新生儿促甲状腺素的时间分辨荧光免疫分析及其试剂盒研精编版
天水地区新生儿先天性甲低现况调查研究
天水地区新生儿先天性甲低现况调查研究摘要】目的为了了解天水地区新生儿先天性甲状腺功能低下症的发病情况。
方法采用时间分辨荧光免疫分析法，测定新生儿出生72 h后足跟血的干血滤纸片中的促甲状腺激素(TSH)浓度，仪器和试剂均由芬兰PE公司提供，样本按照《新生儿疾病筛查技术规范》采集和递送。
结果共筛查本地区新生儿88081例，确诊甲状腺功能低下31例。
结论本地区新生儿先天性甲状腺功能低下症发病率为1:2841，为该类疾病的防治提供了科学依据。
【关键词】新生儿疾病筛查先天性甲低促甲状腺激素先天性甲状腺功能减退（CH），是新生儿先天性疾患的一种多发病，也是儿童时期常见的致残性疾病。
由于先天性甲状腺发育障碍或甲状腺素合成障碍导致甲状腺素分泌减少,使患儿神经系统发育障碍、生长发育迟滞、智能落后、严重者可致聋、哑、呆傻、瘫痪、丧失劳动能力。
先天性甲低治疗时间越早预后越好，大多数早期治疗病例均可获得较高智商，学习成绩满意。
新生儿促甲状腺素（TSH）浓度升高是先天性甲状腺功能低下症的最早实验室指标。
由于它的高度特异性和敏感性，检测分析新生儿促甲状腺素（TSH）浓度成为筛查诊断新生儿先天性甲状腺功能低下的第一选择，目前已把新生儿甲状腺功能低下症筛查作为优生优育、儿童保健、提高人口素质、防止CH该类疾病发生的重要措施之一。
1 对象与方法1.1筛查对象 2009年9月-2012年2月在天水地区新生儿疾病筛查中网络医院出生的新生儿88081例。
按《新生儿疾病筛查技术规范》采集和递送样本，标本采自出生72h充分哺乳6次以上的新生儿足跟血，滴于专用滤纸上，每例采集3个血斑，每个血斑直径＞8mm,采样滤纸于室温下自然晾干后置于密封塑料袋内，保存在2-8℃冰箱中，于5个工作日内由专人递送或邮寄到筛查中心。
1.2筛查方法 CH检测指标为新生儿样本干滤纸血片中的TSH浓度，试剂用进口芬兰PE公司生产的新生儿TSH荧光测定试剂盒，用现阶段最敏感时间分辨免疫荧光分析法按实验要求对新生儿样本干滤纸血片中的TSH浓度进行测定。
新生儿先天性甲状腺功能减低症筛查实验影响因素
选择同一组T S H高值新生儿血样，按照不同的时间洗脱，其测定结果见表3。表中可见，洗脱时间过短可导致T S H测定结果降低，最佳洗脱时间以12小时为宜。
表3洗脱时间对干血片TSH测定结果的影响
讨论
1.保障新生儿筛查实验质量一直是世界关注的问题，据报道，目前尚没有一种十分完善的筛查方法可以使漏诊率降为0。在通过不断加强人员质量意识、责任意识教育，加强各筛查环节的质量控制克服漏诊的主观因素之后，选择灵敏度高、特异性强的筛查实验方法，克服影响实验结果准确性的各种因素对减少漏诊显得尤为重要。
新生儿先天性甲状腺功能减低症筛查实验影响因素
摘要】目的探讨新生儿筛查滤纸干血样测定促甲状腺素（同时）的影响因素。方法用时间分辨荧光免疫法探讨多方面实验影响因素，观察其规律。结果新生儿筛查实验影响因素众多，TSH测定：72小时后采血结果稳定，季节间TSH水平有差异，建议使用不同筛查切值；滤纸血样自然干燥易于洗脱。结论某些因素影响筛查结果，选择最佳实验条件，能较好保证新生儿筛查实验质量。
【关键词】新生儿筛查滤纸干血样促甲状腺素
【中图分类号】R722.19【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）02-0219-02
目前，国内新生儿筛查广泛实施，主要以滤纸干血片采血法检测促甲状腺素（TSH）筛查新生儿中先天性甲状腺功能低下症。由于滤纸为其取样载体，加之被测物在血液中含量甚微，其检测结果容易受多种因素的影响。因此,系统探讨新生儿筛查实验的影响因素，减少或避免漏诊，是当前国内新生儿筛查蓬勃开展之际，极为必须的工作。对此对滤纸干血片采血法的诸实验影响因素进行了探讨，现报道如下。
材料和方法
1.血样收集：烟台市辖区内新生儿出生后72小时的血样2～4滴，要求血斑直径大于8 m m，浸透滤纸正反两面，于不同条件下干燥血样4479例，放专用塑料袋中4～10℃保存，集中送筛查中心实验室检测。
促甲状腺激素(TSH)测定试剂(荧光免疫层析法) 产品技术要求万孚
1.性能指标
1.1外观检查
外观应平整，材料附着应牢固，各组分应齐全、完整，标签清晰，卡固定紧密，液体无渗漏。
1.2物理检查
膜条宽为 4.0±0.5mm ；液体移行速度应不低于10mm/min。
1.3准确性
对于没有配备系列校准品的试剂盒，可在试剂盒规定的测量范围内检测国家标准品，其实测值与理论值之比应在0.850~1.150 之间。
1.4最低检出限
应不高于0.1 mIU/L。
1.5剂量-反应曲线的线性
在（0.1~100）mIU/L 区间内，用双对数或其他适当的数学模型拟合，剂量- 反应曲线线性相关系数（r）应不小于0.9900。
1.6精密度
