培养基模拟灌装试验相关缺陷分析与改进建议
培养基模拟灌装验证的若干问题_顿昕
Warning Letter
Gases used during process simulation should be evaluated for their inhibitory effect on microorganisms. Your response states that the nitrogen used in the process simulation is removed by the test membrane during filtration. 没有评估模拟过程中使用的气体（氮气）对微生物影响。
关于水分流失的问题 清洗的问题
Warning Letter
Placebo mediums should be evaluated for their ability to support growth. Their placebo used in the process simulation is sodium phosphate in different forms (solution and anhydrous) and sodium chloride solution. 培养基灌装所用的介质，没有评估其对微生物的抑菌影响。培 养基灌装所用的材料是磷酸钠和次氯酸钠的溶液。
培养基模拟灌装试验
无菌装配
难
很高
很高
无菌操作最重要的部分
个人认为是
所有操作人员的无菌保障意识
为什么需要进行培养基灌封试验？
※无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之
一，确保产品无菌是该工艺最大的难点。
※减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措
施。
..人员培训
..无菌工艺验证
定义
➢使用培养基模拟药品进行无菌灌封，对无
菌工艺进行验证。又称为“工艺模拟试
是应足以反应操作员工疲劳时对产品质量
潜在的影响 ，并且足以体现了尽可能发生
的干预措施。
• 一般生产量小于5000，培养基灌装数量应
等同批量；生产量大于5000时，培养基最
小灌装数量不少于5000。
• 一些法规中建议应该根据批量确定灌装的
数量。
关键因素五: 容器体积(1/2)
• 应该考虑到灌装容器的极端尺寸。
•
在生产线的每年2次的再验证中，模拟试验的
速度应该进行变换。
关键因素八:灌装的持续时间
• 通常情况，培养基灌装的时间应该足够长，能够
包括所有的必需的干扰、生产中断，包括正常的
无菌操作如开始前的安装、重量或体积的调整、
改变设备或手动维修等，还包括更衣、暂停、换
班等，持续时间还应能反映出潜在的人员疲劳。
培养基需要事先灭菌。
关键因素二: 试验的次数和频率
• 培养基模拟试验的初始验证，至少需要成功的连
续进行 3 次独立的模拟试验（建议在不同的工作
日进行试验）。
• 首次验证后，培养基模拟试验通常每年进行2次，
每次进行1批即可。
• 当生产线发生变更，并且经过评估可能对无菌生
产工艺有潜在危险时，应当进行额外的培养基灌
无菌工艺验证培养基模拟灌装试验(葛均友)
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
干预举例—冷冻干燥工艺 冷冻干燥工艺
设备组装 加入胶塞 取出卡住的胶塞 取走倒下的玻瓶 手工装载到冻干机 放置热电偶
|
不同区域玻瓶破碎 设备故障 更换灌装针头 灌装针头位置调整 自动称量故障 自动加塞故障
环境监测-放置和取走培养皿 操作人员进出及更衣
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
3、验证与确认 验证与确认
稳定的产品质量
性能确认及工艺验证（PQ/PV）
可靠的设备性能
运行确认（OQ）
材质与安装质量
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安装确认（IQ） 安装确认 设计确认（DQ） 设计确认
用户需求与设计
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
验证开始前的准备工作
设备设施确认
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
2010版GMP附录一 附录一：无菌制剂
培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的 培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性 产品，培养基灌装的数量应至少等于产品的批量 培养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装 试验的目标是零污染，应遵循以下要求 应遵循以下要求： （1）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品 不得检出污染品； （2）灌装数量在5000至10000支时 支时： 有1支污染，需调查，可考虑重复试验 可考虑重复试验； 有2支污染，需调查后，进行再验证 进行再验证。 （3) 灌装数量超过10000支时： ： 有1支污染，需调查； 有2支污染，需调查后，进行再验证 进行再验证。 （4）发生任何微生物污染时， ，均应进行调查。
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
培养基模拟灌装方案
