转化酶的测定
碳氮代谢测定
碳氮代谢测定谷氨酰胺合成酶（GS）和谷氨酸脱氢酶（GDH）是碳氮代谢的关键酶。
淀粉酶，转化酶，硝酸还原酶，谷氨酰胺合成酶活性测定原理谷氨酰胺合成酶（GS）是植物体内氨同化的关键酶之一，在ATP和M g 2+存在下，它催化植物体内谷氨酸形成谷氨酰胺。
在反应体系中，谷氨酰胺转化为Y-谷氨酰基异羟肟酸，进而在酸性条件下与铁形成红色的络合物，该络合物在540nm处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。
谷氨酰胺合成酶活性可用产生的 Y-谷氨酰基异羟肟酸与铁络合物的生成量来表示，单位Mmol mg -1 protein h - 1。
也可间接用540nm处吸光值的大小来表示，单位A mg -1 protein h -1。
【仪器与用具】冷冻离心机；分光光度计；天平；研钵；恒温水浴；剪刀；移液管（2 ml、1ml）。
【试剂】提取缓冲液：0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0，内含 2mmol/L Mg 2+，2mmol/L DTT，0.4 mol/L 蔗糖。
称取 Tris （三羟甲基氨基甲烷）1.5295g，0.1245g MgSO 4 7 H 2 0，0.1543g DTT （二硫苏糖醇）和34.25g蔗糖，去离子水溶解后，用0.05 mol/L HCl 调至 pH8.0，最后定容至 250ml ；反应混合液 A （0.1mol/L Tris-HCl 缓冲，PH7.4）：内含80mmol/L Mg 2+，20mmol/L谷氨酸钠盐，20mmol/L半胱氨酸和2 mmol/L EGTA，称取 3.0590g Tris，4.9795 gMgSO 4 7H 2 0, 0.8628g 谷氨酸钠盐， 0.6057g半胱氨酸，0.1920gEGTA，去离子水溶解后，用0. 1mol/L HCl调至pH7.4,定容至 250ml ；反应混合液B（含盐酸羟胺，pH7.4）：反应混合液A的成分再加入 80mmol/L 盐酸羟胺，pH7.4；显色剂（0.2mol/L TCA, 0.37mol/L FeCl 3 和 0.6mol/L HCl混合液）：3.3176g TCA （三氯乙酸），10.1021g FeCl 3 6H 2 0，去离子水溶解后，加5ml浓盐酸，定容至100ml；40mmol/L ATP溶液：0.1210g ATP溶于5ml去离子水中（临用前配制）。
高效液相色谱法测定酶转化液中d-苯丙氨酸
高效液相色谱法测定酶转化液中d-苯丙氨酸
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的鉴定和测定化合物的方法。
下面是一种用于测定酶转化液中d-苯丙氨酸的HPLC 方法：
仪器和试剂：
- 高效液相色谱仪
- C18色谱柱
- 紫外检测器
- 甲醇
- 0.1％磷酸溶液（pH 2.5）
步骤：
1. 准备样品：将酶转化液进行适当的前处理，如稀释或净化，以获得可测定d-苯丙氨酸浓度的样品。
2. 准备标准曲线：准备一系列浓度已知的d-苯丙氨酸标准溶液。
可以使用纯品的d-苯丙氨酸，或者通过其他方法制备。
3. 色谱条件设置：
- 使用C18色谱柱，柱温设定为适当的温度。
- 流动相使用甲醇和0.1％磷酸溶液（pH 2.5），以一定比例混合，并根据实验需要进行调整。
- 设定流速和检测器波长以最佳条件进行分析。
通常，流速为1 mL/min，波长为210 nm。
4. 注入样品和标准溶液：将样品和标准溶液分别注入色谱仪进行分析。
保证注入的样品和标准溶液体积足够小，以避免过度稀释。
5. 分析和计算：根据标准曲线和样品的峰面积，计算样品中的
d-苯丙氨酸浓度。
可以使用内标法或外标法进行定量。
根据不同的实验要求和仪器设置，上述方法可能需要进行调整。
在进行HPLC分析时，确保操作准确和安全，并按照相关的
实验室规定进行。
最新植物体内转化酶活性的测定
植物体内转化酶活性的测定转化酶又称蔗糖酶(β—D—呋喃型果糖苷一果糖水解酶)，是一种水解酶。
植物体的库组织中，一般含有较高活性的转化酶。
它能将植物体内的主要同化产物——蔗糖不可逆地水解为葡萄糖和果糖，为细胞的可溶性糖类贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量。
所以，转化酶与植物组织的生长有密切关系，是衡量同化产物的转化和利用，植物细胞代谢及生长强度的指标。
【原理】转化酶可将非还原性糖的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。
将从植物组织中提取的酶液与蔗糖溶液保温作用一定时间后，测定产生的还原糖的量来表示转化酶活性的大小。
在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其它产物。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度量呈一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。
通常，在测定过程中，溶液的pH对酶活性影响很大。
不同的酶及不同材料中同一种酶都有其最适的pH值。
转化酶有两个影响水解蔗糖能力的解离基团，一个PKa约为7，另一个PKa约为3。
不同植物材料的转化酶中这两个基团的含量不同，它们的最适pH也不同(最适pH在7.0左右的为中性转化酶，最适pH在7.0以下的为酸性转化酶)。
所以，在测定材料中转化酶的活性之前，首先要选择适宜的PH值。
