酶免疫分析技术

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酶联免疫分析的基本类型和原理

酶联免疫分析的基本类型和原理酶联免疫分析（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种灵敏的免疫学分析方法，广泛应用于生物医学领域，包括基础研究、临床诊断、药物筛选等。

该方法基于抗原-抗体的特异性结合反应，将酶与抗体或抗原的结合，通过酶促反应的放大效应，实现对蛋白质的灵敏检测。

一、酶联免疫分析的基本类型根据实验设计的不同，酶联免疫分析可以分为直接法和间接法两大类。

1.直接法：将酶标记的抗体直接与抗原反应，通过检测抗原-抗体-酶复合物的吸光度来定量抗原。

这种方法适用于检测抗原含量较高的样品，如病毒、细菌等。

2.间接法：将酶标记的抗抗体与特异性抗体反应，通过检测抗抗体-抗体-酶复合物的吸光度来定量特异性抗体。

这种方法适用于检测特异性抗体含量较高的样品，如血清、血浆等。

二、酶联免疫分析的原理酶联免疫分析的原理是利用抗原-抗体的特异性结合反应，将酶与抗体或抗原的结合，通过酶促反应的放大效应，实现对蛋白质的灵敏检测。

具体步骤如下：1.包被：将抗原或抗体包被在固相载体（如聚苯乙烯酶标板孔）上，使其与样品中的抗原或抗体结合。

2.温育：将包被后的样品放入温育箱中，保持一定温度和湿度，使抗原-抗体结合反应充分进行。

3.洗涤：洗涤未结合的游离抗原或抗体，去除未结合的物质，使后续步骤中的酶促反应更加特异。

4.加入酶标抗体或酶标抗原：将酶标记的抗体或抗原加入到洗涤后的样品中，使其与已结合的抗原或抗体特异性结合。

5.温育：将样品再次放入温育箱中，保持一定温度和湿度，使酶促反应充分进行。

6.洗涤：洗涤未结合的游离酶标抗体或酶标抗原，去除未结合的物质，使后续步骤中的显色反应更加特异。

7.显色：加入底物溶液，使其与已结合的酶标抗体或酶标抗原中的酶发生显色反应，生成有色产物。

8.终止反应：加入终止液，停止显色反应，使有色产物不再生成。

9.检测：用酶标仪测定各孔的光密度值，通过与标准曲线比较，计算出样品中待测抗原或抗体的浓度。

《酶免疫分析技术》课件

生物工程
酶免疫分析技术在生物工程中广泛应用，如蛋白质表达、酶催化反应和抗体筛选等。
优点与局限
1 优点
酶免疫分析技术具有高灵敏度、高特异性、广泛适应性和操作简便等优点。
2 局限
酶免疫分析技术的局限主要包括影响因素较多、标记物抗原性和稳定性的要求高等限制。
总结
《酶免疫分析技术》是一种重要的生物分析方法，其原理和应用领域广泛。通过本课件的学习，我们对酶免疫分析技术有了更深入的了解，并了解到其优点和局限。谢谢大家的聆听！
为什么选择酶作为标记物？
酶具有活性强、稳定性好、催化效率高等特点，可以产生放大效应，大幅提高测定的灵敏度。
酶免疫分析技术的发展历程
酶免疫分析技术自20世纪70年代初提出以来，经过不断创新和发展，已成为生物医学和环境检测领域的重要分析方法。
酶免疫分析技术的原理
酶底物反应原理
酶标记的免疫试剂与待检测物结合后，通过酶底物的催化反应产生可检测的信号，如颜色、发光或电流。
《酶免疫分析技术》PPT 课件
这是一份《酶免疫分析技术》的PPT课件，通过本课件，我们将深入介绍酶免疫分析技术的原理、主要实现步骤、应用、优点与局限等内容。让我们开始学习吧！
绪论
什么是酶免疫分析技术？
酶免疫分析技术是一种高灵敏度、高特异性的生物分析方法，通过酶标记的免疫试剂与待检测物发生特异性反应，再利用酶对底物的催化作用产生信号。
3
信号产生
通过酶底物反应或其他方式，产生与待检测物浓度相关的可检测信号。
酶免疫分析技术的应用
医学诊断
酶免疫分析技术在临床医学中广泛应用，如血液病、感染性疾病和肿瘤标志物的检测。
环境监测
酶免疫分析技术可用于水质、土壤和空气中有害物质的监测，对环境污染的快速筛查具有重要意义。

