牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)酶联免疫分析(ELISA)
植物生理学名词解释(全)
一、绪论1. 植物生理学是研究植物生命活动规律与细胞环境相互关系的科学，在细胞结构与功能的基础上研究植物环境刺激的信号转导、能量代谢和物质代谢。
二、植物的水分生理1.水势：相同温度下一个含水的系统中一偏摩尔体积的水与一偏摩尔体积纯水之间的化学势差称为水势。
把纯水的水势定义为零，溶液的水势值则是负值。
水分代谢：植物对水分的吸收、运输、利用和散失的过程。
2.衬质势：由于衬质 ( 表面能吸附水分的物质，如纤维素、蛋白质、淀粉等 ) 的存在而使体系水势降低的数值。
3.压力势：植物细胞中由于静水质的存在而引起的水势增加的值。
4.渗透势：溶液中固溶质颗粒的存在而引起的水势降低的值。
5.渗透作用：溶液中的溶剂分子通过半透膜扩散的现象。
对于水溶液而言，是指水分子从水势高处通过半透膜向水势低处扩散的现象。
6.质壁分离：植物细胞由于液泡失水而使原生质体和细胞壁分离的现象。
7.吸胀作用：亲水胶体物质吸水膨胀的现象称为吸胀作用。
胶体物质吸引水分子的力量称为吸胀。
8.根压：由于植物根系生理活动而促使液流从根部上升的压力。
伤流和吐水现象是根压存在的证据。
9.蒸腾作用：水分通过植物体表面（主要是叶片）以气体状态从体内散失到体外的现象。
10．蒸腾效率：植物在一定生育期内所积累干物质量与蒸腾失水量之比，常用 g·kg-l表示。
11.蒸腾系数：植物每制造 1g 干物质所消耗水分的 g 数，它是蒸腾效率的倒数，又称需水量。
12. 气孔蒸腾：植物细胞内的水分通过气孔进行蒸腾的方式称为气孔蒸腾。
13.气孔运动主要受保卫细胞的液泡水势的调节，但调节保卫细胞水势的途径比较复杂。
14.保卫细胞：新月形的细胞，成对分布在植物叶气孔周围，控制进出叶子的气体和水分的量。
形成气孔和水孔的一对细胞。
双子叶植物的保卫细胞通常是肾形的细胞，但禾本科的气孔则呈哑铃形。
气孔的保卫细胞含有叶绿体，因为细胞壁面对孔隙的一侧（腹侧）比较厚，而外侧（背侧）比较薄，所以随着细胞内压的变化，可进行开闭运动。
大鼠神经元特异性烯醇化酶酶联免疫分析(NSE-ELISA)试剂盒使用
大鼠神经元特异性烯醇化酶酶联免疫分析（NSE-ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：E0537r预期应用ELISA法定量测定大鼠血清中NSE含量，有助于诊断小细胞肺癌及相关性疾病。
概述烯醇化酶（Enolase）是参与糖酵解的酶，催化2-磷酸甘油酸向磷酸烯醇丙酮酸的转化，由三种亚基（α、β、γ）组成的二聚体同功酶。
其中αγ和γγ烯醇化酶同功酶存在于神经元及神经来源的细胞中，也称为神经元特异性烯醇化酶（Neurone specific enolase ，NSE）。
在正常大鼠群中NSE含量较低，但在某些神经内皮细胞增生的恶性疾病，如神经母细胞瘤（Neuroblastoma），其含量往往上升。
由于小细胞肺癌（Small cell lung carcinoma，SCLC）是最常表现有神经内分泌性质的肿瘤，目前NSE也是SCLC最敏感最特异的肿瘤标志物。
肺癌是近年来发病率日趋增高的癌种，在种种肺癌中小细胞肺癌占大约20%，因此正确诊断肺癌的类型，特别是确定小细胞肺癌的诊断很重要。
小细胞肺癌患者的αγ和γγ同功酶含量均有不同比例的增高，因些必须在同一敏感度下同时检测NSE的αγ和γγ同功酶含量。
本试剂盒所用单抗只针对NSE的γ亚基，而与α或β亚基无交差反应。
据文献报道，NSE含量测定可作为肺癌、成神经细胞瘤、黑素瘤、精原细胞瘤以及中枢精神系统损伤的诊断指标。
同时，也可用于SCLC治疗前后疗效的监测与预后，以及SCLC 与其它型肺癌的鉴别诊断。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定血清中NSE水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入NSE抗原、生物素化的抗大鼠NSE抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的NSE呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
酶免疫分析的名词解释
酶免疫分析的名词解释酶免疫分析（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的生物化学分析技术，通过利用酶作为信号标记以及免疫反应的特异性，可以准确、灵敏地检测和定量目标物质，包括抗体、抗原、蛋白质等。
1. 酶免疫分析的原理及步骤酶免疫分析的核心原理是将目标物质与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
该复合物在固定在固相载体上的抗体的作用下，使目标物质固定在特定位置。
而后，通过添加酶标记的二抗（即二级抗体）或联合酶-底物系统，使酶与抗原-抗体复合物发生反应，形成显色或荧光信号。
最终，通过光谱测量、比色测定或荧光测定，可以量化目标物质的含量。
酶免疫分析的步骤一般包括样品处理、免疫反应、洗涤、酶标记反应、洗涤和检测。
首先，需要对目标物质进行样品预处理，如稀释、去除干扰物质等。
接下来，将样品加入含有特异性抗体的固相底物，允许抗原-抗体反应发生。
