免疫组化操作步骤
免疫组化实验的详细步骤
免疫组化实验的详细步骤1. 制备组织切片- 将组织固定在适当的固定液中(如甲醛溶液)- 通过脱水、清理和浸蜡等步骤制备石蜡包埋块- 使用切片机将包埋块切成4-6微米厚的切片- 将切片贴附到载玻片上2. 脱蜡和水化- 将载玻片浸入二甲苯或者相似的溶液中,去除石蜡- 使用梯度浓度的乙醇溶液(100%,95%,70%)逐步水化切片3. 抗原修复- 抗原修复是一个关键步骤,可以暴露被固定过程掩盖的抗原表位 - 常用的方法包括加热诱导抗原修复和酶促抗原修复4. 内源性过氧化物酶或者生物素的封闭- 使用3%的过氧化氢溶液处理切片,以封闭内源性过氧化物酶活性 - 对于利用生物素-亲和素系统的实验,需要使用生物素封闭试剂进行封闭5. 加入封闭液- 使用含有蛋白质成分的封闭液(如牛血清白蛋白)处理切片- 这一步可以阻止抗体的非特异性结合6. 加入一抗- 将特异性的一抗(如小鼠抗人蛋白单克隆抗体)稀释至适当浓度- 滴加到切片上,在湿盒中于4℃过夜或37℃温育1-2小时7. 加入二抗- 洗去未结合的一抗- 加入与一抗种属相匹配的二抗(如生物素标记的羊抗小鼠抗体)8. 加入探针- 对于酶促反应型免疫组化,加入酶标记的亲和素(如过氧化物酶-亲和素复合物)- 对于荧光免疫组化,加入荧光标记的亲和素9. 显色- 酶促反应型:加入适当的染色底物(如),产生可见的棕黄色沉淀- 荧光免疫组化:不需要此步骤10. 染色和封片- 用苏木素对细胞核进行复染- 用封片剂和覆盖玻片封闭切片,制成永久装片11. 观察结果- 使用光学显微镜或荧光显微镜观察目的蛋白的分布和表达情况以上是免疫组化实验的一般步骤,具体操作细节可能因实验目的和具体方法而有所调整。
准确无误的实验步骤需要参考相关文献和说明。
免疫组化的操作流程
免疫组化的操作流程免疫组化是一种在细胞或组织中检测特定抗原或抗体的方法。
免疫组化广泛应用于医学诊断、生命科学研究和药物研发等领域。
下面是免疫组化的操作流程。
1.样本处理：首先，需要准备待检测的样本。
样本可以是组织片、细胞悬液或液体样本（如血清或尿液）。
对于组织样本，通常需要固定、切片和脱水等处理步骤，以保持细胞和组织的结构和形态。
2.抗原修复：组织样本中的抗原通常会在固定处理过程中被破坏或失活。
为了恢复抗原的免疫反应性，需要进行抗原修复步骤。
常用的抗原修复方法包括加热诱导抗原修复和酶诱导抗原修复。
3.抗原检测：制备好的样本可以用于检测抗原。
抗原检测通常通过选择与目标抗原特异性结合的一组试剂，如特异性抗体或亲和素。
这些试剂将与待检测样本发生特异性结合，从而形成特定的抗原-抗体结合物。
4.一次抗体结合：首先，将样本与一次抗体结合。
一次抗体是与目标抗原结合的特异性抗体。
待检测样本与一次抗体一起孵育，使其与目标抗原发生特异性结合。
5.洗涤：为了去除未结合的一次抗体和其他非特异性结合物，需要进行洗涤步骤。
洗涤可以用缓冲液溶液进行多次重复，以确保样本的纯净性。
6.二次抗体结合：接下来，需要将与检测物发生特异性结合的二次抗体与样本反应。
二次抗体是与一次抗体特异性结合的抗体。
这些二次抗体通常与标记物结合，如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）等。
7.洗涤：与一次抗体结合后，需要再次进行洗涤步骤，以去除未结合的二次抗体和其他非特异性结合物。
8.标记物探测：二次抗体中的标记物将通过检测技术进行可视化。
最常用的检测技术是酶联免疫吸附实验（ELISA），其中酶标记物与底物反应产生可见的颜色变化。
其他常用的标记物包括荧光染料、生物素-链霉亲和素等。
9.观察和分析：最后，需要使用光学显微镜或显微镜等工具观察标记物，并进行结果分析。
可以根据标记物的位置、数量和强度等进行定量和定性的分析。
总之，免疫组化操作流程包括样本处理、抗原修复、抗原检测、一次抗体结合、洗涤、二次抗体结合、洗涤、标记物探测和观察分析等步骤。
免疫组化法实验操作步骤
免疫组化法实验操作步骤以下是免疫组化法的标准实验操作步骤：1.样本准备：a.获取待检样本，例如组织切片或细胞悬液。
b.将样本固定，常用的固定剂包括福尔马林、乙醇和乙酸等。
c.进行脱水和石蜡包埋，以便于后续切片。
2.制备切片：a.用切片机将固定的样本切成薄片，通常为4-6微米。
b.将切片平均分配在载玻片上。
3.制备蜡块：a.将切片放入烘箱中进行去蜡，以去除切片上的石蜡。
b.用乙醇对切片进行脱水然后重新水化。
c.将切片放入热稳定耐热塑料材料中，通常为硝酸纤维素薄膜等。
4.抗原恢复：a.使用高温高压（如压力锅或蒸汽炉）进行抗原恢复，以改善抗体与抗原的结合效率。
b.根据实验需要选择适当的抗原恢复缓冲液，如磷酸盐缓冲液（PBS）、EDTA缓冲液或三氯醋酸缓冲液等。
c.将切片放入抗原恢复缓冲液中进行恢复处理。
5.抗体处理：a. 选择适当的一抗（primary antibody），根据目标蛋白质的性质选择单克隆或多克隆抗体。
b.将一抗稀释至适当浓度，根据抗原的强度调整抗体浓度。
c.将一抗加入样本上共孵育，使抗体与目标蛋白质发生特异性结合。
d.对于一些抗体，可以使用辅助试剂如牛血清蛋白、牛血清、胶原蛋白等增强结合效果。
6.清洗：a.用PBS或其他合适的缓冲液冲洗切片，以去除未结合的一抗。
b.重复冲洗步骤多次，以充分去除未结合的抗体。
7.检测标记：a.选择适当的检测标记，如酶（如辣根过氧化物酶，HRP）、荧光染料或金标记等。
b.将标记物加入到一抗与抗原结合的位置上，以形成可视的标记。
8.染色：a.若使用酶标记物，则使用特定底物进行染色，产生颜色反应。
b.若使用荧光标记物，则观察荧光信号。
9.显微镜观察：a.使用适当的显微镜观察切片，记录和分析结果。
b.对于荧光标记，可以使用特定的荧光染色剂如DAPI进行细胞核染色。
10.结果分析：a.根据实验设计和目的，对结果进行定性或定量分析。
b.可以使用图像分析软件进行影像处理和数据分析。