1.6.1分析内精密度
手工操作试剂盒参考品测定结果的变异系数(CV)应不大于15%。
1.6.2批间精密度
在多个不同批次产品之间，参考品测定结果的变异系数(CV)应不大于20%。
1.7特异性
1.7.1与促卵泡生成素（FSH）
浓度不低于200mIU/mL 的FSH，在本试剂盒上的测量结果应不高于本试剂盒的最低检出量水平。
1.7.2与促黄体生成素（LH）
浓度不低于200mIU/mL 的LH，在本试剂盒上的测量结果应不高于本试剂盒的最低检出量水平。
1.7.3与人绒毛膜促性腺激素（hCG）
浓度不低于1000mIU/mL 的hCG，在本试剂盒上的测量结果应不高于本试剂盒的最低检出量水平。
1.8分析间精密度
在 3 次独立分析之间，参考品测定结果的变异系数（CV）应不大于20%。
新生儿甲状腺功能低下筛查的探讨
新生儿甲状腺功能低下筛查的探讨总结对新生儿先天性甲状腺功能低下症的筛查和探讨，了解先天性甲状腺功能低下症的发病率及治疗方法。
通过对17543名出生72 h的新生儿采集足跟末梢血，以时间分辨免疫法测血斑中促甲状腺激素（TSH）。
结果：新生儿筛查结果显示，初筛阳性病例185例，确诊11例。
结论：先天性甲状腺功能低下症因其初期没有明显表征容易导致误诊，尽早进行新生儿筛查可以有效减少误诊率，使患儿得到早期诊断和治疗，避免发生不可逆的智能障碍，防止症状的发生和发展。
标签：CH，TSH，新生儿筛查先天性甲状腺功能低下（congenital hypothyroidism，CH），是儿童时期常见的智残性疾病，又称呆小病，发病初期没有明显表现，但是当症状出现后，则是不可逆的，该病发现延迟对儿童智力发育有巨大影响。
因为此病可能导致身材矮小，智力低下。
CH在全球的平均发病率为1：3000～1：4000。
由于该症所致智力障碍是可预防性的，因此早期的诊断和治疗尤为重要。
根据相关报道证明，在2个月内（尤其是一个月内）发现症状并及时治疗，除先天甲状腺缺失患者外，只要终身服药，可以维持智力基本正常。
10个月以后发现并着手治疗的，智商恢复水平只能达到原有智力水平的八成左右，2岁以后发现的病例，基本无法挽回智力落后的情况。
先天性甲状腺功能低下发病率大约是五千分之一。
本文对成都市2011-2012年度出生的婴儿随机抽取17543名样本进行了筛查，现将筛查结果及讨论汇报如下。
1材料与方法1.1对象成都市2011-2012年度随机抽取的17543名新生婴儿样本。
1.2标本采集新生儿出生72小时，从脚跟内或脚跟外侧采血3滴于滤纸上，要求血斑直径应大于10 mm，于室温清洁处自然阴干后装于塑料袋内置于2-8℃冰箱保存后送至四川妇幼保健医院筛查。
1.3实验方法甲状腺功能低下症以促甲狀腺素（thyroid-stimulating hormone，TSH）为主要检测指标，采用免疫放射法检测血液中的TSH浓度。
时间分辨荧光免疫分析
时间分辨荧光免疫分析时间分辨荧光免疫分析(time-reso1vedfIuoroimmunoassay,TRFIA)是80年代初问世的一种超灵敏度的标记免疫检测技术。
其主要特点是以锢系元素铺(Eu3υ等标记抗体或抗原为示踪剂，利用增强液的荧光放大作用和时间分辨荧光法排除样品或试剂中非特异性荧光物质的干扰，最大限度地提高了检测方法的灵敏度和特异性，还具有量程宽,操作简便,标记物容易制备，稳定性好，保存期长等诸多优点。
一、基本原理与放免分析相似，总体上分为竞争法和非竞争法两类，前者多用于小分子半抗原，后者用于大分子化合物。
铺系元素第(Eu).彭(Sn1)、轼(Tb)和钛(Nd)通过双功能螯合剂，在水溶液中很容易与抗原或抗体分子以共价双键结合。
经抗原、抗体间特异性的免疫结合反应，测定免疫复合物的荧光强度，就可推算待测物质的浓度。
辆系离子的荧光信号极弱，需要在酸性条件下，解离出铺系离子，然后与荧光增强液中的B-二酮体生成新的螯合物，经紫外光激发可产生强而持久的荧光信号，其增强效力可达100万倍，故又称解离增强铺系荧光免疫分析(dissociation-enhanced-1anthanidefIuoroimmunoassay,DE1FIA)o锢系元素的发光时间延长，如Eu*和Snr的荧光衰变时间分别达到 4.3×IOns和4.1×10,ns,而样品和试剂中的自然本底荧光的衰变时间仅为4-10ns,通过延迟测量时间，使信号不受本底荧光影响。
此外，锢系元素螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，StOkeS位移大，有利于排除非特异性散射光的干扰，进一步提高荧光信号的特异性。
二、试剂组成(一)EuS标记物：可分为标记抗体、标记抗原，要求有较高的纯度、比活性和免疫活性。
密封后4。
C或-20。
C保存，但应避免反复冻融。
若发现蛋白质聚合，非特异性结合升高，则应停止使用。