酶联免疫分析法

• 基于抗原-抗体反应旳检测技术主要应用于下列几种方面：①用已知抗原检测未知抗体；
②用已知抗体检测未知抗原； ③定性或定量检测体内多种大分子物质； ④用已知抗体检测某些药物、激素等多种半抗原物质。
第一节酶联免疫分析概述
二、酶标识免疫分析法及常用标识酶 1、免疫分析法分类
第一节酶联免疫分析概述
白都是抗体。 • 例如无免疫活性旳免疫球蛋白（如骨髓瘤蛋白）就不
是抗体，尽管其构造与抗体相同。 • 抗体主要存在于血清内，但在其他体液及外分泌液中
也有存在。 • 抗原抗体分子之间存在着构造互补性和亲和性，使得
抗原与相应抗体之间极易发生结合反应，这种反应具有高特异性（即专一性）和可逆性。
第一节酶联免疫分析概述
• Gal催化β-D-半乳糖苷水解反应旳最适pH为7.5，转化效率很高，且比HRP易于标识，背景值低，稳定性好。
• Gal比活力应不少于30U/mg，5℃能保存1～2年。
第二节酶联免疫吸附分析法
一、光度酶联免疫分析 1 、酶联免疫吸附分析（ enzyme-linked
immunosorbent assay，ELISA）原理 ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面； ②抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或抗体； ③在测定时，使受检标本和酶标抗原或抗体按不同旳环
值也略高。 • ELISA载体旳形式有小试管、小珠和微量反应板。
第二节酶联免疫吸附分析法
3、固相载体旳包被与封闭（1）包被（coating）指将抗原或抗体连接到固相载体
上旳过程。 • 以聚苯乙烯微量反应板为例，一般先将抗原或抗体溶
于pH 9.6旳碳酸盐缓冲液（或pH 7.2旳磷酸盐缓冲液，pH 7～8旳Tris-HCl缓冲液）中，加满反应孔，置4℃过夜，洗涤即可。 • 包被浓度随载体和包被物旳性质可有很大旳变化，每批材料需经过试验与酶结合物旳浓度协调选定。 • 一般蛋白质旳包被浓度为0.1～20µg/ml。

酶免疫技术原理

酶免疫技术原理酶免疫技术是一种常用的实验技术，其原理是将酶标记的抗体与待检测物相互作用，通过检测酶标记的反应产物来间接检测待检测物的存在或浓度。

酶免疫技术可以用于检测抗体、蛋白质、核酸等生物分子，也可以用于定量或半定量分析。

酶免疫技术的步骤通常包括以下几个步骤：1.抗原或抗体的加样和固定将待检测物加入到试剂盒中的孔洞中，然后使其在盒子表面固定。

2.疫苗抗体的反应将已知的疫苗抗体加入到试剂盒孔洞中，使其与待检测物结合。

3.标记酶的加入将用于标记酶的物质加入到试剂盒孔洞中，使其可以与疫苗抗体结合。

4.洗涤用冷凝水或其他方式，将未结合的物质从孔洞中提取出来，以保证准确性。

5.色素反应加入染料或颜料，使得待检测物和标记酶协同反应，产生色素反应。

6.结果的读取和分析根据产生的颜色和染料的浓度，来分析待检测物的浓度和质量。

酶免疫技术通常有两种形式：1.间接ELISA间接ELISA是酶免疫技术中最常用的一种方法。

它利用酶标记的二抗与待检测物的一抗结合，通过检测酶标记反应产物来间接检测待检测物的存在或浓度。

间接ELISA具有灵敏度高、特异性好、反应快、操作简便等特点。

2.竞争ELISA竞争ELISA是利用酶标记的抗体与水相抗原或待测物相竞争结合的一种方法。

当待测物或水相抗原与标记抗体竞争时，标记抗体附着在固定物上的数量姗姗而后，细胞内的信号会变弱或消失。

通过测定标记抗体的数量，可以计算出被测物质的含量。

酶免疫技术是一种有效的生物分析技术，其通过简单的实验流程和基于酶反应的原理，可以快速准确地检测分析生物分子的存在和浓度。

酶免疫技术在生物医学、环境科学、食品质量检测等领域有广泛的应用。

1.免疫学研究酶免疫技术在免疫学研究中有着重要的作用。

利用酶免疫技术，可以检测和定量各种免疫球蛋白、细胞因子和细胞表面标志物，研究它们在疾病状态和治疗方案中的作用。

2.临床诊断酶免疫技术在临床诊断中也有很重要的应用。

可以用于检测肿瘤标志物、气道标志物和血液蛋白等，帮助诊断癌症、哮喘和重症肌无力等疾病。

酶免疫分析的名词解释

酶免疫分析的名词解释酶免疫分析（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的生物化学分析技术，通过利用酶作为信号标记以及免疫反应的特异性，可以准确、灵敏地检测和定量目标物质，包括抗体、抗原、蛋白质等。