免疫组化相关步骤
免疫组化相关步骤免疫组化（immunohistochemistry，IHC）是一种基于抗原抗体反应的方法，用于检测组织或细胞中其中一种特定蛋白质的表达。
下面将详细介绍免疫组化的相关步骤。
免疫组化的步骤包括样品制备、抗原修复、阻断、一抗反应、二抗反应和染色，具体如下：1.样品制备：首先，需要获取组织标本。
通过活体组织切片、细胞涂片或冷冻切片等方法制备标本。
制备好的标本需要保持完整和有代表性，通常要求切片不超过5μm厚。
2.抗原修复：组织切片在固定过程中会损害抗原的完整性，因此需要进行抗原修复，以恢复抗原的表达。
常用的抗原修复方法包括热解修复（如加热、压力煮等）和酶解修复（如胰蛋白酶消化等）。
3.阻断：组织切片会与非特异抗体结合，影响免疫反应的特异性，因此需要进行阻断。
常用的阻断方法包括用牛血清白蛋白（BSA）或奶粉进行阻断，以防止非特异性背景信号的产生。
4.一抗反应：将含有特异性抗体的试剂加到组织切片上，使其与目标抗原结合。
特异性抗体可针对不同的抗原进行选择，如研究一些蛋白质的表达，可以选择该蛋白的特异性抗体。
5.二抗反应：一抗与抗原结合后，需要加入与该一抗来自不同物种的二抗。
二抗通常是免疫出来的，其与一抗结合后，可形成复合物，具有荧光或酶标记。
6.染色：最后，通过染色方法来显示抗原的表达。
染色可以是荧光染色或酶标染色。
荧光染色利用特定颜料对特异性标记的抗体进行荧光标记，并在荧光显微镜下观察。
酶标染色则使用酶标记的二抗，再加入相应的底物进行染色。
除了以上的基本步骤1.控制组：为了验证实验是否准确，通常需要设置阴性和阳性对照组。
阴性对照组通常是替代一抗的种属、浓度和机制抗体；阳性对照组是已知具有目标蛋白表达的组织切片。
2.负载密度和反应时间：一抗的负载密度和反应时间需要优化，以确保对目标蛋白的增强标识，同时最大限度地减少背景信号。
3.显微镜观察和图像分析：观察染色结果时，要选择合适的显微镜，以获得清晰的图像。
免疫组化流程
免疫组化流程免疫组化是一种利用抗体与特定抗原结合的技术，用于检测细胞或组织中特定分子的存在和分布。
其流程包括标本制备、脱脂、抗原修复、抗体处理、染色和显微镜观察等步骤。
本文将以免疫组化的流程为主线，介绍各个步骤的具体操作方法和注意事项。
第一步是标本制备。
要制备免疫组化的标本，可以使用细胞悬液、细胞刮片、冰冻切片或石蜡切片等。
标本制备的关键是保持细胞和组织的完整性和形态。
对于固定的细胞和组织，需要将其处理成适合免疫组化的形式，例如通过冰冻切片或石蜡切片的方法。
第二步是脱脂。
脱脂是将细胞或组织中的脂肪和非脂肪物质去除的过程，以便更好地显示目标分子的分布。
通常可以使用乙醇、醚或甲醇等有机溶剂进行脱脂处理。
需要注意的是，脱脂时间不宜过长，否则可能导致抗原失活。
第三步是抗原修复。
抗原修复是为了使被固定的细胞或组织中的抗原恢复或暴露出来，以便与相应的抗体结合。
常用的抗原修复方法包括煮沸法、酶解法和酸碱解法等。
不同的抗原修复方法适用于不同的标本类型和抗原性质。
第四步是抗体处理。
在免疫组化中，需要使用一种与目标分子特异性结合的抗体。
通常可以使用一抗和二抗的结合用于检测。
一抗是与目标分子特异性结合的主抗体，而二抗则与一抗结合，用于产生荧光或酶标信号。
在抗体处理过程中，需要进行固定、洗涤和孵育等步骤。
第五步是染色。
染色是将经过抗体处理的样本显色或标记的过程，以便更好地观察目标分子的分布。
染色的方法可以根据需要选择，常用的有免疫荧光染色、酶标染色和银染等。
在染色过程中，需要根据实验要求和标本特点进行适当的控制，以获得准确的染色结果。
最后一步是显微镜观察。
经过以上的操作，样本已经准备好进行显微镜观察和分析。
观察时需要注意光线的调节和对焦的正确，以获得清晰和准确的图像。
同时，还需要根据实验要求和预定的结果指标进行分析和解读。
总结起来，免疫组化的流程包括标本制备、脱脂、抗原修复、抗体处理、染色和显微镜观察等步骤。
每个步骤都需要精确控制和注意细节，以确保实验结果的准确性和可靠性。
免疫组化操作步骤
免疫组化操作步骤
免疫组化是一种常用的实验技术，用于检测和鉴定生物样本中的特定分子。
下面我会给出大致的免疫组化操作步骤，供你参考。
1.样本处理：将生物组织或细胞样本获取并处理成合适的形式，如切片或细胞悬液。
2.预处理：对于组织样本，可以使用甲醛等固定剂或冰冻保存。
对于细胞样本，也可以用1%的乙醇醋酸钠或甲醛冷冻保存。
3.抗原结构暴露：对于组织样本，可以使用抗原恢复液如缓冲盐水或热诱导抗原恢复等来暴露抗原结构。
对于细胞样本，可以用洗涤缓冲液洗涤，以去除细胞外蛋白质，并暴露出内部抗原。
4.阻断非特异性结合：使用非特异性结合物（如牛血清白蛋白、大肠杆菌蛋白等）进行阻断，以减少非特异性的背景信号。
5.抗体结合：加入目标抗体，与待测分子特异结合。
6.洗涤：洗涤掉未与抗体结合的废液，减少背景信号。
7.二抗结合：加入辣根过氧化物酶标记的二抗，与目标抗体结合，形成目标抗体-二抗复合物。
8.再次洗涤：冲洗掉未与二抗结合的废液，减少背景信号。
9.底物添加：加入染色底物，辣根过氧化物酶催化产生可见信号。
10.反应停止：停止底物活性，如加入酸性溶液。
11.显微镜观察：将样本放置在玻璃载玻片上，使用显微镜观察并记录结果。
12.图像分析：使用光学显微镜或荧光显微镜等设备获取图像，使用图像分析软件进行定量分析。
需要注意的是，实际操作中会根据具体的实验目的和技术要求进行适当的修改和调整。
免疫组化在科学研究和临床诊断中都有广泛应用，可以用于检测肿瘤标志物、病原体、免疫相关分子等，对于疾病诊断和治疗具有重要意义。
免疫组化方法
免疫组化方法
免疫组化是一种常用的实验技术，用于检测组织或细胞中特定蛋白质
的表达和定位。
其基本原理是利用特异性抗体与目标蛋白质结合，再通过
染色或荧光标记等方法来检测抗体与蛋白质的结合情况。
免疫组化方法主
要包括以下几个步骤：1.样品制备：将组织或细胞样品固定、切片或涂片