培养基模拟灌装方案一、背景简介培养基是微生物学实验中的重要基础，常常需要进行大批量的灌装。
传统的培养基灌装方式费时费力，而且操作不方便，难以达到高效的生产要求。
为了提高灌装效率和质量，需要开发一种模拟灌装方案。
二、目标1.提高培养基灌装效率。
2.提高培养基灌装的一致性。
3.减少人工操作。
4.提高灌装的质量控制能力。
三、实施步骤1.设计灌装装置根据培养基灌装的要求和目标，设计一种自动化的灌装装置。
该装置应能够准确地控制培养基的体积，并能自动进行灌装和封口的操作。
合理的设计可以提高灌装的效率和一致性。
2.开发控制系统开发一套完整的控制系统，能够对灌装装置进行精确的控制。
控制系统应包括灌装装置的控制软件和硬件，能够进行体积控制、灌装速度控制和封口力度控制等操作。
通过控制系统，可以实现灌装的自动化和质量的控制。
3.优化工作流程将培养基灌装的各个步骤进行优化，包括培养基的准备、灌装操作、封口操作等。
通过合理安排工作流程，可以提高灌装的效率和一致性。
可以考虑使用自动化设备对培养基进行混合、过滤、存储等处理，进一步减少人工操作。
4.培训操作人员对操作人员进行培训，使其掌握操作流程和操作技巧。
培训内容包括培养基的准备、灌装装置的操作、控制系统的使用等。
操作人员应严格按照操作规程进行操作，以确保灌装的质量和一致性。
5.质量控制建立一套完整的质量控制机制，包括对培养基的物理性质和化学性质进行检测和监控。
可以使用专业的仪器对培养基进行pH值、溶解度、浓度等参数的检测，以确保灌装的质量和一致性。
6.不断改进根据实际操作中的问题和需求，及时对模拟灌装方案进行改进。
可以通过收集用户反馈、开展技术研究等方式，不断改进模拟灌装方案，提高其效率和质量控制能力。
四、预期效果通过上述方案的实施，预期能够实现以下效果：1.提高培养基灌装效率，节省人力和时间成本。
2.提高培养基灌装的一致性，减少灌装误差。
3.减少人工操作，提高工作效率和质量控制能力。
培养基模拟灌装工艺验证方案
培养基模拟灌装工艺验证方案1.引言2.验证目标验证目标是确保培养基在灌装过程中的质量和完整性，包括以下几个方面：(1)确保培养基的成分和性能符合要求。
(2)确保培养基在灌装过程中不受到污染，避免细菌和其他有害微生物的污染。
(3)确保培养基的容器和封闭系统能够有效地保护培养基。
(4)确保培养基的灌装工艺能够满足生产需求，包括速度、稳定性和灌装量的精度。
3.验证方法(1)实验室测试：通过实验室测试，对培养基的成分、pH值、微生物负荷、渗透压等进行定性和定量分析。
(2)灌装设备验证：验证培养基灌装设备的性能和操作规程是否符合要求，包括设备的灭菌能力、管道清洗和灭菌程序的有效性等。
(3)灌装过程模拟：使用类似的物料和操作条件，模拟培养基的灌装过程，包括培养基的灌装速度、灌装量的精度、容器封闭性的测试等。
4.验证参数(1)培养基的成分和性能：对培养基的成分进行定性和定量分析，包括有机物、无机盐、氨基酸、维生素等。
(2)培养基的pH值：测试培养基的初始pH值和在灌装过程中的pH值变化。
(3)培养基的微生物负荷：测试灌装前、灌装过程中和灌装后的培养基微生物负荷，包括总菌落数、细菌干扰菌和真菌的检测。
(4)培养基的渗透压：测试培养基的渗透压，在灌装过程中进行监测。
5.验证流程(1)准备灌装设备和培养基：准备灌装设备，包括容器、管道和灌装机等。
根据所需灌装量制备相应的培养基。
(2)实验室测试：对培养基的成分、pH值、微生物负荷、渗透压等进行实验室测试，确保符合要求。
(3)灌装设备验证：验证灌装设备的灭菌能力和管道清洗程序，确保设备的操作规程符合要求。
(4)灌装过程模拟：使用类似的物料和操作条件，模拟培养基的灌装过程。
进行实际灌装操作，包括灌装速度的控制、灌装量的精度和容器封闭性的测试等。
(5)验证结果的分析：根据实验结果，对验证过程和结果进行分析和总结，评估培养基模拟灌装工艺的可靠性和稳定性。
6.验证结果的分析根据验证实验的结果，对培养基模拟灌装工艺进行分析和评估，包括以下几个方面：(1)培养基的成分和性能是否符合要求。
培养基模拟灌装试验结果分析与调查_钱静杰
行一批或多批的培养基模拟灌装试验。
无菌工艺的先进技术、标准和经验。
本文重点介绍的培养基模拟灌装试验的结果分
4 其他问题探讨
析与调查，只是无菌生产工艺验证方法的一小部分，
由于无菌工艺本身的多样性和复杂性以及笔者经验
4.1 如何判断哪些灌装样品不需要进行培养
和认识的局限性，很难将其中的每个细节介绍得面
影响到密封性的样品（如破损）；完整性测试（泄 面俱到，文中仅对培养基灌装试验中常见的共性问
如果认定培养基灌装试验结果有效，就应该暂 4.5 在培养基灌装试验中是否必须进行录像
停生产，直至确定污染来源并采取有效的纠偏措施，
不是必须的，录像仅是一种可选的辅助调查和
对培养基灌封试验后和此前所生产的产品进行风险 培训手段。如果采用了录像措施，也仅作为公司内部
评估。
的资料（如同内部审计报告）。公司应有文件规定，什
质量都有着举足轻重的意义。为了确保无菌生产工 艺系统无菌的可靠性和适应性，最大程度地降低质 量风险，需通过一定的验证方法来对其进行验证。目 前，多数厂家采用培养基灌装试验来证明其无菌工 艺的可靠。
培养基模拟灌装试验的结果分析与调查是整个 试验中极其重要的一部分。验证试验结果不合格是 无菌工艺验证中的最大难题。其需要进行大量的偏 差调查并采取有效的纠偏措施。根据实际经验，在 此列出一套出现偏差后的调查方法及纠偏措施，以 供大家参考。
实验，或在模拟过程中进行培养基的切换。
4.3 培 养 基 灌 装 试 验 中 的 样 品 是 否 需 要 在 培 养 过
程中进行反转 我们认为不需要。培养基灌装的样品应在开始
