗体是指以 马为代表的大型动物 注射抗原后制备的抗血清, 这类抗血清的 亲和力弱，抗原抗体结合 后极易解离。
医学免疫学沉淀反应
医学免疫学沉淀反应在医学免疫学的广袤领域中，沉淀反应是一项重要的实验技术，它在疾病的诊断、免疫机制的研究以及生物制品的质量控制等方面发挥着不可或缺的作用。
让我们先来了解一下什么是沉淀反应。
简单来说，沉淀反应是指在溶液中，可溶性抗原与相应抗体特异性结合，形成肉眼可见的沉淀物的现象。
这种反应基于抗原与抗体的结合特性，当它们相遇并结合达到一定比例时，就会形成不溶性的复合物，从而沉淀下来。
沉淀反应有着多种类型，其中比较常见的有环状沉淀反应、絮状沉淀反应以及免疫比浊法等。
环状沉淀反应是一种较为古老但直观的方法。
在这种反应中，将抗原溶液小心地叠加在抗体溶液上，在两液的交界处，如果存在对应的抗原抗体反应，就会形成白色的沉淀环。
这个方法虽然操作简单，但相对来说灵敏度不高，如今在实际应用中已经较少单独使用。
絮状沉淀反应则是将抗原与抗体在试管中混合，通过观察溶液中出现的絮状沉淀来判断反应的结果。
这种方法比环状沉淀反应的灵敏度有所提高，但仍然存在一定的局限性。
而免疫比浊法则是一种更为精确和灵敏的定量检测方法。
它利用抗原抗体结合后形成的复合物会导致溶液浊度的变化，通过仪器测量浊度的变化来确定抗原或抗体的含量。
这种方法在临床检测中应用广泛，比如对血清中免疫球蛋白、补体等成分的定量测定。
那么，沉淀反应在医学领域中具体有哪些应用呢？首先，在疾病诊断方面，沉淀反应具有重要的价值。
例如，对于某些传染病的诊断，通过检测患者血清中特定病原体的抗体，可以判断患者是否曾经感染过该病原体。
比如，梅毒的诊断就可以利用沉淀反应检测患者血清中的梅毒螺旋体抗体。
其次，在自身免疫性疾病的诊断中，沉淀反应也发挥着关键作用。
像系统性红斑狼疮等疾病，通过检测患者血清中的自身抗体，如抗核抗体等，可以为疾病的诊断提供重要依据。
此外，沉淀反应还用于监测疾病的进展和治疗效果。
例如，在肿瘤治疗中，通过定期检测患者血清中肿瘤标志物的含量变化，可以评估治疗方案的有效性。
临床免疫学检验-第五章凝集反应和沉淀反应
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术
免疫学检验技术—沉淀反应
教学目标
1.掌握：沉淀反应的概念及特点；免疫电泳技术的种类和原理（重点）。
2.熟悉：凝胶内沉淀试验的种类及原理，免疫电泳的应用（重难点）。
3.了解：液相沉淀试验的原理；各种沉淀试验的技术要点和影响因素；沉淀
反应的临床应用。
能力目标
掌握：凝胶内沉淀试验和免疫电泳技术的操作方法
熟悉：双扩和免疫电泳技术的结果判读和临床应用
一、对流免疫电泳技术
• 无沉淀线出现表明无相应的抗 原。
• 沉淀线位于抗原抗体孔中间， 说明两者比例较适合。
• 沉淀线偏向抗原孔一方，表示 抗体浓度＞抗原，反之，则是 抗体浓度＜抗原浓度。
二、火箭免疫电泳技术
单向免疫扩散和电泳的定量检测技术。固定抗体不移动，
抗原向正极泳动，随着抗原量减少，基底区越来越窄，形成
4.免疫电泳 扩散时间长，影响因素多，结果较难分析。
5.免疫固定电泳 分辨力强，敏感度高，结果易于分析，现 常用于鉴定迁移率相近的蛋白和M蛋白，免疫球蛋白轻链，尿液、 脑脊液等微量蛋白，游离轻链，补体裂解产物等，临床最常用于 M蛋白的鉴定与分型，并已列入临床实验室的常规检测工作。
沉淀反应在医学检验中的应用
的沉淀线逐渐变窄，形成一个如火箭的沉淀峰，峰的高度与
抗原量呈正相关。
火箭免疫电泳图
+
①②③④为标准抗原；⑤⑥为标本
-
三、免疫电泳技术
四、免疫固定电泳技术
SP G A M κ λ SP G A M κ λ SP G A M κ λ
沉淀反应的临床应用
沉淀试验的临床应用
1.经典的沉淀反应 均可用于抗原抗体性质、效价、纯度及相对 分子质量和浓度的分析。
本法稳定、简便、无需仪器设备。重复性和线性 均可信，但灵敏度稍差、耗时长、影响因素多。
凝集反应、沉淀反应和酶联免疫吸附试验的原理
凝集反应、沉淀反应和酶联免疫吸附试验的原理凝集反应、沉淀反应和酶联免疫吸附试验都是免疫学中常用的检测方法，它们的原理如下：
1. 凝集反应：凝集反应是指抗原和抗体在体外结合后，形成肉眼可见的凝集物的现象。
它的原理是抗原和抗体之间的特异性结合，当抗原和抗体结合后，它们会形成一个大分子复合物，这个复合物会聚集在一起，形成可见的凝集物。
