高效液相色谱培训 HPLC使用与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种高效分离和分析样品成分的仪器，广泛应用于医药、化工、环境监测、食品等领域。
在使用HPLC 的过程中，保养和维护工作非常关键。
良好的保养和维护能够延长设备寿命，保证分析结果的准确性和可靠性。
本文将就HPLC的保养和维护进行较全面的探讨，以期为相关使用者提供帮助和指导。
一、日常保养1. 清洗：定期对HPLC进行清洗是保持设备正常工作的关键。
清洗前，首先应关闭色谱柱开关，拔掉电源，然后用无水乙醇清洗柱及管路，最后用纯水冲洗干净。
在一些需要不断更新样品溶剂的实验中，还需要对溶剂瓶、进样器等部件进行定期清洗。
2. 检查密封性：检查HPLC各接口的密封性，确保各部件之间无漏气、不漏液，避免因为漏气或漏液造成分析数据的误差。
3. 检查压力：在使用HPLC过程中，经常检查色谱柱前后的压力表读数，确保在正常范围内。
如果发现异常，应及时排查原因并进行处理。
4. 校准：定期对HPLC进行校准，保证设备和检测器的准确性。
可以借助标准物质进行定期的校准维护。
5. 检查溶剂余量：定期检查溶剂瓶的余量，确保实验过程中不会因为溶剂用尽而中断。
6. 检查灯管：若HPLC设备配备有紫外-可见检测器，需要定期检查和清洗灯管，以保证检测器的灵敏度和准确度。
二、周期性维护1. 良好的使用环境：保持HPLC设备使用环境的干净整洁，避免灰尘、化学气体等对设备造成影响。
需要注意设备周围的温度和湿度，避免影响设备的正常工作。
2. 正确存放标准溶液：在使用标准溶液时，要注意存放条件，避免因为存放不当导致标准溶液的失效。
3. 定期更换消耗品：HPLC设备的使用需要大量耗材，比如柱、进样器、检测器灯管等，这些耗材的使用寿命有限，需要定期更换，以保证设备的正常工作。
4. 记录维护情况：建立设备的维护记录，记录设备的使用情况、维护情况以及出现的问题及处理情况，为设备的维护提供参考。
hplc高效液相色谱仪工作原理操作、维护要点的梳理总结
HPLC高效液相色谱仪工作原理操作、维护
要点的梳理总结
HPLC（高效液相色谱）是一种常见的分析仪器，用于分离、鉴定和定量分析化合物。
下面是HPLC高效液相色谱仪的工作原理、操作和维护要点的梳理总结：
工作原理：
1. 样品通过高压注射器注入进入液相色谱柱，柱内填充有固定相（如硅胶或离子交换树脂），流动相（溶剂）通过柱子，样品中的化合物在不同的固定相上有不同的分配系数，从而被分离出来。
2. 分离后的化合物通过检测器进行检测，检测器将化学信号转换为电信号，然后通过数据系统进行数据处理，得到化合物的保留时间、峰面积等信息。
操作要点：
1. 准备工作：检查仪器是否正常工作，准备好样品，选择合适的溶剂进行样品制备和提取。
2. 启动仪器：启动仪器，调节流速、温度等参数，使其达到预设值。
3. 注入样品：通过注射器注入样品，注意控制注入速度和量。
4. 运行分析：启动色谱柱和检测器，开始进行分析。
5. 数据处理：通过数据系统对分析结果进行数据处理，得到化合物的保留时间、峰面积等信息。
维护要点：
1. 定期清洁和维护仪器：定期清洁仪器，更换滤芯和柱子，保证仪器的正常工作。
2. 定期校准仪器：定期对仪器进行校准，保证分析结果的准确性。
3. 注意安全操作：在操作过程中应遵守安全规范，避免意外事故发生。
4. 储存样品：储存样品时应注意保存条件，避免样品变质或污染。
总之，HPLC高效液相色谱仪的工作原理、操作和维护要点都需要认真掌握，才能保证分析结果的准确性和仪器的正常工作。
高效液相色谱仪的操作与维护指南
高效液相色谱仪的操作与维护指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。
为了保证仪器的正常运行和获得可靠的分析结果，正确的操作和科学的维护是非常重要的。
本指南将详细介绍高效液相色谱仪的操作和维护方法，以帮助用户正确使用该仪器。