(二)固相抗体或抗原：固相载体多用聚苯乙烯微孔条，要求透明度高，吸附性能好，材质均匀，孔间差异小，不同品牌甚至不同批号的微孔条间都会有明显的性能差异，应引起注意。
促甲状腺激素(TSH)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求爱康试剂
促甲状腺激素（TSH）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）1.性能指标1.1试剂条性能指标1.1.1外观试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏，包装标签应清晰、准确、牢固；试剂条中第7孔内组分应为棕色含固体微粒的液体或含棕色固体沉淀的透明液体；第12孔内化学发光底物应为无色或淡绿色液体；其余皆应为无色透明液体，无悬浮物、无沉淀、无絮状物。
1.1.2空白限应不大于0.005μIU/mL。
1.1.3准确度1.1.3.1在试剂盒规定的线性区间内，检测促甲状腺素国家标准品，测定结果的相对偏差应在±10%范围内。
1.1.3.2对具有溯源性的两个浓度水平的正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差应在±10%范围内。
1.1.4线性区间试剂盒在0.02μIU/mL~100μIU/mL区间内，其线性相关系数（r）应不小于0.9900。
1.1.5分析内精密度变异系数（CV）应不大于8.0%。
1.1.6批间精密度变异系数（CV）应不大于15.0%。
1.1.7特异性a)含浓度不低于200mIU/mL的FSH的零浓度TSH样本，检测结果应不高于0.005μIU/mL；b)含浓度不低于200mIU/mL的LH的零浓度TSH样本，检测结果应不高于0.005μIU/mL；c)含浓度不低于1000mIU/m L的HCG的零浓度TSH样本，检测结果应不高于0.005μIU/mL。
1.2校准品性能指标1.2.1外观校准品应为无色或浅黄色透明液体。
1.2.2装量装量偏差应在±10%之内。
1.2.3准确度Cal1、Cal2实测值与标示值的偏差应在±10%以内。
1.2.4均一性对同一瓶校准品1、校准品2分别重复10次检测，对同一批次10瓶校准品1、校准品2进行检测，检测校准品1、校准品2瓶内差CV应≤10%，批内瓶间差CV应≤10%。
1.3质控品性能指标1.3.1外观质控品应为无色或浅黄色透明液体。
石家庄市新生儿促甲状腺素筛查切值的探讨
石家庄市新生儿促甲状腺素筛查切值的探讨马翠霞;封纪珍;封露露;白雪;贾立云【摘要】目的分析石家庄市新生儿疾病筛查诊治中心168 107例新生儿先天性甲状腺功能减低症(CH)的筛查数据,探讨建立石家庄市筛查CH切值的方法,避免漏诊和资源浪费,并指导后续的CH筛查工作.方法采用全自动时间分辨荧光检测仪(GSP-2021型)测定石家庄市168 107例新生儿足跟血干血斑的促甲状腺素(TSH)浓度,采用百分位数法和ROC曲线建立实验室TSH的筛查切值,并进行比较分析.结果 168 107例新生儿TSH浓度呈现偏态分布,确诊患儿80例,其中CH患儿62例,高TSH血症患儿18例,CH检出率为1/2 711.以99％的百分位数和经验确立筛查切值分别为8.2 μIU/ml和9.0 μIU/ml,分别导致3例患儿和8例患儿漏筛.采用ROC曲线得到的TSH切值为8.0 μIU/ml,此时约登指数最高,无漏筛情况.结论比较不同方法最终确定的TSH水平8.0 μIU/ml作为石家庄市新生儿疾病筛查促甲状腺激素的筛查切值.【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2018(033)012【总页数】4页(P1061-1064)【关键词】新生儿筛查;甲状腺功能减低症;甲状腺激素类【作者】马翠霞;封纪珍;封露露;白雪;贾立云【作者单位】石家庄市妇幼保健院优生遗传科,河北石家庄050000;石家庄市妇幼保健院优生遗传科,河北石家庄050000;石家庄市妇幼保健院优生遗传科,河北石家庄050000;石家庄市妇幼保健院优生遗传科,河北石家庄050000;石家庄市妇幼保健院优生遗传科,河北石家庄050000【正文语种】中文【中图分类】R722.1先天性甲状腺功能减低症(CH)是儿科最常见的原发性内分泌疾病之一，它的致病机制较为复杂，主要是由于甲状腺的缺陷、不发育或发育不全以及甲状腺素合成途径缺陷等因素，导致新生儿体内促甲状腺素释放激素分泌不足，引起生长发育落后、智力、基础代谢率降低，从而进一步影响孩子的体格和智力发育[1]。
TSH促甲状腺素化学发光免疫定量检测探究
TSH促甲状腺素化学发光免疫定量检测的探究【摘要】目的：研制人血清中促甲状腺素（tsh）的化学发光免疫检测试剂盒。
