磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)检测试剂盒(PEP比色法)
人教版高考生物学一轮总复习课后习题 第3单元 细胞的代谢 课时规范练9 光合作用与能量转化 (2)

课时规范练9 光合作用与能量转化一、选择题:在每小题给出的四个选项中,只有一项是符合题目要求的。
1.(八省联考湖北卷)将黄豆种子置于黑暗中萌发,生长的豆芽呈浅黄色,再移至光照条件下,一段时间后,生长的豆芽呈绿色。
下列叙述正确的是( )A.豆芽进行了光合作用,变成绿色B.黑暗中黄色物质合成较多,掩盖了绿色C.光照引起温度升高,导致豆芽变成绿色D.光照诱导了叶绿体的形成,导致豆芽变成绿色2.(八省联考重庆卷)绿色植物的光合作用过程,可用如下化学反应式来表示:CO2+H2O(CH2O)+O2下列有关叙述错误的是( )A.在此过程中,CO2中的C被还原,H2O中的O被氧化B.光能的吸收发生在类囊体膜上,光能的直接转化发生在叶绿体基质中D.释放出的O2有利于地球上好氧生物多样性的提高3.(山东烟台一模)我国科学家设计了一种可以基因编码的光敏蛋白(PSP),成功模拟了光合系统的部分过程。
在光照条件下,PSP能够将CO2直接还原,使电子传递效率和CO2还原效率明显提高。
下列说法错误的是( )A.自然光合系统只能还原C3,而光敏蛋白可直接还原CO2B.黑暗条件下自然光合系统中的暗反应可持续进行,而光敏蛋白发挥作用离不开光照C.光敏蛋白与自然光合系统中光合色素、NADPH和ATP等物质的功能相似D.该研究为减轻温室效应提供了新思路4.(广东田家炳实验中学月考)下图为绿色植物某细胞内发生的两个生理过程。
下列分析正确的是( )A.进行②过程的细胞也能进行①过程B.①过程产生的能量,大部分用于合成ATPC.①②过程中的还原型辅酶是同种物质D.①过程发生在线粒体内膜上,②过程发生在叶绿体内膜上5.(山东临沂一模)已知蛋白核小球藻的光合作用过程表示如图,其中PSⅠ和PSⅡ为光合色素与蛋白质组成的复合光反应系统。
在盐胁迫(高浓度NaCl)条件下,蛋白核小球藻的光反应复合体PSⅠ和PSⅡ的结构会受到损伤,电子传递速率降低,光化学反应速率降低,从而使光合作用减弱。
pepc酶活的测定
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2. 实验试剂:50mM ATP溶液,50mM磷酸肌酸溶液,0.2mM NaHCO3溶液,160U/ml 磷酸肌酸激酶溶液,160U/ml磷酸甘油酸激酶溶液,160U/ml磷酸甘油醛脱氢酶溶液(U为酶活力单位),25mM RuBP溶液,5mM NADH,Rubisco提取介质(40mM Tris-HCl缓冲液,pH7.6,内含10mM MgCl2溶液,0.25mM EDTA,5mM谷胱甘肽),反应介质(0.1M Tris-HCl缓冲液,pH7.8,内含12mM MgCl2溶液,0.4mM EDTA)。
3实验步骤3.1 酶粗提液的准备取新鲜洗干净的条斑紫菜的丝状体和条斑紫菜的叶状体各1克,加入预冷的提取介质1ml,冰浴研磨10min,将样品在40C,10,000×g离心10min,弃沉淀;上清夜即是酶粗提液,置于00C备用(王维光,1985;张志良等,2003)。
3.3.2 Rubisco酶活力的测定按下表配制反应体系:试剂加入量ml5mM NADH 0.250mM ATP 0.2酶提取液0.150mM磷酸肌酸0.20.2mM NaHCO30.2反应介质1.4160U/ml磷酸肌酸激酶0.1160U/ml磷酸甘油酸激酶0.1160U/ml磷酸甘油醛脱氢酶0.1双蒸水0.3将配制好的反应体系混匀,倒入比色杯内,以蒸馏水为空白,在紫外分光光度计计上测量340nm处反应体系的OD值,作为零点值。
将0.1mlRuBp加入比色杯内,立即计时,每隔20s测一次OD值,共测3min。
以零点到第1min 的OD值下降的绝对值计算酶活力。
由于酶提取液中可能存在3-磷酸甘油酸(PGA),会使酶活力的测定产生误差,因此除上述测定外还需做一个不加RuBp的对照。
对照的反应体系与上述酶的反应体系完全一样,所不同的仅仅是把酶提取液放在最后加,加入后马上测定此反应体系340nm处的OD值,并记录前1min内OD值的变化量。
高考生物专题复习-专题六光合作用-高考真题练习题(附答案)
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专题六光合作用高考真题篇A组1.(2022全国乙,2,6分)某同学将一株生长正常的小麦置于密闭容器中,在适宜且恒定的温度和光照条件下培养,发现容器内CO2含量初期逐渐降低,之后保持相对稳定。
关于这一实验现象,下列解释合理的是()A.初期光合速率逐渐升高,之后光合速率等于呼吸速率B.初期光合速率和呼吸速率均降低,之后呼吸速率保持稳定C.初期呼吸速率大于光合速率,之后呼吸速率等于光合速率D.初期光合速率大于呼吸速率,之后光合速率等于呼吸速率答案D2.(2022湖北,12,2分)某植物的2种黄叶突变体表现型相似,测定各类植株叶片的光合色素含量(单位:μg·g-1),结果如表。
下列有关叙述正确的是()植株类型叶绿素a叶绿素b类胡萝卜素叶绿素/类胡萝卜素野生型1235519419 4.19突变体151275370 1.59突变体2115203790.35A.两种突变体的出现增加了物种多样性B.突变体2比突变体1吸收红光的能力更强C.两种突变体的光合色素含量差异,是由不同基因的突变所致D.叶绿素与类胡萝卜素的比值大幅下降可导致突变体的叶片呈黄色答案D3.(2022海南,3,3分)某小组为了探究适宜温度下CO2对光合作用的影响,将四组等量菠菜叶圆片排气后,分别置于盛有等体积不同浓度NaHCO3溶液的烧杯中,从烧杯底部给予适宜光照,记录叶圆片上浮所需时长,结果如图。
下列有关叙述正确的是()A.本实验中,温度、NaHCO3浓度和光照都属于自变量B.叶圆片上浮所需时长主要取决于叶圆片光合作用释放氧气的速率C.四组实验中,0.5%NaHCO3溶液中叶圆片光合速率最高D.若在4℃条件下进行本实验,则各组叶圆片上浮所需时长均会缩短答案B4.(2022北京,2,2分)光合作用强度受环境因素的影响。
车前草的光合速率与叶片温度、CO2浓度的关系如图。
据图分析不能..得出()A.低于最适温度时,光合速率随温度升高而升高B.在一定的范围内,CO2浓度升高可使光合作用最适温度升高C.CO2浓度为200μL·L-1时,温度对光合速率影响小D.10℃条件下,光合速率随CO2浓度的升高会持续提高答案D5.(2022全国甲,29,9分)根据光合作用中CO2的固定方式不同,可将植物分为C3植物和C4植物等类型。
江西省萍乡市2023-2024学年高一上学期期末考试生物试卷(含答案)
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江西省萍乡市2023-2024学年高一上学期期末考试生物试卷学校:___________姓名:___________班级:___________考号:___________一、单选题1.下列叙述中正确的是( )①蓝藻是异养型生物②发菜含有叶绿体,能够进行光合作用③海水污染后富营养化,导致蓝细菌等大量繁殖,形成水华④植物、原核生物和真菌都有细胞壁⑤细胞生物都有两种核酸⑥原核生物没有染色体⑦细菌都没有成形的细胞核A.⑤⑥⑦B.②③⑦C.④⑤⑥D.①③④2.哺乳动物的催产素具有催产和排乳的作用,加压素具有升高血压和减少排尿的作用。
两者结构简式如图,各氨基酸残基用三个缩写字母表示。
下列叙述正确的是( )A.两种激素都是由八肽环和三肽侧链构成的多肽类化合物B.氨基酸之间脱水缩合形成的水分子中,氢全部来自氨基C.肽链中游离氨基的数目与参与构成肽链的氨基酸种类无关D.两种激素间因两个氨基酸种类不同导致生理功能不同3.选择理想的生物实验材料是生物实验成败的关键因素之一。
下列关于生物实验选材的叙述正确的是( )A.因洋葱根尖分生区不含叶绿体,故根尖分生区不能作为“观察质壁分离”的实验材料B.因高温会使蛋白质变性,故煮沸的豆浆不能作为“蛋白质鉴定”的实验材料C.因哺乳动物成熟的红细胞无众多细胞器,故适合选择羊红细胞为实验材料进行“观察DNA、RNA在细胞中的分布”D.因淀粉在酸性条件下可水解,故淀粉不宜作为“探究pH对酶活性影响”的实验材料4.图a和图b是由磷脂分子构成的脂质体,它们可以作为药物的运载体,将其运送到特定的细胞发挥作用。
脂溶性药物的运送图示和包裹位置分别是( )A.图a;双分子层中B.图a;两层磷脂分子之间C.图h;双分子层中D.图b;两层磷脂分子之间5.用差速离心法分离出某动物细胞的三种细胞器经测定它们有机物的含量如图所示。
下列有关说法正确的是( )A.细胞器甲依靠类囊体薄膜堆叠来增加膜面积B.细胞器乙内部可能含有多种水解酶C.细胞器丙中含的核酸可能是RNA或者DNAD.哺乳动物成熟红细胞与此细胞共有的细胞器是核糖体6.小液流法是测定植物组织细胞液浓度的一种实验方法,其原理是把高浓度溶液中的一小液滴放入低溶度溶液中时,液滴下沉;反之则上升。
老高考新教材适用2023版高考生物二轮复习知识对点小题练4细胞呼吸光合作用过程及影响因素(含答案)
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2023版高考生物二轮复习知识对点小题练:4.细胞呼吸、光合作用过程及影响因素1.玉米根部细胞中既含有乳酸脱氢酶又含有乙醇脱氢酶,能催化不同类型的无氧呼吸,可以分别生成乳酸和乙醇。
如图是玉米根部细胞在无氧气和氧气充足时细胞呼吸生成CO2的相对速率随时间的变化。
下列相关叙述正确的是( )A.ad段和de段细胞呼吸所需的酶和发生的场所完全不一样B.消耗等量葡萄糖时,ab段和bd段细胞释放的能量不相同C.cd段二氧化碳产生速率下降可能与细胞呼吸产物的积累有关D.ab段细胞只进行产生乳酸的无氧呼吸,bd段只进行产生酒精的无氧呼吸2.(2022辽宁沈阳模拟)糖酵解过程是有氧呼吸和无氧呼吸的共同途径。
在有氧条件下,通过糖酵解形成的丙酮酸进入线粒体基质中被氧化;在缺氧条件下,丙酮酸则被还原成乳酸或乙醇,如图所示。
下列相关叙述不正确的是( )A.糖酵解过程发生的场所是细胞质基质和线粒体基质B.糖酵解过程中既有ATP的消耗,也有ATP的产生C.无氧呼吸过程中既有还原型辅酶Ⅰ消耗,也有还原型辅酶Ⅰ的产生D.细胞呼吸过程中产生的中间产物可转化为氨基酸等非糖物质3.O2在生物的生理活动中起着重要作用,下列叙述不正确的是( )A.中耕松土提高土壤肥力B.NADH与O2结合形成水时释放大量的能量,驱动ATP合成C.光合作用中,O2均来自叶绿体类囊体薄膜上水的光解D.等质量的脂肪和糖原彻底氧化分解时,脂肪消耗O2的量更多4.(2022辽宁辽阳二模)玉米固定CO2的能力比小麦的强70倍,这与其具有的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC,玉米等C4植物特有的固定CO2的关键酶)密切相关。
将转玉米PEPC基因的高产小麦幼苗与普通小麦幼苗分别放置在相同的密闭小室中,在充足光照条件下,检测小室中的CO2浓度随时间的变化情况,结果如图所示。
下列有关叙述不正确的是( )A.曲线Ⅰ表示的是普通小麦CO2浓度随时间的变化B.30~40 min,两种小麦的光合速率都与其各自的呼吸速率相等C.若突然降低光照强度,则短时间内两种小麦叶肉细胞中C3的含量与合成速率都增大D.将两种小麦幼苗放在同一小室中重复实验,一段时间后普通小麦先停止生长5.(2022辽宁二模)将长势相同的黑藻分为A、B两组,将A组分别放入装有300 mL自来水的4只烧杯中,放入光照培养箱中,控制不同光照强度(Lux);将B组分别放入装有等量自来水且溶解有不同浓度NaHCO3的4只烧杯中,在光照强度为1 500 Lux的条件下培养,并用溶解氧传感器检测A、B两组烧杯中黑藻的放氧情况(单位:mg·L-1),每2 min采集一次数据,连续采集10 min,实验结果如图所示(忽略不同光照强度对水温的影响)。
二氧化碳测定试剂盒(PEPC酶法)产品技术要求zhongshengbeikong
