微囊藻毒素(MC)说明书
微囊藻毒素-LR 酶联免疫检测试剂盒(MC-I 型) 说明书
6) 显色底物液 A
1瓶
7) 显色底物液 B
1瓶
8) 终止液
1瓶
9) 浓缩洗涤液(20×)
1瓶
操作流程
样品处理
试剂准备
加入样品/标准品 加入抗体
室温，50min
加入酶标二抗
室温，40min
加入显色底物
室温，10min
吸光度测定
结果分析
结果分析
Absorbance (A)
1.2
1.0
A= - 0.5462 lgC + 0.6979
试剂盒组成
1) 使用说明书 2) 96 孔酶标板板
1份 1 块 (LR-BSA)
3) MC-LR 标准品 5 瓶
(0.2μg/L, 0.5μg/L, 1.0μg/L, 2.0μg/L, 4.0μg/L) 4) 微囊藻毒素-LR 抗体 1 瓶
5) 酶标二抗溶液
1瓶
交叉反应率(%)
工作原理
间接竞争 ELISA 原理示意图
图例(Legend) 固相载体 抗原 抗体 酶标二抗 底物 显色后底物
交叉反应
该试剂盒特异性好，与第四位非精氨酸的微囊 藻毒素几乎没有交叉反应；与第四位为精氨酸的微 囊藻毒素有较小的交叉反应(CR%≤10%)。
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 MC–LR MC–YR MC-RR MC-LF MC–LW Nodularin
0.8
R2 = 0.9997
0.6
0.4
0.2
0.1
1
10
Microcystin-LR (µg/L)
检测平台
相关服务体系
z 了解客户对微囊藻毒素检测和监测的需求；协 助有需要的客户确定合理的监测方案。
自来水中微囊藻毒素的检测
自来水中微囊藻毒素的检测前言微囊藻毒素(Microcystin，MC)是一类具有生物活性的环状七肽化合物，为分布最广泛的肝毒素。
其具有相当的稳定性，它能够强烈抑制蛋白磷酸酶的活性，还是强烈的肝脏肿瘤促进剂。
中国生活饮用水卫生标准（GB 5749-2006）的颁布实施对水源水的质量提出了更高的要求。
本文在“GB/T 20466-2006水中微囊藻毒素的测定”基础上做了一些方法改动，大大提高了该方法做自来水中微囊藻毒素的回收率。
方法中使用Labtech D-SPE全自动固相萃取系统对水中的微囊藻毒素-LR进行固相富集萃取，D-SPE全自动固相萃取系统使用的是膜片萃取，萃取速度快，1L水样的萃取全过程只需27分钟。
通过D-SPE全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合水中微囊藻毒素-LR的检测。
关键词D-SPE全自动固相萃取系统，水，微囊藻毒素-LR， GB/T 20466-20061、设备及试剂D-SPE全自动固相萃取系统，莱伯泰科公司；高效液相色谱仪：LC600 二元高压梯度高效液相色谱，莱伯泰科公司；标样：微囊藻毒素-LR标准物质（农业部环境保护科研监测所，20μg/mL，溶剂：甲醇）；标样工作液：将20μg/mL标样用甲醇稀释至浓度为2μg/mL；甲醇（色谱纯， Fisher Chemical）；三氟乙酸（分析纯，天津市福晨化学试剂厂）；磷酸二氢钾（分析纯，北京化学试剂公司）；磷酸（分析纯，国药集团化学试剂公司）；超纯水；固相萃取膜（3M, C18 47mm）；磷酸二氢钾溶液（0.05mol/L）：称取 6.8g磷酸二氢钾，用水溶解，定容至1000.0mL；磷酸盐缓冲液：用20%（体积分数）磷酸溶液将磷酸二氢钾溶液调至pH到3；洗脱液：用甲醇将0.1mL三氟乙酸定容至100.0mL。
2、测试过程2.1 样品预处理1L 自来水中加入100mg硫代硫酸钠，超声30min，待萃取。
2.2加标样品在2.1的样品中加入200μL的2μg/mL微囊藻毒素-LR标准工作液，样品的加标浓度为400ng/L。
微囊藻毒素(MC-LR)多克隆抗体的制备、纯化及鉴定
Ｐｒ ｄｕ ｔｏ ｕ ｉ ｃ ｔｏ ｎ ｈ ｒ ｃ ｅ ｚ ｔ ｎ ｏ ｏ ｙ ｎ ｉ ｏ ｉｓ ｏ ｃ ｉ ｎ ｐ ｒｆ ａ ｉ ｎ ａ ｄ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ａ ｉ ｆｐ ｌ ａ ｔｂ ｄ ｅ ｉ ｉ ｏ ａ ａ ｎｓ ｉｒ ｃ ｓｉ － ｇ ｉ ｔｍ ｃ ｏ ｙ ｔｎ ＬＲ