方法：采用辣根过氧化物酶标记的抗tshβ亚单位特异性单克隆抗体（mab），与固相包被的抗tshα亚单位的另一mab配对，以鲁米诺作为底物，采用两步法建立了双位点夹心法人血清tsh的化学发光免疫定量分析法。
结果：该方法灵敏度为0.0788 miu/l，批内cv平均为4.7%，批间cv平均为8.4%，平均回收率为93.05%。
该检测与lh、 fsh和hcg无交叉反应。
【关键词】促甲状腺激素（tsh）；化学发光免疫分析法；试剂盒甲状腺功能改变时， tsh的波动较甲状腺激素更迅速且明显，是反映下丘脑、垂体、甲状腺轴功能的敏感指标，因此采用灵敏度高的tsh免疫分析法具有重要的意义。
化学发光免疫分析（chemiluminescent immunoassay， clia）是一种灵敏的免疫分析方法，在免疫诊断试剂研制中已得到了广泛的应用[3]。
本研究根据化学发光免疫分析法的原理研制了血清tsh的检测试剂盒，与国内外同类产品相比具有简便、快捷、成本低等优点。
1 材料和方法1.1 材料 tsh单克隆抗体（mab）、 tsh标准品抗原和辣根过氧化物酶（hrp）为sigma公司产品，光免板为thermo electron公司产品，化学发光底物为biorad公司产品。
1.2 方法1.2.1 标准品的配制将tsh抗原标定后溶于小牛血清中，配制成含0.1， 1， 5， 20， 100 miu/l的标准溶液。
1.2.2 抗体包被板的制备将100μl含tsh mab（0.5mg/l）的ph9.6碳酸盐缓冲液加至包被板中， 37℃包被2 h，再用含10 mg/l bsa的0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液于37℃封闭2 h后晾干备用。
1.2.3 酶标记物的制备 tsh的酶标记物采用过碘酸钠法制备，然后经0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液透析过夜后，加入等量的甘油于-20℃保存备用。
TSH操作规程
9.12如对实验结果有疑问，应重复试验。
9.13为保证实验的准确性，处理后得到的血样应不含纤维蛋白、红细胞、血脂等，并要保证血样吸取的量的准确性，否则容易引起测量值的差异。
9.14本试剂盒应置2—8℃保存，有效期参考瓶上所贴标签。
标准操作规程
版本：
执行日期：
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4.仪器（用户自备）
4.1时间分辨荧光分析仪；
4.2微孔洗涤机；
4.3微孔振荡器；
5.操作步骤
5.1.试剂的准备
（1）洗涤液：将40ml浓缩洗液和960ml蒸馏水在干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液。
（2）将分析缓冲液、校准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温（20～25℃）。
血清促甲状腺激素（TSH）诊断试剂盒
时间分辨免疫荧光分析法
标准操作规程
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血清促甲状腺激素（TSH）诊断试剂盒
时间分辨免疫荧光分析法
标准操作规程
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1.原理
本试剂盒采用双抗体夹心一步法。抗人TSH单抗包被于96孔荧免板，校准品或样品中的TSH与包被单抗及铕离子(Eu3+)标记的单抗于微孔内表面发生免疫反应，通过洗涤分离微孔表面的夹心免疫复合物与游离的标记单抗。微孔表面免疫复合物中的Eu3+被荧光增强液解离后形成稳定的荧光配合物，荧光强度与校准品或样品中的TSH浓度呈正比例，通过校准曲线可得出样品中TSH浓度。
2.样本处理
使用血清或用肝素抗凝的血浆。不能使用以EDTA或柠檬酸盐作抗凝剂的血浆样本。2～8℃条件下样本可保存二周，–20℃可保存更长时间。避免样本反复冻融。
101028例新生儿促甲状腺素筛查结果分析
【 关键词 】 新生儿 ； 甲状腺 素； 促 先天性 甲状腺功能减退症
Ａｎ ｌ ｓ ｓ ｏ ０１ ０ ８ ｃ ｓ ｓ ｏ ｅ ｎ ｔ ｌＴＳ ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ ｒ ｓ ｌ ｓ ａ ｙ ｉ ｆ１ ， ２ ａ ｅ ｆｎ ｏ ａ ａ Ｈ ｃ ｅ ｎ ｎ ｅ ｕ ｔ
促甲状腺激素测定试剂盒(时间分辨荧光免疫分析法)产品技术要求广州市丰华生物
2. 性能指标2.1 装量试剂盒各溶液最大允许负偏差为 6.0％。
2.2 外观试剂盒中校准品为无色或者淡黄色液体，其它液体组份试剂均为澄清透明；微孔反应板应封口良好，无破损。
2.3 灵敏度试剂盒的灵敏度应不高于0.25μIU/ml。
2.4 特异性用黄体生成素（hLH）250U/L 进行检测，测得表观hTSH 浓度不高于0.25μIU/ml。