【材料、仪器与试剂】1．材料：植物组织2．试剂：（1）提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl (PH7.0) 缓冲液，内含5 mmol/L MgCl2,2 mmol/L EDTA-Na2,2% 乙二醇，0.2%牛血清蛋白（BSA），2%PVP，5 mmol/LDTT 。
（2）透析缓冲液：25 mmol/L Tris-HCl (PH7.0) 缓冲液，内含2.5 mmol/L MgCl2,1 mmol/L EDTA-Na2,1% 乙二醇，1 mmol/L DTT。
血管紧张肽(素)转化酶动力学测定方法的探讨及其初步临床应用
患者 Ａ Ｅ活性为 （８７±１ ． ）Ｕ Ｌ 稍低于 正常对照组 ， 差异无统计 学意义 （ ０ ０ ） Ｃ ２ ． １４ ／ ， 但 Ｐ＞ ． ５ 。结论 捷、 精确 ， 可用于 自动化分析 ， 适宜临床常规应用 。Ａ Ｅ可作为评价肺部疾病的一项指标 。 Ｃ 关键词 ： 管紧张肽 （ ） 血 素 转化酶 ； 动力学法 ； 慢性 阻塞性 肺部疾病急性加重期 ； 肺癌
ｐｏｕｅＮ （ ［一ｕｙ］ ｃ ｌ １一—ｈ Ｆ Ｐ ｎｄｇ ｃ ｅｇ ｃ ｅ（ Ｇ） ｎｂｒ ｃ — ｄｕ ｙｒｘ ｅｂｆ ｒｐ ８２ ． ｒｄｃ 一３ ２Ｆ ｒ１Ａ ｒ ｏ ）ＬＰ ｅ（ Ａ ）ａ ｌ ｉ —ｌ ｉ Ｇ ｉ ｏ ｃａｉ ｓ ｉｍｈ ｄｏｉ ｕ ｅ（Ｈ： ．） ｙｙ ｙｎ ｙｎ ｉ ｄｏ ｄ ｆ
检验医学 ２ １ 年 １月第 ２ ０１ ６巷第 １期
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１ ９
文 章 编 号 ：６ ３８４ （ ０ １ ０ －０ ９０ １７ —６０ ２ １ ） １０ １ －４
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度 为 １０ｍ ＬＬ 批 内 、 间 平 均 变异 系数 （ Ｖ 分 别 为 ４０ ％ 、．０ ， 氏 常数 （ ｍ） ０ ０ ｍ ｌＬ ． ｍｏ／ ， 批 Ｃ） ．７ ５ ５ ％ 米 Ｋ 为 ．９ｍ ｏ 。正 常 对 照 ／ 组 Ａ Ｅ活性 为 （ １１ ８０ Ｕ Ｌ Ａ Ｃ Ｐ Ｃ ３ ． ±１ ． ） ／ ；Ｅ Ｏ Ｄ患 者 Ａ Ｅ活性 为 （２ ４±１． ） ／ ， 于 正 常 组 （ ＜ ．０ ） 肺 癌 Ｃ ２． ２６ Ｕ Ｌ 低 Ｐ ００ ０１ ；
蔗糖合成酶、酸性转化酶、碱性转化酶活力活力的测定
实验四蔗糖合成酶、酸性转化酶、碱性转化酶活力活力的测定参考一、实验意义和目的 (2)二、实验原理 (2)三、材料、设备与试剂 (3)四、实验步骤 (3)1.蔗糖合成酶活性测定实验 (3)2.转化酶活性测定 (4)五、实验结果与分析 (4)1.蔗糖合成酶活性测定.................................................................... 错误!未定义书签。
2.转化酶活性测定............................................................................ 错误!未定义书签。
六、误差分析........................................................................................... 错误!未定义书签。
一、实验意义和目的蔗糖作为植物体内主要的光合产物和运输物质，其代谢强弱对许多生理活动都会产生显著影响。
蔗糖合成酶(SuSy)是植物进行蔗糖代谢的关键酶之一,与植物细胞组织和骨架的构建、植株的生长发育和果实的成熟以及植物对逆境胁迫的响应等方面密切相关，在植物的生长发育和代谢活动中具有重要作用。
转化酶也是催化蔗糖降解的重要酶类，为细胞的可溶性糖类贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量，还是控制淀粉合成的关键酶，测定转化酶活性对了解光合产物的贮存、转运及累积都有重要意义。
通过本实验要掌握三种酶的作用、酶活力测定的原理和方法、学习酶活力的计算方法，了解糖类水解。
二、实验原理1.蔗糖合成酶催化蔗糖的水解反应：蔗糖+UDP 果糖+UDPG。
2.转化酶催化蔗糖的水解反应：蔗糖+H2O—►葡萄糖+果糖。
根据催化反应所需的最适PH,可将转化酶分为两种：一种称为酸性转化酶，主要分布在液泡和细胞壁中，另一类转化酶称为碱性或中性转化酶，主要分布在细胞质中。
土壤活性测定实验报告
一、实验目的1. 了解土壤活性的基本概念和测定方法。
2. 掌握土壤酶活性的测定原理和操作步骤。
3. 通过实验，了解土壤酶活性与土壤肥力的关系。
二、实验原理土壤活性是指土壤中微生物、植物、动物等生物体及其代谢产物的综合活性。
土壤酶活性是土壤活性的重要指标，可以反映土壤中生物体的代谢能力和土壤肥力状况。
本实验通过测定土壤酶活性，了解土壤活性水平。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、过氧化氢酶、磷酸酶、脲酶、蛋白酶、转化酶、脱氢酶等试剂。
2. 实验仪器：恒温水浴锅、pH计、分光光度计、滴定管、移液管、烧杯、试管等。
四、实验方法1. 土壤样品的采集与处理采集不同类型土壤样品，过筛后，置于4℃冰箱中保存。
2. 土壤酶活性的测定（1）过氧化氢酶活性测定原理：过氧化氢酶催化过氧化氢分解，产生水和氧气。
通过测定氧气的产生量来计算过氧化氢酶活性。
操作步骤：①配制过氧化氢酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的过氧化氢酶反应液，加入一定量的过氧化氢，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算过氧化氢酶活性。