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二氧化碳测定试剂盒(PEPC酶法)产品技术要求zhongshengbeikong 二氧化碳测定试剂盒(PEPC酶法)适用范围:本产品用于体外定量测定人血清中二氧化碳的浓度。
1.1包装规格液体单剂型试剂(R):20mL×4,校准品:3mL×1;试剂(R):20mL×6,校准品:3mL×1。
1.2主要组成成分试剂(R)液体:磷酸烯醇式丙酮酸(PEP) 12.5mmol/L磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC) 400U/L) 8.0mmol/L氯化镁(MgCl2苹果酸脱氢酶(MDH) 4100U/L还原辅因子 0.6mmol/L校准品液体:水溶液基质(1个浓度)碳酸氢钠目标浓度25.0 mmol/L(每批定值,详见值单) 2.1 外观试剂盒中各组件的外观应满足:2.1.1试剂(R)应为浅黄绿色透明溶液,无杂质、无絮状物,外包装完整无破损。
2.1.2校准品应为无色透明溶液,无杂质、无絮状物,外包装完整无破损。
2.2 净含量液体试剂净含量应不少于标示值。
2.3 试剂空白吸光度在波长400nm~420nm(光径1cm)处,试剂空白吸光度(A)应≥0.600;试剂空白吸光度变化率(△A/min)应≤0.015。
2.4准确度测定GBW06101,测定结果的相对偏差应不超过±10%。
2.5分析灵敏度对应于浓度为 25mmol/L的二氧化碳所引起的吸光度变化率(△A/min)的绝对值应在0.010~0.080的范围内。
2.6重复性重复测试高、中、低浓度样本,变异系数(CV)应≤10%。
2.7批间差测试同一样本,批间差(R)应≤10%。
2.8线性范围在[3,60]mmol/L范围内,线性相关系数(r)应≥0.990;在(25,60]mmol/L范围内,线性相对偏差应不超过±10%;在[3 ,25]mmol/L范围内,线性绝对偏差应不超过±2.5mmol/L2.9试剂稳定性2.9.1效期稳定性原包装的试剂盒在2℃~8℃避光贮存,有效期为12个月。
二氧化碳(CO2)测定试剂盒(PEPC 酶法)说明书

二氧化碳(CO2)测定试剂盒(PEPC酶法)说明书【产品名称】二氧化碳(CO2)测定试剂盒(PEPC酶法)【包装规格】a)单一试剂:1×15mLb)单一试剂:2×40mLc)单一试剂:5×60mLd)单一试剂:2×100mL【预期用途】用于体外定量测定人血清中二氧化碳的含量。
血液中CO2含量对人体内酸碱平衡的调节起着重要的作用。
增高:代谢性碱中毒,如幽门梗阻、柯兴综合征等。
呼吸性酸中毒,如呼吸中枢抑制、呼吸机麻痹等。
降低:代谢性酸中毒,如严重腹泻、肾功能衰竭等。
慢性呼吸碱中毒[1]。
临床上测定二氧化碳代谢性与呼吸性酸、碱中毒的辅助诊断,通常与pH值同时进行。
【检验原理】样本中的碳酸氢根在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)催化下,与磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)反应,生成草酰乙酸和磷酸;草酰乙酸在苹果酸脱氢酶(MDH)催化下,生成苹果酸,同时NADH被氧化成NAD+,NADH被氧化的程度与碳酸氢根的含量成正相关。
【主要组成成分】试剂主要组分三羟甲基氨基甲烷缓冲液250mmol/L磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)10g/L磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)10KU/L苹果酸脱氢酶(MDH)8KU/L还原型辅酶I(NADH) 2.2g/L表面活性剂及稳定剂适量注:不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2~8℃储存,有效期为12个月,生产日期、有效期见标签。
2.开口后的试剂在仪器仓中(2~8℃)可稳定30天。
【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200;日立HITACHI7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT008AS型;贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/ AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821;佳能TBA-FX8/TBA-120FR/ TBA-2000FR;罗氏cobas8000c702/cobas8000c701/cobas8000c502;西门子SIEMENS ADVIA1800/ADVIA2400;雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200;西森美康SYSMEX BM6010/C;科华KHB卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ ZY-1280;迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/ CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-14 00;迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/ BS-600/BS-800/BS-2000M;颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480;赛诺迈德SUNMATIK-9050型;雷杜Chemray420;英诺华D280;特康TC6010L;锦瑞GS400;普康6066。
植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究进展

2021年 2月 Journal of Science of Teachers′ College and University Feb. 2021文章编号:1007-9831(2021)02-0054-07植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究进展于济1,2,沙伟1,2,张梅娟1,2,马天意1,2(齐齐哈尔大学 1. 生命科学与农林学院,2. 抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江重点实验室,黑龙江 齐齐哈尔 161006)摘要:磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC,EC 4.1.1.31)是广泛存在的一种细胞质酶,催化磷酸烯醇式丙酮酸和HCO3-生成草酰乙酸.PEPC作用的产物在植物的生长发育过程和植物应对环境胁迫反应中起到调控的作用,因而被广泛关注.介绍了植物PEPC的种类、结构特征、不同物种中PEPC基因的克隆与分离、在植物逆境反应中的应用、植物PEPC 的活性调节,为深入研究PEPC基因提供理论依据.关键词:磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶;植物;植物逆境胁迫中图分类号:Q945 文献标识码:A doi:10.3969/j.issn.1007-9831.2021.02.011Research progress of plant phosphoenolpyruvate carboxylaseYU Ji1,2,SHA Wei1,2,ZHANG Meijuan1,2,MA Tianyi1,2(1. School of Life Sciences,Agriculture and Forestry,2. Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Resistance Gene Engineering andProtection of Biodiversity in Cold Areas,Qiqihar University,Qiqihar 161006,China)Abstract:Plant phosphoenolpyruvate carboxylase(PEPC,EC 4.1.1.31)is a ubiquitous cytoplasmic enzyme that catalyzes the production of Oxaloacetate by phosphoenolpyruvate and HCO3-.The products of PEPC play important roles in the growth and development of plants and the responses of plants to environmental stresses,so that the PEPC is widely concerned.Introduced the types,structural characteristics,the cloning and isolation of PEPC genes in different species,the applications in plant stress responses,and the researches of plant PEPC activity regulation,which provides a theoretical basis for further studiesof PEPC genes.Key words:phosphoenolpyruvate carboxylase;plant;plant stress responses磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC,EC 4.1.1.31)是一种胞质酶,在HCO3-存在的情况下,可以催化磷酸烯醇式丙酮酸(Phosphoenolpyruvate,PEP)的β-羧化反应,以Mg2+为辅因子生成草酰乙酸(Oxobutanedioic acid,OAA)和无机磷酸[1]70,此反应为不可逆反应.PEPC存在于所有植物中,如绿藻、蓝细菌、大多数古细菌、非光合细菌中,但在动物和真菌中不存在[2]15. PEPC以其在C4和景天酸代谢(Crassulacean acid metabolism,CAM)光合作用中的作用而闻名,在此过程中,其初步固定了大气中的CO2[3]274.然而,PEPC在C3植物的非光合和光合组织中也发挥着广泛的作用,它可以通过补充C4-二羧酸进行能量和生物合成代谢,主要起抗衰老作用[4-5].在C3植物叶片和非光合收稿日期:2020-11-15基金项目:齐齐哈尔大学大学生创新创业训练计划项目(202010232817);黑龙江省省属高等学校基本科研业务费青年创新人才项目(135309364);黑龙江省省属高等学校基本科研业务费科研项目植物性食品加工技术特色学科专项(YSTSXK201876);黑龙江省人力资源和社会保障厅2018年省级留学回国人员择优资助项目作者简介:于济(1997-),女,吉林松原人,在读硕士研究生,从事植物逆境分子遗传学研究.E-mail:*****************通信作者:马天意(1989-),男,黑龙江齐齐哈尔人,讲师,博士,从事植物逆境分子遗传学研究.E-mail:********************组织中,PEPC的主要作用是在三羧酸循环中补充中间体,以及后面的氮同化和各种生物合成途径[3]274.此外,PEPC还参与了广泛的生理和发育过程,包括种子萌发和发育、果实成熟、豆科植物根瘤固氮等,在气孔保卫细胞中提供苹果酸以及增强了对渗透压和生物胁迫的耐受性[2,6-9].正是因为PEPC在植物中发挥着非常重要的作用,因此被人们广泛关注.为了更好地了解植物体中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的作用机制,本文概括分析了植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因的分类、功能、分离与克隆、活性调节以及在植物抵抗逆境过程中的作用等方面的研究结果,介绍了磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因在基因工程方面的应用,也为进一步研究磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因提供了理论基础.1 PEPC的基本结构1984年,首先从大肠杆菌(Escherichia coli)克隆的PEPC基因推导了PEPC的一级结构[10].目前,已经分别在植物和细菌中发现了许多PEPC序列,包括同一生物体中的同工型,并且大约500个部分序列已经记录在GenBank中,主要用于系统发育重建[11-12].系统进化树显示,这些PEPC是从相同的祖先进化而来的[3,13].PEPC多肽的大小随生物体的种类而异:细菌、维管束植物、蓝细菌、原生动物(如疟疾病原体)的氨基酸残基数量大约为870(100 kDa),970(110 kDa),1010(116 kDa)或1150(134 kDa)[1]71.尽管已知古细菌的亚基大小非常小(约60 kDa),并且没有常见的变构调节子,但尚无来自古细菌的PEPC 序列数据[14-15].此外,还寻找了藻类PEPC的序列数据,因为硒的纯化亚型之一是由3种不同的亚基组成的[16],这种新的PEPC类型也在发育中的蓖麻(Ricinus communis)种子中被发现[17].在拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组序列中确定了另一种新的进入高等植物PEPC的第4种亚型[18],在分子大小上与蓝细菌的PEPC相似,并且缺少N端磷酸化位点,这是植物PEPC的标志.在植物和微生物界的多样性和广泛分布使得PEPC成为系统发育分析中最有趣的目标之一.对PEPC序列的比对表明,大约100个残基始终是保守的(相同的),另外100个残基是保守的具有相似的氨基酸残基的,对于成对的陆地植物酶,其识别率超过71%,因为C末端是高度保守的,所以长度的任何差异似乎是由于在N末端或内部区域(大约10个基因位点)处添加或插入了额外的序列而引起的.所制备的重组PEPCs的数量和特征仍是有限的,所涉及的物种目前不超过15个[1]71,因此有必要做进一步的工作.2 植物PEPC的分类及生理生化功能PEPC基因已大致分为2个亚家族,分为植物型PEPC(PTPC)和细菌型PEPC(BTPC)[19]11.PTPC表现出高度的遗传保守性,并在其100~110 kDa蛋白质中包含高度保守的N末端丝氨酸磷酸化基序和关键的C末端四肽QNTG[1,20].相比较而言,116~118 kDa的BTPC蛋白质显示低序列相似性并包含1个类似原核的C端(R/K)NTG四肽基序[17,21].PTPC典型地存在于同型四聚体-1类PEPCs中,而BTPCs作为调节和催化亚基存在于超常的异质配合物中(2类PEPCs)[2]26.PTPC又可以分为C4,C3和根特异亚型[21-22],它们在植物细胞中发挥着不同的功能.植物中PEPC的C3,C4类型至少在3个关键方面不同[23]:(1)C4型的PEPC通过吸收C4和CAM物种中的大气CO2参与了CO2浓缩机制的第1步,C3型PEPC存在于所有植物中,它参与多种生理功能,如三羧酸循环中中间体的补给,OAA的合成以及随后的苹果酸及其衍生物的合成[2]15.(2)C4型PEPC存在于叶肉细胞中,其表达方式对实现C4光合循环具有重要意义[24],而C3型的PEPC分布在C3和/或C4植物的不同组织中,起到管家的作用[22]865.(3)C4型PEPC的底物(PEP)饱和常数(Km)高于C3型,并且显示更多对苹果酸的耐受性,但是在一些植物物种中(如南美白菊科(Chenopodiaceae)植物和异子蓬(Suaedaaralocaspica))尚未将不同的PEPC区分为C3或C4类型,仅命名为ppc-1,ppc-2[25],它们的功能需要进一步验证.3 植物PEPC基因的分离与克隆1953年,植物的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶从菠菜(Spinacia oleracea)叶中首次被分离出来.目前,PEPC基因已在多种植物中被鉴定和研究,拟南芥和水稻(Oryzasativa)中分别报道4,6个PEPC家族成员[18,26],在大豆(Glycine max)中共鉴定到10个PEPC基因(GmPEPC1~10),其中GmPEPC6,GmPEPC8,GmPEPC9被铝毒、寒害、盐害等非生物胁迫诱导表达[27].花生(Arachis hypogaea)基因组报道5个PEPC 基因(AhPEPC1~5)[28],涂嘉琦[29]等从蔓花生(Arachis duranensis)基因组中鉴定到9个PEPC基因.马海洋[30]等从菠萝(Ananas comosus)基因组中鉴定出3个PEPC基因.邵姁[31]等从蓝莓(Vaccinium corymbosum)果实中克隆到磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶编码基因VcPEPC,该基因开放阅读框全长为2 907 bp,可编码968个氨基酸,分子量为110.59 kD.赵晋锋[32]等从谷子(Setariaitalica)基因组中鉴定出1个SiPEPC基因,进一步研究表明,SiPEPC基因在拔节期和抽穗期正常光照强度下参与了对干旱胁迫的响应,推测SiPEPC基因参与了谷子对非生物逆境的应答,可能在干旱和其它逆境胁迫信号途径中起关键作用.4 植物PEPC基因在植物逆境反应中的作用非生物胁迫(如盐度、干旱、高温)通常会对植物的光合作用产生负面影响[33]901.PEPC已被建议用于支持主要的生理代谢途径(即三羧酸循环中中间体的补给等),以帮助植物和微生物避免和/或耐受极端的环境胁迫[7,34].在水分胁迫下,PEPC介导PEP的羧基化为OAA,随后合成苹果酸和渗透活性化合物(糖、氨基酸、糖醇)以帮助植物耐受水分胁迫[34-35].铝的积累、磷和铁的缺乏导致PEPC的上调,从而增加了包括苹果酸和柠檬酸在内的有机酸合成[36-38].有机酸向土壤中的排泄不仅可以增加磷和铁的可溶性形态并为植物所利用,还可以与Al3+形成稳定的配合物,从而降低毒性[39].生物应激(如病毒感染)也可以诱导PEPC的高活性,推测PEPC可以在防御作用中增强植物抗毒素、氨基酸、蛋白质的合成[40-41].也有研究表明,番茄(Lycopersicon esculentum)PEPC基因在盐、冷、植物激素胁迫下均有不同表达[19]15.可以推测PEPC 对植物的生长发育和抗逆性起一定作用.5 PEPC基因的应用目前,已经在多种植物物种中使用了不同PEPC基因作为改善作物的手段.如在水稻中,C4-PEPC使转基因水稻具有耐旱性,但叶绿体定位的PEPC对铵同化至关重要[42].玉米(Zea mays)C4型PEPC基因在小麦(Triticum aestivum)受体内实现了正确的转录和准确的剪接,也证明了玉米C4型PEPC基因在小麦中表现了一定的光合生理效应[43].以转甘蔗(Saccharum officinarum)PEPC基因的籼稻植株和非转基因的植株为研究材料,发现在光合效率和产量相关性状方面,转甘蔗PEPC基因植株都有较大提高,可以实现增产目的[44].张桂芳[45]等首次将含有稗草(Echinochloacrusgalli)根型的PEPC基因对水稻进行遗传转化,研究结果表明,转基因水稻的PEPC活性最高,为对照的5.85倍,植株叶片的净光合速率(Pn)较对照相比提高了20.0%.尹吴[46]等发现,与对照相比,转玉米PEPC基因的杨树表现出较强的光利用能力,其羧化能力和酶活性与对照相比最高可分别增加62.3%,38.6%.最近有研究表明,许多PEPC基因在增强对各种非生物和生物胁迫的耐受性中起调节作用.在干旱和盐胁迫下,PEPC的过度表达增强了耐受性[8]1513,但抑制导致转基因植物对渗透胁迫的敏感性增加[47].同样,拟南芥AtPPC4也可能在干旱胁迫中发挥作用[33]906.然而,表达PEPC的马铃薯(Solanum tuberosum)转基因植株表现出整体有机氮含量的增加,但淀粉和可溶性糖含量有所损失[48].6 植物组织中PEPC的活性调节PEPC通常由4个相同的亚基组成,相对分子质量约为95~110 kDa.大多数PEPC是变构酶,具有多种变构效应物,具体取决于生物的种类[1]70.此外,维管植物PEPCs通过位于N末端附近的保守丝氨酸处的可逆磷酸化来调节[49].目前解析了来自大肠杆菌和玉米的PEPC三维结构[50-51],这种结构信息以及通过定点诱变获得的信息为长期以来一直深入研究的催化和变构调节的分子机理提供了启示. 大多数PEPC都受变构调节,维管植物的效应仅限于一组效应类型,双子叶植物的PEPCs被葡萄糖6-磷酸(G6P)激活,并被L-苹果酸或天冬氨酸抑制,而单子叶植物的PEPC被甘氨酸或丙氨酸进一步激活[52]154.相反,大肠杆菌PEPC受更复杂的方式调节,被乙酰辅酶A、果糖1,6-双磷酸、长链脂肪酸、鸟苷3′-二磷酸5′-二磷酸激活,并被天冬氨酸或L-苹果酸抑制[53].此外,细菌PEPC中不存在的调节性磷酸化是植物PEPC中固有的[1]73.调节性磷酸化后,PEP的半饱和浓度略有降低,而抑制剂的半饱和浓度在包含底物和Mg2+生理浓度的反应混合物中增加了约2.7倍[52]155.Tovar-Mendez[52,54-55]等采用目前可用的最明确的玉米C4-PEPC制剂进行了全面的动力学分析,从生理条件下的动力学测量清楚地表明了变构效应子和磷酸化的重要性.S形PEP饱和度曲线归因于附加的PEP与G6P位点的结合[1]73,这些研究成功地应用了变构调控的协调过渡模型来描述玉米C4-PEPC的动力学行为,并且通过快速动力学分析观察到伴随变构过渡的构象变化[56].PEPC的活性在多个层次上受到调节.变构控制由调节PEPC活性(尤其是在细胞质pH值下)的正(葡萄糖6-P,甘氨酸)、负(L-苹果酸,天冬氨酸)效应子施加[3]280.此外,C4-PEPC通过光依赖性磷酸烯醇丙酮酸羧化酶激酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase kinase,PEPCK)进行调节性磷酸化[57].PEPC的磷酸化形式与去磷酸化形式的动力学性质不同,如更高的最大反应速率对PEP的亲和力更高,对变构效应子的敏感性有所改变,从而减轻了苹果酸对其抑制作用,并增强了其对葡萄糖-6-P和甘氨酸的活化作用[58-59].高粱(Sorghum bicolor)中所有PTPC(SbPPC1-5)均含有带有保守丝氨酸的N末端磷酸化结构域,BTPC (SbPPC6)中不存在此域,PEPCK基因家族包括3个基因(SbPPCK1~3)[60],在叶肉细胞中,SbPPCK1的表达是由光触发的,其转录本在叶肉中比束鞘细胞更为丰富,由于这些原因,它被认为是光合异构体,其中SbPPCK2和SbPPCK3的功能未知[61].另一种可能调控PEPC活性的翻译后修饰(Post-translational modification,PTM)是保守的赖氨酸残基的单泛素化作用,使该酶对苹果酸和天冬氨酸更加敏感[62-64].据报道,该PTM(仅针对C3型PEPCs)存在于蓖麻种子[62]、Hakea prostata种子[63]、高粱种子[64-65]、拟南芥叶片[65-66]中.此外,在不同的植物组织(叶片、保卫细胞、根、果实)[67-70]以及大麦(Hordeum vulgare)、小麦、高粱种子[71-74]中还报道了2条免疫反应性PTPC条带,表明上部条带是下部条带的单泛素化形式.PEPC改变了该酶的动力学特性,从而干扰了其与PEP结合的能力,并增强了其对大多数代谢物效应子的敏感性[62]29656.7 展望植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶作为C4型光合途径的关键酶,对其结构特点、代谢途径已有较为深入的研究[75].