然后，通过洗涤步骤去除未结合的物质。
加入酶标记的二抗或酶-底物体系，形成酶与抗原-抗体复合物。
经过再次洗涤后，将底物加入体系，产生可检测的信号。
最后，通过测定信号强度，可以定量目标物质的浓度。
2. 酶免疫分析的应用领域酶免疫分析在医学、生物学、生物制药等领域有着广泛的应用。
其中，常见的包括：2.1 临床诊断酶免疫分析可以用于检测疾病标志物、肿瘤标志物等，早期发现和诊断疾病。
例如，检测血液中特定蛋白质、抗体或血糖水平等，可用于诊断糖尿病、肝功能异常等病症。
2.2 药物研究和开发酶免疫分析可用于药物筛选、效价测定等。
通过测量药物分子与特定抗体结合能力的变化，可以评估药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄，从而指导药物设计和优化。
2.3 食品安全检测酶免疫分析可以检测食品中的残留农药、重金属、致病菌等有害物质。
通过快速、高效的检测手段，保障食品安全，减少人们食用风险。
2.4 环境监测酶免疫分析可用于检测环境中的污染物，如土壤、水体中的重金属、农药等。
牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶PCK酶联免疫分析ELISA
牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定热牛血清，血浆及相关液体样本中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)水平。
用纯化的牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)，再与HRP标记的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
重组抵抗素对犊牛肝细胞PC mRNA丰度及其活性的影响
重组抵抗素对犊牛肝细胞PC mRNA丰度及其活性的影响陈傲第;贺鹏飞;刘国文;陈承祯;王哲【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2009(29)7【摘要】取单层培养72 h生长良好的犊牛肝细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、25、50、100、200、400 ng/L的牛重组抵抗素(resistin),每个处理3个重复(每重复2孔)。
继续培养12 h后分别提取RNA并制备细胞上清液。
应用荧光定量PCR方法检测牛重组Resistin对肝细胞糖异生关键酶丙酮酸羧化酶(Pyruvate carboxylase,PC)基因表达的影响,同时用比色法检测其对肝细胞PC酶活性的影响。
结果表明,一定浓度的resistin显著下调了肝细胞PCmRNA表达,且降低了PC酶活性。
【总页数】4页(P924-927)【关键词】牛重组抵抗素;肝细胞;丙酮酸羧化酶;犊牛【作者】陈傲第;贺鹏飞;刘国文;陈承祯;王哲【作者单位】吉林大学畜牧兽医学院【正文语种】中文【中图分类】S856.5【相关文献】1.瘦蛋白对犊牛肝细胞PC mRNA表达及其活性的影响 [J], 陈承祯;刘国文;谢光洪;杨文艳;张嘉保;王哲2.胰岛素对犊牛肝细胞PC mRNA表达及其活性的影响 [J], 陈承祯;张嘉保;任文陟;徐闯;刘国文;张永宏;王哲3.神经内分泌因子对新生犊牛肝细胞MTP mRNA丰度的影响 [J], 陈仕均;唐海蓉;刘兴友;刘开永4.神经肽Y对犊牛肝细胞PC mRNA丰度及其活性的影响 [J], 陈承祯;谢光洪;刘国文;徐闯;张嘉保;文力正;王哲5.神经肽Y对犊牛肝细胞PEPCK mRNA丰度及其活性的影响 [J], 陈承祯;李小兵;谢光洪;徐闯;刘国文;张永宏;王哲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
丙酮酸羧化酶(PC)活性检测试剂盒说明书
丙酮酸羧化酶（PC）活性检测试剂盒说明书微量法货号: BC0735规格: 100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×2瓶2-8℃保存试剂一液体15 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体5 mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶-20℃保存试剂四粉剂×1瓶-20℃保存试剂五液体2 mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体5 μL×1支2-8℃保存试剂六稀释液液体5 mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前加入3 mL蒸馏水溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；2、试剂四：临用前加入2 mL蒸馏水溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；3、试剂六：液体置于试剂瓶内EP管中。
临用前按试剂六：试剂六稀释液=1:428（V:V）的比例稀释试剂六备用，现用现配；4、工作液的配制：按照试剂二：试剂三：试剂四=2:1:1的体积比例充分混匀，现用现配。