（2）磷酸酶活性测定原理：磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，产生酚和磷酸。
通过测定酚的产生量来计算磷酸酶活性。
操作步骤：①配制磷酸酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的磷酸酶反应液，加入一定量的磷酸苯二钠，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算磷酸酶活性。
（3）脲酶活性测定原理：脲酶催化尿素水解，产生氨和二氧化碳。
通过测定氨的产生量来计算脲酶活性。
操作步骤：①配制脲酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的脲酶反应液，加入一定量的尿素，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用滴定法测定氨的产生量，根据标准曲线计算脲酶活性。
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
2 土壤微生物量测定土壤微生物量（MB）是指土壤中体积小于5x103叩3的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内］。
它通过调控土壤中能量和养分循环以及有机物转化，来反映土壤同化和矿化能力。
土壤微生物生物量包括土壤微生物生物量碳、土壤微生物生物量氮、土壤微生物生物量磷和土壤微生物生物量硫，但一般情况下土壤微生物生物量的大小以土壤微生物生物量碳来表示。
2.1熏蒸浸提法2.1.1原理利用不同的浸提剂，通过氧化滴定法来测定土壤浸提液中有机C、N和P提取的可溶性有机碳含量和微生物量C之间存在较稳定的比例关系。
2.1.2则定步骤1.根据土壤样品含水量，调节土壤含水量为田间持水量的50%，25 ℃下密封培养10 d，以保持土壤均匀和不同地方所得结果的可比性。
2.氯仿熏蒸24 h后，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。
根据所测对象不同选择不同的提取剂浸提，振荡浸提30 min后，立即分析浸提液中所测对象的含量或放入-15 ℃下保存。
表1指出氯仿熏蒸浸提法测定不同土壤微生物量所选用的浸提剂及其条件。
表1姓熏薪髓喉土就生帽条件Table I F'E fcrdieneasuirm aitcondiocnsof soilm riobialbmass土情即鄢Detemiia血cfhdicaMr Eitatnt土觥生醯K(=D,3S 或D.45土觥物1小K国加士躺蜘M恻般注®拓牖腌雄魂航觥刎楠融脑机装痴螭定雕耐帕帆小麒眼3 土壤酶活性测定土壤酶活性均用风干土壤。
土壤转化酶活性和过氧化氢酶活性、脲酶活性、磷酸酶活性依次用硫代硫酸钠滴定法、高锰酸钾滴定法、靛酚蓝比色法和磷酸苯二钠比色法测定（关松荫,1986）3.1脲酶一一靛酚蓝比色法脲酶的活性可以用来表示土壤供氮能力（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
高效液相色谱法测定血管紧张素转化酶抑制剂的活性
收稿日期:2004-02-30作者简介:吴琼英,女,博士研究生,研究方向为生物资源有效成分的分离与提纯.通讯联系人:马海乐,男,博士生导师,教授,Tel :(0511)5862362,E -mail :mhl @uj s .edu .cn .基金资助:江苏省高技术研究项目(项目编号:BG2003319).高效液相色谱法测定血管紧张素转化酶抑制剂的活性吴琼英, 马海乐, 骆 琳, 吴守一(江苏大学生物与环境工程学院,江苏镇江212013)摘要:建立了体外直接测定血管紧张素转化酶抑制剂活性的高效液相色谱分析方法。
以马尿酰-组氨酰-亮氨酸为反应底物,血管紧张素转化酶为催化剂,反应所生成的马尿酸为测定指标,未加酶抑制剂的反应为空白对照。
使用ZORBAX SB -C 18色谱柱(4.6mm i .d .×150mm ,填料粒径5μm ),柱温25℃,流动相为乙腈-超纯水(体积比为25∶75,各含0.05%(体积分数)三氟乙酸及0.1%(体积分数)三乙胺),流速0.5m L /min ,检测波长228nm 。
在马尿酸浓度为0.005～1.000mmol /L 时,马尿酸浓度与其峰面积呈良好的线性关系(r =0.9999),最小检测限为0.50μmol /L ;该方法对马尿酸的回收率为99.48%～105.64%,相对标准偏差(RSD )为2.20%(n =6)。
该方法可适用于血管紧张素转化酶抑制剂活性的体外测定,具有操作简便、精密度和准确性高的特点,为降血压药物的研制提供了方便可靠的检测手段。
