生物科技行业表面微生物检测方法

生物科技行业表面微生物检测方

法

空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准

1、目的：

检测生产车间空气、操作人员手部、和食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。

2、参照标准：

中华人民共和国国家标准《壹次性使用卫生用品卫生标准》GB15979

－

1995、《HACCP 原理和实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生

物检验方法细菌总数测定》GB/T18204.1－2000、中华人民共和国进ft口商

品检验行业标准 SN0169-92/SN0172-92/SN0170-92、ft入境检验检疫局

二

000 四年《ft入食品微生物检验培训教材》中《ft入食品生产厂卫生细菌

检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。

3、采样和检测方法：

3.1空气的采样和测试方法

3.1.1样品采集：

(1)取样频率：

a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫

生清扫消毒情况。

b)全厂统壹放长假后，车间生产前，进行采样。

c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，

整改后再进行采样检验。

d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。

（2）采样方法

在动态下进行，室内面积不超过 30m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙 1m；室内面积超过 30m2，设东、西、南、北、中五点，周围 4 点距墙 1m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径 9cm)

置采样点(约桌面高度)，且避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，

使平板在空气中暴露 5min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，

送检时间不得超过 6h，若样品保存于 0～4℃条件时，送检时间不得

超过

24h。

3.1.2菌落培养：

（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养 24h，

取ft检查有无污染，将污染培养基剔除。

（2）将已采集样品的培养基在 6h 内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培

养

48h 观察结果，计数平板上细菌菌落数。

（3）菌落计算：

a)记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记

或在菌落计数器上点计，然后用 5～10 倍放大镜检查，不可遗漏。

b)若培养皿上有 2 个或2 个之上的菌落重叠，可分辨时仍以 2 个或2 个

之上菌落计数。

3.2工作台（机械器具）表面和工人手表面采样和测试方法：

3.2.1样品采集：

(1)取样频率：

a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车

间卫生清扫消毒情况。

b)全厂统壹放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。

c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验

不合格点，整改后再进行擦拭检验。

d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。

e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。

（2）采样方法：

a)工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取

和食品直接接触或有壹定影响的表面）取25cm2 的面积，在其内涂抹 10

次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含 10mL 灭菌生理盐水的采样

管内送检。

b)工人手：被检人五指且拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖

到指端来回涂擦 10 次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含 10mL

灭菌生理盐水的采样管内送检。

（3）采样注意事项：

擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间

3.2.2细菌·大肠菌群的检测培养:

样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。此液为 1：10 稀释液。如污染严重，可十倍递增稀释，吸取 1ml1：10 样液加 9ml 无菌生理盐水中，

混匀，此液为 1：100 稀释液。

3.2.2.1细菌总数：

（1）以无菌操作，选择 1～2 个稀释度各取 1ml 样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做俩个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数

琼脂培养基倾入平皿，每皿约 15ml，充分混合。

（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养 48h 后计数。

（3）结果报告：报告每 25cm2 食品接触面中或每只手的菌落数

3.2.2.2大肠菌群：

（1）平板法:

a)以无菌操作，选择 1～2 个稀释度各取 1ml 样液分别注入到无菌平皿内，

每个稀释度做俩个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的去氧胆酸

盐琼脂培养基倾入平皿，每皿约 15ml，充分混合。待琼脂凝固后,再

覆盖壹层培养基，约 3-5ml。

b)待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养 24h 后计数。

c)结果计算：以平板上ft现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得ft。

d)结果报告：报告每 25cm2 食品接触面中或每只手的菌落数

（2）试管法:

a)以无菌操作，选择 3 个稀释度各取 1ml 样液分别接种到 BGLB 肉汤培养

基中，每个稀释度接种三管。

b)置 BGLB 肉汤管于36℃±1℃培养48±2h。记录所有 BGLB 肉汤管的产气

管数。

c)结果报告：按 BGLB 肉汤管产气管数，查 MPN 表报告每 25cm2 食品接触面

中或每只手的大肠菌群值。

3.2.3金黄色葡萄球菌检测

（1）定性检测

a)取 1ml 稀释液注入灭菌的平皿内，倾注 15-20ml 的 B-P 培养基，（或是

吸取 0.1 稀释液，用 L 棒涂布于表面干燥的 B-P 琼脂平板），放进

36±1℃的恒温箱内培养48±2小时。

b)从每个平板上至少挑取 1 个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶

实验。

c)结果报告：B-P 琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性，即报告手

（工器具）上有金黄色葡萄球菌存在。

（2）定量检测

a)以无菌操作，选择 3 个稀释度各取 1ml 样液分别接种到含 10﹪氯化钠胰

蛋白胨大豆肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。

b)置肉汤管于36±1℃的恒温箱内培养 48 小时。划线接种于表面干燥的 B-P

琼脂平板，置36℃±1℃培养 45～48 小时。

c)从B-P 琼脂平板上，挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基，

36℃±1℃培养 20～24 小时。

d)取肉汤培养物做血浆凝固酶试验，记录试验结果。

e)报告结果：根据凝固酶试验结果，查 MPN 表报告每 25cm2 食品接触面中

或每只手的金黄色葡萄球菌值。

3.3工厂环境中病原体的检测计划和方法

检测计划：为了保证食品安全，工厂应该对生产环境中的病原微生物进