植物组织培养设备及条件.

准备室
缓冲室
无菌室
无菌室
培 养 室
培养架
培养间
二、仪器设备
1）、基本仪器设备 冰箱、电（磁）炉、酸度计、纯水器、天平、 移液器、解剖镜、光照培养箱、摇床、生化培养箱、 培养基分装器、搅拌器等。
电炉
酸度计 冰箱
天 平
纯 水 器
搅拌器
培养基分装器
体式显微镜
倒置显微镜 冷光源
电磁搅拌器
1.055 1.125 1.266 1.406 1.543 1.681
（3）塑料器皿灭菌： 多采用高压蒸汽消毒灭菌
（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌 浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷 却后使用
（5）接种室灭菌
接种室 紫外灯 照射 空气消 毒灭菌
超净工 作台
紫外灯 照射 70%—75% 的酒精擦洗 培养材料 的接种
（6）外植体灭菌
流水冲洗10—20min 或更长时间 70%—75% 酒精中浸泡 30s
0.1%—0.2%氯化汞 液中浸泡10min左右 在10%的次氯酸钠、 饱和漂白粉浸泡 30min左右
蒸馏水冲洗 4—5次
备用
常用消毒剂消毒灭菌比较表
消毒剂 次氯酸钙 次氯酸钠 漂白粉 溴水 过氧化氢 升汞 酒精 抗生素 硝酸银 使用浓度 （%） 9~10 2 饱和溶液 1~2 10~12 0.1~1 70~75 4~5（mg/L 1 去除难易 易 易 易 易 最易 较难 易 中 较难 消毒时间 （min） 5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 0.2~2 30~60 百度文库~30 效果 很好 很好 很好 很好 好 最好 好 较好 好
（7）接种准备 消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接 种室。 打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯， 照射40min左右，后关闭。 开启过滤风机，使无菌风吹拂工作台面和 四周的台壁。 用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。
六、无菌操作
实验员消毒 实验室、无 菌台灭菌
实验器材 的灭菌
四、洗涤技术
1、玻璃器皿洗涤
已用过的玻 璃器皿
1%稀HCl
浸渍12h
新购置玻璃 器皿
洗衣粉洗 涤
清水 冲洗
晾干 备用
2、塑料用品洗涤
新的塑料器皿打开即用 已用过的塑 料器皿
2%NaOH浸泡 12h
清水冲 洗
蒸馏水冲 洗
清水 冲洗
2%—5%盐酸 浸泡30min
晾干备用
3、金属用品洗涤
热洗衣粉水 洗净
饱和蒸汽压力 温度（℃） kg/cm2 0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984 1b/m2 0 2 4 6 8 10 12 14 100 103.6 106.9 109.8 112.6 115.2 117.6 119.9 kg/cm2 1b/m2 15 16 18 20 22 24 30 50 121.0 122.0 124.1 126.0 127.8 129.6 134.5 147.6 饱和蒸汽压力 温度（℃）
无菌接种箱
4、细胞培养设备
摇 床
培养架
150C 250D
HZC-250
恒 温 振 荡 培 养 箱
光 照 培 养 箱
烘箱
光照培养箱
5、细胞学鉴定设备
光学显微镜、体视 显微镜、倒置显微镜 倒置显微镜
光 学 显 微 镜
电子天平 （0.0001g， 0.001g）
酸度计
三、培养器皿及实验用具
基本实验室 实验室 组成 辅助实验室 无菌操作室 培养室 细胞生物学实验室
温
室
生化分析实验室
搁 水槽
架
冰箱
搁
无菌台
搁 4.0m 架 实 验 台 药 品 及 无菌台 仪 器 无菌室 柜 缓冲室
拉 窗 架
培养架
培养架
培养室 培 养 架 培 养 架
电 炉 门
准备室
4.5m
3.0m
3.5m
组织培养准备实验室
无菌接种
实验台 卫生 消 毒 培养室 培养
小 结
植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的，要做到无菌的条 件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、 光照、湿度等培养条件。 准备室：器具的洗涤、干燥、保存、灭菌，各种药品的储备、 称量、溶解、配制、培养基分装等，设备：药品柜、防尘厨、冰 箱、天平、纯水仪、酸度计、操作台、灭菌锅、烘箱。 实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。 化学室/准备室、接种室、培养室。
1、玻璃器皿
三角瓶 培养皿 培养瓶
2、金属材质用具
接种针
镊子 解剖刀
（二）各类器皿 1．器皿的类型 （1）培养器皿 三角瓶、培养瓶、圆形培养瓶、试管、 L形管和T形管 （2）分注器 （3）刻度移液管 （4）微量移液器 （5）细菌过滤器
（三）器械用具 打孔器 镊子 解剖刀 接种针 剪刀 电热灭菌器
第二章 实验室设计和培养条件
第一节 实验室设计及基本技术 第二节 植物组织培养所要求的环境条件
第一节 实验室设计及基本技术
一、实验室组成
二、仪器设备
三、培养器皿及实验用具
四、洗涤技术
五、灭菌技术 六、无菌操作
一、实验室组成
组织培养实验室布局的总体要求
便于隔离 便于操作
便于灭菌
便于观察
准备室
缓冲室
接种室：植物材料的消毒、接种、培养物转移、试管苗继代、 原生质体制备及其它需要进行的无菌操作。设备：紫外光源、超 净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（镊子、剪刀、解剖刀、 接种针）。清洁和消毒，减少与外界空气对流，穿实验服及换鞋 以减少带入杂菌。 培养室：墙壁要求绝热防火的性能，培养架由金属制成，底 层离地高约10cm，层间隔40cm，总高1.7m左右，长度根据日光灯 的长度而设计，宽度为60cm。
冲洗
擦干
五、灭菌技术
1、灭菌方法
物理方法： 干热、湿热、射线处理、过滤除菌等 化学方法： 消毒剂、抗菌素灭菌
2、灭菌
（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在0.1M—0.2MPa 温度在121℃ 灭菌10—30min （2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌
饱和蒸汽压力与其对应的温度
摇床
摇 床
2）、灭菌设备
蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭
菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
蒸汽压力灭菌锅
高 压 灭 菌 器
干热消毒柜
75%酒精喷雾器
喷雾消毒器
3）、无菌操作设备
超 净 工 作 台
二、设备、仪器
（一）设备
超 净 工 作 台
1.紫外线灭菌灯 2.日光灯 3.工作台 4.凳子 5.搁物架 6.窗 7.推拉门 8.缓冲间