培养前进行操作，使培养基充分接触到内部各个表 面，开始培养后不应再进行反转等干扰。
无菌生产工艺验证—培养基模拟灌装试验浅析
2.2 多产品简化试验思路
一条灌装线生产多个产品时，根据下列因素可被划分为不同的类型组：
⑴ 灌装工艺。⑵ 不同的容器、密封方式。由此选出两个或更多个下列方面能 涵盖所有其他的相关产品：⑴ 容器的大小、开放或密封的设计。⑵ 灌装线的 速度和干预；⑶ 涉及的操作人员数量。⑷ 储存容器的形式、转移的方式等。 自包装容器代表性选择方面，对于多规格、容器形状不同的灌装生产线，
6. 培养基配制
一般将大豆胰蛋白胨培养基（TSB）配制成3%的溶液，并用湿热蒸 汽灭菌（121℃、15分钟），冷却后的培养基用已清洁灭菌的园筒过滤
器（装入已灭菌的0.22um滤芯）过滤于已清洁灭菌的储罐中（过滤过
程应遵守无菌操作）。 培养基在灌装前保存在储罐中的时间也应挑战至少最长工艺允许 时间。所有在这一段可能进行的操作，如取样、过滤器的完整性试验 等也按实际模拟。 配制用于验证分装生产线的培养基溶液体积应满足灌装所设定的 灌装瓶数需要的量。
应对不同大小、形状的容器进行评估；多数可选用最大敞口直径的容器和最 低生产线速度；有时也应选择容易倒落的小型容器用来代表最差情况，因可 能需要更多的人工干预；当不能兼顾时，应考虑选取有代表性的几种容器进 行培养基模拟灌装试验。
2.3 最差条件设计
2.3.1储存时间的设计
灌装设备、部件、储罐、无菌物料、药液在实际灌装前能够放置
9.15
10.51 11.84 13.15 14.43
15.7
16.96
10.培养基灌装试验的合格标准
10.培养基灌装试验的合格标准
10.3 合格标准
目前，国际上认可的培养基灌装试验合格标准（允许最大污染率）如下表：
批灌装数量 允许阳性数量 2996～4742 0 4743～6294 1 6295～7751 2 7752～9151 3
冻干产品无菌工艺模拟试验方案改进及实施研究
1、引言无菌工艺模拟试验是指采用微生物培养基替代无菌产品，对整个无菌生产工艺进行评估验证的技术，通常也被称为“培养基灌装试验”。
需要把培养基灌装于无菌容器中，并在无菌生产环境中进行转运，通过模拟此无菌工艺的过程，最后将灌封有培养基的容器在适当温度下进行培养，检查容器内微生物的生长状况，来对无菌工艺模拟试验的结果进行评价，评价该试验是否在操作过程中产生了污染。
通常将此试验应用于非最终灭菌的无菌产品中，而对最终灭菌产品没有强制的要求。
根据《药品生产质量管理规范（2010 年修订）》（Good Manufacturing Practice of Medical Products，GMP）以及附录1的“无菌要求”，无菌产品的生产应当进行培养基灌装试验。
在无菌生产过程当中，对于直接接触药物的设备、部件、灌装容器以及原料，虽然已经过灭菌，但是当采用这些要素进行无菌生产时，仍然会由于各种因素导致产品发生污染，从而影响了无菌产品的质量。
因此，无菌工艺的评估应当采用一种更合适的方式进行。
无菌工艺模拟试验，是对无菌工艺进行评估的一种验证技术，采用培养基模拟完成实际无菌生产操作后，可以对结果进行评价，借以确定实际生产中产品被污染的概率。
Part 2、无菌工艺模拟试验方案技术要求广西梧州制药（集团）股份有限公司生产的无菌产品为冻干制剂，故以冻干产品的无菌工艺模拟试验来模拟整个工艺过程，包括从部件、材料的灭菌准备，一直到完成灌装和轧盖等整个过程。
而对于无菌工艺模拟试验方案的设计中，工艺条件的选择应当选取合理的“最差条件”，即整个工艺流程，应采用最差条件来进行试验。
最差条件即在工艺规程允许范围内，正常生产会遇到的最差情况，其并不包括由偏差引起的超出工艺要求的特殊情形。
如果在最差条件下培养基灌装试验仍然取得好的结果，那么说明在比最差条件还要好的正常实际生产过程中，无菌保证水平会更有保证。
2.1无菌工艺模拟试验最差条件设计冻干产品的无菌工艺模拟试验最差条件设计，可以包括在准备阶段将物料、灌装器具、设备等按照工艺要求在无菌条件下放置允许的最长时间；灌装时可以在关键区域保留最多的人员；模拟在工艺允许范围内更长的灌装时间；控制无菌工艺模拟试验灌装速度等。
培养基模拟灌装方案
引言培养基的灌装是实验室中非常常见且重要的工作环节，对于细胞培养、微生物培养及其他生物实验具有关键性影响。
良好的培养基灌装方案能够确保培养基的质量和稳定性，并确保实验的可重复性。
本文将介绍一种基于模拟灌装的培养基灌装方案，以提高灌装的准确性和效率。
背景培养基的灌装是将固体培养基或培养基粉末与适量的水混合并灌装到容器中的过程。
传统的灌装方法常常依赖于人工操作，存在操作误差和时间消耗较大的问题。
为了解决这些问题，模拟灌装方案应运而生。
模拟灌装方案的优势模拟灌装方案采用自动化设备来控制培养基的灌装过程，相较于传统的手动灌装方式，具有以下优势：1.准确性：模拟灌装方案可以通过自动称量和控制流速等功能，确保每个容器中的培养基量一致，避免了人为操作误差的影响。
2.效率：模拟灌装方案可以实现批量生产，大大提高了灌装的效率。
操作员只需设置好参数，然后等待自动完成，节省了大量的人力和时间成本。
3.重复性：模拟灌装方案中的设备可以精确记录每次灌装的参数，如时间、容器编号等，确保实验的可重复性和数据的准确性。
模拟灌装设备的选择选择适合的模拟灌装设备对于实现高质量的培养基灌装至关重要。
以下是一些选择设备的要点：•设备品牌和质量：选择可靠品牌的设备，确保设备的质量和性能稳定。
•精度和准确性：设备应具备高精度的称量功能和流速控制功能，以确保培养基量的准确性。
•操作简便性：设备的操作界面应简单明了，方便操作员进行设置和监控。
•安全性：设备应具备安全保护措施，如气压过载保护、漏液报警等，以确保操作人员和实验室的安全。
