流式常用试剂配制

流式常用试剂配制

，、流式细胞术常用试剂

1、10% NaN3:将10gNaN3 溶解于100ml 蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。

2、3% BSA/PBS : 100ml PBS 中加入3g BSA，使之溶解，再加入0.2ml 10%的NaN3。

3、500mmol/L EDTA :将186g EDTA?Na2?2H z O 溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至8.0，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。

4、4%多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛

溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至7.4,使用前新鲜配制。

5、消化液：0.25%胰蛋白酶（用培养液或PBS 配制）或0.25%胰蛋白酶与0.02% EDTA的混合液。

6、红细胞裂解液：NH4CI 4.16g, KHCO 3 0.5g, EDTA?2Na 0.02g,溶于100ml 水中，调PH 至

7.2，补充蒸馏水至500ml, 4度储存，使用时需

恢复至室温。

7、流式细胞抗体稀释剂：0.1mmol/L PBS液（PH 7.4）+ 1% BSA + 0.1% Na2N3。

&常用细胞破膜剂：PBS液（PH 7.4） + 1% FBS （或BSA） +0.1%NaN3+ 0.1%saponin （Sigma 的效果不错）。

9、流式细胞染色洗涤液：含2%的BSA、0.1% NaN3 的PBS （PH 7.4）。

10、PI染液（保存液，10人用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI溶于10ml PBS，加入2mg 无DNA 酶的RNA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加0.3ml〜0.5ml PI染液。

11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液）

原液A

NaCI 160g

MgSO4?7H2O 2g

KCI 8g

MgCI?6H2O 2g

CaCl2 2.8g

溶于1000ml双蒸水

原液B

1）Na2HPO4?12H2O 3.04g

KH 2PO4 1.2g

葡萄糖20.0g

溶于800ml双蒸水

2）0.4%酚红溶液：取酚红0.4g置玻璃研钵中，

逐滴加入0.1N NaOH并研磨，直至完全溶解，约

加入0.1N NaOH 10ml。将溶解的酚红吸入100ml 量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液，并入量瓶中，最后补加双蒸水至100ml。

将1）液和2）液混合，补加双蒸水至1000ml 即为原液B。

应用液：

原液A 1份

原液B 1份

双蒸水18份

混合后，分装于200ml小瓶中，高压灭菌。临用

前用无菌的5.6%NaHCO3调PH至7.2〜76

12、磷酸盐缓冲液的配制（PB）

A 液（0.2mol/L NaH 2PO4 水溶液）：

NaH 2PO4?H2O 27.6g,溶于蒸馏水中，稀释至

1000ml。

B 液（0.2mol/L Na2HPO4水溶液）：

Na2HPO4?7H2O 53.6g加蒸馏水溶解，加水至

1000ml。

不同PH值PB的配制：

A液xml （参照下表）中，加入B液yml，为0.2mol/L的PB。若再加蒸馏水至200ml，则成0.1mol/L PB。

PH x/ml y/ml

5.793.5

6.5

5.892.0 8.0

5.990.0 10.0

6.0 8

7.7 12.3

6.185.0 15.0

6.281.5 18.5

6.37

7.5 22.5

6.473.5 26.5

6.568.5 31.5

6.662.5 3

7.5

6.756.5 43.5

6.851.0 49.0

6.945.0 55.0

7.0 39.0 61.0

7.133.0 67.0

7.228.0 72.0

7.323.0 77.0

7.419.0 81.0

7.516.0 84.0

7.613.0 87.0

7.710.0 90.0

7.88.50 91.0

7.97.00 93.0

8.0 5.30 94.7 13、PBS的配制

配制PBS,只要在相应的PB基液中加入8.5g/L NaCI即可。

二、常用激活剂

1、激活剂PMA :用DMSO配制成0.1mg/ml，分装20ul/管，一20度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1: 100稀释储存液，终浓度为20ng/ml。

2、激活剂离子霉素：用乙醇配制成浓度为

0.5mg/ml的储存液，—20度保存。实验时用无

菌、无叠氮钠PBS 1: 10稀释储存液，终浓度为

1ug/ml。

3、Staphylococcal enterotoxin B(SEB):用无菌无叠氮钠PBS调节浓度0.5mg/mL , 4C储存，SEB 终浓度10ug/mL。

4、CD3 :包被在培养板中，在蛋白转运抑制剂存

在下活化未稀释的血液细胞。

5、CD28 :加速不同刺激剂（包括SEB、CD3 等）的活化效应，浓度一般为10ug/ml。

6、阻断剂Bregeldin A :用DMSO配制成浓度为

5mg/ml的储存液，分装20ul/管，—20度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1: 10稀释储存液，在激活过程最后4〜5小时使用BFA，终浓度为10ug/ml。

7、阻断剂莫能菌素：用DMSO配制成浓度为

1mg/ml的储存液，4C储存至少4个月，实验时用无菌、无叠氮钠PBS 1: 10稀释储存液，终浓度