雌二醇检测标准操作流程

概述

雌激素能促使女性的第二性征发育。它与促孕激素（孕酮）协同调控女性的生殖过程。具有生物学活性的雌激素是17β-雌二醇，是一种分子量约为272道尔顿的甾类激素。雌激素主要在卵巢（卵泡、黄体）中生成，睾丸和肾上腺皮质也会生成少量的雌激素。妊娠期间，雌激素主要生成于胎盘。约98%的雌二醇是与转运蛋白（SHBG：性激素结合球蛋白）结合运转。在月经周期中，雌激素的分泌分为两个阶段。检测雌二醇主要用于临床诊疗下丘脑-垂体-性腺轴功能紊乱性疾病、男性乳房增生症、分泌雌激素的卵巢/睾丸肿瘤以及肾上腺皮质增生症。此外尚可应用于不孕不育的治疗和判定体外授精（IVF）的排卵时间。Elecsys雌二醇检测法是采用特异性针对17β-雌二醇的多克隆抗体的竞争法实验原理。甲二氢睾酮促使内源性雌二醇从样本中释放与钌复合物a标记的雌二醇衍生物竞争生物素抗体的结合位点。

1 目的

规范雌二醇检测测试，确保检测结果准确性和重复性。

2 检测方法和原理

2.1检测方法：竞争法

2.2检测原理：使用释放剂，将样本中包含的内源性雌二醇从其结合蛋白释放出来。然后，添加吖啶酯标记的抗雌二醇单克隆抗体，与可用的雌二醇结合。最后，向反应物中添加雌二醇衍生物捕捉固相，与雌二醇竞争和吖啶标记抗体结合。洗涤后，添加酸和碱，以启动化学发光反应。

3 标本采集与保护

新鲜无溶血血清

遵守以下推荐的血清标本处理，运行和储存步骤

3.1用真空采样管采集血液标本时须遵守常规注意事项

3.2离心前使标本完全自然形成凝块

3.3全程保证样品管的密闭状态

3.4尽快分离血清，并及时测定

3.5如果标本不能在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在4℃或更低温度的环境中：3.6冷藏标本室温放置20分钟后再测定；