现在PEPC基因已经在越来越多的植物中被发现,并对其功能进行研究探索.在C4和CAM植物中,PEPC的作用以及其基因表征信息比较详细,但在C3植物中PEPC表达的细节报道很少,仍需进一步探索.转PEPC基因植物也在不同方面表达出PEPC基因对植物的调控功能,PEPC作为植物中广泛存在的酶,其在植物应对环境胁迫过程中的作用逐渐被发现,尤其是CAM植物中的大多数物种具有较高抗逆性,而这之中PEPC的相关功能机制还有待进一步挖掘,因此有必要进一步对PEPC基因在植物抗逆性研究中的作用进行详细探索.参考文献:[1] Izui K,Matsumura H,Furumoto T,et al.Phosphoenolpyruvate carboxylase:a new era of structural biology[J].Annual reviewof plant biology,2004,55:69-84[2] O′Leary B,Park J,Plaxton W C.The remarkable diversity of plant PEPC(phosphoenolpyruvate carboxylase):recent insightsinto the physiological functions and post-translational controls of non-photosynthetic PEPCs[J].The biochemical journal,2011(1):15-34[3] Chollet R,Vidal J,O'Leary M H.PHOSPHOENOLPYRUVATE CARBOXYLASE:A Ubiquitous,Highly Regulated Enzyme inPlants[J].Annual review of plant physiology and plant molecular biology,1996,47:273-298[4] Driever S M,Kromdijk J.Will C3crops enhanced with the C4CO2-concentrating mechanism live up to their full potential(yield)?[J].Journal of experimental botany,2013,64(13):3925-3935[5] Masumoto C,Miyazawa S,Ohkawa H.Phosphoenolpyruvate carboxylase intrinsically located in the chloroplast of rice plays acrucial role in ammonium assimilation[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,2010,107(11):5226-5231[6] Cousins A B,Baroli I,Badger M R,et al.The role of phosphoenolpyruvate carboxylase during C4 photosynthetic isotope exchangeand stomatal conductance[J].Plant physiology,2007,145(3):1006-1017[7] O′Leary B,Fedosejevs E T,Hill A T,et al.Tissue-specific expression and post-translational modifications of plant-andbacterial-type phosphoenolpyruvate carboxylase isozymes of the castor oil plant,Ricinus communis L[J].Journal of experimental botany,2011,62(15):5485-5495[8] Qin N,Xu W,Hu L,et al.Erratum to:Drought tolerance and proteomics studies of transgenic wheat containing the maize C4phosphoenolpyruvate carboxylase(PEPC)gene[J].Protoplasma,2016,253(6):1513[9] 蔡小宁,陈茜,杨平,等.磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的生物信息学分析[J].安徽农业科学,2008(3):914-916[10] Fujita N,Miwa T,Ishijima S,et al.The primary structure of phosphoenolpyruvate carboxylase of Escherichia coli.Nucleotidesequence of the PPC gene and deduced amino acid sequence[J].Journal of biochemistry,1984(4):909-916[11] BesnardG,Offmann B,Robert C,et al.Assessment of the C4 phosphoenolpyruvate carboxylase gene diversity in grasses(Poaceae)[J].Theor Appl Genet,2002,105(2-3):404-412[12] Gehrig H,Heute V,Kluge M.New partial sequences of phosphoenolpyruvate carboxylase as molecular phylogeneticmarkers[J].Molecular phylogenetics and evolution,2001,20(2):262-274[13] Svensson P,Blasing O,Westhoff P,et al.Evolution of C4 phosphoenolpyruvate carboxylase[J].Archives of Biochemistry andBiophysics,2003,414(2):180-188[14] Sako Y,Takai K,Nishizaka T,et al.Biochemical relationship of phosphoenolpyruvate carboxylases(PEPCs)from thermophilicarchaea[J].Fems Microbiology Letters,1997,153(1):159-165[15] Sako Y,Takai K,Uchida A,et al.Purification and characterization of phosphoenolpyruvate carboxylase from the hyperthermophilicarchaeon Methanothermussociabilis[J].FEBS Letters,1996,392(2):148-152[16] Rivoal J,Trzos S,Gage D A,et al.Two unrelated phosphoenolpyruvate carboxylase polypeptides physically interact in the highmolecular mass isoforms of this enzyme in the unicellular green alga Selenastrumminutum[J].The journal of biological chemistry,2001,276(16):12588-12597[17] Blonde J D,Plaxton W C.Structural and kinetic properties of high and low molecular mass phosphoenolpyruvate carboxylaseisoforms from the endosperm of developing castor oilseeds[J].The journal of biological chemistry,2003,278(14):11867-11873 [18] Sánchez R,Cejudo F J.Identification and expression analysis of a gene encoding a bacterial-type phosphoenolpyruvate carboxylasefrom Arabidopsis and rice[J].Plant physiology,2003(2):949-957[19] Waseem M,Ahmad F.The phosphoenolpyruvate carboxylase gene family identification and expression analysis under abiotic andphytohormone stresses in Solanum lycopersicum L[J].Gene,2019,690:11-20[20] Xu W,Ahmed S,Moriyama H,et al.The importance of the strictly conserved,C-terminal glycine residue in phosphoenolpyruvatecarboxylase for overall catalysis:mutagenesis and truncation of GLY-961 in the sorghum C4leaf isoform[J].The journal of biological chemistry,2006,281(25):17238-17245[21] Gennidakis S,Rao S,Greenham K,et al.Bacterial-and plant-type phosphoenolpyruvate carboxylase polypeptides interact in thehetero-oligomeric Class-2 PEPC complex of developing castor oil seeds[J].The plant journal:for cell and molecular biology,2007(5):839-849[22] Dong L Y,Masuda T,Kawamura T,et al.Cloning,expression,and characterization of a root-form phosphoenolpyruvate carboxylasefrom Zea mays:comparison with the C4-form enzyme[J].Plant & cell physiology,1998,39(8):865-873[23] Gehrig H,Faist K,Kluge M.Identification of phosphoenolpyruvate carboxylase isoforms in leaf,stem and roots of the obligate CAMplant Vanilla planifolia Salib.