浙江沿海主要贝类中麻痹性贝类毒素研究

100
1
2.2
0
0
45
100
100
45
100
1
2.2
2
4.4
20 57.1
0
0
52.9
17 48.6
0
0
45
100
0
0
98.9
44 97.8
0
0
22 48.9
0
0
44.4
18 40.0
0
0
9
22.5
0
0
22.5
9
22.5
0
0
485
66.0
4
总超标率% 0 0 0 1.1 3.3 0 0 0 0
0.5
贝类腺体组织检测结果分析：全部贝类样品 PSP 毒素检出率为 77%，腺体中毒素广泛存 在，大多数样品腺体中都能检出 PSP 毒素。PSP 超标率明显高于全部组织，达到 13.2%，存 在于毛蚶（61.1%）、泥蚶（33.3%）、牡蛎（10%）、泥螺（6.7%）。
从时间角度上分析，4 月份样品中 PSP 检出率略高于 9 月份。其中，4 月份样品全部组 织中 PSP 检出率为 68.9%，9 月份检出率为 62.8%；4 月份样品腺体组织中 PSP 检出率为 81.6%， 9 月份检出率为 72.1%。
不同采集地区贝类毒素水平不同，其中 PSP 毒素水平最高的样品（315 µg/100g）出现在 舟山，是 PSP 限量标准（80 µg/100g）约 4 倍。其次是象山海域 PSP（202 µg/100g）毒素水 平最高样品约是规定限量标准 2.5 倍。这表明在象山和舟山海域加强贝类毒素水平的监控。
Keyword: Zhejiang offshore, red tide, paralytic shellfish poison
1 引言 东海是我国赤引潮高发区，其中浙江沿海又是东海赤潮主要发生地。赤潮主要是由海水 过度营养化导致藻类过度繁殖引起。如果引起赤潮的藻类属于有毒藻类，就会引起藻类毒素 水平增高。并且通过食物链的传递作用被贝类、鱼类摄食后累积在其体内。当消费者摄食这 些受到藻类毒素的海产品时就会发生中毒，严重的会出现死亡。常见海洋藻毒素包括麻痹性 贝类毒素（PSP）、腹泻性贝类毒素（DSP）、神经性贝毒素（NSP）、记忆缺失性贝毒素（ASP）、 西加鱼毒素（CFP），其中麻痹性贝毒的分布范围最广，毒性强，甚至会导致人们死亡而最受
Abstract: Nine types of shellfishes were collected from nine district of Zhejiang offshore area. Enzyme-linked immunobosorbent assay were used to determine the level of paralytic shellfish toxin in shellfishes. The results showed that the PSP level of shellfishes were very low in Zhejiang offshore area. And the detection rate of toxin were as high as 66%, while the samples exceeding the limit level only accounted for 0.5 %. The result also indicated that the detection rate in April was higher than in September，most of PSP accumulated in the digestive glands of shellfish. The study suggested that the toxic algal existed in Zhejiang ocean areas and didn’t yet bloomed, which needs to be specially monitored.
Study on paralytic shellfish toxin level of major shellfishes in
Zhejiang offshore area
Long Zaihao, Chen Xiaoqing, Ma Zhongchun (Ningbo Academy of Inspection and Quarantine, Ningbo, Zhejiang, 315012)
类别 月份 总量
花蛤 4
45
9 45
4 45 白蛤
9 45
泥螺 4
35
9 10
泥蚶 4
45
9 45
毛蚶 4
45
9 45
厚壳 4 35
表 2 浙江沿海贝类腺体组织中麻痹性贝类毒素水平比较
检出量
检出率%
总检出 率%
超标数
超标率%
41
91.1
0
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
0
82.2
33
73.3
0
0
24
53.3
0
0
42.2
14
31.1
9 45
27
海瓜 4 40
16
子 9 40
14
合计
735 566
