微生物检验第十五章 弧菌科及检验讲义

第十五章弧菌科及检验
本章内容
一、弧菌属
（一）霍乱弧菌
（二）O139型霍乱弧菌
（三）副溶血性弧菌
（四）其他弧菌
二、气单胞菌属与邻单胞菌属
（一）气单胞菌属
（二）邻单胞茵属
革兰阴性
直杆菌或弧菌
有极端鞭毛
氧化酶阳性
动力阳性
发酵葡萄糖
弧菌属——分类
根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：
①O1群霍乱弧菌；
②不典型O1群霍乱弧菌:能被O1群血清凝集但不产生致病毒素；
③非O1群霍乱弧菌；
④其他弧菌：包括副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、创伤弧菌、麦氏弧菌和拟态弧菌。

大多数为非病原菌，对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。

霍乱弧菌——生物学特性
形态与结构
形态：弧形或逗点状，“鱼群状”。

人工培养后呈杆状。

染色：G-。

特殊结构：有菌毛，无芽胞，部分有荚膜。

一端有一根粗而长的鞭毛，悬滴观察可见穿梭样或流星状
运动。

·培养特性
营养要求：不高，可无盐生长。

气体环境：兼性厌氧。

菌落特征：耐碱不耐酸。

pH8.5的碱性蛋白胨水：培养6～9h，增菌形成菌膜。

碱性琼脂平板：较大圆形扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。

硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）：较大黄色菌落。

亚碲酸钾琼脂平板：还原亚碲酸钾成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。

庆大霉素琼脂：形成的菌落中心呈灰褐色。

·抗原
·变异性：有形态变异、菌落变异、溶血性变异和毒力变异。

·抵抗力：对热、干燥、日光、酸、消毒剂很敏感。

但耐碱力较强。

霍乱弧菌——微生物检验及鉴定
·标本采集：以粪便（米泔水样便）为主，尽可能在用药之前采取。

及时接种适宜培养基。

常用的保存或运送培养基有碱性蛋白胨水、文-腊二氏保存液和卡-布运送培养基等。

·形态学检查：
①动力观察：米泔水样粪便悬滴观察可见流星或穿梭状运动的细菌。

②制动试验：加霍乱多价诊断血清后弧菌凝集，运动停止。

③涂片染色：革兰染色，观察革兰染色阴性呈鱼群状排列的弧菌。

·分离培养
增菌：碱性蛋白胨水。

弱选择培养基：碱性琼脂和碱性胆盐琼脂。

强选择培养基：庆大霉素琼脂、4号琼脂和TCBS琼脂等。

·生化反应
糖类发酵试验氧化酶
试验
硝酸盐还原
试验
ONPG
试验
明胶液化
试验
吲哚
试验
动力
试验
霍乱
红反
应
V-P
试验
多黏菌素B
敏感试验
分解甘露醇、
葡萄糖、蔗糖、
麦芽糖
产酸不产气
+ + + + + + +
古典生
物型
- + EITor
生物型
+ -
·霍乱的病原菌，一种急性烈性肠道传染病，发病急，传染性强，死亡率高。