模拟灌装方案的具体步骤下面将介绍基于模拟灌装的培养基灌装方案的具体步骤：1.准备工作–清洁：确保工作区域和设备的清洁。
–检查：检查设备是否正常运行，如有故障应及时修复。
–验证：检测设备的准确性和精确度。
2.样品准备–固体培养基：根据实验需求，称取适量的固体培养基到容器中。
–培养基粉末：按照比例配备所需的培养基粉末。
培养基模拟灌装探讨
培养基模拟灌装探讨培养基灌装是微生物学和生物技术生产中必不可少的操作。
在制备培养基时，需要进行分装或灌装操作，以便存储和使用。
如果培养基灌装存在问题，可能会对实验结果产生负面影响。
培养基灌装的目的培养基灌装的主要目的是制备标准化、无菌的培养基，以便进行微生物生长和研究。
培养基通常使用液态、固态和半固态三种形式，其中液态培养基最常用。
在灌装培养基时，需要注意以下几个方面：1.充分计量：灌装培养基需要精确计量，以便制备标准化的培养基。
一般来说，采用电子秤或者容量瓶等计量工具。
2.选择适当容器：液态培养基需要使用密封性好的容器，避免外部细菌的污染。
同时采用无菌技术进行操作，使培养基不被污染。
具体容器样式包括考培氏烧瓶和培养皿等。
3.选择恰当灌装技术：常见培养基灌装技术包括倒入法、注射法和离心灌装法等。
倒入法适用于液态和半固态的培养基；注射法适用于液态和固态培养基；离心灌装法用于高度浓缩的培养基。
常见的问题与解决方法在培养基灌装的过程中，可能会出现一些常见问题。
下面我们来一一介绍这些问题及解决方法。
1. 灌装容器不够无菌导致污染在灌装液态培养基时，如果容器本身不够无菌，或者在灌装过程中净化技术不够，可能会导致灌装出的培养基污染。
这种情况下，可以在洁净室或者至少在有洁净工作环境的实验室操作，并采用适当的净化技术，如火焰消毒法和紫外线杀菌法。
2. 灌装过程中出现泡沫在灌装培养基的过程中，可能会出现空气泡沫。
空气泡沫不仅浪费培养基，而且可能也会影响培养基中微生物的生长情况。
解决方案包括在灌装前预先加热培养基、使用离心法或者去泡沫的添加剂，以消除泡沫。
3. 培养基灌装不充分培养基灌装不充分会导致不同培养基质量差异和生物学数据的不准确性。
可以通过修改培养基灌装技术、适当使用压力和检查实验室设备，确保灌装完全。
4. 培养基灌装过程中出现水珠水珠会在培养基灌装过程中出现，可能是因为容器表面有油或其他物质残留引起的。
可以使用纯水洗刷容器，并且可使用适当的洁净剂消除残余物质。
培养基模拟灌装试验相关缺陷改进
link appraisement梁芳芳浙江医药股份有限公司新昌制药厂梁芳芳（1982.10.09-）女，汉族，浙江新昌人，本科，工程师，研究方向：注射剂产品质量管理（1979，02，工程师，研究方向：产品技术转移过程质量管理。
中国科技信息2021年第11期·CHINA SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION Jun.2021◎31万～60万中采用的培养箱的设备编号、培养数量、培养温度以及存放时间等；没有记录表面微生物的监测情况以及操作人员出入清洁区的时间；没有详细记录对在线悬浮粒子的监测数据；没有记录培养基的配置流程、批号、促生长试验和灵敏度试验的相关内容；操作人员检查培养基的无菌性时，没有记录取样的时间；冻干机中的模拟产品具体的装载方式没有进行记录；没有具体的记录灌装模拟过程中具体的动作和频次；没有详细的记录胶塞、工作服、西林瓶、配液系统、容器具等工具完成灭菌作业后应存放多长时间可以再次使用；对于设备的维修与停机时间以及针头更换频率没有及时记录；没有记录维修人员模拟过程中都带了哪些工具以及都进行了什么操作；报废产品的数量以及具体原因也没有进行记录。
偏差调查对于试验过程中出现的各类偏差也一定要详细的记录下来，而在实际的模拟过程中却发现企业并没有充分的调查偏差出现的原因，而这类缺陷问题具体表现为：没有充分的调查试验中样品的整体污染情况，那么最后的试验结果与污染是否存在关联性就无法确认了；试验中所选用的胶塞与实际生产过程中所采用的胶塞可能是不同厂家的，对这种情况没有进行偏差处理；完成整个试验后将样品先存放在了常温留样室内，并没有理解放入到培养箱中，对于这类偏差问题也没有进行调查；对悬浮粒子进行动态监测时如果发现其超过了最大限值，也应及时进行处理。
干扰设计进行培养基的模拟灌装试验时一定要保证所有生产活动都是符合要求的，但是也还是会出现故障维修、卡瓶和倒瓶等意外问题的，那么试验中对于各类操作偏差以及干预措施也应真实的进行模拟，具体的表现为：试验中采取的干预次数并没有将真实生产情况准确的反映出来，主要问题就是试验中操作次数是少于实际生产中的操作次数的；对于理瓶操作中一些常见参数没有进行有效干预，如维修人员的进入时间、装量的检查、班次的更替、分装机隔离门的开关次数以及卡塞等内容，对设备可能出现的停机和维修状态没有进行模拟；未将A级区沉降菌更碟等操作内容纳入到干扰试验中。
全自动冻干车间培养基模拟灌装的验证方法
Part 1、本文的主要观点本文主要探讨的是培养基模拟灌装验证中的风险点及验证方法。
1.1风险分析培养基经过配制除菌过滤后，由灌装岗位灌至经335 ℃灭菌的西林瓶中半压塞（胶塞121 ℃灭菌F0 值≥ 15），装入冻干机内，将制品按既定曲线进行抽真空后压塞，出箱轧盖。
生产过程中设备自动化程度较高，人员依赖少；为了确保人员、机器、物料、操作规程、环境能达到无菌保证要求，从各个方面对无菌生产工艺过程影响无菌保证的风险要素进行分析，以确定无菌培养基模拟灌装工艺验证的范围和程度。
1.1.1 风险评估工具：采用RAC 打分方法对验证前识别的风险点进行评级。
