95%酒精固定蛋白甘油凝集法细胞块的制备

95%酒精固定蛋白甘油凝集法细胞块的制备

发表时间：2018-12-07T10:39:31.317Z 来源：《医药前沿》2018年30期作者：陈杨刘盛均

[导读] 细胞块技术是将可疑病变的细胞学标本中单个细胞富集成团、固定脱水处理制作成细胞团蜡块，进一步HE切片染色、免疫组化染色等的新技术。

（绵阳市中心医院病理科四川绵阳 621000）

【摘要】目的：研究95%酒精固定蛋白甘油凝集法细胞块的制备。方法：取新鲜鸡蛋的蛋清至于烧杯中。按7:3比例加入甘油，以玻璃棒充分混匀，搅拌至均匀泡沫状，放置于冰箱冷藏室过夜。去除表面凝结浮沫，收集下部澄清液于200ml滴管瓶，置于4～8摄氏度冰箱保存。每100ml可加入0.5g麝香草酚以防腐。结果：细胞块完整，不易破碎，可多次重复切片；HE染色镜下细胞富集，有效成分多，核浆分明；免疫组化染色结果定位准确，易于判读；可进行FISH、PCR、重排、测序等分子病理检测。结论：可在各级医院病理科开展。

【关键词】细胞块；95%酒精；蛋白甘油

【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）30-0317-01

细胞块技术是将可疑病变的细胞学标本中单个细胞富集成团、固定脱水处理制作成细胞团蜡块，进一步HE切片染色、免疫组化染色等的新技术。根据文献报道主要方法有琼脂包埋法、固定沉淀法、血浆凝血酶沉淀法、鸡蛋清凝集法等，方法各有优劣[1-5]。根据自身条件及临床要求，本科室摸索出了95%酒精固定蛋白甘油凝集法细胞块技术，该法操作简单，成本低，效果理想，现介绍如下。

1.材料与方法

1.1 材料

脱落细胞学、细针穿刺细胞学等病理细胞学标本。

1.2 仪器与试剂

斜角式低速离心机，10ml离心管，2ml吸管，蛋白甘油，95%酒精。

1.3 方法

1.3.1蛋白甘油制备：取新鲜鸡蛋的蛋清至于烧杯中。按7：3比例加入甘油，以玻璃棒充分混匀，搅拌至均匀泡沫状，放置于冰箱冷藏室过夜。去除表面凝结浮沫，收集下部澄清液于200ml滴管瓶，置于4～8摄氏度冰箱保存。每100ml可加入0.5g麝香草酚以防腐。

1.3.2液基细胞学制片后剩余的细胞学标本，静置2小时后，倾去多余上清液，留10～20ml标本液，震荡混匀，将细胞悬液移至10ml离心管，2500r/min离心5min。

1.3.3缓慢倾去上清液，加入2ml的95%酒精，若细胞沉淀较少则加入2滴蛋白甘油，用吸管吹打混匀后完全吸入吸管，倒立使细胞悬液完全收集于吸管头，编号后剪去吸管尖多余部分，放入离心机4000r/min，离心10min。

1.3.4弃去上清，剪刀剪去吸管头，轻轻倒出细胞块于滤纸中，包裹后放入已编号组织包埋盒，与活体病理检查组织同放于全自动病理组织脱水机中，进行后续处理。

1.3.5常规包埋、切片、HE染色、诊断。根据诊断需要，进行特殊染色、免疫组化、分子病理等检测。

2.结果

细胞块完整，不易破碎，可多次重复切片；HE染色镜下细胞富集，有效成分多，核浆分明；免疫组化染色结果定位准确，易于判读；可进行FISH、PCR、重排、测序等分子病理检测。

3.讨论与体会

3.1 操作要点

纯鸡蛋清太过粘稠，不易吸取，且离心后容易与沉淀物分层；本科室采用甘油，按照蛋清、甘油7:3的比例混匀制成蛋白甘油使用，稀释度合理，离心后细胞团块坚实，不易散。

该方法的原理是95%酒精使蛋白变性凝固作为基质对分散的单个细胞进行包裹，胸膜腔积液等含蛋白较多的体液标本，初次离心后可留1ml上清液不必倾去，加入95%酒精可使蛋白析出，再次离心后形成自体蛋白基质；如细胞团小则同时加入蛋白甘油作为基质。尿液、脑脊液、细胞穿刺液等细胞量较少，应加入蛋白甘油作为基质，才能制作出较完整的细胞块。

为了使蛋白质充分变性形成蛋白基质网络细胞，在标本中加入95%酒精和蛋白甘油后，必须用吸管反复吹打混匀。

血性标本液，需在初次离心沉淀后，加入细胞清洁液，充分震荡后再次离心，去除红细胞后再按照上述方法制作细胞块。

3.2 技术缺陷

对于浆膜腔积液，特别是临床怀疑恶性肿瘤患者的浆膜腔积液，阳性检出率高，效果显著；但是对于尿液、脑脊液等细胞较少的体液标本，做出的细胞块有效成分较少，仅作为辅助运用；

部分细胞块进行免疫组化染色后发现背景较深，估计与自体蛋白有关，后续将进行相关工作的研究。

3.3 技术优势

细胞学病理检查，是通过有创或微创的方法，采集人体可疑病变部位的细胞及组织碎片，经病理细胞学技术员制片，病理医师显微镜下观察细胞形态，进行疾病诊断的病理学方法之一。与活体组织检查相比，具有创伤小、标本易获得、报告时限短等优点。但在诊断阳性率、准确性方面，与活体组织检查有一定差距，以及无法进行特殊染色、免疫组化、分子病理等进一步检测与诊断，限制了病理细胞学的发展。我科开展的蛋白甘油凝集法细胞块制作技术，将有可疑病变的细胞学标本制作成细胞块，固定、脱水、透明、浸蜡、包埋后，作出的蜡块具有能多次切片、易于长期保存，可进行特殊染色、免疫组化和分子病理诊断等优点，提高细胞学诊断的阳性率，是对细胞学诊断有力的补充和扩展。

对于文献报道的琼脂包埋法、固定沉淀法、血浆凝血酶沉淀法、鸡蛋清凝集法等[1-4]。琼脂包埋法较复杂，琼脂不易得且需要加热溶解，其对脱水影响也很大，现已很少使用；血浆凝固酶难以采购；固定沉淀法作出的细胞块易碎不坚固，对于细胞很少的体液难以成功，缩小的细胞块可用范围。经反复实验总结，95%酒精固定蛋白甘油凝集法成功率高适用于所有送检体液标本、且操作简单，稳定兴高，材料易得，成本低廉，得到的细胞块较坚实完整、脱水处理佳，HE染色红蓝对比分明、免疫组化染色结果清楚。

本科室从2013年至今用此方法制作了细胞块4000余例，免疫组化染色1300余例，证实该方法切实可行，可在各级医院病理科开展。