用促卵泡激素（hFSH）250U/L 进行检测，测得表观hTSH 浓度不高于0.25μIU/ml。
用绒毛膜促性腺激素（hCG）10000U/L 进行检测，测得表观hTSH 浓度不高于0.25 μIU/ml。
2.5 线性相关系数试剂（盒）的线性范围（0.25 μIU/ml～324 μIU/ml）内的线性应符合如下要求：a)线性相关系数r≥0.990；b)检测浓度＜100μIU/ml 的hTSH 时，线性的绝对偏差应在±10μIU/ml 范围内；检测浓度≥100μIU/ml 的hTSH 时，线性相对偏差不超过±20%。
2.6 测量准确度测定浓度为50μIU/ml（允许偏差为±20%）的hTSH 国家标准品，测定结果的相对偏差应在±10%范围内。
2.7 测量精密度2.7.1 批内不精密度试剂盒的批内不精密度（CV）应不超过15.0%；2.7.2 批间不精密度试剂盒的批间不精密度（CV）应不超过20.0%。
2.8 质控品测定值用三种不同浓度的质控品进行测定，测定结果应在允许范围内。
2.9 HOOK 效应检测浓度为2000μIU/ml 的hTSH 时，其荧光值仍高于324μIU/ml 校准品的荧光值。
时间分辨荧光免疫法在新生儿先天性甲状腺功能减退中的检测分析
进行提高 ，或许 能够提高相应检出率 。 综上所述 ，，Ｉ’Ｒ兀Ａ法作为新 生儿先天性 甲状腺 功能减退的
筛查方法是可靠 的 ，具有检测质量稳定、敏感度高 的特点 ，值
得在临床上加以推广 和应用 。
参 考 文 献
１ 王志国，李小鹏 ，武平原 ．２００１年全 国新 生儿疾 病筛查 实验室 质
【关键词 ｌ 婴儿，新 生；时光分辨 荧光免疫法；先天性 甲状腺功能减退症 【中图分类号】Ｒ ５８１．２ 【文献标识码】Ｂ 【文章编号】１６７４—３２９６ （２０１３）０２—０１０６—０１
新生儿疾病筛查工作一直是临 床检验工作 中的一个 重点 ， 指对患儿在临床上并未有明显症状 ，但体 内的生化 、激素水平 已经 出现改变 的这 种情况做 出筛查 ，通 过检 验为临床 提供依 据 ，做出早期诊断 ，更好、更及 时地对此类疾病做 出治疗 ，防 止疾病进一 步发展 对 患儿 的重要 器 官造 成更 严重 的伤 害… 。 为了提高筛查质量 ，为临床提供更准确的诊断依 据，本研究近 年来采用时光分辨荧光免疫法 （ＴＲＦＩＡ）对新生儿的先天性 甲 状腺功能减退 （ＣＨ）进行 了筛查 ，现报道如下 。 １ 资 料 与方 法 １．１ 临床资料 选取我院２００８年 １月—２０１２年 １月所收治的 １２４６２名足月 出生 、无畸形 的正常新生儿 的临床资料。 １．２ 血 片 采 集 在新 生 儿 出生 ７２ｈ之后 且 至 少 吃奶 ６次 以上 ， 方可进行足跟末梢采血 ２滴作为实验标本 ，让血滴 自然流出之 后采用 Ｓ＆Ｓ ９０３专用滤纸片进行采集 ，待血液渗透滤纸形成两 个 血斑之后将其放置于室温下 自然干燥 ，对每个标本进行单独 放置并详细填写姓名、性别 、地址等信息 ，之后冷藏于 ４℃冰 箱内保存 ，作为筛查之用 。 １．３ 试验方法及仪器 将 以上 新生儿 血液标本 分别采用 ＴＲ－ ＦＩＡ法和酶联免疫 吸附试 验 （ＥＬＩＳＡ）法进行筛查 。，Ｉ＇ＲＦＩＡ法 中时光分辨荧光免疫检测仪 采用芬兰产 Ｗａｌｌａｃ １４２０型、试剂 盒为配套 Ｎｅｏ—ｈＴｓｈ试剂 盒 ；ＥＬＩＳＡ法 的酶 标仪 采用美 国产 Ｂ１０一ＲＡＤｍｏｄｅｌ ５５０型进行 筛查 ，样 品测定 中均带有 内质 控 ， 包括质控结果在 内的所有操作严格按 照说 明书进行。 １．４ 结果判定 ＥＨＳＡ的筛查 切值为 ２０￣ｇ／ｍｌ。ＴＲＦＩＡ的判 断标准为 （￣Ｕ／ｍｌ ｂｌｏｏｄ）： ＜９为阴性 ；９—１８为可疑 ； ＞１８ 为 ＣＨ。筛查值均用原标本进行 复查 ，确保实验结果 不出现偏 差 ，复查结果仍在切值 以上者视为初检阳性 ，随即采用放射免 疫法 （ＲＩＡ）进行对照 检测 ，检 测血清 中 Ｌ、Ｔ４以及 ＴＳＨ水 平 ，ＴｓＨ≥２０ｍＵ／Ｌ且 Ｔ４＜４８ｒ ｉｇ／ｍｌ视 为 ｃＨ；ＴＳＨ≥２０ｍＵ／Ｌ 但 Ｔ４水平正常则视为非典型 甲状腺功能减退 。 １．５ 统计 学方法 采用 ＳＰＳＳ１５．０统计软件进 行统计学处 理 ，
促甲状腺素(TSH)试剂盒批间差异对实验结果的影响及纠正措施
doi：10.3969/j.issn.1009-4393.2020.20.052--临床研究--促甲状腺素（TSH）试剂盒批间差异对实验结果的影响及纠正措施张虹1，2，张国文1，朱伟2，袁帅2（1.宿迁市妇幼保健院新生儿疾病筛查实验室，江苏宿迁223800；2.宿迁市妇产医院新生儿疾病筛查实验室，江苏宿迁223800）摘要：目的分析试剂盒批间差异对实验结果的影响，重点排查是否会造成漏筛。
方法采用第三方质控品比较27573例样本在使用两个不同批号试剂间的差异。