RAC 风险评价指数矩阵法：采用科学的RAC 风险评价指数矩阵法对出现的风险进行分级：风险程度（R）=风险概率（P）×风险严重度（S）。
通过规定风险严重性等级及风险概率的定性等级，进行不同的等级组合对风险进行分级。
如：1.1.2 风险概率等级A 级- 频繁- 几乎经常出现，连续发生；B 级- 容易- 在整个产品的生命周期中将出现若干次，经常发生；C级- 偶然- 在整个产品的生命周期中可能出现，有时发生；D 级- 很少- 不能认为不可能发生，可能发生；E 级- 不易- 出现的概率接近于零，可以假设不发生。
1.1.3 风险严重度等级Ⅰ级- 非常危险性的- 质量管理活动某一部分或某些部分失败；已有证据证明产品不符合要求导致患者死亡；Ⅱ级- 危险性的- 已有证据证明质量管理活动某一部分或某些部分受到威胁；Ⅲ级- 处于危险与安全之间（临界）的- 质量管理活动可能受到潜在威胁，无法证明是否已造成损害或产品不符合要求导致患者死亡；Ⅳ级-安全的- 无损害。
1.1.4 风险定性分级用矩阵指数的大小作为风险分级的准则。
一级风险：指数为1 ～5，是不能接受的风险，必须降低；二级风险：指数为6 ～9，是不希望有的风险，必须适当地降至尽可能低，需要相关的组织决策确定是否可以接受；三级风险：指数为10 ～17，是有条件接受的风险。
培养基模拟灌装试验验证方案
培养基模拟灌装试验验证方案一、研究目的和意义培养基的生产过程中，灌装是一个重要环节。
灌装的准确与否直接关系到培养基的质量和效果。
为了验证培养基灌装的准确性以及提高生产效率，进行培养基模拟灌装试验是必要的。
本文从试验方案的制定、具体步骤和结果分析等方面进行探讨。
二、试验方案的制定1.确定试验目标：验证培养基模拟灌装的准确性和可操作性。
2.选择适当的试验设备：选择一台能够准确模拟真实灌装流程的设备，例如自动灌装机。
3.确定试验参数：确定试验中需要测量和记录的参数，例如灌装速度、灌装量、灌装时间等。
4.制定操作流程：制定灌装试验的具体操作流程，包括设备准备、样品准备、灌装过程、数据采集等。
5.确定试验样品：选择一种常用的培养基作为试验样品，根据生产需求确定灌装量。
三、具体步骤1.设备准备：检查试验设备的工作状态，确保设备正常运行。
2.样品准备：准备试验样品，确保培养基的质量符合规定要求。
3.灌装过程：根据试验方案确定灌装参数，将培养基灌装到目标容器中。
4.数据采集：在灌装过程中记录和采集重要数据，例如灌装速度、灌装量、灌装时间等。
5.重复试验：进行多次试验，以获取可靠的数据并验证试验结果的可重复性。
四、结果分析1.数据处理：整理试验数据，计算平均值、标准差等统计数据。
2.数据分析：对试验结果进行分析，比较不同试验之间的差异和变异程度。
3.结果评估：评估培养基模拟灌装试验的准确性和可操作性，根据试验结果确定是否需要调整灌装参数。
4.结论和建议：根据试验结果提出相应的结论和建议，为实际生产中的培养基灌装提供参考依据。
五、实施方案1.确定试验计划：按照前述步骤制定实施方案，并明确各个步骤的操作要求和注意事项。
2.实施试验：按照试验方案进行试验，并确保每个步骤的操作准确无误。
3.数据分析和结果评估：对试验结果进行数据处理、分析和评估。
4.撰写报告：根据试验结果撰写试验报告，包括试验目的、试验方案、试验结果等内容。
培养基模拟灌装验证方案
培养基模拟灌装验证方案一、背景介绍在微生物实验室中，培养基的灌装是一个重要的实验步骤。
正确的培养基灌装可以保证实验的准确性和可重复性。
因此，为了验证培养基模拟灌装的准确性和精确度，制定一套验证方案是必要的。
二、实验目的验证培养基模拟灌装的准确性和精确度，以确保其符合实验要求。
三、验证方案1.设计验证样本选择不同容器（如试管、烧杯、培养皿）作为验证样本，并准备标准培养基。
2.准备仪器和设备准备一个称量器、一个热源、一个培养基灌装器和一组各种验证样本。
3.确定灌装重量使用称量器称量灌装前和灌装后的每个验证样本的重量，并记录下来。
4.培养基灌装将标准培养基加热至适当温度，在无菌条件下使用培养基灌装器向每个验证样本中加入等量的培养基。
5.测量灌装后重量将每个灌装后的验证样本再次称重，记录下灌装后的重量。
6.计算灌装精度计算每个验证样本的灌装精度，公式如下所示：灌装精度=(灌装后重量-灌装前重量)/灌装前重量×100%7.统计结果将每个验证样本的灌装精度记录下来，并计算平均值和标准偏差。
8.结果分析比较平均值和标准偏差是否在可接受的范围内。
如果平均值接近100%，且标准偏差较小，则说明培养基模拟灌装的准确性和精确度较高。
9.结论根据实验结果，得出对培养基模拟灌装的准确性和精确度的评价，并提出改进建议和措施。
四、改进建议和措施1.定期校准设备：确保培养基灌装器的准确性和精确度，定期进行校准和检验。
2.培训操作人员：培训操作人员掌握培养基灌装的正确方法和技巧，提高实验操作的准确性。
3.优化工艺流程：对于培养基灌装的每个步骤进行优化，优化流程，提高操作效率和质量。
4.质量控制：建立培养基灌装的质量控制体系，制定相关的质量控制标准和标准操作规程，确保每次灌装的准确性和精确度。
五、安全注意事项1.在操作过程中，严格遵守无菌操作规范，确保实验的准确性和可靠性。
2.使用热源时，注意火源安全，避免烧伤或火灾事故的发生。
7、培养基模拟灌装试验
• 无菌条件下的运输、转移次数（如容器转移、 加胶塞、加无菌原辅材料） • 灌装过程中的称重 • 微生物污染水平测试 • 必要的书面规程说明，如无菌操作相关的规定 ，允许进行清场的条件
20