2. 沉淀反应：沉淀反应是指抗原和抗体在体外结合后，形成肉眼可见的沉淀的现象。
它的原理是抗原和抗体之间的特异性结合，当抗原和抗体结合后，它们会形成一个大分子复合物，这个复合物会沉淀下来，形成可见的沉淀。
3. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA 是一种常用的免疫检测方法，它的原理是利用酶标记的抗体或抗原与待测样本中的抗原或抗体结合，形成复合物，然后通过酶催化底物产生颜色反应，从而检测待测样本中抗原或抗体的存在。
这些检测方法的原理都是基于抗原和抗体之间的特异性结合，通过检测这种结合反应的产物来判断待测样本中是否存在抗原或抗体。
经典的免疫学反应
免疫电泳技术
免疫电泳技术是将琼脂电泳与免疫扩散相结合 的一种常用的免疫学实验方法，此项技术由于 具有抗原抗体反应的高度特异性，电泳分离技 术的快速，灵敏和高分辨力，以及实验设备和 操作简便等优点，至今仍作为免疫学的一种基 本技术，广泛用于科学研究和临床实验诊断。
数十年来，根据不同的实验目的和要求，在经 典的免疫电泳技术基础上，又衍生出对流免疫 电泳、火箭电泳、交叉免疫电泳及免疫固定电 极等许多新技术和新方法出现。
此时如在上述反应系统中．加入绵羊红细胞(抗 原)和溶血素(抗体)系统，即可与游离的补体结 合而出现溶血现象。
因此，绵羊红细胞和溶血素是CFT的指示系统 (亦称溶血系统)。试验结果根据溶血现象是否 产生，即可得知检测系统中有无相应的抗原或 抗体存在。
中和反应
中和试验是免疫学和病毒学中常用的一种抗原抗 体反应试验方法，用以测定抗体中和病毒感染性 或细菌毒素的生物学效应。
凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体又称中 和抗体。能与细菌外毒素结合，中和其毒性作用 的抗体称为抗毒素。
中和试验可以在敏感动物体内(包括鸡胚)，体 外组织(细胞)培养或试管内进行。观察特异性 抗体能否保护易感的试验动物死亡；能否抑制 病毒的细胞病变效应或中和毒素对细胞的毒作 用；以及测定抗体的其他生物学效应。
凝集反应
细菌和红细胞等颗粒性抗原，当与相应抗体特异 结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚 集，出现肉眼可见的凝集现象．称为凝集反应。
早在1896年，Widal就利用伤寒病人血清与伤寒杆 菌发生特异性凝集的现象成功地诊断伤寒病。
1900年Landsteiner在特异血凝现象的基础上发现 了人类ABO血型，于1930年获得诺贝尔生理学和 医学奖。
免疫电泳
免疫凝聚反应和免疫沉淀反应的异同
免疫凝聚反应和免疫沉淀反应的异同免疫凝聚反应和免疫沉淀反应是免疫学中常见的两种实验方法，用于检测和分析抗原与抗体之间的相互作用。
虽然它们有相似的目的，但在实验原理和操作过程上存在一些不同之处。
免疫凝聚反应是通过观察抗原与抗体的可见凝聚来判断它们之间的相互作用。
在该实验中，抗原和抗体在一定条件下混合，如在适宜的缓冲液中，在适当的温度和时间下反应。
如果抗原与抗体之间存在特异性结合，它们将发生凝聚并形成可见的沉淀物。
这种凝聚反应可以用肉眼或显微镜观察，并通过比较试验组和对照组来判断是否存在特异性反应。
与免疫凝聚反应不同，免疫沉淀反应是通过观察抗原与抗体形成的不可见复合物的沉淀来判断它们之间的相互作用。
在该实验中，抗原和抗体在一定条件下混合，如在适宜的缓冲液中，在适当的温度和时间下反应。
如果抗原与抗体之间存在特异性结合，它们将形成不可见的复合物。
为了让这些复合物沉淀下来，通常需要添加一种沉淀剂，如聚乙二醇。
沉淀形成后，可以通过离心分离沉淀物，并使用其他方法进行进一步的检测和分析。
免疫凝聚反应和免疫沉淀反应在实验原理上的区别导致了它们在操作过程中的一些不同。
在免疫凝聚反应中，通常将已知的抗原溶液与未知的抗体溶液混合，然后观察是否发生凝聚。
而在免疫沉淀反应中，通常将已知的抗体溶液与未知的抗原溶液混合，然后观察是否形成沉淀。
此外，免疫凝聚反应通常是用于初步筛选抗原与抗体的特异性结合，而免疫沉淀反应通常是用于进一步确认和分析抗原与抗体的相互作用。
免疫凝聚反应和免疫沉淀反应在结果的解读上也有所不同。
在免疫凝聚反应中，凝聚程度越明显，说明抗原与抗体之间的特异性结合越强。
