生化实验3 RNA提取

南京大学医学系实验报告

题目：酵母RNA的提取

姓名：彭睿学号：171230511 日期：2019年3月29日

(一)实验目的：

掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。

(二)实验材料：

市售酵母粉、冰醋酸、无水乙醚、95%乙醇溶液、氢氧化钠溶液（0.2%）(三)实验原理：

电子天平、水浴锅、冷冻离心机、离心管、玻璃棒、抽滤瓶、砂芯漏斗、烧杯、量筒、广泛pH试纸

(四)实验原理：

1. 酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%， RNA可溶于碱性溶液，当碱

被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此可得到粗RNA制品。

2. 用碱液提取的RNA有不同程度的降解，不能用做进一步的性质测量。

3.稀碱沸水浴的作用是：破碎细胞、释放出细胞内容物，溶解RNA。加入乙

酸的目的：调节pH。第一次离心：去除蛋白质、菌体等杂质。95%冷乙醇与第二次离心的目的：沉淀RNA，获得粗品。最后乙醇洗两次，乙醚洗两次，即获得粗RNA。

(五)实验步骤：

1.称取8.05g酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加

热30min，同时不断用玻璃棒搅拌。

2.冷却后，加入乙酸调pH为5-6，转入离心管，离心15min（4000r/min）。

3.吸取上清于100ml烧杯中，加入两倍体积的95%乙醇，缓慢加入，边加边

搅。静置，待完全沉淀后，离心5min（4000r/min），倒置离心管彻底去除上清液，留下糊状沉淀。

4.沉淀先用10ml的95%乙醇悬浮，抽滤。滤渣用95%乙醇洗两次，无水乙醚

洗两次；洗涤时用玻璃棒小心搅动沉淀。

5.粗RNA称重，贴好标签，留作下次鉴定和测量用。

(六)实验结果：

1.沸水浴后，得到的混悬液呈米黄色。

2.调节pH至5-6时，溶液滴在广泛pH试纸上几乎不变色，颜色接近pH试纸原

色。

3.第一次离心的结果如图，沉淀为灰白色，上清液为澄清的淡黄色溶液。

4. 加入两倍量的乙醇并搅拌后，出现了一些白色沉淀，因为第一次离心后我们进行了洗涤与转移，溶液量较大，我们选择均分到两个离心管进行离心，离心前进行了约5min 的静置，最终沉淀呈白色，溶液为很淡的黄色。

5. 抽滤过程中，我们未让沉淀全部悬浮起来，两次乙醇洗涤也没有进行激烈的搅拌，只是稍微搅动，此时滤渣均匀分布，如左图所示，形成了大地龟裂状的图案。在乙醚洗涤时，我们进行了搅拌，并尽量打碎结块，但此刻滤渣吸水凝结开始呈现黄色，如右图所示，并具有很大的黏性。

两种洗涤时，本组均关闭了抽滤，让洗涤液缓慢流过样品。

6. 最终我们将滤渣尽量烘干，但成品效果很差，没有改善。

（七） 注意事项与讨论

在实验结束后，我们总结了实验中出现的一些错误：

1. 在离心调节平衡时操作比较僵硬，而且溶液高度相同并不意味着等重。

2.抽滤洗样品前，应该先用乙醇让物质全部悬浮起来，我们缺少了这一步。在

两次乙醇洗涤和两次乙醚洗涤时搅拌不足，这应该是本次实验失败的重要原因。当时听了老师对于之前学生实验的总结，也有一些犹豫，不清楚到底要不要搅拌。

3.直到现在，本组仍然不清楚为何其他组完全不搅拌和全程都搅拌都可能获得

较好结果。经过分析，可能和离心的程度有关，影响最终样品性状的可能是杂质或没有完全去除的水（如搅拌时玻璃棒上有水）。

4.