副溶血弧菌——生物学特性
·形态与结构
形态：多形性。

染色：G-；两极浓染。

特殊结构：一端有单鞭毛，运动活泼。

无芽胞、无荚膜。

培养特性
营养要求：不高；嗜盐性弧菌。

气体环境：需氧。

温度环境：pH为7.0～9.5，最适pH为7.7。

菌落特征：
35g/LNaCl琼脂平板：蔓延生长，菌落边缘不整齐，凸起光滑湿润不透明。

副溶血性弧菌专用选择培养基：形成稍隆起浑浊无黏性绿色菌落。

羊血琼脂平板：形成圆形隆起湿润灰白色菌落，某些可形成α/β溶血。

TCBS琼脂：不发酵蔗糖，菌落绿色。

抗原：
具O抗原、H抗原及K抗原，以O抗原定群，以O抗原、K抗原组合定型。

抵抗力：
不耐热，不耐冷，不耐酸，对常用消毒剂抵抗力弱。

副溶血弧菌——微生物检验及鉴定
标本采集：患者的粪便、可疑食物、炊事用具的洗涤液等。

形态学检查
分离培养：无盐培养基中不生长。

在70g/LNaCl培养基中生长，在100g/LNaCl培养基中不生长。

40g/LNaCl蛋白胨水中，培养增菌。

接种副溶血弧菌选择培养基，培养18～24h。

菌落湿润、浑浊无黏性，呈绿色。

生化反应
糖类发酵试验硫化
氢试
验
氧化酶
试验
甲基红
试验
V-P试验
动力试
验
吲哚试
验
尿素酶试
验
神奈
川试
验
分解葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、
淀粉、阿拉伯糖；不分解乳糖、
蔗糖，产酸不产气
- + + - + + - +
副溶血弧菌——致病性及临床意义
致病物质：黏附因子（主要为菌毛）、毒素（如耐热性溶血素）。

所致疾病为食物中毒及急性胃肠炎，常为被污染的海产品及盐腌制品所引起；此菌尚可引起浅表创伤感染、败血症等。

其他弧菌
1.拟态弧菌常引起胃肠炎，但不引起暴发流行。

2.创伤弧菌该菌引起的疾病最为严重，病程进展非常快且致命。

3.溶藻弧菌是弧菌属中耐盐性最强的致病菌。

4.河弧菌
5.弗尼斯弧菌
6.霍利斯弧菌
7.其他弧菌
气单胞菌属——分类
主要有10种。

有临床意义：嗜水气胞菌、豚鼠气单胞菌、温和气单胞菌、维隆气单胞菌、舒伯特气单胞菌、简达气单胞菌和易损气单胞菌。

无临床意义：杀鲑气单胞菌、中间气单胞菌、嗜泉气单胞菌。

气单胞菌属——生物学特性
形态与结构
形态：短杆菌，两端钝圆。

染色：G-。

特殊结构：单极鞭毛，运动极为活泼。

无芽胞，有窄的荚膜。

培养特性
营养要求：不高；生长不需要NaCl。

气体环境：兼性厌氧。

温度环境：0～45℃；最适30℃。

菌落特征
普通培养基：形成微白色半透明的菌落。

血琼脂：形成灰白光滑湿润凸起菌落，多数有β溶血环。

肠道选择培养基：大多数形成乳糖不发酵菌落，TCBS琼脂上生长不良。

气单胞菌属——微生物检验及鉴定
标本采集：采集粪便、血液、脓汁、脑脊液、尿液等。

形态学检查：革兰阴性短杆菌；运动活泼。

分离培养：
血液标本经肉浸液或胰化酪蛋白大豆肉汤内增菌后转种血琼脂平板或含氨苄西林血平板；脓汁、分泌物等直接接种血琼脂平板；粪便标本接种肠道选择培养基。

气单胞菌属——微生物检验及鉴定
生化反应
气单胞菌属——致病性及临床意义
广泛分布于自然界，可从水源、土壤以及人的粪便中分离。

气单胞菌可引起腹泻，并可引起伤口感染及菌血症，偶尔引起心内膜炎、脑膜炎、肺炎、脊髓炎、腹膜炎、关节炎、血栓性静脉炎和胆囊炎。

邻单胞菌属
生长不需要NaCl。

只有一个种即类志贺邻单胞菌。

可引起水样腹泻和食物中毒；在机体免疫力降低时，可引起蜂窝织炎、骨髓炎、脑膜炎和败血症。

霍乱弧菌经人工培养传代后，显微镜下观察是
A.杆状
B.球形
C.椭圆形
D.弧形
E.纤丝状
『正确答案』A
『答案解析』霍乱弧菌人工培养后呈杆状。

可用作霍乱弧菌的运输保存的培养基是
A.碱性蛋白胨水
B.P、V平板
C.SS琼脂
D.EC肉汤
E.GN增菌液
『正确答案』A
『答案解析』霍乱弧菌需在碱性环境中生长，应用碱性蛋白胨水运输保存。