而在免疫沉淀反应中，沉淀物的形成越明显，说明抗原与抗体之间的特异性结合越强。
免疫凝聚反应和免疫沉淀反应是两种常见的免疫学实验方法，用于检测和分析抗原与抗体之间的相互作用。
它们在实验原理和操作过程上存在一些不同，但都具有检测和分析特异性结合的能力。
研究人员可以根据实验目的和需要选择适合的方法，以获得准确的实验结果。
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周围出现沉淀环。
人民卫生出版社
(三) 方法评价
单向琼脂扩散试验是一种稳定、简便、 毋需特殊设备，一般实验室均可使用的 常规方法，试验的重复性和线性均好。
敏感度为1.25mg/L。
人民卫生出版社
(四) 影响因素
： 絮状沉淀 环状沉淀 免疫浊度沉淀
人民卫生出版社
一、絮状沉淀试验 絮状沉淀试验是一项经典实验技术。曾用 于测定梅毒抗体的Kahn试验是絮状沉淀的代 表试 验 ，现 今 已被 更 简便 而 敏感 的 USR 或 RPR方法替代。
人民卫生出版社
(一) 原理 抗原溶液与相应抗体溶液混合，在电解质
存在的条件下，抗原与抗体结合出现可见的絮 状沉淀。絮状沉淀易受抗原与抗体比例的影响，
人民卫生出版社
1. 速率散射比浊法 (1) 原理：是一种抗原抗体结合动态测定法。 所谓速率是抗原抗体结合反应过程中，在单位 时间内两者结合的速度。速率法是测定最大反 应速率，即在抗原抗体反应达最高峰时，通常 为数十秒钟，测定其复合物形成的量。峰值的 高低在抗体过量情况下与抗原的量成正比。峰 值出现的时间与抗体的浓度及其亲和力直接相 关。不同抗原含量其速率峰值不同，通过微电 脑处理，求出抗原含量。
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(二) 操作步骤 1. 用毛细滴管吸取抗血清加于沉淀管(内径
约1.5~2mm)底部，避免产生气泡。 2. 将抗原溶液沿管壁缓缓叠加于抗血清液面
上，形成清晰的交界面。 3. 置沉淀管于室温下使其反应，1~5min内
在两界面间呈现乳白色沉淀环为阳性。 30min仍无沉淀环出现则为阴性。
人民卫生出版社
人民卫生出版社
3. 抗体稀释度
抗体浓度大，沉淀环小，则敏感度低；抗体浓度 小，沉淀环增大，不同浓度抗原间的差别较显著 ，敏感度高。但沉淀环过大，常造成边缘糊不清 ，致使测量误差也增大。因此要求在沉淀环清晰 的基础上加大稀释度以提高敏感度。下图为抗体 分别以1:25、1:50、1:75、1:100稀释，所形成
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二、环状沉淀试验
环状沉淀(ring precipitation)试验 是 由 Ascoli 于 1902 常简便的技 术了解待测血清内是否存在某种抗原 或抗体。
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(一) 原理 把抗原溶液小心地加于已含抗体溶液的细
试管液面上。当对应的抗原与抗体相遇 ，在界面处形成清晰的乳白色沉淀环。
度的抗体反应，出现沉淀物最多的管为抗 体最适比例管。 3. 方阵滴定法
抗原和抗体同时稀释，亦称棋盘 (checkerboard)滴定法，是前二法的结合， 可一次完成抗原和抗体的滴定并找出抗原、 抗体的最适比。
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• (三) 方法评价 絮状沉淀试验方法简单，设备要求低，敏感度 较低，受抗原抗体比例影响非常明显，目前多 用以测定抗原抗体反应的最适比。
琼脂板厚度增加，沉淀环面积相应缩小。
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二、双相琼脂扩散试验 (一) 原理
将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中 ，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与 抗体相遇，在比例合适时形成可见的白色沉淀线 。沉淀线的特征与抗原抗体的浓度、纯度和扩散
速率等有关。