65.7 100.0 100.0
0 5 100 4
68.9
0
64.4
60.0
0
40.0
0
37.5
35.0
0
77.0
97
0 11.1
10.0 8.9 0
0 0. 0
0 0
13.2
地点
慈溪 宁海 象山 舟山 三门 温岭 玉环 乐清 苍南
样本量
浙江省主要贝类产品全部组织和腺体中 PSP 毒素检出和超标情况分别见表 1 和表 2。对 贝类全部组织检测结果分析：全部贝类样品 PSP 毒素检出率为 66%，其中毛蚶、泥蚶、泥螺 和牡蛎的 PSP 毒素检出率都接近或达到了 100%。但 PSP 超标率为 0.5%，水平较低，并且只 有毛蚶和泥蚶样品检测结果存在超标情况，超标率分别为 3.3%和 1.1%。
根据本次调查结果表明浙江海域贝类多数都检测出麻痹性贝类毒素，全部组织中 PSP 检出率高达 66%，腺体组织检出率更高达 77%，这说明浙江海域存在可能产生 PSP 毒素的藻 类，因此需要加强关注。但是调查结果也表明贝类中 PSP 毒素水平较低，最高只有 315 µg/100g，而且超出限量标准的样本较少，超标率仅为 0.5%（全部组织）。研究说明浙江沿 海并没有出现塔马亚历山大藻和链状亚历山大藻引发的赤潮。泥蚶、毛蚶、牡蛎中 PSP 毒素 检出率接近或达到了 100%，也同时说明要对这几种类别的贝类加强监管。
35
50.0
0
0
49
70.0
48
64.0
0
0
61
81.3
43
50.6
0
0
58
68.2
42
49.4
0
0
55
64.7
腺体
超标量
10 19 21 15 5 5 11 9 2
参考文献
[1] 胡益峰，郭朋军. 2001 年以来舟山海域赤潮及麻痹性贝毒发生情况的研究. 海洋环
略率高于 9 月份；贝类中的毒素主要累积在贝类腺体组织中；泥蚶、毛蚶、牡蛎中麻痹性毒
素水平及检出率高于其它贝类，要加强关注。
月总 类别
份量
4 45 花蛤
9 45
4 45 白蛤
9 45
4 35 泥螺
9 10
4 45 泥蚶
9 45
4 45 毛蚶
9 45
厚壳 4 35 贻贝 9 35
4 45 牡蛎
9 45
本次采样四月份 PSP 毒素检出率高于九月份，很可能与浙江沿海赤潮发生规律有关。一 般浙江在四、五月份进入赤潮高发期，七月份逐渐消失。同时腺体组织中 PSP 毒素水平显著 高于全部组织中 PSP 毒素水平，这也与目前的研究结果一致。
小结： 本次调查显示，浙江沿海地区的贝类中麻痹性贝毒水平处于安全范围；4 月份毒素检出
到关注，是全球各国水产养殖业重点监测对象。本研究主要对赤潮高发区浙江沿海进行贝类 样品采集，用酶联免疫吸附方法（ELISA）调查该地区贝类中麻痹性贝毒水平，为浙江沿海 麻痹性贝类毒素的监测和食品安全提供理论依据。
2 材料与方法 2.1 样品采集 分别于 2009 年 9 月和 2010 年 4 月，分两次在浙江沿海 9 个地区（慈溪、宁海、象山、 舟山、三门、温岭、玉环、乐清、苍南）水产市场等采集了毛蚶、泥蚶、泥螺、牡蛎、厚壳 贻贝、海瓜子、花蛤、白蛤、缢蛏共 9 个种类。每个地区的样品采集量为 5 份，每份 1000kg。 采集过程中样品用冰块保存，采集后的样品如不能立即检测放入-20℃冷冻。 2.2 主要试剂与仪器 麻痹性贝类毒素酶联免疫定量检测试剂盒（RIDASCREEN ®FAST PSP SC）；0.1 mol/L 盐酸 溶液；酶标仪（Spectramax M5，MD） 2.3 样品制备 全部组织制备：用清水将贝壳洗净后，打开贝壳，分离整个组织，沥干水分/滤纸吸干， 然后用匀浆机将整个组织匀浆。 腺体组织：用清水将贝克洗净后，打开贝壳，分离消化腺，沥干水分/滤纸吸干，然后 用组织匀浆机将腺体组织匀浆。 2.4 ELISA 检测 2.4.1 毒素提取：取 10g 均质组织，加入 10 ml 0.1mol/L HCL，煮沸 5min，同时搅拌；离 心（10min/3500g/4℃）；离心后控制 pH 值不能超过 4，用 5M HCL 调节；最后取 100μl 的上 清夜，用缓冲液稀释至 1ml（1：10 稀释）。在酶标板中每孔加入 50μl 液体。 2.4.2 检测过程：将检测微孔条插入微孔架；向每个微孔内加入 50μl 标准品或样品；接 着每个微孔内加入 50μl 稀释的酶标记物液；然后向每个微孔内再加入 50μl PSP 抗体，人工 轻轻混匀，在室温（20~25℃）孵育 15min；孵育结束后，将酶标板中液体倒出，将微孔架 倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体。用 8 通道移液器取 250μl 去离子水，加入 微孔板上，冲洗几次，然后再次倒出孔中液体，完全除去孔中的液体。重复操作 2 次；向微 孔中加入 100 μl 显色液，人工轻轻振荡，在室温下孵育 15min；最后向微孔中加入 10 μl 终 止液，轻微混匀，在加入终止液 10min 内测量 450nm 处吸光度。 2.4.3 结果计算：按照 PSP 检测试剂盒的说明用软件计算结果。 3 结果与分析