等处理，以便于后续的抗体结合和检测。
2.抗原修复：对于某些抗原易于
失活或难以检测的样品，需要进行抗原修复处理，如加热、酶解等，以恢
复抗原的结构和活性。
3.抗体结合：将特异性抗体加入样品中，与目标蛋
白质结合形成免疫复合物。
抗体可以是单克隆或多克隆，也可以是直接标
记或间接标记的。
4.洗涤：用缓冲液洗涤样品，去除未结合的抗体和杂质，以减少假阳性的干扰。
5.检测标记：将荧光标记、酶标记或金标记等标记
物加入样品中，与免疫复合物结合，以便于检测和定位。
6.显色或荧光：
通过染色或荧光显微镜等设备，观察样品中的免疫复合物的分布和定位，
以确定目标蛋白质的表达和定位情况。
总之，免疫组化方法是一种高灵敏度、高特异性的实验技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开
发等领域。
免疫组化实验步骤
免疫组化实验步骤免疫组化是一种常用的实验技术，用于检测蛋白质的存在和定位。
其步骤包括样本制备、抗原去原、阻断试验、一次抗体处理、二次抗体处理、显色和镜检。
下面将详细介绍每个步骤：1.样本制备：收集需要检测的样本，可以是细胞、组织或体液。
样本收集后，需要进行固定和切片处理，以保持细胞和组织结构的完整性。
2.抗原去原：蛋白质在组织中可能会被结构和其他因素影响，使其在免疫组化实验中难以被检测到。
因此，需要进行抗原去原处理。
常用的方法有热处理、酸碱处理、酶解处理等。
3.阻断试验：细胞和组织常常会存在非特异性结合位点，会使得后续的免疫反应变得模糊不清。
为了减少这种非特异性结合，需要进行阻断试验。
常用的阻断试验方法有牛血清白蛋白（BSA）、动物血清等。
4.一次抗体处理：在一次抗体处理步骤中，需要准备与目标蛋白质特异性结合的一次抗体。
将制备好的一次抗体加入样本中，使其与目标蛋白质发生反应，并形成抗原抗体复合物。
5.二次抗体处理：一次抗体只能与抗原结合，无法提供光学信号。
因此需要加入与一次抗体结合的二次抗体，该二次抗体与荧光物质或酶偶联，可以提供可视化信号。
常见的二次抗体有HRP（辣根过氧化物酶）、荧光染料等。
6.显色：通过加入合适的显色底物，可以使得与二次抗体结合的酶产生可见的颜色反应。
常用的显色底物有DAB（3,3'-二氨基联苯），其在酶的作用下会产生棕色的显色产物。
7.镜检：最后一步是使用光学显微镜对样本进行观察和分析。
通过镜检可以确定抗原存在的位置和分布情况，并对结果进行定量分析。
总结：免疫组化是一种确定蛋白质存在和分布的重要实验技术。
通过以上步骤的顺序操作，可以获得可靠的结果。
实验人员需要熟悉每个步骤的操作方法，并根据实验样本的要求进行调整和优化，以获得准确和可重复的结果。
免疫组化法实验操作步骤
免疫组化法实验操作步骤步骤一：取材固定1.将需要处理的组织或细胞样本，如切片或离心沉淀等，放置在含有适当浓度的固定试剂（如4%的中性缓冲甲醛）中，使其固定。
2.这一步的目的是保持蛋白质的结构和形态，使其对后续步骤的抗体反应更加稳定。
步骤二：脱水和包埋1.将样本从固定试剂中洗涤，并逐渐转移到乙醇溶液中，以脱水。
2.将样本转移到适当浓度的透明剂（如甲基丙烯酸甲酯）中，使其透明化。
3.最后，将样本包埋在合适的固化剂（如尼龙、蜡、树脂等）中，以便后续的切片操作。
步骤三：切片和烘干1.使用组织切片机将样本以适当的厚度切成切片。
2.将切片放置在加热平台上，烘干以去除切片中的水分。
步骤四：抗体处理1.使用适当的抗体稀释液将抗体与切片接触。
抗体可为一抗或二抗，具体选择取决于实验需求。
2.将切片放置在含有抗体的湿润孵育盒中，使其与抗体反应。
孵育温度和时间取决于抗体的要求，一般在4℃下孵育过夜。
步骤五：洗涤1.将切片取出，并置于洗涤缓冲液中，用于去除未结合的抗体。
2.反复洗涤3-4次，每次至少5分钟，确保切片完全清洗。
步骤六：标记1.添加适当浓度的二抗，如辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，与已经结合的一抗反应。
2.孵育切片与二抗共反应，孵育温度和时间根据试剂的要求进行。
步骤七：显色和染色1.使用合适的显色剂将切片进行显色。
常见的显色剂有DAB（二氨基联苯氧化物）和VIP（有机磷染料）等。
2.彩色染色可根据实验需求进行，可以使用核染料如伊红、快速伊红等对细胞核进行染色。
步骤八：石蜡去除和封片1.将切片浸入去石蜡溶液中，去除石蜡。
2.使用适当稀释的巴豆胶溶液将切片封闭，确保切片在显微镜下观察时保持湿润。
步骤九：显微镜观察1.将封片放置在显微镜载物台上，使用适当放大倍率的显微镜观察切片。
2.观察切片的染色情况、抗体标记的结果等，记录并进行分析。
这些是一般的免疫组化法实验操作步骤，根据具体实验需求和试剂要求，可能会有一些细微的差异和额外的步骤。
免疫组化基本步骤
免疫组化基本步骤免疫组化是一种研究细胞或组织中特定抗原表达的方法。
它是通过将已知抗原与未知组织或细胞的衍生物进行反应，然后通过可见光或荧光显微镜观察这些抗原的表达情况。
免疫组化的基本步骤如下：1.样本预处理：首先，需要对待检组织样本进行预处理。
这通常包括固定和包埋。
固定可以使用甲醛、乙醇等化学物质进行，目的是保持组织或细胞的形态结构和细胞膜完整性。
接下来，样本通常会被包埋在石蜡或冰冻剂中，以便进行切片。
2.切片制备：将处理后的样本切片。
通常可以使用切片机或超薄切片机将固定好的组织切成薄片，通常为4-10微米。
切片可以更好地展示组织结构和细胞的形态。
3.抗原恢复：根据需要，可能需要进行抗原恢复步骤。
抗原恢复是通过热或酶解的方法，来使抗原的免疫原性恢复。
这是因为在组织固定的过程中，抗原常常会被交联变性，丧失免疫反应性。
4.抗体染色：将待检样本与已知抗体进行反应。
已知抗体可以是单克隆或多克隆抗体。
这些抗体具有对特定抗原的亲和力。
反应通常在生物素-链霉亲和素体系或酶-抗酶（如辣根过氧化物酶）体系中进行。
通过这些反应，待检抗原会与抗体结合，形成抗原和抗体的复合物。