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(二) 操作步骤 1. 融化琼脂，浇板 每张载玻片约4ml。 2.凝固，打孔 孔径3mm，孔间距3~5mm，孔型 有双孔型、三角孔型、双排孔型和梅花孔型。 3. 加样 在相对孔内加抗原或抗体。 4.孵育 使抗原抗体自由扩散，在两孔之间抗原 抗体相遇，在比例适时形成可见的沉淀线。沉淀 线的数目、形态和位置与抗原和抗体的纯度、浓 度和扩散速度有关。
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(三) 双相琼脂扩散试验的应用 1. 检测未知抗原或抗体
将已知的抗体或抗原与待检标本加入成对 孔中，根据沉淀线有无定性；根据沉淀线 的位置估计抗原或抗体的相对含量；根据 沉淀弧形状判断抗原或抗体的相对扩散速
率，见图 。
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沉淀线形状、位置与抗原抗体扩散率及浓度的关系
A：Ag、Ab浓度及扩散率近似；B ： Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＞ Ab ； C：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＜ Ab ；D： 扩散率近似，浓度Ag ＞ Ab ；
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(3) 方法评价：
检测不必等到抗原抗体反应达到平衡，大大 节约反应时间，每小时可检测数十份标本，
敏感度高，最小检出量达μg/L水平。
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2. 终点散射比浊法 (1) 原理：
让抗原抗体作用一定时间，使 其反应达到平衡后，测定其复合物的量。复 合物的浊度不再受时间的影响，但反应复合 物聚合产生絮状沉淀之前(大约反应数十分 钟)进行浊度测定。
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一、单相琼脂扩散试验 (一) 原理 将一定量的抗体混入琼脂凝胶中，使待测的抗原物 质在凝胶中自由扩散，与抗体结合形成沉淀环，沉 淀环的大小与抗原浓度呈正相关。
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(二) 操作步骤 1. 将抗体和0.9%琼脂糖50~56℃混合，即刻倾注成平
板。 2. 待凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入已稀释的抗原
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(一) 透射比浊法 1. 原理 抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复合物粒 子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，免疫复合 物量越多，透射光越少，即光线吸收越多，可用吸光 度表示。吸光度和复合物的量成正比，当抗体量固定 时，与待检抗原量成正比。用抗原标准品建立标准曲 线，可测出待检抗原含量。
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2. 操作步骤
1) 用稀释液将待测抗原和抗原标准品稀 释。 2) 将抗体致敏胶乳溶液和待测抗原、不 同浓度的抗原标准品反应一段时间，测吸 光度值。 3) 以抗原标准品量为横坐标，吸光度值 为纵坐标绘制标准曲线，查出待测抗原量。
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3. 方法评价
敏感度高，试剂稳定，因反应液中无PEG 沉淀剂的影响，个体IC对结果影响也小， 所以结果稳定、可靠，特异性好；不需特 殊仪器设备，一般分光光度计、自动化生
E：浓度Ag ＞ Ab，扩散率Ag ＞ Ab ；F：浓度Ag ＜ Ab，扩散率Ag ＜ Ab
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2. 抗原性质分析
利用三角孔型，将待检抗原和标准 抗原加入相邻两个孔中，与另一孔相对， 根据沉淀线形状分析待测抗原，见图 。