Ａ ｓｒｃ ： ｂｅｔ ｅ Ｐｏ ｕｔ ｎａ ｄｃ ａａｔ ｉ ｔ ｎｔｅ ｏ ａ ｔ ｏ ｉ ｇｉｓ ＭＣ Ｓ － Ｒ Ｍｅｈ ｄ ｍ ｃｏｙｔ ． ｂ ｔ ｔ ０ ｊｃｉ ｒｄ ｃ ｏ ｎ ｈ ｒｃ ｒ ａ ｏ ｌ ｎ ｂｄｅ ａａ ｔ Ｙ Ｔ Ｌ ． ｔｏ ｓ ｉ ｃ ｓ ｎ ａ ｖ ｉ ｅｚ ｉ ｈ ｐ ｙ ｉ ｓ ｎ ｒ ｉ Ｌ （ Ｃ Ｌ ）ｗ ｓ ｏ ｊｇｔ Ｌ ｔ ｎｉｍ ｕ ｅｔ ａｂｔ ｙ ｈ ｕｉ ｅ ｏ ． ｕｉ ｅａ ｔｅｕ ｙｃｎｒｕ ａ Ｒ Ｍ － Ｒ ａ ｃｎｕａ ｄ ｔ Ｋ Ｈ， ｈ ｔ ｅｒ ｉｂ ｅｒ ｔ ｅｍ ｔ ｄ Ｐ ｒｙｔ ｎ ｓ ｍ ｂ ｅｔ ｆ ｌ ｅ ｏ ｅ ｎ ｎ ｈ ｂ ｔ ｏ ｎ ｈ ｆ ｈ ｉｒ ｉ ｇ
水中微囊藻毒素的测定
编号：作业指导书水中微囊藻毒素的测定高效液相色谱法临江市环境保护监测站1、方法提要微囊藻毒素在238nm下有1、方法的适用范围本标准规定了高效液相色谱法和间接竞争酶联免疫吸附法测定水中微囊藻毒素（环状七肽）的条件和详细分析步骤。
本标准适应于饮用水、湖泊水、河水、地表水中微囊藻毒素的测定。
样品中微囊藻毒素的检出限：高效液相色谱法和酶联免疫吸附法均匀为0.1µg/L。
2、微囊藻毒素的分子式、分子质量及结构式2.1分子式微囊藻毒素-RR(MC-RR):C49H75N13O12,微囊藻毒素-YR(MC-YR):C52H72N10O13,微囊藻毒素-LR(MC-LR):C49H74N10O12.。
2.2分子质量MC-RR:1038.21mg,MC-YR:1045.2100µg,MC-LR:995.250µg。
2.3结构式MC-RR、MC-YR、MC-LR、X和Y表1 MC-RR、MC-YR、MC-LR、X和Y3、水样采集和保存用采水器采集1500ml～2000ml水样（水样采集后，应在4h内完成以下前处理步骤）。
用500目的不锈钢筛（）过滤，除去水样中大部分浮游生物和悬浮物。
取过滤后的水样1200ml于玻璃杯式滤器（）中，依次经滤膜（）减压过滤。
准确量取1000ml 滤液置于棕色试剂瓶中。
注：如减压过滤后的水样不能立即分析，可置于玻璃容器中，在-20℃保存，30d内分析完毕。
4、试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂和不含有机物的蒸馏水。
5.1甲醇，HPLC级（色谱级甲醇）5.2二氯甲烷，农残级5.3阿特拉津标准贮备溶液，ρ=100µg/mL。
准确称取0.0100g阿特拉津标准样品，用少量二氯甲烷溶解后，再用甲醇准确定容至100mL，作为阿特拉津标准贮备溶液。
在4℃冰箱中保存，保存期半年。
5.4阿特拉津标准使用液，ρ=10.0µg/mL。
微囊藻毒素微生物降解途径与分子机制研究进展
微囊藻毒素微生物降解途径与分子机制研究进展一、内容描述微囊藻毒素(Microcystins,MC)是由某些单细胞藻类产生的一种具有高毒性的天然毒素，广泛存在于海洋环境中。
由于其对生态系统和人类健康的潜在危害，研究微囊藻毒素的微生物降解途径与分子机制具有重要意义。
近年来科学家们在这一领域取得了一系列重要进展。
首先研究人员发现了许多能够降解微囊藻毒素的微生物菌株，这些菌株主要包括细菌、真菌和病毒等，它们可以利用不同的酶类或代谢途径来降解微囊藻毒素。
例如一些细菌通过合成脲酶降解微囊藻毒素中的脲键，从而降低其毒性；真菌则通过降解微囊藻毒素中的脂肪酸酯来达到降解的目的。
此外还有一些病毒可以感染微囊藻并抑制其生长，从而间接地减少微囊藻毒素的产生。
其次科学家们揭示了微囊藻毒素降解过程中的关键酶和代谢途径。
研究表明微囊藻毒素的降解主要涉及多种酶的作用，如脲酶、酯酶、酰胺酶等。
这些酶在不同微生物菌株中具有特异性，可以有效地降解微囊藻毒素。
此外研究还发现，微囊藻毒素的降解过程受到环境因素的影响，如光照、温度、盐度等，这些因素可以影响微生物菌株的生长和代谢途径的选择。
研究人员还探讨了微囊藻毒素降解的分子机制，研究发现微囊藻毒素与微生物菌株之间的相互作用是影响降解效果的关键因素之一。
通过基因工程技术，科学家们已经成功地构建了一些具有抗性基因的微生物菌株，这些菌株可以在高浓度的微囊藻毒素环境中存活并进行有效的降解。