结果批号658663试剂检测初筛样本数19090例，中位数为1.40，95%和99%百分位数分别为5.62和9.30，低、高值质控浓度均值分别为9.176、36.679，标准差（SD）分别为0.728、2.800，变异系数（CV）分别为7.93%、7.63%；确诊先天性甲状腺功能减退症（CH）9例，高TSH血症5例，CH发病率为1/2121。
批号661537试剂共检测的初筛样本数为8483例，中位数为1.41，95%和99%百分位数分别为4.90和7.65，低、高值质控浓度均值分别为8.78、34.81，标准差分别为0.69、1.93，变异系数分别为7.83%、5.54%，确诊CH4例，高TSH血症1例，另有1例失访，CH发病率为1/2121。
结论促甲状腺素（TSH）试剂盒658663试剂和661537试剂两批号间存在显著性差异，降低661537试剂切值，可防止漏筛。
关键词：促甲状腺素；第三方质控品；切值促甲状腺素是腺垂体分泌的重要激素，参与甲状腺细胞的发育、合成及甲状腺激素的分泌。
一方面，该激素水平受下丘脑分泌的促甲状腺激素释放激素（TRH）的促进性影响，另一方面又受到甲状腺激素反馈性的抑制性影响，二者互相拮抗，在多种甲状腺疾病筛查中具有重要价值。
促甲状腺素作为实验室常用检测指标，要获得准确的测定结果，需建立全面的质量控制体系，包括室内质量控制和室间质量评价，并根据实验室情况不断改进[1-3]。
沈阳地区新生儿先天性甲低筛查促甲状腺素切值研究
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新生儿疾病筛查检验技术
新生儿疾病筛查检验技术新生儿疾病筛查技术是指用于检测新生儿某些危害严重的先天性遗传代谢性疾病的先进实验室检测技术。
从而早期诊断、早期治疗。
根据我国《母婴保健法》要求至少开展先天性甲低（CH）和苯丙酮尿症（PKU）两项筛查。
CH和PKU患儿在出生后往往缺乏疾病的特异表现，一般要到月龄6个月才逐渐出现固有的临床症状，并日趋加重。
然而，一旦出现了疾病的临床症状，表明疾病已进入了晚期。
即使治疗，智力低下等也难以恢复；相反，若能在出生不久即发现疾病，及时治疗，极大多数患儿能正常发育，其智力亦可达到正常人的水平。
筛查试验结果是早期发现阳性患儿的唯一指征，因此筛查实验室的管理和规范是整个筛查环节的重中之重。
一、苯丙氨酸测定（一）检验方法学以苯丙氨酸（Phe）作为新生儿疾病苯丙酮尿症的筛查指标。
筛查方法主要有荧光分析法、定量酶法、细菌抑制法和串联质谱法。
1.荧光分析法（1）原理：从干滤纸血片上提取出的苯丙氨酸，与茚三酮形成一种荧光化合物。
在激发光波长390nm，发射波长485nm处测定荧光强度。
苯丙氨酸含量与荧光强度成正比，通过检测已知浓度的标准血斑的荧光值并绘制曲线，可求得各样本的苯丙氨酸浓度。
试验中加入二肽L亮氨酰-L丙氨酸后可大大增强此荧光反应，用琥珀酸盐缓冲液严格控制反应条件pH在5.8±0.1，保证理想的荧光值和最大的特异性。
加入铜试剂进一步增强反应并降低背景。
（2）器材：荧光读数仪、60℃恒温孵育箱、孵育/振荡仪、3.2mm打孔器或打孔钳、加样器、八道加样器。
（3）试剂：苯丙氨酸标准品（phenylalanine calibrtors）、苯丙氨酸质控品（phenylalanine controls）、硫酸锌试剂（zinc sulfate reagent）、PKU试剂即茚三酮（PKU reagent）、铜试剂（copper reagent）、PKU 复溶缓冲液（PKU Reconstitution buffer（内含琥珀酸钠缓冲液L 亮氨酰-L丙氨酸和防腐剂）、白色微孔板96孔（white microtiter plate）。
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新生儿促甲状腺素的时间分辨荧光免疫分析及其试剂盒研文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）新生儿促甲状腺素的时间分辨荧光免疫分析及其试剂盒研制 谭玉华，冯健明，卢顺舵，罗建安，李建国，季涛，李贵情（广州市丰华生物工程有限公司，广州 510730 ）摘要：目的利用时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）技术，建立新生儿促甲状腺素（Neonatal TSH）微量检测法，并研制其检测试剂盒。
方法采用了一株TSH单克隆抗体用于固相包被，另一株TSH单克隆抗体用于标记铕（Eu3+），固相双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法检测Neonatal TSH。
结果自建的Neonatal hTSH TrFIA法灵敏度高可达μU/ml，且在测量范围内，自制试剂盒剂量-反应曲线的相关系数r达。