A、培养基选择 • 如无特殊要求，所用培养基能够支持微生物生长的菌谱 范围要宽，应能促进革兰氏阳性、革兰氏阴性、酵母菌和霉 菌的生长。 • 推荐使用大豆消化酪素琼脂培养基(SCD) ，以及大豆胰蛋白 胨肉汤(TSB)。 • 干粉工艺：具备与干粉产品流动性能相似的无菌TSB干粉 或无菌安慰剂粉末（乳糖,甘露醇…) • 如果产品在缺氧条件、通常在氮气保护下灌装时，需要 使用厌氧培养基:液体硫乙醇酸盐培养基(FTM)。
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环境监控方案 • 应用风险评估的方法确定关键监控点 – 给产品构成最大风险的位置，如产品暴露位置 、直接接触表面 – 人员 • 按实际需要选择合适的监测方法 – 空气浮游菌 – 沉降菌 – 接触碟/棉签法 • 合理制定控制标准 • 体现全面监控、动态监控
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胶塞漏斗 灌装站 至冻干机
风险点 - 产品暴露区域 瓶子裸露区 灌装站区域 胶塞裸露区
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灌装数量
• 例1：某冻干产品，冻干机容量为30,000瓶，分布 在九个层板上，请问：较合理的一次培养基灌装 数量为多少？如是初始验证，如何考虑不同层板 的分布？
• 9000瓶。层板1、4、7，2、5、8，3、6、9，分三 次三层均匀分布。
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• 例2：某冻干产品为人工灌装，共有三个操作人员 具有无菌灌装资格，批量为3000瓶，请问：此种 情况较为合理的一次培养基灌装数量为多少？
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I、培养基灌装过程记录
• 文件记录：
• •
过程控制检测和实验室检测结果
无菌工艺验证-培养基模拟灌装试验
即使使用最精确的模型模拟实际生产运行，其他的因素也需要考虑，以确保 其合理性。
无菌药品生产－SFDA GMP 检查员高级研讨会 18 | Nanjing, the People’s Republic of China, 16-20 November 2009
培养基灌装方案
关键因素: 生产线 (或 灌装) 速度
培养基灌装的速度，应符合实际生产的灌装速度范围。如果超过了限度，应 该进行评估。
培养基灌装的原则
为什么无菌工艺的验证必须符合制药行业的规范？ “无菌药品”的含义是“没有活体微生物” 在无菌检测过程中，实际上并没有对每个产品进行检测，所以应采 取所有努力减少污染的风险(洁净厂房、 HVAC 、压差、清洗程序、 监测计划)
尽管采取这些措施，但污染永远是一个潜在的风险，因为无菌工艺 操作是在一个受控但是非灭菌的环境中进行的，并且样品取样数量 太小，所以只有严重污染才可能被发现。
SDC 粉末通常遭受支原体的污染，并且无法在无菌过滤中去除。在这 种情况下，可以在粉末灌装前，对粉末进行灭菌（使用γ射线）。
无菌药品生产－SFDA GMP 检查员高级研讨会 14 | Nanjing, the People’s Republic of China, 16-20 November 2009
培养基灌装方案
关键因素: 容器体积(1/2)
应该考虑到灌装容器的极端尺寸。
最大的容器（通常由于充填体积较大而导致最小的充填速度）通常开 口较大，所以从环境中微生物侵入的潜在风险是最大的。 最小的容器（通常由于充填体积较小而导致最大的充填速度）体现了 最大的操作难度；小的容器更容易破碎，稳定性差，在设备中更容易 破裂或堵塞。
MF培养基模拟灌装(A模块)风险分析(2)
无菌制剂车间A模块2013年第一次培养基模拟灌装再验证Protocol Approval 方案批准Revision History版本修订索引Index 目录1.PURPOSE目的 (5)2.SCOPE范围 (5)3.SYSTEM DESCRIPTION系统说明 (5)3.1系统描述 (5)3.2风险分析 (5)4.REGULATORY REFERENCES 参考法规 (6)5.ABBREVIATIONS缩略语 (7)6.RESPONSIBILITIES 职责 (7)6.1 华药新制剂无菌制剂车间 (7)6.2 华药新制剂质量部职责 (7)6.3 公共支持部、动力车间、生产运营部 (8)7.VERFICATION BEFORE MEDIUM FILLING 培养基模拟灌装验证前确认 (9)7.1Personnel Identification人员确认 (9)7.2Calibration of Instruments仪器仪表校验 (13)7.3SOP Verification标准操作流程（SOP）确认 (16)7.4公用设施确认状态确认 (20)7.5工艺设备确认状态的确认 (21)7.6物料状态的确认 (24)8.MEDIUM FILLING SIMULATION VALIDATION VERIFICATON 培养基模拟灌装验证过程确认. (26)8.1培养基配制、除菌过滤 (26)8.2Vial Washing and Drying, Stopper Washing洗烘瓶、胶塞清洗 (27)8.3Rubber Stopper Adding灌装加塞 (28)8.4模拟冻干 (32)8.5Capping压盖 (32)8.6Manual inspection人工检查 (32)8.7Packing Integrity Check包装完整性检查 (32)8.8Sample Culturing样品培养 (33)8.9Medium promption test促生长试验 (33)8.10Potential Deviations or Leakage