5.检测标记物：接下来，需要对已形成的抗原-抗体复合物进行检测。
这通常涉及到糖基化酶物质（如辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶）或荧光标记抗体。
检测标记物的选择取决于研究者的需求以及所使用的设备和系统。
6.显色：根据使用的检测标记物不同，需要进行相应的显色步骤。
对于辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶体系，可以使用底物通过化学反应产生颜色信号。
对于荧光标记抗体，可以通过激光或紫外线照射来使其发出荧光光。
7.显微观察：将显色后的样本放置在显微镜下进行观察。
根据待检抗原的位置和表达情况，可以通过显微镜来观察和分析组织或细胞中抗原的分布和表达水平。
免疫组化技术在医学研究和临床诊断中发挥着重要的作用。
它能够帮助研究人员了解组织或细胞中特定抗原的表达情况，从而深入了解疾病的发生机制，并且可以用于辅助诊断和病理分析。
免疫组化操作步骤
免疫组化操作步骤一免疫组化（法）操作步骤：1．切片常规脱蜡至水。
如需抗原修复，可在此步后进行2. 缓冲液洗 32 次。
3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色 , 将切片放在中孵育 10-15 分钟。
4. 缓冲液洗 52 次。
5. 滴加 V ，在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。
（注：孵育不要超过 10 分钟，否则会导致特异性染色降低。
如果一抗的稀释液中含有 5 － 10% 正常羊血清，这一步可以省略。
）6. 缓冲液洗 52 次。
7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 － 2 小时。
（具体孵育时间和温度由试验者最终决定）8. 缓冲液洗 52 次。
9 ．滴加 ( 增强子 ) , 在室温下孵育 20 分钟。
10 ．缓冲液洗 52 次。
11 ．滴加 ( 酶标二抗 ) ，在室温下孵育 30 分钟。
（注：对光敏感，应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。
）12 ．缓冲液洗 52 次。
13 ．向 1 ( 或 ) 中滴加 1-2 滴（或） , 混匀后滴加到切片上，孵育 3 － 15 分钟。
（具体时间由染色深浅决定。
）14 ．自来水充分冲洗 , 复染，脱水 , 透明 , 封片。
二．免疫组化 ( 三步法 ) 操作步骤：（ 1 ）、石蜡切片脱蜡至水。
（ 2 ）、 3 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。
（ 3 ）、蒸馏水冲洗，浸泡 5 分钟 x2 （如需抗原修复，可在此步后进行）。
（ 4 ）、 5-10% 正常山羊血清（稀释）封闭，室温孵育 10 分钟，倾去血清，勿洗。
滴加一抗工作液， 37 ℃孵育 1-2 小时或 4 ℃过夜。
（ 5 ）、冲洗， 5 分钟 x3 次。
（ 6 ）、滴加适量生物素标记二抗工作液， 37 ℃孵育 10-30 分钟。
（ 7 ）、冲洗， 5 分钟 x3 次。
（ 8 ）、滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液，37 ℃孵育 10-30 分钟。
免疫组化操作方法步骤原理
免疫组化操作方法步骤原理
免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过检测组织或细胞中的蛋白质表达来判断其状态的方法。
该技术被广泛应用于医学和生物学领域，用于诊断、研究和治疗疾病。
下面是免疫组化操作的步骤：
1. 标本采集和固定：对于组织样本，需要在切除后尽快固定，以保持其形态和蛋白质表达。
常用的固定剂包括福尔马林、乙醛和酒精等。
对于细胞样本，需要将其附着在载玻片上，使其保持完整。
2. 抗原修复：固定后的样本会导致抗原的变性和失活，需要进行抗原修复来恢复抗原的活性和可识别性。
常用的抗原修复方法包括热水浴、微波炉和酶处理等。
3. 阻断非特异性结合：在进行免疫染色前，需要阻断非特异性的结合，以避免假阳性的结果。
常用的阻断剂包括牛血清白蛋白、鱼肝油和酵母提取物等。
4. 抗体染色：将待测蛋白质与特异性抗体结合，形成免疫复合物。
常用的标记物包括酶标记、荧光标记和金标记等。
5. 信号放大：为了提高检测灵敏度，常使用信号放大剂来增加信号强度。
常用的信号放大剂包括多聚物和酶促反应等。
6. 显色：最后将样品显色，以显示出目标蛋白质在组织或细胞中的分布和表达情况。
常用的显色剂包括DAB、AP和HRP等。
免疫组化的原理是利用特异性抗体与待测蛋白质结合，形成免疫复合物。
该技术可以检测细胞和组织中的蛋白质表达，以研究它们在生理和病理过程中的作用和变化。
免疫组化技术的应用范围广泛，包括肿瘤诊断、药物研发和疾病机制研究等。
免疫组化步骤范文
免疫组化步骤范文免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种应用于组织学研究中的技术方法，用于检测和定位特定的抗原或蛋白质在组织或细胞中的表达。
免疫组化可以提供细胞和组织的一些重要信息，如蛋白质分布、定位和表达的数量。
以下是免疫组化的一般步骤：1.材料准备：-组织切片：将组织固定、包埋和切片。
-切片预处理：将切片置于载玻片上，并进行脱脂、水洗和固定处理。
2.抗原修复：-如果组织经过了形态改变或抗原损失，需要对切片进行抗原修复。
常见的方法有热处理（如煮沸、加热蒸汽、加热压力等）和酶处理（如胰蛋白酶、丝氨酸蛋白酶等）。
3.阻断非特异性结合：-切片上的非特异性结合位点可能与前体抗体非特异性结合，导致假阳性结果。
因此，需要将非特异性结合位点进行阻断，通常使用牛血清蛋白（如BSA或NGS）或非特异性抗体进行阻断。