(Orchidaceae):a physiological and molecular approach[J].Plant molecular biology,1998,38(6):1215-1223[24] Stockhaus J,Schlue U,Koczor M,et al.The promoter of the gene encoding the C4 Form of phosphoenolpyruvate carboxylase directsmesophyll-specific expression in transgenic C4Flaveriaspp[J].The plant cell,1997,9(4):479-489[25] Rosnow J J,Edwards G E,Roalson E H.Positive selection of Kranz and non-Kranz C4 phosphoenolpyruvate carboxylase aminoacids in Suaedoideae(Chenopodiaceae)[J].Journal of experimental botany,2014,65(13):3595-3607[26] Muramatsu M,Suzuki R,Yamazaki T,et al.Comparison of plant-type phosphoenolpyruvate carboxylases from rice:identificationof two plant-specific regulatory regions of the allosteric enzyme[J].Plant & cell physiology,2015,56(3):468-480[27] Wang N,Zhong X,Cong Y,et al.Genome-wide Analysis of Phosphoenolpyruvate Carboxylase Gene Family and Their Responseto Abiotic Stresses in Soybean[J].Sci Rep,2016(6):38448[28] Shanlin Y U,Pan L,Yang Q,et al.Identification and expression analysis of the phosphoenolpyruvate carboxylase gene family inpeanut(Arachis hypogaea L.)[J].Agricultural Sciences in China,2010,9(4):477-487[29] 涂嘉琦,甘璐,冯兰兰,等.蔓花生PEPC基因家族的生物信息学分析[J].热带亚热带植物学报,2018,26(2):107-115[30] 马海洋,赵秋芳,陈曙,等.菠萝PEPC基因家族的生物信息学分析[J].热带作物学报,2020,41(1):97-103[31] 邵姁,王月,应炎标,等.蓝莓磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因cDNA克隆及表达分析[J].基因组学与应用生物学,2016,35(1):166-171[32] 赵晋锋,王高鸿,杜艳伟,等.谷子磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC)对逆境胁迫的响应[J].华北农学报,2019,34(4):67-74[33] Sánchez R,Flores A,Cejudo F J.Arabidopsis phosphoenolpyruvate carboxylase genes encode immunologically unrelatedpolypeptides and are differentially expressed in response to drought and salt stress[J].Planta,2006,223(5):901-909 [34] Doubnerová V,Rylavá H.What can enzymes of C4 photosynthesis do for C3 plants under stress?[J].Plant science:an internationaljournal of experimental plant biology,2011,180(4):575-583[35] Seki M,Umezawa T,Urano K,et al.Regulatory metabolic networks in drought stress responses[J].Current opinion in plantbiology,2007,10(3):296-302[36] Ma J F,Furukawa J.Recent progress in the research of external Al detoxification in higher plants:a minireview[J].Journal ofinorganic biochemistry,2003,97(1):46-51[37] Gregory A L,Hurley B A,Tran H T,et al.In vivo regulatory phosphorylation of the phosphoenolpyruvate carboxylase AtPPC1 inphosphate-starved Arabidopsis thaliana[J].The biochemical journal,2009(1):57-65[38] López-Millán A F,Morales F,Andaluz S,et al.Responses of sugar beet roots to iron deficiency.Changes in carbon assimilationand oxygen use[J].Plant physiology,2000(2):885-898[39] Rangel A F,Rao I M,Braun H P,et al.Aluminum resistance in common bean(Phaseolus vulgaris)involves induction andmaintenance of citrate exudation from root apices[J].Physiologia plantarum,2010(2):176-190[40] Ryslava H,Muller K,Semoradova S,et al.Photosynthesis and activity of phosphoenolpyruvate carboxylase in Nicotiana tabacum L.Leaves infected by potato virus A and potato virus Y[J].Photosynthetica,2003,41(3):357-363[41] Müller K,Doubnerová V,Synková H,et al.Regulation of phosphoenolpyruvate carboxylase in PVY(NTN)-infected tobaccoplants[J].Biological chemistry,2009,390(3):245-251[42] Liu X,Li X,Zhang C,et al.Phosphoenolpyruvate carboxylase regulation in C4-PEPC-expressing transgenic rice during earlyresponses to drought stress[J].Physiologia plantarum,2017(2):178-200[43] 陈绪清,张晓东,梁荣奇,等.玉米C4型PEPC基因的分子克隆及其在小麦的转基因研究[J].科学通报,2004(19):1976-1982[44] 马宏敏.转PEPC基因籼稻恢复系“N175”产量相关性状分析[J].福建农业科技,2014(8):1-2[45] 张桂芳,丁在松,赵明.稗草(Echinochloacrusgalli)根型PPC基因对水稻的遗传转化及其对光合速率的调节效应[J].作物学报,2015,41(3):507-513[46] 尹吴,李丽莎,王立科,等.转玉米PEPC基因杨树的光合生理特性分析[J].林业科学,2012,48(6):63-71[47] Chen M,Tang Y,Zhang J,et al.RNA interference-based suppression of phosphoenolpyruvate carboxylase results in susceptibilityof rapeseed to osmotic stress[J].Journal of integrative plant biology,2010,52(6):585-592[48] Rademacher T,Häusler R E,Hirsch H J,et al.An engineered phosphoenolpyruvate carboxylase redirects carbon and nitrogenflow in transgenic potato plants[J].The plant journal:for cell and molecular biology,2002(1):25-39[49] Vidal J,Chollet R.Regulatory phosphorylation of C4 PEP carboxylase[J].Trends in Plant Science,1997,2(6):230-237[50] Kai Y,Matsumura H,Inoue T,et al.Three-dimensional structure of phosphoenolpyruvate carboxylase:a proposed mechanismfor allosteric inhibition[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,1999,96(3):823-828[51] Matsumura H,Xie Y,Shirakata S,et al.Crystal structures of C4 form maize and quaternary complex of E.coli phosphoenolpyruvatecarboxylases[J].Structure,2002,10(12):1721-1730[52] Tovar-Méndez A,Mújica-Jiménez C,Muñoz-Clares R A.Physiological implications of the kinetics of maize leafphosphoenolpyruvate carboxylase[J].Plant Physiology,2000(1):149-160[53] Izui K,Taguchi M,Morikawa M,et al.Regulation of Escherichia coli phosphoenolpyruvate carboxylase by multiple effectors invivo. II. Kinetic studies with a reaction system containing physiological concentrations of ligands[J].Journal of biochemistry,1981(5):1321-1331[54] Tovar-Méndez A,Muñoz-Clares R A.Kinetics of phosphoenolpyruvate carboxylase from Zeamays leaves at high concentration ofsubstrates[J].Biochimica et Biophysica Acta,2001,1546(1):242-252[55] Tovar-Méndez A,Rodríguez-Sotres R,López-Valentín D M,et al.Re-examination of the roles of