关键词:高效液相色谱法;血管紧张素转化酶抑制剂;马尿酸中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:1000-8713(2005)01-0079-03De te rmination of Angiotensin Converting Enzyme InhibitorActivity by High Pe rformance Liquid ChromatographyWU Qiongying ,MA Haile ,LUO Lin ,WU Shouyi(College of B iolog y and Environment Eng ineering ,Jiang su University ,Zhenjiang 212013,China )Abstract :A high performance liquid chromatographic method to determine angiotensin -convertingenzyme inhibitor activity in vitro was established by using N -hippuryl -His -Leu tetrahydrate as the reaction substrate and hippuric acid as the reaction product .The chromatographic conditions were as follows :column ,ZORBAX SB -C 18(4.6mm i .d .×150mm ,5μm );column temperature ,25℃;mobile phase ,acetonitrile -distilled water (25∶75,v /v ,both containing 0.05%(v /v )trifluo -roacetic acid and 0.1%(v /v )triethylamine );flow rate ,0.5mL /min ;detection wavelength ,228nm .An excellent linearity over the range of 0.005-1.000mmol /L (r =0.9999)was observed .The detection limit was 0.50μmol /L .The recoveries of hippuric acid ware 99.48%-105.64%,with a relative standard deviation (RSD )of 2.20%(n =6).It is a simple ,precise and reliable as -say method for developing antihypertension drugs .Ke y words :high performance liquid chromatography ;angiotensin -converting enzyme inhibitor ;hippuric acid 血管紧张素转化酶(angiotensin Ⅰ-converting enzyme ,简称ACE )主要参与肾素-血管紧张素-醛固酮系统的调节。
碳氮代谢测定
谷氨酰胺合成酶（GS）和谷氨酸脱氢酶（GDH）是碳氮代谢的关键酶。
淀粉酶，转化酶，硝酸还原酶，谷氨酰胺合成酶活性测定原理谷氨酰胺合成酶（GS）是植物体内氨同化的关键酶之一，在ATP 和M g 2+ 存在下，它催化植物体内谷氨酸形成谷氨酰胺。
在反应体系中，谷氨酰胺转化为γ—谷氨酰基异羟肟酸，进而在酸性条件下与铁形成红色的络合物，该络合物在540nm 处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。
谷氨酰胺合成酶活性可用产生的γ—谷氨酰基异羟肟酸与铁络合物的生成量来表示，单位μmol·mg －1 protein·h －1 。
也可间接用540nm 处吸光值的大小来表示，单位A·mg －1 protein·h －1 。
【仪器与用具】冷冻离心机；分光光度计；天平；研钵；恒温水浴；剪刀；移液管（2 ml、1ml）。
【试剂】提取缓冲液：0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0，内含2mmol/L Mg 2+ ，2mmol/L DTT，0.4 mol/L 蔗糖。
称取Tris（三羟甲基氨基甲烷）1.5295g，0.1245g MgSO 4 ·7 H 2 O，0.1543g DTT（二硫苏糖醇）和34.25g 蔗糖，去离子水溶解后，用0.05 mol/L HCl 调至pH8.0，最后定容至250ml；反应混合液A（0.1mol/L Tris-HCl 缓冲，pH7.4）：内含80mmol/L Mg 2+ ，20mmol/L 谷氨酸钠盐，20mmol/L 半胱氨酸和2 mmol/L EGTA，称取3.0590g Tris，4.9795 gMgSO 4 ·7H 2 O, 0.8628g 谷氨酸钠盐，0.6057g 半胱氨酸，0.1920gEGTA，去离子水溶解后，用0. 1mol/L HCl 调至pH7.4，定容至250ml；反应混合液B（含盐酸羟胺，pH7.4）：反应混合液A 的成分再加入80mmol/L 盐酸羟胺，pH7.4；显色剂（0.2mol/L TCA, 0.37mol/L FeCl 3 和0.6mol/L HCl 混合液）：3.3176g TCA（三氯乙酸），10.1021g FeCl 3 ·6H 2 O，去离子水溶解后，加5ml 浓盐酸，定容至100ml；40mmol/L ATP 溶液：0.1210g ATP 溶于5ml 去离子水中（临用前配制）。
蜂蜜中蔗糖转化酶的测定
蜂蜜中蔗糖转化酶的测定蜂蜜是一种天然的甜味品，其味道甘甜可口，因此备受人们喜爱。
但是，蜂蜜中所含的蔗糖却对某些人群有一定的影响，特别是糖尿病患者。
因此，了解蜂蜜中蔗糖的含量对于人们选择合适的食物具有重要意义。
为了测定蜂蜜中蔗糖的含量，可以采用蔗糖转化酶测定的方法。
蔗糖转化酶是一种能够将蔗糖分解成葡萄糖和果糖的酶，通过测定其转化蔗糖的速率可以间接测定蜂蜜中蔗糖的含量。
下面是测定蜂蜜中蔗糖转化酶的具体步骤：1. 样品制备：将蜂蜜样品称取一定量加入到试管中，加入适量的缓冲液，并进行适当的稀释。
同时，准备好空白试管作为对照组。
2. 预处理：将试管中的样品放入恒温水浴中，在一定温度下孵育一段时间，使蔗糖转化酶充分发挥作用。