4.一抗处理：5.洗涤：-用缓冲液对切片进行洗涤，以去除未结合的一抗和非特异结合的物质。
6.二抗处理：-加入二抗，即针对一抗的抗体。
二抗通常是与标记物连接的抗体，可以是荧光染料、酶或金纳米等。
7.洗涤：-用缓冲液对切片进行洗涤，以去除未结合的二抗和非特异性的结合。
8.标记物检测：-标记物可以是荧光染料、酶或金纳米等，它们与二抗结合形成复合物，并可通过荧光显微镜或酶反应显色方法来观察。
9.洗涤和封片：-用缓冲液对切片进行彻底的洗涤，以去除未结合的标记物或荧光染料。
然后，将切片用有机溶剂除去水分，然后使用封片剂覆盖并封装切片。
10.观察和分析：-将切片放入显微镜下观察和分析，如荧光显微镜观察、酶反应显色方法观察等。
可以通过比较反应强度、分布和定位等特征来分析抗原或蛋白质在组织或细胞中的表达情况。
以上是一般的免疫组化步骤，具体操作可能会根据实验设计和研究目的的不同而有所差异。
在进行免疫组化实验时，需要严格控制实验条件和相应的质量控制，以确保结果的可靠性和准确性。
此外，还需要根据具体的实验需求选择合适的抗体、标记物和检测方法，以及根据组织类型和抗原性质选择适当的抗原修复和阻断非特异性结合的方法。
免疫组化操作规程
免疫组化操作规程
《免疫组化操作规程》
免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断中的技术，其操作规程的严谨性和标准化对于获得准确可靠的结果至关重要。
下面是一份免疫组化操作规程供参考：
1. 样本处理：将组织标本固定在适当的条件下，然后进行蜡包埋并切片。
注意保护好标本的完整性和质量。
2. 抗原修复：对标本进行适当的热处理或酶处理，以修复由于固定等步骤导致的抗原构象变化。
3. 抗体选择：选择适当的一抗和二抗，确保一抗的特异性和敏感性，二抗的来源和标记物的稳定性。
4. 标本处理：将切片标本进行脱脂、脱水和透明化处理，确保标本的透明度和形态保持完好。
5. 抗体染色：将标本与一抗和二抗分别反应，通过荧光标记或酶标记来检测靶标记的位置和强度。
6. 阅读结果：采用专业显微镜观察标本的染色结果，进行定量分析或者定性分析。
7. 结果验证：通过对照组和阳性对照进行染色结果的验证，确
保结果的准确性。
8. 结果分析：根据染色结果和临床信息进行综合分析，作出科学可靠的结论。
以上是一份免疫组化操作规程的基本内容，但在实际操作中还需要根据具体的实验室条件和要求进行进一步的细化和规范化。
希望这份规程能为从事免疫组化工作的科研人员和临床检验人员提供一些帮助。
免疫组化超详细步骤
免疫组化超详细步骤免疫组化是用抗体识别特定蛋白质来检测组织和细胞中的蛋白质表达。
其可广泛应用于病理学、生理学和生物学等领域中。
下面将详细介绍免疫组化的步骤。
1. 组织处理首先，需要采集样本组织，常见的样本来源包括活体组织、固定组织和石蜡包埋切片。
不同的组织来源需要采用不同的处理方法。
对于新鲜的活体组织，可以通过切片、离心、冷冻等手段进行处理。
而对于已固定的组织，需要进行脱水、清洗、去蜡等前处理步骤。
同时，还需要注意保护蛋白质的完整性，以免影响后续细胞学的表达情况。
2. 抗原修复样本经过前处理后，可能会发生抗原损失或失活现象。
为了提高蛋白质的表达和稳定性，需要进行抗原修复处理。
一般采用的方法包括微波处理、煮沸处理、酶切处理等。
3. 样本烘干对于已经进行过前处理和抗原修复的样本，需要进行烘干处理，以免影响后续染色结果。
常见的方法包括空气干燥、乙醇除水、真空蒸发等。
4. 抗体选择根据实验需求，选择合适的一抗和二抗。
一抗是特异性识别目标抗原的抗体，一般是单克隆或多克隆的小鼠、兔、鸡等动物来源。
二抗是与一抗特异亚型相对应的抗体，主要用于增强信号。
二抗一般来自于不同阳性动物中。
5. 抗体稀释选定好的一抗和二抗，需要进行适当的稀释。
稀释倍数应根据抗体的浓度来控制，以获得最佳的信号与噪声比。
6. 组织切片将已处理好的组织切片成合适的大小，并摆放到载玻片上。
可以选用切片机、剪刀、切片钳等工具进行处理。
7. 抗体染色将稀释好的一抗液滴加到组织切片上，尽量润滑整个切片表面。
然后将切片在湿润的环境中孵育2-6小时，让一抗充分和目标蛋白质结合。
之后，将二抗液滴加到组织切片上，孵育30-60分钟。
通过荧光、酶标记、颜色标记等方式进行检测。
8. 洗涤处理组织切片在染色过程中会出现背景颜色可能会较强，影响实验结果的情况。
为了去除这些杂质，需要对切片进行洗涤处理。
一般采用的方法为不同性质的缓冲液进行多次反复的洗涤处理。
9. 封片组织切片染色完毕后，需要经过封片过程。
免疫组化操作程序
免疫组化操作程序免疫组化操作程序是一种用于检测特定蛋白质在细胞或组织中的表达及定位的方法。
它是一种广泛应用于生物医学研究和诊断中的技术，可以帮助我们了解细胞和组织中的分子机制并在疾病诊断中起到重要的作用。
本文将详细介绍免疫组化操作程序的步骤和注意事项。
一、实验前准备：1.样本准备：收集并固定适当的组织样本，使用适当的方法固定样本，如福尔马林或酒精。
2.抗体选择：根据所需研究的蛋白质，选择合适的一抗和二抗。
同时，选择用于检测的标记物，如酶、荧光物质等。
3.条件优化：根据本实验的具体情况，优化实验条件，包括温度、时间和浓度等。
二、免疫组织染色步骤：1.切片制备：将固定的组织样本切片，厚度约为4-6微米。
2.抗原修复：根据实验需求，选择适当的方法进行抗原修复，如高温加热、酶解或酸解等。
3.阻断非特异性结合：将组织切片加入阻断液，如10%牛血清蛋白（BSA）或5%牛血清中所含的非离子阻断剂。
封闭其非特异性结合位点。
4.一抗孵育：将选择的一抗溶液滴于组织切片上，孵育在适当的温度和时间下，让一抗与目标蛋白结合。
5.洗涤：用缓冲液清洗切片，去除未结合的一抗。
6.二抗孵育：将选择的针对一抗的二抗溶液滴于切片上，孵育在适当的温度和时间下，让二抗结合到一抗上。