1. 酶免疫分析的原理及步骤酶免疫分析的核心原理是将目标物质与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

该复合物在固定在固相载体上的抗体的作用下，使目标物质固定在特定位置。

而后，通过添加酶标记的二抗（即二级抗体）或联合酶-底物系统，使酶与抗原-抗体复合物发生反应，形成显色或荧光信号。

最终，通过光谱测量、比色测定或荧光测定，可以量化目标物质的含量。

酶免疫分析的步骤一般包括样品处理、免疫反应、洗涤、酶标记反应、洗涤和检测。

首先，需要对目标物质进行样品预处理，如稀释、去除干扰物质等。

接下来，将样品加入含有特异性抗体的固相底物，允许抗原-抗体反应发生。

然后，通过洗涤步骤去除未结合的物质。

加入酶标记的二抗或酶-底物体系，形成酶与抗原-抗体复合物。

经过再次洗涤后，将底物加入体系，产生可检测的信号。

最后，通过测定信号强度，可以定量目标物质的浓度。

2. 酶免疫分析的应用领域酶免疫分析在医学、生物学、生物制药等领域有着广泛的应用。

其中，常见的包括：2.1 临床诊断酶免疫分析可以用于检测疾病标志物、肿瘤标志物等，早期发现和诊断疾病。

例如，检测血液中特定蛋白质、抗体或血糖水平等，可用于诊断糖尿病、肝功能异常等病症。

2.2 药物研究和开发酶免疫分析可用于药物筛选、效价测定等。

通过测量药物分子与特定抗体结合能力的变化，可以评估药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄，从而指导药物设计和优化。

2.3 食品安全检测酶免疫分析可以检测食品中的残留农药、重金属、致病菌等有害物质。

通过快速、高效的检测手段，保障食品安全，减少人们食用风险。

2.4 环境监测酶免疫分析可用于检测环境中的污染物，如土壤、水体中的重金属、农药等。

酶联免疫法和化学发光法

酶联免疫法和化学发光法
酶联免疫法（ELISA）和化学发光法（CLIA）是两种常用的免疫分析技术，用于检测和定量生物分子，如蛋白质、抗体、激素等。

它们在实验室和临床诊断中广泛应用。

酶联免疫法是一种基于酶催化反应的免疫分析方法。

其基本原理是将待测物（抗原或抗体）与固相载体（如微孔板）上的抗体或抗原结合，然后加入酶标记的抗体或抗原，形成三明治复合物。

当加入底物时，酶会催化底物发生反应，产生可检测的信号，通常是颜色变化或荧光强度。

通过测量这些信号，可以定量待测物的浓度。

酶联免疫法具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，适用于大规模样本的检测。

它可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、激素、药物、病原体等。

常见的酶联免疫法包括间接法、夹心法和竞争法等。

化学发光法是一种基于化学发光反应的免疫分析方法。

其基本原理是将待测物与固相载体上的抗体或抗原结合，然后加入标记有发光物质的抗体或抗原，形成三明治复合物。

当加入触发剂时，发光物质会被激发并产生光信号。

通过测量光信号的强度，可以定量待测物的浓度。

化学发光法具有灵敏度高、线性范围宽、快速等优点，适用于微量和痕量分析。

它可以用于检测多种生物分子，如蛋白质、激素、药物、病原体等。

常见的化学发光法包括间接法、夹心法和竞争法等。

总的来说，酶联免疫法和化学发光法都是常用的免疫分析技术，它们各有优缺点，适用于不同的应用场景。

选择哪种方法取决于待测物的特性、检测要求以及实验室的设备和技术水平。

酶联免疫吸附法标准

酶联免疫吸附法标准
酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的免疫分析技术，用于检测和定量分析特定蛋白质或其它
分子的存在。