此外研究还发现，微囊藻毒素降解过程中的一些关键酶和代谢产物具有生物活性，可以作为药物或食品添加剂用于环境保护和健康促进等领域。
1. 微囊藻毒素的来源和危害微囊藻毒素是由某些单细胞藻类产生的一种有毒物质，主要存在于海洋中。
这些有毒藻类在生长过程中会分泌出微囊藻毒素，其中包括一些对人体健康具有极大危害的毒素，如艾氏藻毒素、汉氏氏藻毒素等。
微囊藻毒素具有极高的生物活性，能够破坏人体的细胞膜和线粒体功能，导致细胞死亡。
水中微囊藻毒素的测定
编号：作业指导书水中微囊藻毒素的测定高效液相色谱法临江市环境保护监测站1、方法提要微囊藻毒素在238nm下有1、方法的适用范围本标准规定了高效液相色谱法和间接竞争酶联免疫吸附法测定水中微囊藻毒素（环状七肽）的条件和详细分析步骤。
本标准适应于饮用水、湖泊水、河水、地表水中微囊藻毒素的测定。
样品中微囊藻毒素的检出限：高效液相色谱法和酶联免疫吸附法均匀为0.1µg/L。
2、微囊藻毒素的分子式、分子质量及结构式2.1分子式微囊藻毒素-RR(MC-RR):C49H75N13O12,微囊藻毒素-YR(MC-YR):C52H72N10O13,微囊藻毒素-LR(MC-LR):C49H74N10O12.。
2.2分子质量MC-RR:1038.21mg,MC-YR:1045.2100µg,MC-LR:995.250µg。
2.3结构式MC-RR、MC-YR、MC-LR、X和Y表1MC-RR、MC-YR、MC-LR、X和Y微囊藻毒素X YMC-RR Arg(R)Arg(R)MC-YR Tyr(R)Arg(R)MC-LR Leu(L)Arg(R)3、水样采集和保存用采水器采集1500ml～2000ml水样（水样采集后，应在4h内完成以下前处理步骤）。
用500目的不锈钢筛（）过滤，除去水样中大部分浮游生物和悬浮物。
取过滤后的水样1200ml于玻璃杯式滤器（）中，依次经滤膜（）减压过滤。
准确量取1000ml 滤液置于棕色试剂瓶中。
注：如减压过滤后的水样不能立即分析，可置于玻璃容器中，在-20℃保存，30d内分析完毕。
4、试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂和不含有机物的蒸馏水。
5.1甲醇，HPLC级（色谱级甲醇）5.2二氯甲烷，农残级5.3阿特拉津标准贮备溶液，ρ=100µg/mL。
准确称取0.0100g阿特拉津标准样品，用少量二氯甲烷溶解后，再用甲醇准确定容至100mL，作为阿特拉津标准贮备溶液。
微囊藻毒素-LR 酶联免疫检测试剂盒(MC-I 型) 说明书
微囊藻毒素-LR酶联免疫检测试剂盒(MC-I型) 使用说明书User’s Brochure ofELISA Kit (MC-I)for Microcystin-LR Detection北京金达清创环境科技有限公司版权所有北京金达清创环境科技有限公司说明书目录一、试剂盒简介 (1)二、试剂盒组成 (2)三、所需仪器和设备 (3)四、操作流程 (4)五、样品处理 (5)六、实验准备 (6)七、实验步骤 (6)八、结果分析 (9)九、注意事项 (11)十、服务及购买信息 (13)附录一、水样的浓缩 (14)附录二、固体样品的处理 (15)北京金达清创环境科技有限公司一、本试剂盒简介本试剂盒系采用自行研制的微囊藻毒素-LR (MC-LR)与BSA的偶联物作为包被抗原，采用自制的抗MC-LR单克隆抗体(MC8C10)作为一抗，组成的MC-LR间接竞争ELISA检测试剂盒。
该试剂盒可用于水中微囊藻毒素-LR的定量检测；其它固体样品(如藻类、底泥、动物组织等)经过提取后，也可采用该试剂盒进行定量检测。
该试剂盒特异性好，与第四位非精氨酸的微囊藻毒素几乎没有交叉反应；与第四位为精氨酸的微囊藻毒素有较小的交叉反应(≤10%)。
敏感性高：最低检测限0.1μg/L；定量检测区间0.2 ~4.0μg/L。
稳定性强：变异系数≤10%。