产品说明：丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase，PC，EC 6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中，但在植物体和大部分细菌中却不含此酶。
是供给草酰乙酸的主要补充反应，是糖异生过程的第一个限速酶。
PC不可逆的催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm下测定NADH氧化速率，即可反映PC活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤;一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
肝细胞癌中糖异生代谢异常的研究进展
2肝细胞癌中糖异生代谢异常的研究进展罗赛芳，马向明，曹立瀛华北理工大学附属开滦总医院肝胆外科，河北唐山０６３０００摘要：肿瘤在有氧环境中仍然进行糖酵解以加速对肿瘤微环境中的葡萄糖摄取和产生大量乳酸，为肿瘤细胞增殖提供所需的核苷酸、脂质和蛋白质的生物分子前体，以及可抑制免疫细胞的功能而促进肿瘤细胞的转移。
糖异生代谢作为糖酵解的逆反应在肝细胞癌中处于抑制状态，尤其是丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、果糖－１，６－二磷酸酶１和葡萄糖－６－磷酸酶４个关键限速酶的表达下调，通过促进有氧糖酵解及其分支途径而促进肝细胞癌的生长和增殖，同时也与肝细胞癌患者的总生存期和预后相关，被认为是肝细胞癌的抑制因子。
基于此，本文总结了糖异生代谢关键酶在肝细胞癌发生发展中的变化及其作用机制，并分析了其在肝细胞癌中相关研究的不足和未来方向，期望为肝细胞癌的治疗提供新思路。
关键词：癌，肝细胞；糖原异生；代谢基金项目：河北省２０２０年度医学科学研究课题计划（２０２０１２８５）ＲｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｓｉｎａｂｎｏｒｍａｌｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａＬＵＯＳａｉｆａｎｇ，ＭＡＸｉａｎｇｍｉｎｇ，ＣＡＯＬｉｙｉｎｇ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，ＫａｉｌｕａｎＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＮｏｒｔｈＣｈｉｎａＵｎｉ ｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔａｎｇｓｈａｎ，Ｈｅｂｅｉ０６３０００，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＣＡＯＬｉｙｉｎｇ，ｃａｏｌｉｙｉｎｇ１５３＠１２６．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００３－３６６２－５９６１）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｕｍｏｒｓｓｔｉｌｌｐｅｒｆｏｒｍｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓｉｎｔｈｅａｅｒｏｂｉｃｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｔｏａｃｃｅｌｅｒａｔｅｔｈｅｕｐｔａｋｅｏｆｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｐｒｏｄｕｃｅａｌａｒｇｅａｍｏｕｎｔｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｉｎｔｕｍｏｒｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ｐｒｏｖｉｄｅｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓｏｆｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ｌｉｐｉｄｓ，ａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓｆｏｒｔｕｍｏｒｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｓａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｉｎａｃｉｄｉｃｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ，ａｓｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｒｅａｃｔｉｏｎｏｆｇｌｙ ｃｏｌｙｓｉｓ，ｉｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｆｏｕｒｋｅｙｒａｔｅ－ｌｉｍｉｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅｓｐｙｒｕｖａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅｃａｒｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ，ｆｒｕｃｔｏｓｅ－１，６－ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ１，ａｎｄｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ４，ｗｈｉｃｈｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｂｙｐｒｏｍｏｔｉｎｇａｅｒｏｂｉｃｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓａｎｄｉｔｓｂｒａｎｃｈｅｄｐａｔｈｗａｙｓ，ａｎｄｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｉｔｉｓａｌｓｏａｓ ｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｏｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｉｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｆｏｒｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｃｈａｎｇｅｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｋｅｙｅｎｚｙｍｅｓｏｆｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄａｎａｌｙｚｅｓｔｈｅｓｈｏｒｔｃｏｍｉｎｇｓａｎｄｆｕｔｕｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓｏｆｒｅｌａｔｅｄｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅｎｅｗｉｄｅａｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ；Ｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ；ＭｅｔａｂｏｌｉｓｍＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：２０２０ＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｊｅｃｔＰｌａｎｏｆＨｅｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ（２０２０１２８５）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２２．０９．０４２收稿日期：２０２２－０２－２３；录用日期：２０２２－０４－０５通信作者：曹立瀛，ｃａｏｌｉｙｉｎｇ１５３＠１２６．ｃｏｍ 据２０２０年全球癌症数据统计，肝癌是世界上第三大致死性癌症，占癌症死亡总数的８．３％，也是我国第二大致死性癌症，死亡率为１３％［１］。
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)试剂盒说明书
货号：MS3500 规格：100管/96样磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸，是调节糖异生途径的关键酶。
测定原理：，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
自备实验用品及仪器：分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体18 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体16.5uL×1支，4℃保存；试剂三：粉剂×1支， -20℃保存；试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；样本的前处理：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
3、试剂四的配制：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)提取液
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)提取液简介：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)是C4植物和CAM 植物固定CO 2的关键酶，为催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶，在植物和细菌中广泛存在，在动物及丝状霉菌中缺乏此酶。
大肠杆菌中的酶分子量约36万的四聚体，可受很多因素的影响，例如可为乙酰辅酶A 活化，可受天门冬氨酸抑制。
此酶是变构酶，主要功能为供给三羧酸循环以草酰乙酸，另外也与C4植物光合二氧化碳固定反应(C4二羧酸循环)及景天科植物的苹果酸形成(景天酸代谢)等有关。
Leagene 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、取植物组织清洗干净，切碎。