这种分析方法是基于抗原与抗体的高度特异性结合原理。

以下是酶联免疫吸附法的一般标准步骤：
1. 准备微孔板：将酶标板的孔洞涂覆有抗原或抗体，使其吸附
在微孔板上。

2. 样本处理：将待检样本经过必要的预处理，如稀释、清洗等。

3. 加入样本：将处理好的样本加入到微孔板中，使抗原或抗体
与样本中的目标物质结合。

4. 免洗步骤：根据实验需要，可能需要进行一些免洗步骤来清
除非特异性结合物质。

5. 加入检测抗体：加入检测抗体，用于与目标物质结合。

6. 再次免洗步骤：如有需要，进行免洗步骤来清除非特异性结
合物质。

7. 加入酶标记抗体：加入酶标记抗体，它与检测抗体结合形成
复合物。

8. 加入底物：加入底物，使酶作用并产生可测量的信号。

9. 反应停止：加入反应终止剂停止酶反应，停止信号产生。

10. 信号检测：使用酶标仪或其他测量设备测量底物反应产生的
信号强度。

11. 数据分析：根据标准曲线或其他定量方法，计算样品中目标
物质的浓度。

需要注意的是，ELISA的具体步骤可能会因实验目的、样品类型
等因素有所差异，以上所述仅为一般标准步骤。

第八章酶免疫技术

cloned enzyme donor immunoassay
酶放大免疫分析技术示意图
克隆酶供体免疫分析示意图
克隆β-D半乳糖苷酶的两种片段：酶受体（EA）和酶供体（ED）
二、异相酶免疫测定
与均相不同之处
需分离游离与结合的酶标记物
分类：液相酶免疫测定固相酶免疫测定
Ag+Ab-E
AgAb-E+Ab-E
物、激素等）
1、已知抗体包被于载体表面
1、已知抗体包被于载体表面
+
竞争法测抗原
-
E
E
E
3、加酶作用的底物不显色或显色弱
E
E
E
2、加待检物抗原与酶标抗原竞争与抗体结合
2、加待测物和酶标抗原，酶标抗原与抗体结合
E
E
3、加酶作用的底物显色
ELISA检测抗体的方法
间接法
方法
用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗抗体或二抗）加底物显色。
底物显色
1、固相化抗人 IgM 2、加待测物特异性IgM与非特异性IgM 和抗人IgM结合
1、固相化抗人 IgM
2、加待测物只有非特异性IgM 和抗人IgM结合
3、加特异性抗原，与特异性抗体结合
E E E
3、加特异性抗原，不能与非特异性IgM结合
+
E
E
4、加酶标抗体与特异性抗原结合，加底物显色
原理
酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变，不用分离结合和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性的改变，而确定抗原或抗体的含量。
均相酶免疫测定
最具代表性的两种技术

临床检验仪器第十一章临床免疫检验仪器习题

第十一章临床免疫检验仪器一、名词解释1.酶免疫分析技术：利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。

2.均相酶免疫分析法：检测过程中抗原抗体反应后，无需分离结合和游离的酶标记物，直接根据反应前后酶活性的改变进行待检物质测定的分析方法。

3.非均相酶免疫分析法：在酶免疫测定中，抗原抗体反应达到平衡后，需分离游离的和与抗原(或抗体)结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待测抗原(或抗体)含量的分析方法。

4.发光免疫分析技术：利用化学发光现象，根据物质发光的不同特征，即辐射光波长、发光的光子数，与产生辐射的物质分子的结构常数、构型、数量等密切相关，通过受激分子发射的光谱、发光衰减常数、发光方向等来判断分子的属性及发光强度进而判断物质的量的免疫分析技术。

5.免疫浊度检测：将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。

6.放射免疫分析技术：以放射性核素为标记物的标记免疫分析技术。

7.非均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，先把Ab*Ag 与Ab*分离，然后测定Ab*Ag 或A b*中的标记物的量，从而推算出标本中的A g 量的方法。

8.均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，Ab*Ag 中的标记物失去荧光特性，不需进行A b*Ag 与A b*的分离直接测定游离的A b*量，从而推算出标本中的A g 量的方法。

9.闪烁体：是将核辐射能激发分子转化成可探测闪光的荧光物质。

常用的有有机闪烁体、无机闪烁体和特殊闪烁体等。

10.时间分辨荧光免疫分析：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素及其螯合物(如 Eu3+螯合物) 作为示踪物标记抗原、抗体、核酸探针等物质，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术。

