实验四 斐林试剂法法测定还原糖含量(1)

实验四斐林试剂法测定果品蔬菜中还原糖含量

一、实验目的：

掌握园艺产品中糖的测定方法。

二、实验原理

利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。

斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。

三、试剂与材料

1、斐林试剂

甲：69.3g CuSO4.5H2O加水溶解并定容至1000ml；

乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml；

2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存；

3、0.2%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml；

4、碱式滴定管；

5、电炉，各种玻璃器皿。

四、操作方法

1、斐林试剂标定

取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入0.2%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在0.5－1.0ml)。

电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用0.2%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。

（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。）

2、样品滴定预备试验

同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%葡萄糖滴定至蓝色消失。记录耗用的葡萄糖量为V1。

3、样品滴定

同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml 0.2%葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。

五、结果计算

还原糖含量(以葡萄糖计)（g/ml)=（Vo-V)×0.002×1/10×n

式中：V o--------斐林试剂标定值，ml

V---------样品糖液测定值，ml

0.002-----标准葡萄糖溶液浓度，g/ml

10--------样品糖液体积，ml

n---------样品稀释倍数

六、思考题：

1、还原糖测定方法有哪些？

2、总结本实验方法测定还原糖应注意哪些事项？