在碱性培养基中生长良好的细菌是
A.葡萄球菌
B.霍乱弧菌
C.大肠埃希菌
D.结核分枝杆菌
E.厌氧菌
『正确答案』B
『答案解析』在碱性培养基中生长良好的细菌是霍乱弧菌。

患者男，30岁。

在小饭店就餐后出现腹痛腹胀，剧烈腹泻，呈水样便伴呕吐1天，头晕无力，无腹痛，
无里急后重。

查体：血压80/60mmHg，面容疲倦，皮肤松弛，有口干舌燥感，眼窝内陷，首选的检查是
A.尿常规检查
B.取外周血进行白细胞计数
C.碱性蛋白胨水接种
D.大便常规检查
E.粪便标本立即进行直接悬滴检查
『正确答案』E
『答案解析』患者症状怀疑霍乱弧菌感染，取患者粪便作悬滴观察，可见穿梭样或流星状运动。

用于培养霍乱弧菌的选择性培养基是
A.麦康凯培养基
B.SS琼脂
C.LB琼脂
D.庆大霉素琼脂
E.蛋白胨水
『正确答案』D
『答案解析』用于培养霍乱弧菌的弱选择培养基包括碱性琼脂和碱性胆盐琼脂，
强选择培养基包括庆大霉素琼脂、4号琼脂和TCBS琼脂等。

不属于霍乱弧菌生物学性状的是
A.曾引起7次世界大流行
B.可用活菌悬滴法直接观察其动力
C.本菌初次分离通常用碱性蛋白胨水
D.运动活泼，周生鞭毛
E.患者粪便常呈米泔水样
『正确答案』D
『答案解析』霍乱弧菌有单鞭毛，运动活泼。

不属于霍乱弧菌培养特性的是
A.怕酸耐碱，可用碱性蛋白胨水增菌
B.EITor生物型弧菌在血平板上可出现β溶血
C.在TCBS平板上霍乱弧菌形成绿色较大菌落
D.霍乱弧菌在液体培养基中大量生长，可形成菌膜
E.庆大霉素琼脂，形成的菌落中心呈灰褐色
『正确答案』C
『答案解析』霍乱弧菌在TCBS平板上霍乱弧菌形成黄色较大菌落。

关于霍乱弧菌，叙述错误的是
A.O1群有古典生物型和EITor生物型之分
B.庆大霉素平板上不生长
C.多黏菌素B敏感试验可用于古典生物型和EITor生物型的鉴别
D.营养要求不高，在普通营养琼脂上生长良好
E.感染途径主要是通过污染的水源或食物经口摄入
『正确答案』B
『答案解析』霍乱弧菌在庆大霉素琼脂上生长为灰褐色的菌落中心。

霍乱弧菌的主要致病物质是
A.内毒素
B.外毒素
C.普通菌毛
D.荚膜
E.Vi抗原
『正确答案』B
『答案解析』霍乱弧菌的主要致病物质是外毒素。

弧菌科细菌区别于肠杆菌科细菌的特征是
A.氧化酶阳性
B.有动力
C.发酵葡萄糖
D.有鞭毛
E.吲哚试验阳性
『正确答案』A
『答案解析』弧菌科细菌区别于肠杆菌科细菌的特征是氧化酶阳性。

副溶血弧菌的主要致病物质是
A.耐热肠毒素
B.不耐热肠毒素
C.溶血素A
D.耐热直接溶血素和耐热相关溶血素
E.志贺样毒素
『正确答案』D
『答案解析』副溶血弧菌的主要致病物质是耐热直接溶血素和耐热相关溶血素。