2、加入预冷的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶提取液，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
3、经纱布或滤纸过滤，留取滤液待用。
3、离心，留取上清液。
4、冻存，用于磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的检测或其他用途。
计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%注意事项：编号名称CS0421Storage 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶提取液500ml 4℃使用说明书1份1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶提取液稀释样品后重新测定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
酶联免疫吸附法在畜产品快速检测中的应用
摘要：酶联免疫吸附法是畜产品质量安全检测常用的快检方法之一，能快速、准确、高效地对相关产品进行检测。
伴随着行业的高速发展，人们对畜产品的需求数量及质量要求也在逐步上升，畜产品的食品安全问题越来越受到重视。
但近年来，畜产品中存在着动物疫病、兽药残留及产品非法添加物等相关问题。
因此，使用快速、准确的检测方法筛查畜产品的质量安全至关重要。
本文以酶联免疫吸附法为主要技术导向，深入剖析其原理，同时对该技术在畜产品快检中的应用情况分层介绍，以期为行业相关研究人员提供依据。
关键词：酶联免疫吸附法；畜产品；检测技术；应用酶联免疫吸附法在畜产品快速检测中的应用程俊嘉，陈源，刘冬梅（昌吉州畜产品质量检测中心新疆昌吉831100）收稿日期：2023-06-29作者简介：程俊嘉（1990.06—），男，陕西人，畜牧师，硕士研究生，从事畜产品质量检测工作。
doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.05.056科研动态中国是畜产品的生产及消费大国，随着世界经济的全球化发展，标有“中国造”的畜产品对外出口比例逐年上升。
但近年来，随着禽流感病毒、非洲猪瘟病毒等疾病的不断肆虐，动物感染疫病的概率也不断增加，畜产品源头安全无法得到保障。
无独有偶，随着生活环境中外源性化学物质的日益增长，包括畜产品在内的日常消费食品也经常被查出含有违禁的化学药物，如瘦肉精、抗生素、雌雄激素类、抗病毒类药物等[1]，这些化学药物在食品中的滥用会导致兽药残留并引发严重的食品安全问题，对消费者的身心健康也具有较大的影响。
国家食品药品监督管理总局也多次发文要求严厉打击畜产品中滥用药物的问题，因此，对畜产品建立快检方法具有重要意义。
1快速检测技术概述畜产品安全快速检测技术是保障畜产品安全的重要技术，主要特点便是操作简易、速度快、成本低廉，能提高检测效率及工作效率，使得监管机构及相关人员能迅速处理突发事件。
同时，使安全的畜产品及时投入市场，使有害的畜产品中断市场流通并快速召回，以防止给人体和环境带来潜在危害。
光合作用之碳同化途径
光合作用之碳同化途径碳同化又称为CO2固定，是指植物利用光反应中形成的ATP和NADPH，将CO2转化为有机物的过程。
二氧化碳同化是在叶绿体的基质中进行的，有许多种酶参与反应。
根据碳同化过程中最初产物所含碳原子的数目以及碳代谢的特点，高等植物的碳同化途径有三条，即C3途径、C4途径和CAM（景天酸代谢）途径。
一、C3途径碳以二氧化碳的形态进入并以糖的形态离开卡尔文循环。
在这个循环中CO2固定的最初产物是一种三碳化合物，故又称C3途径。
C3途径可分为三个阶段: 羧化、还原和二磷酸核酮糖的再生。
大部分植物会将吸收到的一分子CO2通过1，5-二磷酸核酮糖羧化酶的作用整合到一个五碳糖分子1，5-二磷酸核酮糖（RuBP）的第二位碳原子上。
此过程称为CO2的固定。
这一步反应的意义是，把原本并不活泼的二氧化碳分子活化，使之随后能被还原。
但这种六碳化合物极不稳定，会立刻分解为两分子的三碳化合物3-磷酸甘油酸。
后者在光反应中生成的NADPH+还原，此过程需要消耗ATP。
产物是3-磷酸丙糖。
后来经过一系列复杂的生化反应，一个碳原子将会被用于合成葡萄糖而离开循环。
剩下的五个碳原子经一些列变化，最后在生成一个1，5-二磷酸核酮糖，循环重新开始。
循环运行六次，生成一分子的葡萄糖。
二、C4途径CO2同化的最初产物不是C3途径中的三碳化合物（3-磷酸甘油酸），而是四碳化合物（苹果酸或天门冬氨酸）的植物，称C4植物。
C4植物主要是生活在干旱热带地区的植物，如玉米、甘蔗等。
在这种环境中，植物若长时间开放气孔吸收CO2，会导致水分通过蒸腾作用过快的流失。
所以，植物只能短时间开放气孔，CO2的摄入量必然少。
植物必须利用这少量的CO2进行光合作用，合成自身生长所需的物质。
C4植物的维管束周围有两种不同类型的细胞：靠近维管束的内层细胞称为鞘细胞，围绕着鞘细胞的外层细胞是叶肉细胞。
两种不同类型的细胞各具不同的叶绿体。
围绕着维管束鞘细胞周围的排列整齐致密的叶肉细胞中的叶绿体，具有发达的基粒，而维管束鞘细胞的叶绿体中却只有很少的基粒，而有很多大的卵形淀粉粒。
丝胶蛋白逆转Ⅱ型糖尿病的研究进展