3. 反应停止：加入一定量的酸性溶液（例如硫酸）停止反应，使蔗糖转化酶停止工作。
4. 离心和过滤：将试管中的混合液进行离心，然后使用滤纸过滤，除去其中的固体颗粒。
5. 测定还原糖含量：将过滤后的样品吸取一定量，加入到还原糖测定试剂中，进行比色测定。
根据比色反应的结果，可以间接测定还原糖的含量。
6. 数据处理：根据比色的结果，通过标准曲线或参比溶液来计算蜂蜜中蔗糖的含量。
此外，还可以借助现代化学分析仪器，如高效液相色谱仪（HPLC），进行蔗糖转化酶测定。
HPLC可以在短时间内精确测定蜂蜜中蔗糖、葡萄糖和果糖的含量，提高测定的准确性和效率。
总之，测定蜂蜜中蔗糖转化酶的含量是一项重要的分析工作，对于了解蜂蜜的营养成分以及选择健康食品有重要意义。
在实际操作中，可以根据实验室条件和需求选择适合的方法进行测定。
同时，需要注意样品的处理和数据的分析，以确保测定结果的准确性和可靠性。
酶活性测量的方法有哪几种
酶活性测量的方法有哪几种酶活性测量是评估酶在特定条件下，催化底物转化为产物的能力的一种方法。
根据不同的酶特性和底物/产物的特性，可以使用多种方法来测量酶的活性。
以下是常见的酶活性测量方法：1. 比色法：比色法是最常用的测量酶活性的方法之一。
在酶催化底物转化为产物之后，产生的有色化合物可以通过分光光度计来测量其吸光度。
比色法适用于各种酶的测量，包括氧化还原酶、氨基酸酶等。
2. 荧光法：荧光法是利用酶底物转化为产物之后所产生的荧光来测量酶活性的方法。
这种方法通常需要在底物或产物中引入荧光染料，通过测量荧光信号的强度来定量酶活性。
荧光法对于具有较高灵敏度要求的酶活性测量非常有用，例如蛋白酶、DNA酶等。
3. 发光法：发光法是利用酶催化底物转化为产物后所产生的光来测量酶活性的方法。
这种方法通常需要在底物或产物中引入发光底物或荧光染料，通过测量其发光强度来测量酶活性。
发光法对于对时间分辨率要求较高的酶活性测量非常有用，例如ATP酶、NADH酶等。
4. 放射性法：放射性法是利用酶催化底物转化为产物后所释放的放射性物质测量酶活性的方法。
该方法需要在底物或产物中引入放射性同位素，通过测量其放射性强度来定量酶活性。
放射性法对于具有极高灵敏度要求的酶活性测量非常有用，例如DNA聚合酶、RNA酶等。
5. 电化学法：电化学法是利用酶催化底物转化为产物后所产生的电流来测量酶活性的方法。
这种方法通常需要在底物或产物中引入可反应的电活性物质，通过测量电流来定量酶活性。
电化学法对于某些具有电催化酶活性的酶测量非常有用，例如葡萄糖氧化酶、酒精脱氢酶等。
6. 色谱法：色谱法是利用酶催化底物转化为产物后所产生的物质在色谱柱上的分离来测量酶活性的方法。
这种方法通常需要在底物或产物中引入特定的标记物质，通过测量标记物质在色谱图谱上的峰面积或峰高度来定量酶活性。
色谱法对于某些底物或产物具有特定的分离性质的酶活性测量非常有用，例如激酶、酮糖酶等。
HPLC法检测纯生啤酒蔗糖转化酶活性的研究
酶活 ｍ ） 力（／ ： Ｌ
式 中 ：一稀释 倍数 ｎ
堡 垒 量
Ｗ ｔ Ｘ
）
真伪 ， 也可 以进行 半定 量分 析 。
０ ６ ． ０ ０ ５ ． ０
—
Ｖ 酶 液 的总 体积 （ Ｅ 一 ｍ ） ｗ一 品体 积 （ ） 样 ｍＥ
ｔ时 间（ ｉ） 一 ａ ｒ ｎ
重 ．】 ｏ【 ４
Ｏ１ ． ０２ ．５
０２ ． ５ ０１ ．
＋
冷却 至室温 。冷却 的样品超声脱气 １ｒｎ 用超 ５ ｉ， ａ 纯 水 稀释 １ 倍 ， ０２１ Ｏ 用 ． ， ２ｚ 孔滤 膜 过滤 后测 定 ， ｍ微 萄糖的量 。
１ ＿ 糖转 化酶酶 活力计 算 ．３蔗 ２ 糖 所需 的酶量 ， 定义 为酶 的一个 活力 单位 （ ） ｕ。
１ ｍ ／ｉ； ． Ｌｍｎ 进样量为 ｌｐ 。利用保 留时间定性 ， ０ Ｏ， Ｌ
峰 面积定 量 。
１． ．
样 品 货架期 葡萄糖 蔗糖转化酶 试纸对应含 葡萄糖 名称 （ ） （／Ｏ ｍＬ 活 （０ ）量 （／０ ｍ ） 试 纸 天 ｇｌＯ ）酶 １ ｇ１０ Ｌ
蛹｛ ． ０ ０３
奇Ⅱ
１ ． 市售 纯生 啤酒 中蔗糖转 化酶 活性测 定 ．４ ２ 在 市场 上 随机 抽取 货架 期三个 月 内的不 同品 牌 纯 生啤酒 ， 每月 进行 蔗糖转 化酶 活性 的测定 ， 连 续 检测 四个 月 。
１ ． 温瓶 温 度 及温 瓶 时 间对 蔗糖 转 化 酶活 性 的 ．５ ２
乏
２ ・ ０
埘 腾
薪 巴 杀 监 仪 型 氏 菌 测
８－８３ 嘴 １口 １８ｏ６ ４１； ０６３ ０ ３ ０ ９ ６ ’
血管紧张素转换酶测定标准操作程序
血管紧张素转换酶测定标准操作程序1.摘要血管紧张素转换酶变化可作为衡量各种因素所致肺损害程度的重要指标。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中ACE的浓度。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定ACE浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的血管紧张素转换酶（ACE）试剂盒采用的是酶法。
5.原理−−−→+GlyGlyFAPFAPGG ACE-FAPGG: N-[3-(2-呋喃基)丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸，N-[3-(2-furyl)acryloyl]-L-phenylalanylglycylglycineFAP: N-[3-(2-呋喃基)丙烯酰]-L-苯丙氨酸，N-[3-(2-furyl)acryloyl]-L-phenylalanineGly-Gly: 二甘肽，glycylglycineFAPGG在样本中血管紧张素转换酶(ACE)的作用下水解为FAP和二甘肽，由于FAPGG在340nm 附近处有吸收峰，水解为FAP后吸光度降低，所以可以通过监测340nm处的吸光度变化率计算样本中血管紧张素转换酶的活力。
