实验四甘油三酯测定(范玉平)优秀课件
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
15
TG的代谢
外源性途径 内源性途径
16
外源性途径：
指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘 油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞， 再合成TG并与其他脂质形成CM，通过 淋巴系统入血。CM中的TG在脂蛋白脂 肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离 脂肪酸（FFA），被细胞利用或贮存。
17
内源性途径：
CM水解产物—CM残粒以受体介导的 形式被肝脏吸收，其衍生物和一些 新组分合成VLDL。
18
TG测定的方法学
➢ 化学法 ➢ 色谱法 ➢ 酶法
19
化学法ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
化学法用有机溶剂氯仿抽提标本中的TG，去除抽 提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG， 以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应 测甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不 能自动化，而不适于常规工作应用。
27
实验操作(自动分析）
空白管 校准管 质控管 样本管
试剂1 （ul） 240
240
240
240
蒸馏水（ul） 3
—— ——
——
标准液 （ul） ——
3
——
——
质控液 （ul） ——
——
3
——
样本（ul） ——
—— ——
3
混匀，37℃孵育5min
试剂2（ul） 60
60
60
60
混匀，37℃孵育5min，以空白管调零，520nm波长处测定各管 吸光度值(A)。
生化分析相关概念
准确度为一次测量结果与被测量的真值之间的
一致程度。 准确度是一个定性的概念，用于定性描述，如
谈准确度高、低，是否合格。
1
测量误差:是测量结果减真值之差。
误差和准确度属于不同概念，两者之 间不能划等号。
2
不准确度的数字表达是不确定度 (标准 差和置信区间的半宽度表示)。 可以理解为测量结果与约定真值之差
22
酶法
1.磷酸甘油氧化酶法 最为普遍使用 酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽
2.乳酸脱氢酶法 结果准确，但灵敏度低， 试剂不太稳定
3.甘油氧化酶法
23
磷酸甘油氧化酶法实验原理:
LPL
TG + H2O
甘油+FFA
GK
甘油+ATP
甘油-3-磷酸+ADP
GPO
甘油-3-磷酸+O2
磷酸二羟丙酮+H2O2
用途：一级标准品定值；参考方法评价 ( 一般不用 于常规工作 )
7
②参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经 充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与 重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏 度、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方法在条 件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常 规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可 以被接受。
用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂 盒等。 ( 有条件实验室可用于常规工作 )
8
③常规方法（routine method）有足够的精密 度、准确性、特异性和适当分析范围。 用途：经方法评估和学术组织认可后推荐 为常规方法。 例如： TG 定量 决定性方法——同位素稀释/质谱 （ID/GC/MS） 参考方法——酶法 常规方法——酶法
POD
H2O2+4-AAP+DHBS
醌亚胺+ H2O
24
实验操作(手工分析）:
加入物
空白管 标准管 样本管
蒸馏水（ul） 20
—— ——
标准液 （ul） ——
20 ——
样本 （ul） —— —— 20
酶工作液（ml) 1.5
1.5 1.5
混匀，37℃孵育15min，以空白管调零，520nm波 长处测定各管吸光度值(A)。
的范围。
3
生化分析相关概念
正确度 大量测量的均值与真值的接
近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x),
4
生化分析相关概念
精密度：表示测量结果中的随机误差大小
的程度，即指在一定条件下进行多次测 定时，所得结果之间的符合程度。 常用标准差或变异系数表示。
5
生化分析相关概念
实验方法分类
25
酶工作液
试剂1（稀释液） 过氧化物酶 EDTA 4-氨基安替比林 缓冲剂
试剂2（酶试剂） 脂蛋白脂酶 ATP EDTA 甘油激酶 甘油磷酸氧化酶 3，5-二氯-2-羟基苯
磺酸盐 Mg2+
26
计算TG的含量
甘油三酯浓度（mmol/L)=A样/A标×标准液浓度
(2.26mmol/L)
单位换算：
甘油三酯mmol/L×88.5=甘油三酯mg/dL