检测时间：~2h适应环境温度：20~40o C- 1 -北京金达清创环境科技有限公司二、试剂盒组成1) 使用说明书1份2) 96孔酶标板板1块 (8孔/条 × 12条)(包被有MC-LR-BSA)3) MC-LR标准品5瓶 (2mL/瓶)(0.2μg/L, 0.5μg/L, 1.0μg/L, 2.0μg/L, 4.0μg/L)4) 微囊藻毒素-LR抗体1瓶 (7mL)5) 酶标二抗溶液1瓶 (12mL)6) 显色底物液A 1瓶 (6mL)7) 显色底物液B 1瓶 (6mL)8) 终止液1瓶 (7mL)9) 浓缩洗涤液(20×) 1瓶 (18mL)- 2 -北京金达清创环境科技有限公司三、所需仪器和设备1) 单道微量移液器(20~200μL) 1支可选配多道微量移液器(20~200μL) 1支2) 酶标仪(含450nm波长)，自带打印功能，或配置打印机，或配置电脑3) 0.45μm微滤膜过滤装置，或高速离心机4) 4o C冷藏冰箱5) 计时器；烧杯等- 3 -北京金达清创环境科技有限公司四、操作流程- 4 -试剂准备 样品处理 加入样品/标准品和抗体 加入酶标二抗室温，50min 加入显色底物室温，40min室温，10min吸光度测定结果分析北京金达清创环境科技有限公司五、样品处理对于较干净的水样(如饮用水)可直接测定。
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微囊藻毒素(MC)酶联免疫酶联免疫分析分析分析
试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围检测范围：： 96T
30 ng/L -850 ng/L
使用目的使用目的：：
本试剂盒用于测定样本中微囊藻毒素(MC)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中微囊藻毒素(MC)水平。
用纯化的微囊藻毒素(MC)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入微囊藻毒素(MC)，再与HRP 标记的微囊藻毒素(MC)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的微囊藻毒素(MC)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中微囊藻毒素(MC)浓度。
试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液 6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（1600 ng/L ） 0.5ml ×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶
4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6
显色剂B 液
6ml ×1/瓶
12
密封袋
1个
标本标本要求要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
800 ng/L 5号标准品 150µl 的原倍标准品加入150µl 标准品稀释液 400 ng/L 4号标准品 150µl 的5号标准品加入150µl 标准品稀释液 200 ng/L 3号标准品 150µl 的4号标准品加入150µl 标准品稀释液 100 ng/L 2号标准品 150µl 的3号标准品加入150µl 标准品稀释液 50 ng/L
1号标准品
150µl 的2号标准品加入150µl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50µl ，待测样品孔中先加样品稀释液40µl ，
然后再加待测样品10µl （样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50µl ，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl ，再加入显色剂B50µl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50µl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结操作程序总结：：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。