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(1) 沉淀线吻合：待检抗原与标准抗原完全相 同。
(2) 沉淀线相切：待检抗原中含有与标准抗原 相同的抗原，还含有另外的抗原与抗血清相 对应。
1. 抗原分子量 抗原分子量大，扩散慢，
沉淀环较小；抗原分子量小，扩散快， 沉淀环相对较大。要求待检血清和抗 原标准品在血清学上具有均一性，否 则可能出现结果偏高或偏低。
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2. 抗体种类 实验证明兔抗血清优于马、羊抗血
清，兔抗血清可测抗原0.1~1IU/ml，马抗 血清为1~10IU/ml，羊为0.4~4IU/ml，为提 高实验敏感度，应首选敏感度高的抗血清 。
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2. 操作步骤 (1) 用稀释缓冲液将待检样品和标准品按 规定稀释，取一定量加至测定管中。 (2) 加最适工作浓度(用方阵法预先滴定) 的抗体，孵育一定时间，测定吸光度(A) 值。 (3) 以不同浓度抗原含量为横轴，吸光度 为纵轴，绘标准曲线。从标准曲线可得待
检抗原量。
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由此可作为最适比测定的基本方法。
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(二) 操作步骤 1. 抗原稀释法 (1) 将可溶性抗原作一系列倍比稀释。 (2) 各管加入一定浓度的适量抗血清。 (3) 振摇使抗原、抗体充分混匀，置37℃孵育。 (4) 产生沉淀量随抗原量而不同，以出现沉淀物最多 的管为最适比例管。
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2. 抗体稀释法 本法采用抗原量恒定与不同倍比稀释
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(2) 操作步骤
1) 用稀释液稀释待检抗原和抗原标准品。 2) 取一定量稀释待检抗原液和不同浓度抗原 标准品溶液加至试管中，加抗体充分混匀，孵 育一定时间，比浊。 3) 以抗原标准品量为横坐标，浊度值为纵坐 标，绘制标准曲线。根据待检抗原的浊度值， 查出抗原含量。
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(3) 方法评价：
化分析仪或散射比浊仪均可使用。
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第二节 凝胶内沉淀试验 凝胶内沉淀试验(gel phase precipitation)主要是指琼脂 糖扩散或称凝胶扩散(gel diffusion)。常用的凝胶有琼脂、 琼脂糖、葡聚糖或聚丙稀酰胺凝胶等。根据实验目的与方 法不同，可将固相内沉淀验分为3类：①双相琼脂扩散试验 (double gel diffusion test)，②单相琼脂扩散试验(single gel diffusion test) ， ③ 凝 胶 免 疫 电 泳 (gel immunoelectrophoresis)。这是一项凝胶内电泳加扩散技术，专门 一章介绍。
(三) 方法评价 该试验是经典的血清学反应之一，简便、 快速、实用。故用于鉴定血迹和诊断炭疽
(Ascoli试验)。只能定性，不能定量、敏感 性较低(3~20mg/L)，对含有多个抗原抗体对
的反应系统缺乏分辨力。方法难以推广。
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三、免疫浊度试验 经典的免疫沉淀试验是抗原和相应抗体在反应 终点时判定结果，方法存在耗时、敏感度低 (10~100mg/L)和不能自动化等缺点。70年代以来， 根据抗原和抗体所在液相内快速结合并产生浊度 的原理，建立了免疫比浊法。临床常用3种微量免 疫技术，即透射比浊法、散射比浊法和免疫胶乳 比浊法，借助多种自动化分析仪器来完成。
3. 方法评价
敏感度高于单相琼脂扩散试验5~10倍， 批内、批间重复性较好，变异系数<10%，
操作简便快速，1h可报告结果。