6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：Good’s缓冲液、FAPGG、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：此项目只需要用理论因子并做空白校准即可。
以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白。
8.2质控品某某公司提供的生化定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用1ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约15分钟）后使用。
食品冷链品控专业《实验十七、蔗糖转化酶活性测定》
实验十七、蔗糖转化酶活性测定
一、原理
不经巴氏灭菌或高温灭菌的啤酒，酒体中各种酶系仍保持着活性，其中的蔗糖转化酶可以将蔗糖分解为葡萄糖，利用葡萄糖鉴别试纸可以检查酒体中的蔗糖转化酶活性。
二、仪器
移液管；试管；恒温水浴:控温精度±℃。
三、试剂和溶液
〔一〕蔗糖溶液〔250g/L〕：称取蔗糖25g，用水溶解，并定容至100mL。
〔二〕葡萄糖鉴别试纸。
四、分析步骤
分别吸取酒样10mL于三支试管中。
于第一支试管A中加水，摇匀。
将第二支试管B置于佛水中加热2min，取出冷却。
于第二支试管B和第三支试管C中各参加蔗糖溶液，摇匀。
然后三支试管同时置于30℃±℃水浴中保温30min。
随后将三支试管再同时置于沸水中加热2min，取出，冷却至室温。
分别用葡萄糖鉴别试纸的端浸入各试管中30s~60s，取出，立即观察其颜色变化，记录结果。
五、判定
假设C管试纸变色且颜色深于A管和B管〔呈阳性〕，那么判为生啤酒或鲜啤酒。
假设不变色或者与A管和B管颜色无差
异，那么判为熟啤酒。
血管紧张素转化酶(ACE)测定试剂盒(FAPGG底物法)产品技术要求sainuopu
血管紧张素转化酶(ACE)测定试剂盒(FAPGG底物法)适用范围：用于体外定量测定人体血清中血管紧张素转化酶的活性。
1.1试剂盒包装规格试剂：1×20ml；试剂：2×60ml；试剂：3×40ml；试剂：4×60ml；试剂：4×400ml；试剂：1×8L；试剂：2×30ml。
校准品（选配，冻干品）：1×1ml，1×3ml，1×5ml。
质控品（选配，冻干品）：1×1ml，1×3ml，1×5ml。
1.2试剂盒主要组成成分2.1 外观液体单试剂：无色至浅黄色澄清液体。
校准品：冻干品，复溶后为无色至浅黄色液体。
质控品：冻干品，复溶后为无色至浅黄色液体。
2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度：在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不小于0.6。
2.3.2试剂空白吸光度变化率：在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应不大于0.01。
2.4 分析灵敏度测定活性为100U/L样本时，吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.004。
2.5 线性范围在（5，120）U/L范围内r不小于0.996。
在（50，120）U/L区间内线性相对偏差不大于±15%；（5，50]U/L区间内线性绝对偏差不大于±7.5U/L。
2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于6%。
2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。
2.8 准确度与已上市产品进行比对试验：在检测活性（5，120）U/L范围内，与比对系统的相关系数r不小于0.975；在（50，120）U/L区间内与比对系统的相对偏差不大于±15%；（5，50]U/L区间内与比对系统的绝对偏差不大于±7.5U/L。
几种酶的测定方法
各种酶的测定方法：土壤脲酶测定方法（靛酚比色法）根据脲酶水解时生成的氨与苯酚钠及次氯酸钠反应，形成兰色靛酚这一原理。
试剂配制：1.甲苯（分析纯）2.10%尿素：尿素（分析纯）10克溶于100毫升蒸馏水中。
(当天做当天配)3.柠檬酸盐缓冲液：368克柠檬酸（分析纯）溶于600毫升蒸馏水中；295克氢氧化钾溶于水；将二种溶液合并，调pH至6.7，并用水稀释至2升。
4.苯酚钠溶液：A.62.5克苯酚溶于少量95%乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升。
B.27克氢氧化钠溶于100毫升水中。
将二溶液保存在冰箱里。
使用前，将溶液A、B各吸取20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。
5.次氯酸钠溶液：用蒸馏水稀释试剂，至活性氯浓度为0.9%。
（次氯酸钠活性氯浓度为5.2%）。
标准溶液：称0.4717克硫酸铵（105℃烘干）溶于水，稀释至1升（1毫升含100微克氮）即100ppm。
将100ppm的标准溶液稀释为10ppm。
