革兰染色——【医学微生物学精品讲义】

革兰染色法（Gram stain）
革兰染色的原理
• 等电点 • 胞壁结构成分
Structure of a Gram-Negative Cell Wall Structure of a Gram-Positive Cell Wall
• 初染：在已固定的标本片上滴加结晶紫染液 （Crystal violet），染1min，水洗，并将玻片上积水 轻轻甩净。
• 掌 握 细 菌 的 三 种 基 本 形 态 和 特 殊 结 构 Master bacterial morphology and special structures • 掌握细菌学标本片的制作和革兰染色法 Master the preparation of bacterial sample slides and Gram staining • 掌握油镜的使用与保护 Master the use of oil lens • 了解墨汁涂片法和悬滴法 Know the principle of negative staining and hanging-drop
形（霍乱弧菌Vibrio cholera） ➢ 螺菌 spirilum 菌体有多个弯曲（幽门螺杆菌
Helicobacter pylori）
Basic shapes
• Spherical: coccus • Rod: bacillus • Curved or spiral: spiral bacterium
如：革兰染色Gram stain、 抗酸染色Acid-fast stain c.特殊染色法 Special staining
如：鞭毛染色Flagella stain、芽胞染色 Spore stain
d.墨汁负染色法 Negative stain • 细菌不染色标本检查法
a.悬滴法 Hanging drop method
荚膜 capsule
鞭毛 flagullum
芽胞 spore
芽胞 spore
细菌形态检查法
• 细菌染色标本检查法 a.单染法 Simple staining：
如：美兰染色Methylthioninium Chloride staining b.鉴别染色法 Differential staining
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标本片的制作
Preparation of bacterial specimen
涂片Smear → 干燥 Dry → 固定 Fixation
• 涂片要薄而均匀 • 干燥时标本面朝上 • 固定需在酒精灯火焰上来回2～3次，杀死细菌、
粘附牢固、蛋白质变性易于着色。如遇多种标本， 可用蜡笔在玻片上划为数格，并于玻片的背面， 标明标本的编号。
医学微生物学实验
EXPERIMENTS OF MEDICAL MICROBIOLOGY
• 实验室规则 The Rules of Microbiological Lab
• 分组 Grouping
实验一 细菌形态与结构的检查
examination of bacterial morphology and structure
• 媒染：滴加碘液（Gram's iodine solution）媒染1min， 水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。
• 脱色：加95％酒精（ethanol）数滴，轻轻晃动玻片 30sec，直到流下的酒精无色或稍呈淡紫色为止。 水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。
• 复染：加稀释石炭酸复红染液（basic fuchsin solution） 复染30sec，水洗。
b.压滴法 Pressure drop method
Gram staining
Acid-fast staining
真菌fungus
Negative staining
悬滴法
1．取凹玻片一张，在凹窝四周涂凡士林（或水）少许。 2．取一接种环细菌液体培养物放在盖玻片中央。 3．将凹玻片反转，使凹窝对准盖玻片中心，液滴即悬垂于凹 窝中央。 4．先用低倍镜找到悬滴的边缘，再换用高倍镜检查。镜检时 光线宜稍弱，也可用暗视野显微镜观察。 5．结果观察细菌的运动性（有鞭毛细菌有位置移动，无鞭毛 细菌只有原位颤动。
葡萄球菌 staphylococcus
肠道杆菌 Enterobacteria
霍乱弧菌
Vibrio cholera
幽门螺杆菌 Helicobacter pylori
细菌特殊结构观察
Observe bacterial special structures
• 荚膜 capsule：与细菌致病力有关（产气荚膜梭菌 C. perfringens） • 鞭毛 flagellum：细菌的运动器官（破伤风梭菌 C. tetani） • 芽胞 spore：判断微生物的灭菌指标（破伤风梭菌 C. tetani） • 菌毛 pilus：与细菌致病力和遗传物质的传递有关---电镜观察
细菌基本形态观察
Observe bacterial morphology
1. 球菌 coccus：外观呈球形或近似球形（葡萄 球菌staphylococcus）
2. 杆菌 bacillus：呈杆状，长短、粗细和大小不 一（肠道杆菌enterobacteria）
3. 螺形菌spiral bacteria： ➢ 弧菌 vibrio 菌体略带弯曲，呈逗点状或括弧
镜检
• 待标本片自干，或用吸水纸吸干（勿撕），加一滴 香柏油，油镜检查，注意观察菌体的形态及染色性 • 紫色者为革兰阳性菌（G+菌） • 红色为革兰阴性菌（G-菌）
实验完毕后，请把玻片放在污物盆中!