20
化学法
1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸变色酸法） 比较准确
2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便， 条件温和，但灵敏度低
基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色
21
色谱法
核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS） 主要用作参考系统中决定性方法的建立及 参考物质的制备与定值，此法费用昂贵， 样品处理复杂，难以推广应用。
28
注意要点：
1．酶试剂发红时，不可再用。 2．加入显色剂要准确，加入后立即混匀。 3. 线性范围上限为11.4 mmol/L ，若超过用生理盐水
13
TG的生物化学
二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和 1分子甘油酯化而成，是体内能量的主 要来源。TG处于脂蛋白的核心，在血 中以脂蛋白形式运输。
14
除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一 酯（两者总和不足TG的3%）和游离甘油 （FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、 极低密度脂蛋白（VLDL）及其残粒中，TG 含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL）， 也称残粒样脂蛋白（RLP）
①决定性方法（definitive method） ②参考方法（reference method） ③常规方法（routine method）
6
①决定性方法（definitive method）是指准确度最 高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发 现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方 法，测定结果为“确定值”，与“真值”最接 近。由于技术要求太高，费用昂贵，
9
实验方法选择原则
①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、 安全可行。
②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性 均达到要求。
10
实验四 血清三酰甘油测定
11
实验目的:
1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理 和意义．
2.了解三酰甘油的正常值范围.
12
TG的生物化学
一 ， 血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是 一项重要的临床血脂常规测定指标，特别 是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研 究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危 险因素日益受到重视 。
TG的代谢
外源性途径 内源性途径
16
外源性途径：
指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘 油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞， 再合成TG并与其他脂质形成CM，通过 淋巴系统入血。CM中的TG在脂蛋白脂 肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离 脂肪酸（FFA），被细胞利用或贮存。
17
内源性途径：
CM水解产物—CM残粒以受体介导的 形式被肝脏吸收，其衍生物和一些 新组分合成VLDL。
18
TG测定的方法学
➢ 化学法 ➢ 色谱法 ➢ 酶法
19
化学法ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
化学法用有机溶剂氯仿抽提标本中的TG，去除抽 提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG， 以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应 测甲醛。但因操作步骤繁多、技术要求高、不 能自动化，而不适于常规工作应用。
27
实验操作(自动分析）
空白管 校准管 质控管 样本管
试剂1 （ul） 240
240
240
240
蒸馏水（ul） 3
—— ——
——
标准液 （ul） ——
3
——
——
质控液 （ul） ——
——
3
——
样本（ul） ——
—— ——
3
混匀，37℃孵育5min
试剂2（ul） 60
60
60
60
混匀，37℃孵育5min，以空白管调零，520nm波长处测定各管 吸光度值(A)。
生化分析相关概念
准确度为一次测量结果与被测量的真值之间的
一致程度。 准确度是一个定性的概念，用于定性描述，如
谈准确度高、低，是否合格。
1
测量误差:是测量结果减真值之差。
误差和准确度属于不同概念，两者之 间不能划等号。
2
不准确度的数字表达是不确定度 (标准 差和置信区间的半宽度表示)。 可以理解为测量结果与约定真值之差