11.化学发光免疫技术：在检测化学反应中，某些化学基团被氧化后形成激发态，并在返回基态的同时发射一定波长的光子。

仪器利用这种化学基团标记在免疫分析的抗原或抗体上所建立起来的免疫分析为化学发光免疫分析。

酶免疫技术名词解释

酶免疫技术名词解释酶免疫技术是一种广泛应用于生命科学、生物技术和医学领域的技术。

它是利用酶作为探针，实现分子分析和检测的一种方法。

酶免疫技术拥有许多独特的优点，如高度灵敏、特异性强、操作简便等，因此被广泛应用于临床诊断、生物医学研究、环境监测和食品安全等领域。

下面是一些关于酶免疫技术相关的名词解释。

1. 酶标记：酶标记是指在酶免疫技术实验中，通过对探针分子进行修饰，使其与酶结合并形成稳定的复合物。

这种复合物可以作为信号源，在检测过程中被检测出来。

2. 性能参数：在酶免疫技术实验中，用来评估探针的性能的参数。

包括特异性，敏感性，可重复性等。

这些参数决定了实验的可靠性和准确性。

3. 单抗：单克隆抗体（Monoclonal Antibody，mAb）是一种特殊的抗体，可与目标分子的特定区域（表位）结合。

在酶免疫技术实验中，单抗被广泛应用于酶标记和检测分析。

4. 酶免疫法（ELISA）：酶免疫法是一种利用酶做为标记物，通过对抗体与抗原之间的特异性结合来检测抗原或抗体的方法。

这种方法广泛应用于多种疾病的诊断和治疗。

5. 酶反应体积：在酶免疫技术实验中，所需的反应体积越小，检测灵敏度越高。

然而，不同反应最优的体积需要通过实验来确定。

6. 活化酶底物：活化酶底物是一种反应物，被酶催化后可以产生可检测的信号，如荧光、发光、吸收光谱等。

在酶免疫技术实验中，活化酶底物被广泛应用于酶标记和检测分析。

7. 酶聚合素链反应（EPCR）：酶聚合素链反应是一种利用DNA聚合酶复制DNA分子的技术。

在酶免疫技术中，EPCR被广泛应用于检测遗传学分析。

8. 分子探针：分子探针是一种有机分子，在酶免疫技术中用于特定分子的检测。

它们可以与互补的DNA或RNA 配对，并用作免疫试剂或标记物。

分子探针在分子诊断学中起着至关重要的作用。

9. 酶抑制剂：酶抑制剂是一种分子化合物，可以抑制酶的活性。

在酶免疫技术中，酶抑制剂被广泛应用于检测分析中，以增加检测灵敏度和准确性。

酶免疫分析技术

ELISA
（测抗原）
4. 双位点一步法ELISA
• 基本原理：应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体包被和酶标抗体，待检测抗原和另一个经酶标记单抗同时加入，形成固相单抗－待检抗原－酶标单抗复合物，加入底物显色后，根据颜色深浅对待检抗原进行定性或定量。
5. 竞争ELISA
• 竞争法测抗体：待测抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。 • 竞争法测抗原：待测抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合，结果如待测抗原含量越多，与固相抗体结合的酶标抗原就越少，显色越浅，二者呈负相关。
三、ELISA基本操作程序
• (1)包被（coating）：使抗原或抗体吸附于固相载体表面。其机制可能是聚苯乙烯表面间的疏水基团可以无选择性地吸附蛋白分子。
• (2)封闭（blocking）：固相吸附蛋白是非特异性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力，为了保障抗原抗体反应的特异性，因此，包被剩余的固相表面应该用抗原抗体反应无关蛋白封闭。
加一抗
加酶标二抗
加底物和显色
3. 双抗体夹心ELISA
• 基本原理：将包被在微量反应板上的已知抗体与待检抗原进行反应，再加上酶标抗体和底物，通过显色反应对抗原进行定性或定量。此法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原。
• 此法适用于多价大分子抗原检测，而不能用于测定半抗原等小分子物质。
双抗体夹心
与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
IgG的一级结构
三、抗原抗体反应
抗原抗体反应：指抗原与相应杭体之间所发生的