丝胶蛋白逆转Ⅱ型糖尿病的研究进展作者：钟海玲龚雪陈忠敏陈国宝王富平来源：《丝绸》2021年第09期摘要：自古中医采用家蚕蚕茧治疗糖尿病，近年来研究确定是家蚕蚕茧中的丝胶蛋白（SS）起作用。
文章在Ⅱ型糖尿病（T2DM）研究中发现：SS可以促进胰岛信号转导、增加糖降解，促进肝糖原的生成而降低T2DM的血糖水平;改善胰岛素抵抗、提高糖耐量、促进胰岛细胞增殖、提高胰岛素分泌量来逆转胰岛素量能;同时，SS还具有改善脂肪代谢，提高抗氧化能力、降低炎症反应、减轻肝脏损伤、减轻肾脏损伤等逆转身体机能。
研究结果表明：SS对T2DM血糖降低、恢复T2DM患者身体机能方面具有显著效果，具有潜在的治疗T2DM价值。
关键词：丝胶蛋白;Ⅱ型糖尿病;降血糖;改善胰岛素抵抗;逆转身体机能中图分类号： TS101.4文献标志码： A文章编号： 1001-7003（2021）09-0040-08引用页码： 091107DOI： 10.3969/j.issn.1001-7003.2021.09.007（篇序）Research progress of sericin reversing type Ⅱ diabetesZHONG Hailing， GONG Xue， CHEN Zhongmin， CHEN Guobao， WANG Fuping（College of Pharmacy and Bioengineering， Chongqing University of Technology，Chongqing 400054， China）Abstract：Silkworm cocoons have been used for TCM treatment of diabetes since ancient times and it has been confirmed by research in recent years that sericin（SS） in silkworm cocoons plays a key role. It is found in studies of type 2 diabetes mellitus（T2DM） that SS can facilitate islet signal transduction， accelerate glucose degradation， and promote the generation of liver glycogen，thereby reducing the blood sugar level of T2DM. It can also ameliorate insulin resistance， improve glucose tolerance， promote islet cell proliferation， enhance the amount of insulin secretion to reverse insulin quantity. In the meantime， SS has advantages of improving fat metabolism，enhancing antioxidant capacity， reducing inflammation， alleviating liver damage， kidney damageand other reversal of body functions. The results reveal that SS has a significant effect on reducing blood sugar in T2DM patients and restoring the body function of T2DM patients， and has potential value in T2DM treatment.Key words：sericin; type 2 diabetes; reduce blood glucose; improve insulin resistance; restore the body ability收稿日期： 20201210修回日期： 20210824基金項目：重庆市技术创新与应用发展专项面上项目（cstc2019jscxmsxmX0110）作者简介：钟海玲（1996），女，硕士研究生，研究方向为生物材料。
牛β羟丁酸BHBA酶联免疫分析ELISA
牛β羟丁酸BHBA酶联免疫分析ELISA 牛β-羟丁酸（BHBA）酶联免疫分析（ELISA）是一种常用的实验方法，用于测定牛血清或乳汁中BHBA的浓度。
本文将详细介绍ELISA的原理、操作步骤和相关注意事项，并探讨其应用于牛BHBA的测定。
1.原理ELISA是一种基于免疫反应的定量和定性分析方法，其原理基于抗原与抗体间的特异性结合。
该方法通过在固相（通常是微孔板）上固定抗原，然后与样品中的抗体结合，再与特异性的酶标记二抗结合，最后通过添加底物使酶发生化学反应，以测定抗原或抗体的浓度。
2.操作步骤步骤一：样品制备将牛血清或乳汁样品离心，去除悬浮的颗粒物。
然后按照实验所需的比例将样品稀释成合适的浓度。
步骤二：固相涂覆取出微孔板，将酶标板孔涂覆剂加入孔底，孔涂覆剂的种类可根据实验需求而定，一般为牛蛋白。
孔涂覆剂形成的蛋白质层能够固定抗原，使其与抗体特异结合。
步骤三：抗原包被将稀释后的样品加入孔中，与孔涂覆剂共同孵育，使抗原与酶标记二抗结合。
步骤四：洗涤用缓冲液对孔中的液体进行洗涤，从而去除非特异性结合物。