分别吸取0、0.5ml、1.5ml、2.5ml、3.5ml、4.5ml、5.5ml、6.5ml、7.5ml于50毫升容量瓶或刻度试管中，加入试剂，最后定容至50毫升使溶液浓度为：0、0.1ppm、0.3ppm、0.5ppm、0.7ppm、0.9ppm、1.1ppm、1.3ppm、1.5ppm。
分析步骤：称2~5克过20目风干土于50毫升磨口三角瓶中，加5~10滴甲苯，盖好，15分钟后加10毫升10%尿素和20毫升pH6.7柠檬酸盐缓冲液，摇匀后，在30℃恒温箱中培养24小时，过滤。
取滤液1~3毫升（视样品浓度定）于50毫升刻度试管中，加入4毫升苯酚钠溶液和3毫升次氯酸钠溶液，边加边摇匀。
20分钟后定容，在分光光度计波长578nm处比色（1cm比色杯）。
反应生成的靛酚兰能在60分钟以内稳定。
每一土样设置用水代替基质（即尿素）的对照，以除掉土壤中氨态氮引起的误差。
还需减去无土基质（尿素＋柠檬酸盐）。
人肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)ELISA检测试剂盒说明书
人肿瘤坏死因子α转化酶（TACE）ELISA检测试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆樊克生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本肿瘤坏死因子α转化酶（TACE）含量。
试验原理：TACE试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TACE浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将TACE和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中TACE的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗TACE抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
农业试验测定方法大全
淀粉酶的定测称取鲜样0.2克，加1%NaCl8毫升研磨（低温），放置15分钟，不时摇动。
3000rpm离心10分钟。
（1）取1ml酶液，加1％淀粉1ml（2）空白：取1ml酶液，100度水浴10min，加1％淀粉1ml，混匀，40度水浴5min（准确）,取出，将各试管各加入DNS2ml，煮沸5min，冷却，定容至25ml，然后在520nm下比色。
注：淀粉临时配制。
1％淀粉：1g溶于100ml水中。
DNS试剂：精确称取3、5－二硝基水杨酸1g溶于20ml1mol/lNaOH中，加50ml蒸馏水中，再加入30g酒石酸钾钠，溶解后盖紧瓶塞，勿使CO2进入。
麦芽糖标液称取麦芽糖0.1000g溶于少量蒸馏水中，定容至ml即为1mg/ml的麦芽糖标液。
标准曲线的制作：取25ml具塞刻度试管7支，按下表加入各种试剂混匀，在沸水浴中加热5分钟，取出，冷却后加蒸馏水至25ml刻度，摇匀，在520nm下比色，绘出标准曲线。
管号麦芽糖含量（ml）麦芽糖标液（ml）蒸馏水（ml）DNS 试剂（ml）123456 00.20.61.01.41.82.0 00.20.61.01.41.82.0 2.52.31.91.51.10.70.5 2.02.02.02.02.02.0硝酸还原酶的测定试剂：1、亚硝酸钠标准液：称取分析纯NaNO2 0.1000g水溶后定容至100毫升，吸取5毫升用水稀释定容至1000毫升。
2、0.1mol/lpH7.5的磷酸缓冲液K2HPO419.24g，KH2PO42.2g，加水溶解后定容至1000毫升。
3、1% 对氨基苯磺酸溶液：称取1.0g加入25毫升浓盐酸中，用蒸馏水定容至100毫升。
4、0.2% α—萘胺溶液：称取0.2g α—萘胺溶于25毫升冰醋酸中，用蒸馏水定容至100毫升。
5、30%三氯乙酸溶液：75.0g三氯乙酸，水溶后定容至250毫升。
6、KNO3•异丙醇•磷酸缓冲液混合液：称3.03g KNO3溶于300毫升0.1mol/l的磷酸缓冲液中，再加3毫升异丙醇混匀。
fapgg法
fapgg法
FAPGG法是一种用于测定血管紧张素转化酶（ACE）活性的方法。
该方法的基本原理是利用FAPGG（荧光素乙酰普鲁卡因酰胺-脯氨酸-甘氨酸）作为底物，通过ACE的催化作用，将FAPGG水解成荧光素和乙酰普鲁卡因酸，并检测荧光素的荧光强度。
通过比较不同样本的荧光强度，可以定量测定ACE的活性。
使用FAPGG法进行ACE活性测定时，需要注意以下几点：
1.标本量要求：一般而言，需要的标本量为25μl。
2.试剂用量：使用250μl的试剂。
3.测定方法：采用终点法，通过监测反应体系中的荧光强度的变化
来计算ACE的活性。
4.主波长和副波长：通常使用主波长为340nm，副波长为405nm。
5.定标模式：一般采用线性模式进行定标。
6.反应温度和时间：反应温度通常设定为37℃，反应时间一般为600
秒。
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转化酶的测定
转化酶又称蔗糖酶，是一种水解酶，植物体的库组织中，一般含有较高活性的转化酶，它能将植物体内的主要同化产物——蔗糖不可逆的水解为葡萄糖和果糖，为细胞的可溶性糖贮库提供可利用六碳糖，以用于细胞壁、贮藏多糖及果聚糖的生物合成，并通过与呼吸作用偶联的氧化磷酸化产生能量，所以，转化酶与植物组织的生长有密切关系，是衡量同化产物的转化和利用、植物细胞代谢及生长强度的指标。
试剂：1、10%蔗糖溶液
2、葡萄糖标准液（500μg/ml）
3、0.05mol/l的磷酸缓冲液