22
酶法
1.磷酸甘油氧化酶法 最为普遍使用 酶试剂稳定，灵敏度高，线性范围宽
2.乳酸脱氢酶法 结果准确，但灵敏度低， 试剂不太稳定
3.甘油氧化酶法
23
磷酸甘油氧化酶法实验原理:
LPL
TG + H2O
甘油+FFA
GK
甘油+ATP
甘油-3-磷酸+ADP
GPO
甘油-3-磷酸+O2
磷酸二羟丙酮+H2O2
用途：一级标准品定值；参考方法评价 ( 一般不用 于常规工作 )
7
②参考方法（reference method）是指准确度与精密度已经 充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差很小，与 重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏 度、特异性、直线性及较宽的分析范围。此类方法在条 件优越的实验室中应经常使用。但它主要应用于鉴定常 规方法，评价其误差大小，干扰因素，并决定其是否可 以被接受。
用途：它也用于二级标准品定值，也可用于评价商品试剂 盒等。 ( 有条件实验室可用于常规工作 )
8
③常规方法（routine method）有足够的精密 度、准确性、特异性和适当分析范围。 用途：经方法评估和学术组织认可后推荐 为常规方法。 例如： TG 定量 决定性方法——同位素稀释/质谱 （ID/GC/MS） 参考方法——酶法 常规方法——酶法
POD
H2O2+4-AAP+DHBS
醌亚胺+ H2O
24
实验操作(手工分析）:
加入物
空白管 标准管 样本管
蒸馏水（ul） 20
—— ——
标准液 （ul） ——
20 ——
样本 （ul） —— —— 20
酶工作液（ml) 1.5
1.5 1.5
混匀，37℃孵育15min，以空白管调零，520nm波 长处测定各管吸光度值(A)。
的范围。
3
生化分析相关概念
正确度 大量测量的均值与真值的接
近程度。用偏倚表示不正确度 。 偏倚值(Bias=Xi-x),
4
生化分析相关概念
精密度：表示测量结果中的随机误差大小
的程度，即指在一定条件下进行多次测 定时，所得结果之间的符合程度。 常用标准差或变异系数表示。
5
生化分析相关概念
实验方法分类
25
酶工作液
试剂1（稀释液） 过氧化物酶 EDTA 4-氨基安替比林 缓冲剂
试剂2（酶试剂） 脂蛋白脂酶 ATP EDTA 甘油激酶 甘油磷酸氧化酶 3，5-二氯-2-羟基苯
磺酸盐 Mg2+
26
计算TG的含量
甘油三酯浓度（mmol/L)=A样/A标×标准液浓度
(2.26mmol/L)
单位换算：
甘油三酯mmol/L×88.5=甘油三酯mg/dL
20
化学法
1.Van Handel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸变色酸法） 比较准确
2.分溶抽提-乙酰丙酮显色法 比较简便， 条件温和，但灵敏度低
基本步骤：抽提、皂化、氧化、显色
21
色谱法
核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS） 主要用作参考系统中决定性方法的建立及 参考物质的制备与定值，此法费用昂贵， 样品处理复杂，难以推广应用。
28
注意要点：
1．酶试剂发红时，不可再用。 2．加入显色剂要准确，加入后立即混匀。 3. 线性范围上限为11.4 mmol/L ，若超过用生理盐水
13
TG的生物化学
二 TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和 1分子甘油酯化而成，是体内能量的主 要来源。TG处于脂蛋白的核心，在血 中以脂蛋白形式运输。
14
除TG外，外周血中还存在甘油二酯、甘油一 酯（两者总和不足TG的3%）和游离甘油 （FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、 极低密度脂蛋白（VLDL）及其残粒中，TG 含量高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL）， 也称残粒样脂蛋白（RLP）
①决定性方法（definitive method） ②参考方法（reference method） ③常规方法（routine method）
6
①决定性方法（definitive method）是指准确度最 高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发 现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方 法，测定结果为“确定值”，与“真值”最接 近。由于技术要求太高，费用昂贵，
9
实验方法选择原则
①实用性：速度快、标本用量少、操作简便、 安全可行。
②可信性：精密度、准确度、敏感性、特异性 均达到要求。
10
实验四 血清三酰甘油测定
11
实验目的:
1.掌握酶法测定血清中三酰甘油的原理 和意义．
2.了解三酰甘油的正常值范围.
12
TG的生物化学
一 ， 血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是 一项重要的临床血脂常规测定指标，特别 是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研 究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危 险因素日益受到重视 。