PEP and Mg2+ in the reactioncatalysed by the phosphorylated and non-phosphorylated forms of phosphoenolpyruvate carboxylase from leaves of Zeamays.Effects of the activators glucose 6-phosphate and glycine[J].Biochemical Journal,1998(3):633-642[56] Frank J,Clarke R J,Vater J,et al.Influence of allosteric effectors on the kinetics and equilibrium binding of phosphoenolpyruvate(PEP)to phosphoenolpyruvate carboxylase(PEPC)from Zea mays[J].Biophysical Chemistry,2001,92(1-2):53-64 [57] Echevarria C,Vidal J.The unique phosphoenolpyruvate carboxylase kinase[J].Plant Physiology and Biochemistry,2003,41(6):541-547[58] Echevarria C,Pacquit V,Bakrim N,et al.The effect of pH on the covalent and metabolic control of C4 phosphoenolpyruvatecarboxylase from Sorghum leaf[J].Archives of Biochemistry and Biophysics,1994,315(2):425-430[59] Takahashi-Terada A,Kotera M,Ohshima K,et al.Maize phosphoenolpyruvate carboxylase.Mutations at the putative bindings ite for glucose 6-phosphate caused desensitization and abolished responsiveness to regulatory phosphorylation[J].The journal of biological chemistry,2005,280(12):11798-11806[60] Wang X,Gowik U,Tang H,et al.Comparative genomic analysis of C4 photosynthetic pathway evolution in grasses[J].GenomeBiology,2009,10(6):447-477[61] Shenton M,Fontaine V,Hartwell J,et al.Distinct patterns of control and expression amongst members of the PEP carboxylasekinase gene family in C4 plants[J].Plant Journal,2006,48(1):45-53[62] Uhrig R G,She Y M,Leach C A,et al.Regulatory monoubiquitination of phosphoenolpyruvate carboxylase in germinating castoroil seeds[J].Journal of Biological Chemistry,2008,283(44):29650-29657[63] Shane M W,Fedosejevs E T,Plaxton W C.Reciprocal control of anaplerotic phosphoenolpyruvate carboxylase by invivo monoubiquitination and phosphorylation in developing proteoid roots of phosphate-deficient harsh hakea[J].Plant Physiology,2013(4):1634-1644[64] Ruiz-Ballesta I,Feria A B,Ni H,et al.In vivomonoubiquitination of anaplerotic phosphoenolpyruvate carboxylase occurs atLys624 in germinating sorghum seeds[J].Journal of Experimental Botany,2014,65(2):443-451[65] Ruiz-Ballesta I,Baena G,Gandullo J,et al.New insights into the post-translational modification of multiple phosphoenolpyruvatecarboxylase isoenzymes by phosphorylation and monoubiquitination during sorghum seed development and germination[J].Journal of experimental botany,2016,67(11):3523-3536[66] Figueroa C M,Feil R,Ishihara H,et al.Trehalose 6-phosphate coordinates organic and amino acid metabolism with carbonavailability[J].The plant journal:for cell and molecular biology,2016(3):410-423[67] Denecke M,Schulz M,Fischer C,et al.Partial purification and characterization of stomatal phosphoenolpyruvate carboxylase fromVicia faba[J].Physiologia Plantarum,1993(1):96-102[68] Law R D,Plaxton W C.Purification and characterization of a novel phosphoenolpyruvate carboxylase from bananafruit[J].Biochemical Journal,1995(3):807-816[69] Nisi P D,Zocchi G.Phosphoenolpyruvate carboxylase in cucumber(Cucumis sativus L.)roots under iron deficiency:activity andkinetic characterization[J].Journal of Experimental Botany,2000,51(352):1903-1909[70] Rao S,Reiskind J,Bowes G.Light regulation of the photosynthetic phosphoenolpyruvate carboxylase(PEPC)in Hydrillaverticillata[J].Plant and Cell Physiology,2006,47(9):1206-1216[71] González M C,Osuna L,Echevarría C,et al.Expression and localization of phosphoenolpyruvate carboxylase in developing andgerminating wheat grains[J].Plant Physiology,1998(4):1249-1258[72] Osuna L,Pierre J N,Gonzalez M C,et al.Evidence for a slow-turnover form of the Ca2+-independent phosphoenolpyruvatecarboxylase kinase in the aleurone-endosperm tissue of germinating barley seeds[J].Plant Physiology,1999(2):511-520 [73] Nhiri M,Bakrim N,Bakrim N,et al.Posttranslational regulation of phosphoenolpyruvate carboxylase during germination ofSorghum seeds:influence of NaCl and l-malate[J].Plant Science,2000,151(1):29-37[74] Feria A B,Alvarez R,Cochereau L,et al.Regulation of phosphoenolpyruvate carboxylase phosphorylation by metabolites andabscisic acid during the development and germination of barley seeds[J].Plant Physiology,2008(2):761-774[75] 王丽媛,张玉,徐明怡,等.植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究进展[J].国土与自然资源研究,2017(5):86-89。
备战2023年高考等级考生物考试易错题精练07 关于光合作用光反应和暗反应关系分析(含详解)

易错点07 关于光合作用光反应和暗反应关系分析光合作用相关知识是高考命题必考的内容之一,光合作用光反应和暗反应的关系常常以选择题或非选择题形式考查。
这类试题丢分的原因有对光合作用光反应和暗反应的内在联系不理解、对题目新情境有效信息获取能力和分析能力薄弱、对原因依据类表达逻辑混乱等。
在复习备考中,需要对比光合作用光反应和暗反应区别与联系,同时进行专项练习巩固,提高理解能力、获取信息能力和表达能力,注意避开易错陷阱,才能从容应对这类题。
易错陷阱1:光反应和暗反应的场所。
误以为光合作用只能在叶绿体进行;误以为液泡和叶绿体的色素均参与光合作用;误以为叶绿体内膜和外膜参与光合作用。
误以为离体的叶绿体不能进行光合作用。
易错陷阱2:光反应和暗反应的条件。
误以为暗反应在无光条件下可以长期进行;误以为暗反应必须在暗处进行。
易错陷阱3:骤然改变某个因素对光反应和暗反应产物的影响。
忽视光反应与暗反应的联系,即光反应产物NADPH和ATP对C3还原中的作用、忽视暗反应产物ADP和NADP+对ATP和NADPH形成的影响造成分析错误。
例题1、(2021湖南省·T18)图a为叶绿体的结构示意图,图b为叶绿体中某种生物膜的部分结构及光反应过程的简化示意图。
回答下列问题:(1)图b表示图a中的______结构,膜上发生的光反应过程将水分解成O2、H+和e-,光能转化成电能,最终转化为______和A TP中活跃的化学能。
若CO2浓度降低.暗反应速率减慢,叶绿体中电子受体NADP+减少,则图b中电子传递速率会______(填“加快”或“减慢”)。
(2)为研究叶绿体的完整性与光反应的关系,研究人员用物理、化学方法制备了4种结构完整性不同的叶绿体,在离体条件下进行实验,用Fecy或DCIP替代NADP+为电子受体,以相对放据此分析:①叶绿体A和叶绿体B的实验结果表明,叶绿体双层膜对以_________(填“Fecy”或“DCIP”)为电子受体的光反应有明显阻碍作用,得出该结论的推理过程是_________。
pepc酶活的测定.