酶免疫分析技术

物后的显色程度确定待检抗体含量。
第七章
酶免疫分析技术
间接法检测抗体
酶标二抗标本（含抗体）固相抗原 E
E
底物
E
第七章
酶免疫分析技术
2．技术要点
（1）将特异性抗原包被于固相反应板上，洗涤。（2）加稀释的受检血清，洗涤。（3）加酶标二抗，洗涤。
（4）加底物显色，颜色深度代表标本中待检抗体
的量。
稀释后重新测定。
第七章
酶免疫分析技术
（三）竞争法检测抗原 1．原理
酶标抗原和待检抗原对固相特异性抗体具有
相同的结合力，二者竞争结合固相特异性抗体。免疫反应后，结合于固相的酶标抗原量与标本中待检抗原含量呈反比。待检抗原量越多，酶标抗原与固相抗体结合越少，底物显色反应越浅；反
之则显色越深，即底物显色与待检标本中抗原含
目
1 2 3
录
概述酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验的应用和注意事项其他酶标记免疫测定技术
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4
第七章
酶免疫分析技术
酶免疫分析技术的分类
酶免疫组织化学技术酶放大免疫测定技术酶免疫分析技术酶免疫测定技术非均相酶免疫测定液相酶免疫测定均相酶免疫测定克隆酶供体免疫测定固相酶免疫测定
第七章
酶免疫分析技术
（三）β-半乳糖苷酶
（β-galactosidase，β-Gal）
源于大肠埃希菌，常用于均相酶免疫测定。
β-Gal 的底物
4-甲基伞酮基βD半-乳糖苷（ 4MUG ）
酶作用后，生成高强度荧光物，用荧光计测量。
第七章
酶免疫分析技术
（四）其他酶在商品试剂中，经常应用的酶还有葡萄糖

《酶联免疫分析法》课件

酶联免疫分析法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
酶联免疫分析法广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域。
分类：直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等应用：临床诊断、药物研发、食品安全检测、环境监测等领域优点：灵敏度高、特异性强、操作简便、成本低等局限性：存在假阳性和假阴性结果，需要标准化操作和严格的质量控制
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CONTENTS
PART ONE
PART TWO
酶联免疫分析法（ELISA）是一种免疫学检测方法，用于检测样品中的抗原或抗体。
原理：利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过酶催化底物产生颜色反应，从而定量或定性检测样品中的抗原或抗体。
优点：灵敏度高，特异性强，检测速度快，操作简便缺点：成本较高，需要专业人员操作，容易受到环境因素影响
PART THREE
抗原选择：选择合适的抗原，如蛋白质、多肽等
抗原标记：将抗原与酶或荧光素等标记物结合
添加标题
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抗原纯化：通过离心、层析等方法纯化抗原
抗原保存：将标记好的抗原保存在适当的条件下，如低温、避光等
检测水中有机污染物：如农药、多环芳烃等
检测土壤中的污染物：如重金属、有机氯农药等
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
检测空气中的污染物：如二氧化硫、氮氧化物等
检测生物体内的污染物：如农药残留、重金属等
蛋白质定量分析：通过酶联免疫分析法检测蛋白质的浓度抗体检测：通过酶联免疫分析法检测抗体的存在和浓度细胞因子检测：通过酶联免疫分析法检测细胞因子的存在和浓度基因表达分析：通过酶联免疫分析法检测基因的表达水平和调控机制

EIA法

酶免疫分析（Enzyme Immunoassay,EIA）是标记免疫分析中的一项重要技术,是以酶标记的抗体（抗原）作为主要试剂，将抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和专一性结合起来的一种免疫检测技术。

作为经典的三大标记技术之一,酶免疫技术在检验医学中得到广泛应用并不断得到更新，不断和其他先进技术如荧光、发光技术以及仪器自动化相融合，日臻完善,许多自动化仪器实际上是EIA技术和其他现代化技术的复合体，其分析敏感度已达到甚至大大超过放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)的水平，因试剂稳定无放射性污染且分析形式日趋多样化，简易灵活，临床应用广泛而倍受重视。

1、酶免疫分析的技术进步近年来，EIA技术取得了显著的发展，主要表现在以下方面：1.1.继单克隆抗体后的第三代抗体基因工程抗体的应用，明显地提高了检测的特异性，基本消除了抗原、抗体间的非特异性交叉反应，保证了分析的准确性。

抗体制备技术的进步，使试剂的生产制备得以规模化，检测范围日益扩展，小分子抗原、半抗原的检测成为事实。

1.2.分析方式的改进与多样化提高了试验的敏感性。

1.2.1.除早期的竞争法，间接法外，又发展了双抗原夹心法测抗体，偶联酶标记法测抗原，桥联酶免疫分析，酶放大免疫分析技术等，后者应用了生物素-亲和素系统，底物循环放大系统，酶-抗酶放大系统及酶偶联放大系统等。