Treatment可能的偏差或漏项的处理 (33)9.EXECUTION METHODS执行方法 (34)9.1Document Management Practices执行记录规范 (34)9.2Pass/Fail Criteria合格/不合格标注 (35)9.3Handling of Deviations偏差处理 (35)9.4Test Acceptance测试的验收 (36)9.5Handling of Changes变更处理 (36)9.6Execution Methods执行方法 (36)9.7Validation Report验证报告 (36)10.APPENDICES附录 (37)1. Purpose目的验证的目的是对无菌制剂车间冻干制剂在现有生产环境、工艺控制及生产操作条件下是否能有效地防止微生物污染，保证产品的无菌要求。
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.药事.Phorrnoceuticol Administration China Pharmaceuticals 2018年9月20日第27卷第18期Vol. 27, No. 18, September 20, 2018•监管实践• d o i: 10. 3969/j.issn. 1006 -4931. 2018. 18. 026培养基模拟灌装试验相关缺陷分析与改进建议毛红(重庆市药品技术审评认证中心，重庆401120)摘要：目的帮助生产企业和药品生产质量管理规范（GM P)检查员了解培养基模拟灌装试验中的关键点，改进缺陷以符合法规要求。
方法分析无菌药品生产企业G M P认证现场检查发现的缺陷中涉及培养基模拟灌装试验的问题，及其产生原因。
结果与结论共发现与培养基模拟灌装相关的缺陷项378条，出现频次较高的缺陷分为人员与培训、方案设计、培养基及培养条件、记录缺失、最差条件、干扰设计、偏差调查7个方面。
分析其表现及对策，有助于形成培养基模拟灌装试验的关注要点与重点。
关键词：无菌药品；培养基模拟灌装试验;缺陷分析；改进措施中图分类号：R951 文献标识码：A 文章编号= 1006 -4931牗018) 18 -0080-03 Defect Analysis and Improvement Suggestion of Simulation Test of Culture Media FillMao Hongi Chongqing Center fo r Drug Evaluation and Certification，Chongqing，ChinaA b s tra c t： O bjective To help the manufacturing enterprises and GMP inspectors understand the key points in simulated test of culture media fill and improve the defects to meet the requirements of regulations. M ethods The problems and causes of defects involved in simulated test of culture media fill were found and analyzed in the GMP certification on - site inspection of aseptic drug manufacturers.R esults an d C onclusion Totally 378 defects related to simulated test of culture media fill were found. Higher frequency of defects were divided into seven aspects：personnel and t raining，program design,culture media and condition of culture,record m issing,worst condition ,interference design, deviation survey. The analysis of its performance and countermeasures will help to form the key points of simulated test of culture media fill.Key w o rd s： sterile drug products; simulated test of culture media fill;defect analysis;improvement measure《药品生产质量管理规范（2010年修订）》犤](以下简称GMP)及《无菌药品附录》[2]要求，非最终灭菌药品 的无菌工艺验证应进行培养基模拟灌装试验。
该试验是 指采用微生物培养基替代产品(无菌粉末分装的培养基 模拟灌装试验是将产品替代品溶于培养基中)对无菌工 艺进行评估的验证技术，它解决了无菌检查不能复检的 问题，灌装批量即为无菌检查取样量，更能体现污染率 问题犤_4]。
该试验是非最终灭菌药品GMP管理中一项 重要的验证工作。
2014年至2015年，国家食品药品监 督管理总局食品药品审核查验中心在组织的无菌药品 生产企业的GMP认证检查缺陷中，共发现与培养基模 拟灌装相关的缺陷项378条。
本研究中对这些缺陷项进 行了分类汇总和梳理,现报道如下。