2. 实验试剂:50mM ATP溶液,50mM磷酸肌酸溶液,0.2mM NaHCO3溶液,160U/ml 磷酸肌酸激酶溶液,160U/ml磷酸甘油酸激酶溶液,160U/ml磷酸甘油醛脱氢酶溶液(U为酶活力单位),25mM RuBP溶液,5mM NADH,Rubisco提取介质(40mM Tris-HCl缓冲液,pH7.6,内含10mM MgCl2溶液,0.25mM EDTA,5mM谷胱甘肽),反应介质(0.1M Tris-HCl缓冲液,pH7.8,内含12mM MgCl2溶液,0.4mM EDTA)。
3实验步骤3.1 酶粗提液的准备取新鲜洗干净的条斑紫菜的丝状体和条斑紫菜的叶状体各1克,加入预冷的提取介质1ml,冰浴研磨10min,将样品在40C,10,000×g离心10min,弃沉淀;上清夜即是酶粗提液,置于00C备用(王维光,1985;张志良等,2003)。
3.3.2 Rubisco酶活力的测定按下表配制反应体系:试剂加入量ml5mM NADH 0.250mM ATP 0.2酶提取液0.150mM磷酸肌酸0.20.2mM NaHCO30.2反应介质1.4160U/ml磷酸肌酸激酶0.1160U/ml磷酸甘油酸激酶0.1160U/ml磷酸甘油醛脱氢酶0.1双蒸水0.3将配制好的反应体系混匀,倒入比色杯内,以蒸馏水为空白,在紫外分光光度计计上测量340nm处反应体系的OD值,作为零点值。
将0.1mlRuBp加入比色杯内,立即计时,每隔20s测一次OD值,共测3min。
以零点到第1min 的OD值下降的绝对值计算酶活力。
由于酶提取液中可能存在3-磷酸甘油酸(PGA),会使酶活力的测定产生误差,因此除上述测定外还需做一个不加RuBp的对照。
对照的反应体系与上述酶的反应体系完全一样,所不同的仅仅是把酶提取液放在最后加,加入后马上测定此反应体系340nm处的OD值,并记录前1min内OD值的变化量。
二氧化碳测定试剂盒(PEPC法)产品技术要求danda

二氧化碳测定试剂盒(PEPC法)适用范围:本品用于体外定量测定人血清中二氧化碳的含量。
1.1规格规格1: (试剂1:30mL);规格2: (试剂1:60mL);规格3: (试剂1:90mL);规格4:(试剂1:120mL);校准品:(选配)规格1(0.3mL×1;1水平);规格2(0.5mL×1;1水平);规格3(1.0mL×1;1水平);质控品:(选配)规格1(0.5mL×2;2水平);规格2(1.0mL×2;2水平)。
1.2组成试剂盒组成见表1表1 二氧化碳测定试剂盒组成注:校准品及质控品赋值具有批特异性,每批次浓度详见标签。
2.1试剂2.1.1外观试剂盒外观应整洁,文字符号标识清晰;组分齐全,液体无漏液;试剂1为浅黄色透明液体,不得有沉淀和絮状物。
2.1.2装量每瓶不少于标示值。
2.1.3试剂空白吸光度用指定的空白样品测试试剂(盒),在光径1cm下,在A405nm处测定试剂空白吸光度A≥0.8。
2.1.4分析灵敏度测定在29 mmol/L范围内的样品,吸光度变化绝对值大于0.05A。
2.1.5线性范围2.1.5.1在[0.5,50] mmol/L内,相关系数R≥0.990。
2.1.5.2在[0.5,15] mmol/L内,线性绝对偏差不超过±1.5mmol/L;(15,50] mmol/L内,线性相对偏差不超过±10%。
2.1.6 重复性重复测试(18±3.6)mmol/L和(34±6.8)mmol/L样本,所得结果的变异系数(CV%)应不大于5%。
2.1.7批间差测定(18±3.6)mmol/L和(34±6.8)mmol/L样本,所得结果的批间相对极差(R)应不大于10%。
2.1.8准确度)中加入一定体积高于50 mmol/L的碳酸氢钠纯在正常浓度范围的临床样本(C品(Cs)或由纯品配制的标准溶液,回收率应在90%-110%范围内。
糖酵解类检测

糖酵解类检测葡萄糖或糖原在无氧或缺氧条件下,分解为乳酸同时产生少量ATP的过程,由于此过程与酵母菌使糖生醇发酵的过程基本相似,故称为糖酵解。
催化糖酵解反应的一系列酶存在细胞质中,因此糖酵解全部反应过程均在细胞质中进行。
糖酵解是所有生物体进行葡萄糖分解代谢所必须经过的共同阶段。
糖酵解迪信泰检测平台使用酶法测定糖酵解过程中的中间产物如果糖-1, 6-二磷酸,对于在糖酵解过程中的酶类物质,采用相应的试剂盒采用生化法检测。
可检测的物质包括己糖激酶、磷酸果糖激酶、果糖-1, 6-二磷酸、丙酮酸激酶等。
此外,我们还提供糖酵解类物质的生化试剂盒代测服务,以满足您的不同需求。
两种酶法测定糖酵解类物质结果比较迪信泰检测平台可检测糖酵解类物质项目果糖-1,6-二磷酸(FDP)己糖激酶(HK)丙酮酸激酶(PK)磷酸果糖激酶(PFK)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量检测测定意义:果糖-1,6-二磷酸,又称1,6-二磷酸果糖,是糖酵解途径的重要中间产物之一,在临床上,主要用作治疗心脏缺血症的辅助药物。
测定原理:果糖1,6-二磷酸在醛缩酶催化下发生降解,产物与DNPH反应生成紫红色化合物,在540nm处有最大吸收峰,可利用分光光度法检测果糖-1,6-二磷酸含量。
己糖激酶(HK)活性检测测定意义:己糖激酶是催化己糖磷酸化的酶,参与植物信号转导过程,可调控糖降解和氧化磷酸化途径的代谢速率。
测定原理:己糖激酶催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH,NADPH在340nm处有最大吸收峰,可利用分光光度法检测己糖激酶活性。
丙酮酸激酶(PK)活性检测测定意义:丙酮酸激酶,又称磷酸丙酮酸激酶、丙酮酸磷转称酶,是一种转移酶,主要参与糖酵解途径和遗传物质代谢的调控,是糖酵解途径的3个关键酶之一。
测定原理:丙酮酸激酶催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成丙酮酸和ATP,乳酸脱氢酶催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,可通过计算340nm处NADH的减少量检测丙酮酸激酶活性。
植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究进展
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摘 要 :磷 酸 烯 醇 式 丙 酮酸 羧 化 酶 ( P h o s p h o e n o l p y r u v a t e
c a r b o x y l a s e , P E P C) , 是一 个广泛存在 于细菌 、 古细 菌、 蓝 藻细胞 、
绿 藻、 原 生动 物 和 维 管植 物 中的 细 胞 质 酶 。P E P C在 植 物 种 子 萌
发、 种子的形成、 调节有机酸类的代谢 、 抗生物和非生物胁迫 中有
重要 的作 用 。本 研 究主 要 介 绍 了植 物 P E P C种类、 结构、 P E P C 在
植 物 中的作 用, 及其在基 因工程 方面的研 究。 关 键词 : P E P C; 特征 ; 功 能 基 因 工程
f u c t i o ng s o f PEPC i n p l a n t an d t he p r o g r e s s i n g e n e t i c e n g i n e e r i n g o fPEPC. Key wor  ̄ :Ph o s pho en o l py mv a t e c a r bo x yl a s e;
国 土 与 自 然 资 源 研 RI TORY & NATURAL RES O URCES ST UDY
2 01 7 No . 5
文章编 号 : 1 0 0 3 — 7 8 5 3 ( 2 0 1 7 ) 0 5 — 0 0 8 6 — 0 4
包括 : 种子萌发和形成【 、 调 节 保卫 细胞 [ 4 ] 、 促 进 苹 果 酸
《植物生理学》专升本习题库+答案

《植物生理学》习题库+答案一、单选题(共60题,每题1分,共60分)1、在植物体内,糖与油脂可以发生互相转变,油脂转化为糖时,呼吸商( )。
A、先变大后变小B、变小C、不变D、变大正确答案:D2、二磷酸尿苷葡萄糖(UDPG)和6-磷酸果糖(F6P)结合形成6-磷酸蔗糖(S6P),催化该反应的酶是( )。
A、磷酸蔗糖合酶B、磷酸蔗糖磷酸酶C、UDPG焦磷酸化酶D、1,6-二磷酸果糖磷酸酶正确答案:A3、玉米的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)固定二氧化碳在( )中。
A、维管束鞘细胞的细胞质B、叶肉细胞的细胞质C、叶肉细胞的叶绿体间质D、维管束鞘细胞的叶绿体间质正确答案:B4、含羞草遇外界刺激,小叶合拢,这种现象是( )。
A、生长运动B、感性运动C、向性运动D、偏上生长正确答案:B5、源库单位的( )是整枝、摘心、疏果等栽培技术的生理基础。
A、可变性B、固定性C、区域化D、对应关系正确答案:A6、叶绿素与血红蛋白和细胞色素的化学结构相似,均有一个大的( )。
A、卟啉环B、苯环C、吲哚环D、吡咯环正确答案:A7、( )化肥属于生理碱性盐。
A、硝酸钠B、硫酸钾C、硝酸铵D、磷酸铵正确答案:A8、半叶法是测定单位时间、单位叶面积的( )。
A、水的消耗量B、干物质的积累量C、二氧化碳消耗量D、氧气的产生量正确答案:B9、在禾谷类种子萌发过程中,胚乳储存的淀粉被来自( )的淀粉酶水解。
A、胚B、胚乳C、糊粉层D、胚根正确答案:C10、已知洋葱表皮细胞水势为—1MPa,置于( )中会发生质壁分离现象。
A、-1 MPa NaCl溶液B、-0.8MPa葡萄糖溶液C、-1.5MPa蔗糖溶液D、-0.9MPa甘油溶液正确答案:C11、大多数肉质果实的生长曲线呈( )。
A、单S形B、不规则形C、双S形D、Z形正确答案:A12、植物细胞膜脂中含量最高的是( )。
A、硫脂B、甾醇C、磷脂D、糖脂正确答案:C13、绿茶制作的工艺流程为杀青、揉捻、干燥,其原理就是消除( )活性,防止茶叶失绿变褐。
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)提取液

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)提取液简介:磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)是C4植物和CAM 植物固定CO 2的关键酶,为催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶,在植物和细菌中广泛存在,在动物及丝状霉菌中缺乏此酶。