3.7冷冻标本室温解溶后放置20分钟后再测定

3.8不符合标本处理

3.8.1溶血和乳糜血标本在报告单的备注栏注明

3.8.2标本量过少的标本，严重溶血和乳糜血标本与临床沟通并将标本退回，填写不合格标本拒接登记。

4 试剂和设备

4.1试剂

SIEMENS原装配套试剂

4.1.1试剂组成

该试剂盒由含雌二醇标记试剂、固相试剂和辅助孔试剂的主试剂包，含雌二醇辅助试剂的辅助包，以及雌二醇主曲线卡组成。

组成试剂成份

标记试剂（7.5mL/试剂包）：吖啶酯标记的抗雌二醇绵羊单克隆抗体(~22ng/mL)，置于含牛血清白蛋白、羊γ球蛋白、表面活性剂和防腐剂的缓冲液中。

固相试剂（10.0mL/试剂包）：与磁性乳胶颗粒结合的雌二醇捕捉结合物(~1.7 ng /mL)，置于含牛血清白蛋白、表面活性剂和防腐剂的缓冲液中。

辅助孔试剂（2.5mL/试剂包）：含牛血清白蛋白和防相剂的缓冲液。

雌二醇辅助试剂（10.0mL/试剂包）：释放剂缓冲盐水，含猪肝素和防腐剂。

4.1.2试剂准备：手工混合所有试剂包。肉眼检查试剂底部以确保所有颗粒分散均匀并处悬浮状态，然后将混合物载入系统直接使用

4.1.3试剂保存

试剂2~8℃避光保存，并保持竖直向上

4.2质控品

SIEMENS原装配套质控品

4.3校准品

SIEMENS原装配套标准品。

4. 4警告和注意事项

4.4.1只可用于体外诊断；

4.4.2试剂中含有叠氮钠，请小心处理，请勿吞服或与皮肤粘膜接触！叠氮钠在与铜或铅等重金属接触后会产生有毒的叠氮化物；

4.4.3试剂盒的测定结果仅作为临床各种疾病的辅助诊断依据

4.5仪器

ADVIA Centaur CP 全自动化学发光免疫分析仪

5 操作程序

5.1检测过程流程

签收样品→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存

5.2样本签收

严格按标本接收程序签收标本

5.3标本处理

以3000r/min，离心6~10min，分离血清上机测定，若标本不能及时检测，将分离血清冷藏于2~8℃的冰箱内

5.4标本检测

5.4.1手工编排测试项目：在主界面选中样本区域→选择样本架→选择样本→点击Samples区域中的样本类型选择按钮→切换至样本类型→选择样本ID编排区→没有通过扫描样本管条形码输入ID号的样本，在此处手工输入样本ID →然后在Assay Selection 区域选择测试项目

5.4.2样本运行确认样本装载，必要的样本信息输入完毕→确认所有耗品及试剂已装载→

按开始运行样本。

5.5检验后标本保存

保存在标本冰箱内，保存期为7d

6 校准程序

6.1校准品的准备和储存

将校准品从冰箱中取出，加5ml蒸馏水复融，轻轻旋转摇匀，室温放置30min，待充分混匀后分装。-20℃冰冻保存可保存20d，复融后2~8℃可稳定24h。

6.2校准条件

在室内质控失控，或使用新批号试剂，或更换仪器主要配件，或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为28d

6.3校准程序

参见生化组的校准操作程序

7 质量控制程序

7.1控制品的准备和储存

每瓶准确加入5.0ml蒸馏水复融，轻轻旋转摇匀，室温放置30min待充分溶解后分装，保存于-30℃冰箱，启用前取出，室温放置30min待充分融化后使用，2~8℃可稳定24h。

7.2控制品水平和分析批长度

每24h至少进行1批。

7.3质控操作程序

参见生化组的质量控制操作程序。

8 性能参数

8.1不准确度允许范围±12.5%

8.2不精密度 CV≤8.33%

8.3线性范围10.7pg/ml~3000pg/ml

9 生物参考区间

排卵期22.4-256 pg/ml 黄体期35.5-570. 8pg/ml

卵泡期pg/ml 18.9-246.7 pg/m l 绝经期0-44pg/ml

10异常结果的处理

结果与诊断不符或两次结果差异较大时，应及时与临床沟通。

11 临床意义

生物活性最强的雌激素是17β-雌二醇。主要由卵巢产生。睾丸和肾上腺皮质也产生少量的雌激素。妇女怀孕期，雌激素主要由胎盘产生。检测雌二醇可用于解释下丘脑-脑垂体-性腺调节功能紊乱、男子女性型乳房、产生雌激素型的卵巢和睾丸肿瘤和肾上腺皮质增生等。另外还可用于生育治疗中的疗效监测以及体外受孕中排卵时间的确定。

12 干扰因素

具有下述特点的血清样本研究证实干扰物达以下范围，检测结果变化≤10%

溶血250 mg/dL血红蛋白

脂血1000 mg/dL甘油三酯

黄疸20 mg/dL结合胆红素

黄疸20 mg/dL未结合胆红素

13 安全防护措施

13.1血液标本运输必须保证运输过程的生物安全，防止溢出。血液标本溢出后，应立即对污染环境和设备进行消毒处理；

13.2对标明有污染性疾病的血液标本应特别的防护，以不污染环境和保证工作安全为前提；

13.3在进行血液分析的一切操作过程中应按照《检验科生物安全管理程序》进行；

13.4与血液标本接触的一切器皿。仪器组装/拆卸组合零件都应视为污染源，因此操作人员不小心接触到了这种污染源时，应立即用清水清洗被污染区域并进行消毒；

13.5如果操作人员皮肤或衣服上污染（沾到）了血液或废液应立即冲洗并进行消毒处理。如果眼睛被溅入了血液或废液应立即用大量清水冲洗并进行必要的医疗措施。

13.6血液标本离心的过程中所有标本都应该加盖，离心后，开启试管时应注意防止气溶（雾）胶污染环境；

13.7所有检测过的血液标本及有关废物，都会给您带来潜在的危险及生物污染。所有废弃样本及废物的处理方法同血液标本的处理程序。

14 参考文献

14.1《SIEMENS试剂盒说明书》

14.2《临床实验室操作规程编写要求》

14.3《生化组仪器设备操作程序》