4、（DNS）3，5二硝基水杨酸：将6.3g二硝基水杨酸和262 ml 2mol/l NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
方法：1、酶的提取：1g样品剪碎后，用预冷的蒸馏水在冰浴中研磨成匀浆，定容至100ml，在冰箱中浸提3小时，4000转离心15分钟，上清液即为酶的粗提液。
2、酶活性的测定：吸酶液2ml，放入试管中，再加入pH6.0的缓冲液5ml及10%蔗糖溶液1ml，在37度水浴中保温30分钟，取出后立即按3，5二硝基水杨酸法测定还原糖的含量。
以煮沸酶液10分钟钝化酶的试管作对照。
3、还原糖标准曲线的制作及还原糖含量的测定
①标准曲线：取6支20ml刻度试管，编号，按下表配置不同浓度的葡萄糖标准液：
管号 1 2 3 4 5 6
葡萄糖原液量（ml）0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
加蒸馏水量（ml） 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
葡萄糖浓度（μg/ml）0 100 200 300 400 500 在上述各管中分别加入1.5ml 3，5二硝基水杨酸试剂，在沸水浴中加热5分钟，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，加蒸馏水定容至20ml，混匀，以1号管为空白，测540nm 波长下的OD值。
以OD值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。
②酶反应液中还原糖的含量的测定：吸取2ml反应液，加入1.5ml 3，5二硝基水杨酸试剂，沸水浴中煮沸5分钟，冷却定容至20ml ，测定540nm波长下的OD值，查标准曲线得酶反应液中还原糖的浓度。
4、结果计算：
A=(N-N’)*V/(T*W*1000)
A：转化酶的活性(mg/gfw/h) N：酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml)
N’：钝化酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml) V：酶反应液的总体积
T：反应时间W：材料鲜重
转化酶的测定
方法：1、酶的提取：1g样品剪碎后，用预冷的蒸馏水在冰浴中研磨成匀浆，定容至100ml，在冰箱中浸提3小时，4000转离心15分钟，上清液即为酶的粗提液。
2、酶活性的测定：吸酶液2ml，放入试管中（以煮沸酶液10分钟钝化酶的试管作对照），加入pH6.0的缓冲液5ml及10%蔗糖溶液1ml，在37度水浴中保温30分钟，取出后立即吸取2ml加入1.5ml 3，5二硝基水杨酸试剂，沸水浴中煮沸5分钟，冷却定容至20ml ，测定540nm 波长下的OD值，查标准曲线得酶反应液中还原糖的浓度：Y（μg/ml ）=744.63*OD值
3、结果计算：
A=Y*V/(T*W*1000)（一般范围14~40mg/g/fw//h）
A：转化酶的活性(mg/gfw/h) Y：上式计算得酶反应液中还原糖的浓度(μg/ml)
V：酶反应液的总体积100ml
T：反应时间0.5h W：材料鲜重（fw）
一个处理3次重复所需试验台仪器：容量瓶(100ml)
刻度试管（20mlx4，1个对照），移液管（5mlx1，2mlx1，1 ml x1），研钵
试剂：10%(w/v)蔗糖溶液现用现配：称取10g加入用蒸馏水定容至100ml.。
葡萄糖标准液（500μg/ml）： 80度烘干葡萄糖0.05克蒸馏水定容100ml。
PH=5.4,5%的磷酸缓冲液: Na2HPO4·12.H2O0.448125g, NaH2PO4·2H2O 3.731125g,加水溶解定容至250ml..
（DNS）3，5二硝基水杨酸：将6.3g二硝基水杨酸和262 ml 2mol/l 或20.96gNaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚（即苯酚）和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
预冷蒸馏水1000ml.
转化酶的测定
（一个处理，3次重复）
1g左右样品1份，剪碎
预冷的蒸馏水研磨成匀浆
蒸馏水定容至100ml
冰箱中浸提至少3小时
混均，倒入4个离心管，在 4000转离心15分钟
分别吸2ml上清液，放入4个试管
其中任选1个试管煮沸至少10分钟作对照，
此后（包括煮沸10分钟的对照试管）各试管加pH6.0的缓冲液5ml，10%蔗糖溶液1m
37度水浴中保温30分钟
取出后分别加入1.5ml 3，5二硝基水杨酸试剂，在沸水浴中加热5分钟取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温
加蒸馏水定容至20ml，
540nm比色（读数即为OD值）
转化酶的测定
10%(w/v)蔗糖溶液现用现配：称取10g加入用蒸馏水定容至100ml
葡萄糖标准液（500μg/ml）：葡萄糖标准液：80度烘干葡萄糖0.05克蒸馏水定容100ml。
PH=5.4,5%的磷酸缓冲液: Na2HPO4·12.H2O0.448125g, NaH2PO4·2H2O 3.731125g,加水溶解定容至250ml..
（DNS）3，5二硝基水杨酸：将6.3g二硝基水杨酸和262 ml 2mol/l 或20.96gNaOH溶液，加到500ml左右含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚（即苯酚）和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
预冷蒸馏水1000ml.。