大肠杆菌中的酶分子量约36万的四聚体,可受很多因素的影响,例如可为乙酰辅酶A 活化,可受天门冬氨酸抑制。
此酶是变构酶,主要功能为供给三羧酸循环以草酰乙酸,另外也与C4植物光合二氧化碳固定反应(C4二羧酸循环)及景天科植物的苹果酸形成(景天酸代谢)等有关。
Leagene 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)提取液主要用于裂解植物组织,提取样品中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。
该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考):1、取植物组织清洗干净,切碎。
2、加入预冷的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶提取液,冰浴情况下充分匀浆或研磨。
3、经纱布或滤纸过滤,留取滤液待用。
3、离心,留取上清液。
4、冻存,用于磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的检测或其他用途。
计算:组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%注意事项:编号名称CS0421Storage 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶提取液500ml 4℃使用说明书1份1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂,同时需避免反复冻融。
2、所测样本的值高于标准曲线的上限,应用磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶提取液稀释样品后重新测定。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期:6个月有效。
相关:编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
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Solution、NADH 工作液、ddH2O,恢复至室温,按 PEPC Assay buffer:PEP Solution: MDH Solution:NADH 工作液:ddH2O,混匀,即为 PEPC Assay buffer 工作液。 最好即配即用,预冷备用,保存 1 月有效。 4、 PEPC 加样:按照下表设置对照管(备选,一般可以不设对照管)、测定管,溶液应按照 顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性过高, 可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置平行管。
北京雷根生物技术有限公司
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)检测试剂盒(PEP 比色法)
简介:
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase, PEPC)是 C4 植物和 CAM 植物固定 CO2 的关键酶,为催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈 不可逆反应的酶,在植物和细菌中广泛存在,在动物及丝状霉菌中缺乏此酶。大肠杆菌中 的酶分子量约 36 万的四聚体,可受很多因素的影响,例如可为乙酰辅酶 A 活化,可受天 门冬氨酸抑制。此酶是变构酶,主要功能为供给三羧酸循环以草酰乙酸,另外也与 C4 植物 光合二氧化碳固定反应(C4 二羧酸循环)及景天科植物的苹果酸形成(景天酸代谢)等有关。
加入物质(ml) ddH2O 待测样品 PEPC Assay buffer 工作液
对照管(备选) 0.07 — 1.96
测定管 — 0.07 1.96
5、 PEPC 测定:混匀,恒温孵,置于分光光度计中,比色杯光径,测定吸光度,记为 A0。 加入 PEPC 启动剂,立即计时,每隔 30s 测定一次吸光度,其中至 1min 时处吸光度记 为 A1,记录其变化。
计算:
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性:在碱性条件下,每吸收 1 分子 CO2 伴随 1 分子 NADH 氧化。
组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100% PEPC(μmol/ml·min)=ΔA×N×2.1×(106/6220)/0.07 式中:ΔA=A0−A1
组成:
编号 名称 试剂(A): PEPC Lysis buffer 试剂(B): PEPC Assay buffer 试剂(C): PEP Solution 试剂(D): MDH Solution 试剂(E): NADH 使用说明书
TE0453 50T
Storage
500ml 4℃ 避光
40ml 4℃
Leagene 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)检测试剂盒(PEP 比色法)检测原理是利用磷 酸烯醇式丙酮酸(PEP)为一种的酶显色底物,在弱碱条件下,PEPC 催化 PEP,形成草酰乙 酸(OAA),OAA 在 MDH 催化下被 NADH 还原为苹果酸(Mal)。在碱性条件下每吸收 1 分 子 CO2 伴随 1 分子 NADH 氧化,通过分光光度比色法(分光光度计)测定处吸光度的变化, 计算出 NADH 的消耗速率进一步推算出磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性水平。该试剂盒主要 用于检测植物样本、血清等中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性。该试剂盒仅用于科研领域, 不宜用于临床诊断或其他用途。
注意:该反应系统是利用速率变化,求得相应 OD 的变化,进而推算出 NADH 的消耗速率,再进一 步推算出磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的量。因此加入 PEPC 启动剂立即计时很重要,每次检测指标不宜过多, 否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。
北京雷根生物技术有限公司
有效期:6 个月有效。
相关:
编号 DF0135 NR0001 PS0013 TO1013
名称 多聚甲醛溶液(4% PFA) DEPC 处理水(0.1%) RIPA 裂解液(强) 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)
3.5ml -20℃
3.5ml -2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ℃
2 支 -20℃
1份
自备材料:
1、 研钵或匀浆器 2、 离心管或试管 3、 低温离心机 4、 恒温箱或水浴锅 5、 比色杯
北京雷根生物技术有限公司
6、 分光光度计
操作步骤(仅供参考):
1、 准备样品: ①植物样品:取植物组织清洗干净,切碎,植物组织:PEPC Lysis buffera 按一定的比例, 加入预冷的 PEPC Lysis buffer,冰浴情况下充分匀浆或研磨。经 4 层纱布或滤纸过滤,留 取滤液,离心,留取上清液即为磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶粗提液。短期 4℃保存,长期-20℃ 冻存待用。 ②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定, 冻存,用于磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的检测。 ③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用 PEPC Lysis buffer 进行适当 匀浆,离心,取上清液,冻存,用于磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的检测。 ④高活性样品:如果样品中含有较高活性的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶,可以使用 PEPC Lysis buffer 进行恰当的稀释。 2、 配制 NADH 工作液:取出 NADH,恢复至室温后溶解于 ddH2O,混匀,预冷备用。
再进一步推算出磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的量。因此加入 PEPC 启动剂立即计时很 重要,每次检测指标不宜过多,否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。 4、 所测样本的浓度过高,应用 PEPC Lysis buffer 稀释样品后重新测定。 5、 待测样品中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性较低时,可适当延长孵育时间。 6、 PEPC 启动剂易挥发,应密闭保存。 7、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
N=酶液稀释倍数 6220=NADH 的吸光系数 2.1=反应液的总体积(ml) 0.07=待测样品体积(ml)
注意事项:
1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂,同时需避免反复冻融。 2、 如果没有分光光度计,也可以使用普通的酶标仪测定,但应考虑根据酶标仪的最大检
测体积。 3、 该反应系统是利用速率变化,求得相应 OD 的变化,进而推算出 NADH 的消耗速率,