1.2.2.由于酶标记技术的进步，标记酶的应用已从过氧化物酶，扩展到碱性磷酸酶，β半乳糖苷酶，尿素酶，葡萄糖6磷酸脱氢酶，葡萄糖氧化酶，苹果酸脱氢酶，至今有二十多种酶被应用于EIA ，但应用最多的仍然是辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）和碱性磷酸酶（Alkalinephasphotase，ALP）。

1.2.3. 酶免疫分析与其它标记免疫分析相结合如与荧光免疫分析（Fluorescence Immunoassay ,FIA）结合形成荧光酶免疫分析（Fluorescence Enzyme Immunoassay ，FEIA），酶促放大时间分辨荧光免疫分析（Enzyme-am-plified time-resolved fluoroimmunoassay ，EATRFIA），EIA与化学发光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）结合形成酶—化学发光免疫分析，增强化学发光酶免疫分析（ECLEIA）。

酶免疫分析仪

图
结果
测定结束后，保存测定结果，并用外置打印机打印结果
关机
卸载样品盘，清洗管路后关闭仪器
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（二）仪器的维护
• 酶免疫分析仪是一种精密的光学仪器，良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。
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安装要求
①仪器放置在无强磁场和干扰电压且噪音低于40分贝 ②操作环境空气清洁，温、湿度适宜 ③避免阳光直射，以延缓光学部件的老化 ④操作时电压应保持稳定 ⑤保持工作台面干燥、干净、水平，有足够操作空间
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五、仪器的操作与维护与常见故障处理
开机
（一）
参数设置
操
接通接线板电源，打开酶标仪器开关，仪器开始自检，自动预热2~3分钟。
打开酶联软件，进入主菜单，选择测量模式以及某些参数作流Fra bibliotek样品装载
将离心好的样品，放入样品盘，选择相应的测定程序以及试剂盘。
程
样本测定
检查无误后，按”开始”键，酶标仪对样品开始进行测试
2
酶免疫分析仪
• 酶免疫分析（enzyme immunoassay，EIA）
❖目前临床免疫检验最常用的分析技术，具有灵敏度高，特异性强，试剂稳定，操作简单、快速且无放射性污染等优点。
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3
一、酶免疫分析仪的分型
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4
（一）酶免疫分析技术的分类
• 根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为：
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（二）酶免疫分析仪的类型
• 根据固相支持物的不同而设计成的酶免疫分析仪可以分为微孔板固相酶免疫分析仪管式固相酶免疫分析仪微粒固相酶免疫分析仪磁微粒固相酶免疫分析仪

酶免疫分析技术在生物药物分析中的应用

酶免疫分析的优点与局限性
优点
高灵敏度、高特异性、操作简便、适用于大量样本检测等。
局限性
对某些结构相似的物质可能存在交叉反应，对某些小分子物质检测效果不佳，以及易受非特异性背景干扰等。
03 酶免疫分析技术在生物药物分析中的应用实例
生物药物中蛋白质的分析
蛋白质的定量分析
酶免疫分析技术可以用于蛋白质的定量分析，通过标记酶和抗体结合，利用酶催化底物反应产生光信号或电信号，实现对蛋白质的定量检测。
02
通过酶免疫分析技术，可以快速、准确地检测生物药物中的有效成分和杂质，为药物质量控制提供了有力支持。
03
酶免疫分析技术的应用，还推动了相关领域的技术创新和产业升级，为生物医药产业的可持续发展做出了重要贡献。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
酶免疫分析技术可以用于各种不同类型的生物药物分析，包括小分子和大分子药物、蛋白质、细胞因子等。
酶免疫分析技术可以与自动化仪器相结合，实现高通量、自动化的药物分析，提高了分析效率。
酶免疫分析技术的挑战
交叉反应
尽管酶免疫分析技术的特异性较高，但仍有可能出现交叉反应，影响检测结果的准确性。
样品处理
生物样品的处理和前处理对酶免疫分析技术的结果有很大影响，需要严格控制样品的质量和处理方法。
成本较高
酶免疫分析技术需要使用昂贵的试剂和仪器，导致分析成本较高。
酶免疫分析技术的发展前景
新技术的应用
随着新技术的发展，如纳米技术、微流控技术等，酶免疫分析技术有望实现更快速、更灵敏、更简便的药物分析。
蛋白质的定性分析
通过酶免疫分析技术，可以检测蛋白质的特异性抗原或抗体，从而对蛋白质进行定性分析，有助于确定蛋白质的来源和功能。