步骤五：酶标记加入特异性的酶标记二抗，与抗原结合，形成抗原-酶标记二抗复合物。
步骤六：再洗涤用缓冲液对孔中的液体进行洗涤，从而去除非特异性结合物。
步骤七：底物添加加入底物，底物与酶发生化学反应，可以通过生成可测量的信号（如颜色反应）来进行定量或定性分析。
3.注意事项-在进行ELISA实验时，应注意洗涤步骤的频率和缓冲液的浓度，以确保去除非特异性结合物的同时，不会导致特异结合复合物的脱离。
-确保样品的稀释倍数适当，以避免过度稀释或浓缩对实验结果的干扰。
-在进行酶标记二抗时，应根据实验需求选择合适的抗原和酶标记二抗，以确保特异性结合和化学反应的发生。
-操作过程中要注意洁净环境和避光，以避免外界因素对实验结果的影响。
-对于一些需要定量测定的ELISA实验，同时应加入标准品，以建立标准曲线，并根据标准曲线计算出样品中的抗原或抗体浓度。
糖异生类检测
糖异生类检测糖异生又称为葡糖异生。
由简单的非糖前体(乳酸、甘油、生糖氨基酸等)转变为糖(葡萄糖或糖原)的过程。
糖异生不是糖酵解的简单逆转。
虽然由丙酮酸开始的糖异生利用了糖酵解中的七步近似平衡反应的逆反应，但还必需利用另外四步酵解中不曾出现的酶促反应，绕过酵解过程中不可逆的三个反应。
糖异生保证了机体的血糖水平处于正常水平。
糖异生迪信泰检测平台采用生化法，实现高效、精准的检测糖异生系列物质的活性变化。
目前可检测的糖异生系列包括磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)、果糖-1,6-二磷酸酶、丙酮酸羧化酶和葡萄糖-6-磷酸酶等。
此外，我们还提供糖异生系列生化试剂盒产品，以满足您的不同需求。
脂联素对磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)活性的影响迪信泰检测平台可检测糖异生类项目磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)丙酮酸羧化酶(PC)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性检测测定意义：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶是糖异生途径的关键酶之一，还参与蛋白质代谢、次生物质代谢以及TCA循环等代谢途径，存在于动物、植物、细菌和酵母中。
测定原理：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶依次催化NADH氧化生成NAD+，可通过计算340nm处NADH的减少量检测磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性。
果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)活性检测测定意义：果糖-1,6-二磷酸酶是糖异生和糖原合成中的限速酶，不可逆地催化果糖-1,6-二磷酸水解为果糖-6-磷酸。
大部分果糖-1,6-二磷酸酶参与非碳水化合物合成葡萄糖或肝糖原过程，还可抑制细胞凋亡。
测定原理：果糖-1,6-二磷酸酶催化1,6二磷酸果糖和水反应生成6磷酸果糖和无机磷，磷酸葡萄糖异构酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，可通过计算340nm处NADPH的增加速率检测果糖-1,6-二磷酸酶活性。
牛柠檬酸合成酶(CS)酶联免疫分析(ELISA)
牛柠檬酸合成酶(CS)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中柠檬酸合成酶(CS)的含量。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛柠檬酸合成酶(CS)水平。
用纯化的牛柠檬酸合成酶(CS)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入柠檬酸合成酶(CS)，再与HRP标记的柠檬酸合成酶(CS)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的柠檬酸合成酶(CS)呈正相关。
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牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)水平。
用纯化的牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)，再与HRP标记的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存
说明书1份1份
封板膜2片（48）2片（96）
密封袋1个1个
酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备
用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L，150ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
100ng/L -2000ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。