7.洗涤：用缓冲液清洗切片，去除未结合的二抗。
8.标记物检测：根据选择的标记物，使用适当的方法检测其在切片上的存在，如化学染色、荧光显微镜等。
9.涂覆封片：将固定和染色好的切片放置在玻璃片上，并用适当的封片溶液覆盖切片。
三、实验注意事项：1.样本处理：合适的样本处理和固定方法对实验结果至关重要。
选择适当的固定剂并注意固定时间。
2.抗原修复：不同的抗原修复方法适用于不同的蛋白质，需要根据实验要求选择适当的方法。
3.阻断非特异性结合：添加适当的非特异性结合阻断剂能够减少非特异性结合。
4.孵育温度和时间：根据抗体和样本的特性选择适当的孵育温度和时间，以提高特异性和灵敏度。
免疫组化法实验操作步骤
免疫组化法实验操作步骤免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)是一种利用抗体与组织中的抗原特异性结合的技术。
它是一种重要的研究方法，可以用于检测和定位组织中的特定蛋白质和其他生化分子。
以下是免疫组织化学实验的一般操作步骤：1.样本处理：a.固定：将待检测的组织样本进行固定处理，以保持其形态结构并保留组织内的抗原。
b.切片：将固定的组织样本切成非常薄的切片（通常为3-5微米厚），并将其放置在载玻片上。
2.抗原解蓝（抗原恢复）：a.对于不同类型的组织样本，选择适当的抗原解蓝方法。
b.抗原解蓝可以通过加热、酶解或其他方法来恢复组织样本中的抗原。
3.阻断非特异性结合：a. 使用一种非特异性的蛋白质来阻断载玻片上未特异性结合的位点，例如牛血清蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)或小鼠免疫球蛋白(Mouse IgG)。
b.加入适当浓度的阻断剂，并孵育片玻片上的切片，以阻断非特异性结合位点。
4.主抗体孵育：a.加入含有特定抗原的主抗体溶液，其可以与组织样本中特定的抗原结合。
b.孵育片玻片上的切片，使主抗体与待检测的抗原结合。
5.洗涤：a.用缓冲液或PBS等洗涤溶液洗涤载玻片上的切片，以去除未结合的主抗体。
6.二抗孵育：b.孵育片玻片上的切片，使辅助抗体与主抗体结合。
7.洗涤：a.再次用缓冲液或PBS洗涤载玻片上的切片，以去除未结合的辅助抗体。
8.信号放大：a.可根据需要，使用染色剂或底物来增强或显色识别待检测抗原的结合位置。
b.例如，使用荧光染料或酶底物，通过显微镜观察或光镜观察，可使抗原可视化。
9.洗涤：a.最后一次用缓冲液或PBS洗涤载玻片上的切片，以去除未结合的染色剂或底物。
10.封片：a.加入适当的封片剂，如富含丙酮的溶液，将载玻片上的切片封装起来，以保护切片和保存染色结果。
免疫组织化学是一种复杂的实验技术，需要仔细的操作和精确的控制条件才能得到准确的结果。
免疫组化步骤
1.石蜡切片, 60摄氏度烤片1小时.2.脱蜡: 依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精, 二甲苯浸泡10分钟, 酒精浸泡5分钟.3.抗原修复: 在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温. 或用高压锅煮沸3分钟后冷却至室温。
4.灭火内源性过氧化氢酶：在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min。
5.血清封闭：将载玻片置于PBS中5min，洗2次，马上加上山羊血清封闭液。
6.加一抗：如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。
加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜。
MG7 使用浓度为2ug/ml左右; MG5使用浓度为3ug/ml左右(推荐1:100)；7.加二抗：PBS中洗3次，每次5min，加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。
8.加显色剂：PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。
镜下观察组织染色情况，适可而止。
9.复染：将显色后的片子用清水冲洗15分钟后，浸泡于苏木精中染色，一般为1-3分钟。
10.脱水：将复染后的片子置于水中冲洗5分钟后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。
每个试剂中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。
11.封片：用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。
抗体保存：分装后10-20ul/支存于-80摄氏度。
使用后剩余抗体存于4摄氏度不超过一周。
避免反复冻融。
免疫组化实验步骤
(一)免疫组化：
1、脱蜡和水化：
石蜡切片置于二甲苯中浸泡5min×2，再在无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇和PBS中分别浸泡3分钟。
2、抗原修复：
微波炉加热：在容器内加入柠檬酸钠缓冲液（pH6.0）后将组织芯片放入，中高火，加热5min，盖盖冷却15分钟，再加热3分钟，再开盖冷却20分钟。
3、染色
（1）PBS浸泡10分钟，3次。
（2）3%H2O2室温孵育30分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，
（3）PBS冲洗，10分钟，3次，血清封闭，室温孵育60分钟。
（4）滴加已稀释的一抗工作液，封口，4℃过夜。
（5）PBS冲洗，20分钟，3次。
（6）滴加生物素标记二抗100ul/片，室温孵育60分钟。
（7）PBS冲洗，10分钟，3次。
（8）滴加辣根酶标记链霉卵白素，室温孵育1h后PBS洗3 min×3。