与hLH、hFSH、HCG无明显交叉反应。
分析内或分析间质控结果在靶值±25%内，室内低质控、高质控分析内和分析间变异系数(CV)分别为%和%，%和%。
与DELFIA Neonatal TSH试剂标准品进行准确性比对实测值与标示效价比平均值为。
与DELFIA Neonatal TSH试剂比对试验符合率一致，相关性系数r可达。
试剂盒室间质评能力比对成绩100%。
结论自建的Neonatal TSH TrFIA法具有灵敏度高，特异性强，准确度高，精密性好和非放射性等优点，具有良好的临床应用价值。
关键词：新生儿；促甲状腺素；时间分辨荧光免疫分析Time-resolved Fluoroimmunoassay of Neonatal Hypothyropin andPreparation of It’s Test ReagentTan Yu-hua,Feng Jian-ming, Lu Shun-duo, Luo Jian-an, Li Jian-guo, JiTao,Li Gui-qing基金项目：科技型中小企业技术创新基金（08C281），广州市科技计划项目（2006V42C0051）。
作者简介：谭玉华，1980年10月，男，医学学士，检验技师，主要从事标记免疫试剂的研发、应用和医学检验工作。
( Guang zhou Fenghua Bio-engineering Co.,LTD,Guangzhou 510730 China) Abstract:Objective To establish a method of Time-resolved Fluoroimmunoassay(TrFIA) for the quantitative determination of human thyroid stimulating hormone(hTSH) in blood specimens dired on filter paper as an aid in screening newborns for neonatal hypothyroidism,and to prepare it’s test reagent .Methods The method based on solidphase sandwich TrFIA for Neonatal Hypothyropin(Neo-hTSH),which used two anti-TSH monoclonal antibody -one was coated on microplates and another was labeled by Europium. Results The assay sensitivity of the method was μU/ correlation coefficient of self made kit’s curve was was no obvious cross-reaction to human luteinizing hormone(hLH) , humanfollicle stimulating(hFSH) and human chorionic gonadotropin(HCG).The intra-assay and the inter-assay measured values of controls were not more than 25% difference from their labeled values, still their intra-assay and the inter-assay coefficients of variation(CV) of low and high controls were % and %, % and %,respectively. The correlation coefficient of self made Kit and DELFIA Neonatal TSH kit was ,and the results of self made Kit and DELFIA Neonatal TSH kit were showing no difference. The lab’s proficiency testing was excellent. Conclusions The Neonatal TSH TrFIA established which has several advantages including high sensitivity, strong specificity, good accuracy, nice precision, and non-radioactive immunoassay. It is suitable for clinical use.Key words: Neonatal; Hypothyropin; Time-resolved Fluoroimmunoassay新生儿血液中促甲状腺素（Neonatal TSH）浓度升高(出生72小时后采血)是原发性甲状腺功能低下症（CH）最早的实验指标。