1 缺陷项目分类及分析选取近年来收集的与培养基模拟灌装试验相关的 378条认证检查缺陷，出现频次较高的缺陷分为人员与 培训、方案设计、培养基及培养条件、记录缺失、最差条 件、干扰设计、偏差调查7个方面。
人员与培训:无菌药品生产中，人是最大的污染源,操作人员应始终按无菌技术操作,并在日常操作中努力 降低风险犤_6]。
检查中人员与培训缺陷主要为试验中未 包括所有日常生产人员；模拟灌装前未对人员无菌更衣效果进行确认，人员更衣不规范;无菌更衣培训记录过 于简单,无视频资料;未对进人灌装区域的维修人员、环 境监测人员进行表面微生物监测;模拟灌装后培养基的 培养结果由灌装车间灯检岗位人员执行,但未对该岗位 人员进行微生物学知识和检查技能的培训。
人员方面的 缺陷对无菌药品最终质量的影响最大。
方案设计:培养基模拟灌装试验要求尽可能模拟整 个工艺过程，但也要考虑到培养基的生长条件,避免某 些工艺抑制微生物的生长。
检查中方案设计缺陷主要 为，试验时按照正常生产工艺充氮气保护，未考虑氮气 可能对需氧菌的抑菌效果;冻干时真空度过低造成培养 基中的水分减少;培养基在冻干箱中温度降低导致微生 物生长抑制，未同步进行促生长试验；试验中模拟了开 门、停电、停风等会带来污染风险的操作。
试验应当经过 详细的计划和良好的组织，以保证真实反映工艺中的污 染风险犤]。
培养基和培养条件:培养基和培养条件的选择对于 培养基模拟灌装试验的成败至关重要。
检查中此类缺陷 主要为，未对试验用培养基进行灵敏度试验;培养结束 后，未进行培养基促生长能力试验;培养条件未严格按 照微生物的繁殖规律,先低温、后高温进行培养,如验证 方案规定“灌装后的培养基一半置23 ~ 28 °C的温度条第一作者：毛红（196/ -),女，大学本科，高级工程师，研究方向为药品G M P检查，（电话）023 -60353850(电子信箱）120715625@ qq. com。
802018年9月20日第27卷第18期中阌窃4, •药事Voi. 27, No. 18, September 20,2018__________________China Pharmaceuticals__________________Pharmaceutical Administration件下培养7d,另一半置30 ~35 °C培养7d,7 d后交换 培养”培养之前未对已灌装好的瓶子进行倒置和旋转 操作,而是直接采用将瓶子一半正立一半倒置的装载方 式培养，未能确保所有瓶子内的培养基在培养之前均能 与瓶壁和胶塞充分接触;培养室设置的温控探头位置与 温度分布试验结果无对应关系，设置的温度超标报警系 统未进行确认。
记录缺失:GMP要求,所有与质量相关的活动均应 当有记录，记录缺失是GMP检查中普遍存在的问题。
常 见记录缺失缺陷主要为，缺少在线悬浮粒子的监测数据 和B级背景沉降菌/浮游菌的数据；未记录操作人员进 出洁净区时间和表面微生物的监测情况;未记录维修工 模拟了哪些操作，带人了什么工具等;未记录灭菌后的 配液系统、工作服、容器具、西林瓶、胶塞等放置多长时 间后使用;对灌装过程中模拟干预的动作、频次等的记 录不具体;未记录报废品的原因及数量；未记录针头更 换、设备维修与停机的时间；未记录所用培养箱的设备 编号、培养温度、放人时间、培养数量等信息；未记录模 拟产品在冻干机中的装载方式;缺少培养基的批号、配 制过程、灵敏度试验及促生长试验记录;操作人员无菌 性检查未记录取样时间。
最差条件选择：最差条件是指与正常生产条件相 比，更有可能造成工艺或生产失败的条件犤。
企业在培 养基模拟灌装试验中对最差条件常常选择不当，主要存 在的缺陷为，没有挑战灌装器具(包含玻瓶、胶塞、工作 服、工器具)灭菌后存放的最长时间;未对实际生产时多 台分装机同时分装时的情景进行模拟；未根据企业生产 实际情况模拟同一品种同一天内更换批号的操作;试验 前对环境分别进行了乳酸和甲醛的熏蒸,人为制造了良 好的生产环境，导致评估结论不准确。
干扰设计:培养基模拟灌装试验必须模拟所有正常 生产中的活动，如取样、加塞等，但生产中还有一些意外 情况，如倒瓶、卡瓶、故障维修等,所以应按常规生产情 况模拟影响无菌的关键操作和可能出现的各种干预。
检 查中常见干扰设计缺陷主要为，未考虑理瓶期间分装机 隔离门开关次数、装量检查、卡塞，班次更替、维修人员 进人等干预;缺少更换轨道和更换灌装头的模拟；实施 干预的次数不能反映正常生产状况牗卩正常生产时，每 批加胶塞的次数约为30次,但模拟灌装只设计了 12次 加塞操作;正常生产时每批产品灌装过程中会有约16次 检查装量，但模拟灌装试验只设计了 12次）；干扰试验 中未包括A级区沉降菌更碟等操作;未模拟设备维修、停机等状况。
偏差调查:试验过程中应详细记录出现的偏差，并 进行调查，但在检查过程中，常常发现企业缺少偏差调 查或偏差调查不充分的情况。
常见的此类缺陷问题包括，对试验中样品染菌情况的调查不充分，不能确认调 查结果与染菌的相关性;试验中所使用的胶塞与实际生 产用胶塞供应商不一致,未按偏差进行处理;试验完成 后未立即进人培养箱培养，而是存放在常温留样室数 日，对此偏差未开展评估;动态监测悬浮粒子超过警戒 限时未进行调查和处理。
2改进建议与措施为指导和规范无菌药品生产企业开展无菌工艺模 拟试验，国家食品药品监管管理总局食品药品审核查验 中心2016年1月组织启动了《无菌工艺模拟试验指南 (无菌原料药）》和《无菌工艺模拟试验指南（无菌制 剂）》,并于2016年12月向社会公开征求意见，目前尚 未正式颁布。
GMP的认证实施，使大部分药品生产企业 的管理水平得到了提升，特别是硬件设施的保证有了很 大提高。
GMP要求企业进行培养基模拟灌装试验，以确 保无菌生产过程的可靠性,为企业及时识别风险和改进 无菌控制措施提供数据支持犤-10]。