（9）DAB显色剂显色100ul/片，3-10min，镜下观察，有棕黄色沉淀后自来水充分冲洗。
（10）苏木精复染，5-30分钟。
4、脱水封片
（1）50%乙醇、75%乙醇、90%乙醇中各浸泡1分钟。
（2）无水乙醇中浸泡2分钟，两次。
（3）无水乙醇和二甲苯1：1混合液浸泡2分钟。
（4）二甲苯浸泡2分钟，两次。
中性树脂封片。
免疫组化的步骤
免疫组化的步骤免疫组化是一种在细胞和组织中检测特定蛋白质的方法。
它是通过使用特异性抗体来标记和检测目标蛋白质的存在和定位。
免疫组化在生命科学研究和临床实验室中被广泛应用，可以用于研究细胞周期、诊断疾病以及评估药物治疗效果。
本文将详细介绍免疫组化的步骤。
第一步：取样和固定组织对于免疫组化分析，需要提取组织样本。
常见的样本来源包括组织切片、细胞培养物或动物实验的组织。
确保样本经过适当的处理和固定，以保持目标蛋白质的形态和结构的完整性。
常用的固定剂包括甲醛、乙醛等。
第二步：抗原修复抗原修复是为了恢复固定样本中的蛋白质的原始结构和形态。
常见的修复方法包括热处理、酶消化等。
热处理是将样本在高温水浴中加热，以使蛋白质重新展开。
酶消化是通过酶的作用，去除样本中的一些交联或修饰物质，以恢复抗原的可识别性。
第三步：抗体的选择和标记在免疫组化中，选择一个适当的抗体是至关重要的。
抗体可以选择单克隆或多克隆抗体。
单克隆抗体可以与目标蛋白质结合的特异性更高，但价格相对较高。
多克隆抗体则具有更广泛的适用范围。
抗体可以标记有不同的标记物，如荧光染料、酶或金标记等。
标记抗体的选择应基于实验目的和检测方法。
第四步：抗体和样本的孵育将选择好的抗体加入到固定样本中，使其与目标蛋白质结合。
这一步又称为孵育步骤。
孵育时间和温度取决于抗体的亲和性和实验要求。
通常，较长的孵育时间会提高目标蛋白质与抗体的结合效率。
第五步：洗涤洗涤步骤的目的是去除未结合的抗体和其他非特异性结合物质，以减少背景信号的干扰。
洗涤缓冲液的选择应根据实验要求和样本特点进行调整。
洗涤次数和时间应根据具体情况进行优化。
第六步：二级抗体的添加和孵育二级抗体是与一级抗体（与目标蛋白质结合）结合的抗体。
一级抗体通常是与标记物结合的特异性抗体，而二级抗体则是对一级抗体产生反应的抗体。
二级抗体可以标记有荧光染料、酶或其他可视化标记物。
添加二级抗体的目的是通过放大信号来增强目标蛋白质的检测。
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第一节免疫组化操作步骤及抗原修复（供参考）第二节免疫组化抗原热修复的技术要点（供参考）（一）、仪器设备
1.18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.
2.水浴锅
（二）、试剂
1.PBS缓冲液（一）
2.L柠檬酸钠缓冲液（CB,,1000m）
3.3%甲醇一H
20
2溶液：用30%H
20
2和80%甲醇溶液配制
4•风裱剂：a.甘油和L碳酸盐缓冲液（-等量混合b油和TBS （PBS）制
5. TBS/PB-适用于荧光纤维镜标本；适合光学纤维标本
（三）、操作流程
1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60C恒温箱
中烘烤20分钟。
a组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后在浸泡10分钟
b无水乙醇中浸泡五分钟
C95%乙醇中浸泡五分钟
d75%乙醇中浸泡五分钟
2、抗原修复：用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片：
抗原修复（免疫组化石蜡切片）用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片需要抗原修复
福尔马林固定的组织有可能破坏了原来组织的抗原结构，蛋白多肽发生交联，导致部分抗原表位封闭，结合位点减少，所以需要抗原修复，以暴露原来的抗原表位，达到充分显露
抗原，以不出现明显脱片现象为佳。
抗原修复的几种常用方法（供参考）
1.微波炉加热：在微波炉里加热枸椽酸钠缓冲液（）至沸腾后将组织芯片放入，断电，间隔5-10分钟，反复1-2次。
根据玻片情况可参考采用微波加热"-3 5-3法”3分钟温火沸腾后静止5分钟，再温火沸腾3分钟即可。
适用的抗原：来源于人、大鼠、小鼠的组织标本；来源于其他动物种属的组织标本：
2•沸热修复：电炉或水浴锅加热枸椽酸钠缓冲液（）至95 C左右，放入组织芯片加热10-15分钟。
3•高压热修复：在沸水中加入EDTA或枸椽酸钠缓冲溶液（）•盖上不锈钢锅盖，但不能锁定。
将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡五分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。
10分钟后除去热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。
此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。
（骨及软骨组织的标本最好选择较温和的微波加热修复）
4.酶消化方法：
常用％胰蛋白酶和％胃蛋白酶液。
胰蛋白酶使用前预热37C,消化时间约为
5-30分钟。
适用于被固定遮蔽的抗原：
包括.等
石蜡切片免疫组化染色步骤
1 •三步法（以SP试剂盒为例）
•石蜡切片脱蜡至水
•蒸馆水冲洗，PBS浸泡5分钟，如果采用抗原修复，可在此步后进行。
・3%H2O室温孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS中
洗，2分钟X3次。
・5-10%正常山羊血清封闭，室温孵育10分钟。
倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37C孵育1 ~2小时或4C过夜。
・PB冲洗，2分钟X3次。
•滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1%BSA-PB稀释)，37C孵育10~30分钟；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37 C或室温孵育10〜20分
钟。
・PB冲洗，2分钟X3次。
•滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素
(PBS稀释)，37C孵育10〜30分钟；或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37 C或室温孵育10-20分钟。
・PB冲洗，2分钟X3次。
•显色剂显色(DAB或AEQ
•自来水充分冲洗，复染，脱水透明、封片
•如果必要，可选用avdin封闭内源性生物素。
法
(1 )脱蜡、水化
(2)PBS洗2次各5分钟
(3)用蒸馆水或PBS配制新鲜的3%H2O2室温封闭5-10分钟，用蒸馆水洗3次
(4)抗原修复
(5)PBS洗5分钟
(6)滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟，甩去多余液体
(7)滴加抗50ul,室温静置1小时或4C过夜或37C 1小时
(8)PBS洗3次各2分钟
(9)滴加生物素化H抗，20C -37C 20分钟
(10)PBS洗3次各2分钟
(11)滴加试剂SABC 2© -30 C 20分钟
(12)PBS洗4次各5分钟
(13)DAB显色：试剂盒或自配显色剂显色
(14)脱水、透明、封片、镜检。
冰冻切片的免疫组化染色步骤
•速冻组织
•冰冻切片4~8呵，冰冻切片后如不染色，必须吹干，储存低温冰箱内，或进行短暂预固定后储存于-20C冰箱。
•室温放置30分钟后，入4C丙酮固定10分钟。
也可根据需要选择其他的固定方式。
・PB冲洗，5分钟X3次。
•用3%过氧化氢孵育5- 1 0分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。
・PB冲洗，5分钟X3次。
•下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤(滴加一抗开始)。
第二节免疫组化抗原热修复的技术要点(供参考)
1、抗原热修复温度和时间的关系
我们日常工作中所使用的组织固定液福尔马林会引起组织蛋白内或蛋白之间的亚甲基发生桥连，具体过程如下：
第一步基本反应福尔马林和氢反应形成新的化合物
第二步基本反应福尔马林和氢反应形成新的亚甲基桥
上述反应的结果导致许多抗原决定簇被封闭，而加热可以水解该桥连使抗原被激活。
影响抗原热修复的两个最关键的因素是温度和时间，有人将这两种因素对抗原修复的影响总结为下面的公式：
抗原热修复的有效性二加热温度（丁） X加热时间（t）
也就是说当我们修复时的温度越低则需要修复的时间就越长；反过来当修复温度增高时修复的时间可以适当地缩短，才能使抗原决定簇完全暴露，这种反比的关系从MBI单克隆抗体的实验结果表1中也可以清楚地看出。
时间和温度对染色的影响
时间（分钟）
100C 80C60C
5x2+ + + ----
5x6+ + + ++ + + —
5X 10 — + + + ++
10小时一一 + +
如果修复强度不够，免疫组织化学染色所显示的只能是修复后暴露的部分抗原决定簇，而不是组织所含的全部抗原。
这样的染色结果可能会非常弱，或岀现假阴性，即使是阳性结果，充其量只能起到定性的作用，不能适应今后对免疫组化进行定量的需要。
这就给我们诊
断中定量指标的应用带来困难，例如用来测定耐药的指标。
2、组织固定时间和所需的抗原热修复的关系
大量的实验表明，固定时间越长的标本，它所形成的桥连就越紧密，抗原就越难以被激活，所需要的修复强度也就越强。
有意思的是随着固定时间的延长，组织中蛋白对温度的耐受也相应增高（如图1所示），这可能就是我们对固定时间长的标本加大修复强度的理论基础。
固定时间和变性的关系
这就提醒我们在做回顾性的研究时一定要注意所使用的修复条件，它与新鲜标本的修复条件一定是有所区别的，同等条件下一定要加长修复的时间或提高修复所使用的温度，才可能得到比较满意的结果。
3、不同PH值抗原修复液对染色结果的影响
抗原热修复中所使用的修复液PH值也会对染色结果产生相当大的影响。
PH值对染色结果的影响大概可以分为以下四种情况。
A—稳定型，PH值对染色结果影响不大，如PCNAAE1、EMA、CD20等。
B—V型，高PH值和低PH值染色较好，而PH值牛5染色结果较差，如
ER、Ki-67 等。
C—上升型，随着PH值的增加，染色结果逐渐增强，如HMB45等。
D—下降型，随着PH值的增加染色结果逐渐减弱，当然这种类型的抗体只是个别的现象，如MOC31 o
一个有趣的现象值得注意，即在高PH值都有较好的染色结果，所以目前比较推崇的抗原修复液为高PH值得修复液，如ImMEDTA或等。
但是由于传统习惯，绝大多数医院和实验室都在使用的枸椽酸缓冲液。
综合以上各种抗体的染色状况，考虑到临床工作的实际情况，许多国外免疫组化专家建议，在常规的免疫组化工作中，全部选用高PH值得修复液来代替目
前广为使用的枸椽酸缓冲液。
为此，本公司已经推出和的新型抗原修复液。
经验证，绝大多数的抗体使用得修复液效果都要优于的枸椽酸，尤其是核阳性的抗体。
所以，在常规的免疫组化工作中，使用高PH值的抗原修复液是今后的必然趋势。
4、抗原热修复的手段
微波炉修复和高压锅修复的比较
温度压力v时间受热
微波炉100C 1P15~20分钟不均匀
高压锅120C喷气2分钟均匀
目前抗原热修复所采用的方法主要有微波炉修复和高压锅修复两种，从表中可以看出，由于高压锅修复具有温度均一、节省时间、效果稳定等特点，已经越来越受到人们的青睐。