CH是造成儿童智力低下和生长发育迟缓的重要疾病之一。
通过新生儿筛查，可及早诊断和阻断疾病发展，预防脑损伤的发生。
国内由于筛查技术的滞后，新生儿疾病的筛查尚待普及。
国内外资料表明开展和推广新生儿疾病的筛查，其经济意义和社会意义日益显着。
随着《中华人民共和国母婴保健法》的颁布，对依法进行新生儿疾病筛查提供了有效的法律和政策支持。
并且TrFIA法为卫生部新生儿疾病筛查质控中心推荐的首选方法[1]。
经过多年研究，我们建立了Neo-hTSH TrFIA法，并研制出了诊断试剂盒，现报道如下。
1 材料与方法标本标本均在受试者知情同意下通过S&S903滤纸收集，严格按要求操作[2-4]，由郑州大学第三附属医院、沈阳市妇幼保健所新筛中心、佛山市顺德区妇幼保健院提供。
材料与仪器分别用于包被和标记的两株鼠源性促甲状腺素单克隆抗体（进口分装），TSH纯品、牛血清白蛋白（BSA）和Tween80（Sigma公司）。
Sepharose CL-6B（Pharmacia公司）。
96孔微孔板（Thermo Labsystems公司）。
铕(Eu3+)标记试剂盒（Wallac公司）。
β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的Eu3+发光增强液[5]、洗涤液[6]和含有小牛血清(200ml/L)的50mmol/L 溶液为分析缓冲液[6]均为自制。
其余试剂为国产分析纯试剂。
冻干机（上海浦东冷冻干燥设备有限公司）。
2D1420型TrFIA检测仪及配套DELFIA Neonatal TSH试剂（Perkin Elmer VictorTM公司）。
恒温振荡仪（广州丰华公司）。
标准血片、质控血片制备用TSH纯品按50-55%的血细胞比容由人全血制备，由本公司生产部提供。
固相抗体包被板的制备将包被抗体用50mmol/L 柠檬酸缓冲液稀释至μg/ml，在96孔微孔板各孔中加200μl，4℃过夜，弃去包被液，洗涤1次，每孔加280μl含有10.0g/L BSA的10mmol/L 磷酸盐缓冲液，37℃封闭2h，弃去封闭液，真空抽干过塑冷藏。
铕标记物的制备将1mg的标记抗体加入含有1mg的Eu3+冻干粉小瓶中，室温振荡反应48h。
反应液经用50mmol/L 缓冲液平衡的Sepharose CL-6B柱（1cm×40cm）层析，A监测收集第一洗脱峰。
280建立Neo-hTSH TrFIA检测方法采用双抗体夹心法，将标准品、质控品或样本用打孔器打下直径约3.2mm样品盘于固相抗体包被板中，再加入用分析缓冲液1：1200稀释的铕标记物 200μl室温振荡4h（室温法）或室温振荡15min后置于4℃过夜孵育再室温振荡1h（过夜法），洗涤6次，加入增强液200μl ，振荡5min 后，于1420时间分辨仪上用随机配备的Workstation软件荧光计数和用Multicalc软件进行拟合分析。
Perkimelmer公司DELFIA Neonatal TSH检测方法严格按仪器和试剂说明书操作检测。
评价参数评价试剂盒的分析灵敏度、分析特异性、准确性、精密度，建立试剂盒的参考值，并与国外同类产品进行比对试验。
统计学处理 Neonatal TSH TrFIA标准曲线分析（有效剂量（ED）、变异系数（CV）等）及结果由Victor TM2D1420仪随机配备Multicalc软件自动给出。
其它平行对照实验均采用配对t检验分析或直线相关性分析。
测试值与靶值间采用偏倚分析。
2 结果上述包被抗体浓度、包被与封闭温度与时间[7]、反应温度与时间[7-8]、铕标记物工作浓度、洗板次数等均采用棋盘方阵滴配法确定。
方法学评价参数2.2.1 剂量反应曲线 采用LIN-MEAS 拟合模式，绘制标准曲线如图1。
在测量范围内，自制试剂盒剂量-反应曲线的相关系数r 达。
图1 自制试剂盒剂量-反应曲线2.2.2 分析灵敏度 以自制试剂1 μU/mL 全血标准品重复检测20次，以x +2s 的荧光值在曲线上得到相应浓度为检测低限，则本方法的检测低限可达μU/ml 。
2.2.3 特异性 自制试剂检测含有250U/L 的hLH 、250U/L 的hFSH 、100000U/L 的HCG 样品，其表观值均小于μU/ml 。
2.2.4 准确性与精密性 自制试剂盒检测DELFIA Neonatal TSH 试剂标准品，实测值（10次检测平均值）与标示效价比平均值为。
取本公司制备的质控品C1和C2，进行分析内 (10次)和分析间实验(10次) ，分析内或分析间质控结果在靶值±25%内，分析内CV <15%，分析间CV <20%。