酶联免疫分析技术

酶联免疫分析技术1971年瑞典学者Engvail和Perlmannn,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，称为酶联免疫吸附试验)。

其基本原理与RIA相同。

先将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上，并保持其免疫活性。

测定时，将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。

用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离成分。

然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量测定。

最初发展的免疫酶测定方法。

是使酶与抗体或抗原结合，用以检查组织中相应的抗原或抗体的存在。

后来发展为将抗原或抗体吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶染色，底物显色后用肉眼或分光光度计判定结果。

这种技术就是目前应用最广的酶联免疫吸附试验，俗称ELISA (enzyme linked immunosorbant assay)。

众所周知, 酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可导致大量的催化过程，所以极为敏感。

免疫酶技术就是将抗原和抗体的免疫反应和酶的催化反应相结合而建立的一种新技术。

酶与抗体或抗原结合后，既不改变抗体成抗原的免疫学反应的特异性，也不影响酶本身的酶学活性，即在相应而合适的作用底物参与下，使基质水解而呈色，或使供氢体由无色的还原型变为有色的氧化型。

这种有色产物可用肉眼、光学显微镜相电子显微镜观察，也可以用分光光度计加以测定。

呈色反应显示了酶的存在，从而证明发生了相应的免疫反应。

所以，这是一种特异而敏感的技术，可以在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。

酶联免疫吸附试验原理酶联免疫吸附试验是一种固相免疫测定技术，其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

测定时，将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应，后加入酶标抗体与免疫复合物结合，用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分，最后加入酶反应底物，根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法。

临床免疫学检验(名解及答题)

临床免疫学检验【名词解释】1、enzyme immunoassay（EIA）酶免疫分析技术，是以酶标记的抗体（抗原）作为主要试剂，将酶高效催化反应的专一性和抗原抗体反应的特异性相结合的一种免疫标记检测技术。

2、colloidal gold immunoassay胶体金免疫技术，是以胶体金作为示踪标记物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种标记免疫测定技术。

3、immunoblot test（IBT）免疫印迹试验，是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的技术。

4、precipitation reaction沉淀反应，指可溶性抗原与相应抗体在适当的条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。

5、agglutination reaction凝集反应，指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。

6、immunogen免疫原，指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。

7、adjuvant （immunoadjuvant）佐剂（免疫佐剂），指预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质。

8、hapten半抗原，指仅有抗原性而无免疫原性的物质。

如多糖、多肽、类脂和核酸等物质。

9、monoclonal antibody（McAb）单克隆抗体，设法将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体。

10、Polyclonal antibody（PcAb）多克隆抗体，亦称免疫血清，用抗原以不同途径免疫动物，从动物血清中获取抗体，该类含有抗体的血清称为抗血清。

由于免疫动物的抗原往往具有多种抗原表位，可激活体内多个B细胞克隆产生针对抗原多种表位的混合抗体，因而抗血清也称为多克隆抗体。

11、tumor antigen肿瘤抗原，指细胞癌变过程中新出现的或异常表达的抗原物质。

临床检查项目——酶免疫分析技术

临床检查项目小结
凝集反应
ABO血型鉴定、菌种诊断或分型、交叉合血、肥达反应、TRUST、TPPA、TPHA、RF、ASO、肺炎支原体
沉淀反应
血清M蛋白测定
免疫比浊分析
免疫球蛋白IgG/IgA/IgM、CRP、ASO、RF、Alb
酶免疫分析技术
抗-HA V、“乙肝两对半”、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP、抗-ENA抗体、抗dsDNA 抗体、AHA、AnuA、AFP、CEA
金标记免疫分析技术
尿HCG、抗结核抗体、HBsAg、粪便OB试验、粪便轮状病毒、TPPA、TPHA、RF、ASO
荧光免疫技术
总ANA
发光免疫分析
甲状腺激素（T3、T4）、TSH、β-HCG、人生长激素、AFP、CEA、PSA、雌二醇、孕酮、卵泡刺激素、黄体生成素、胰岛素、C肽、肌钙蛋白-1、地高辛、环孢素、洋地黄。