一、高效液相色谱仪的操作方法1. 准备工作在操作前，需要先进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否处于稳定的工作环境中，以确保仪器不受外界干扰。
其次，检查所有的连接与密封件是否完好，确保流体不会泄漏。
最后，检查溶剂和样品的储存条件，保证其符合要求。
2. 开机与关闭正确的开机和关闭步骤可以延长仪器的寿命。
开机前，需要检查电源和其他外部连接。
按照仪器的说明书，按顺序打开电源和其他必要的开关。
关闭仪器时，应按照相反的顺序关闭开关，并断开电源。
3. 样品准备与进样在进行进样操作前，需要准备好样品和溶剂。
样品准备时，应遵循相应的样品制备方法，确保样品的准确性和稳定性。
进样时，应根据实验需求设置适当的进样方式，并注意定量准确。
4. 仪器参数设置在进行分析之前，需要设置仪器的参数，以调整流速、温度、检测波长等参数。
仪器的参数设置应根据实验目的和样品特性进行优化调整，确保获得准确的分析结果。
5. 分析运行与数据处理设置好仪器参数后，可以开始进行分析运行。
根据实验要求和样品特性，选择合适的分析方法和梯度程序。
在分析过程中，应定期检查仪器运行状态，注意观察流速、峰面积、保留时间等数据，并记录相关结果。
6. 仪器清洗与维护分析结束后，必须对仪器进行清洗和维护。
首先，关闭流体通道，清除流体残留物和样品残留物。
然后，根据仪器说明书的要求，进行仪器的常规清洗和维护工作。
定期检查和更换液相柱、检测器等易损件，以保证仪器的正常运行。
二、高效液相色谱仪的维护方法1. 液相柱维护液相柱作为HPLC分离的重要组件，需要定期维护和保养。
高效液相色谱仪安全操作及保养规程
高效液相色谱仪安全操作及保养规程前言高效液相色谱仪（HPLC）是一种用于化学分析和检测的重要工具。
为了确保高效液相色谱仪的安全运行和最佳性能，需要遵守一系列的安全操作和保养规程。
本文档提供了详细的操作和保养步骤，以协助用户正确地使用和保护高效液相色谱仪。
安全操作规程操作前1.确保操作人员已经接受了高效液相色谱仪的操作培训并掌握了正确的操作方法。
2.在操作前检查仪器的电源是否正常，仪器的机械结构是否稳定，是否有明显损坏或松动的部件。
3.确保试剂和溶剂的选择和准备符合分析要求，并遵守相关安全规程，如使用防护手套和护目镜。
4.加载样品前必须确定样品的性质和浓度，并根据需要适当稀释和过滤。
操作时1.操作人员应当始终注意安全。
在操作过程中避免直接接触样品和溶剂，避免口误和吞咽样品或溶剂。
2.操作过程中，若发现异常状况，如机器停滞或跑偏、压力急剧增高等，应立即停止操作并检查仪器或相关部件。
3.调整某些参数时，如流速、温度、压力等，应尽量保持小幅度调整，避免快速快速调整。
4.操作结束后，必须关闭仪器并注销相关操作，清理工作区域和操作台面，清洗使用的管道、器皿和附件，并将物品归位。
操作恢复1.若长时间未使用高效液相色谱仪，请在使用前仔细检查机器各部位是否存在异常。
2.重新启动仪器时，请按照操作手册上的步骤重新进行仪器的初始化和调试。
废物处理高效液相色谱仪所使用的溶剂和其他化学废物，必须按照当地的环保规定进行处理和处置。
在处理前应该咨询相关专业人员。
保养规程日常检查和保养1.每天开始操作前，检查仪器的所有零部件是否齐全，零部件是否完整，清洁状态如何。
2.操作后，每天对样品室、管路等部位进行清洁，确保无污物堆积和管路没有堵塞现象。
3.每周对色谱柱进行洗涤和清洁，可以使用去离子水和乙醇为主要清洗溶剂，以确保柱子的性能和使用寿命。
4.定期对机械结构和电子部件进行检查和保养，保证设备运行的稳定性。
液路检查和保养1.定期检查操作中常温箱的工作状态和温度。
保养维护高效液相色谱仪的要点
保养维护高效液相色谱仪的要点高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种常用的分离和定量分析仪器。
为了保证其正常运行和延长使用寿命，需要进行定期的保养和维护。
下面是保养维护高效液相色谱仪的主要要点：1.保持色谱仪周围环境清洁干燥：色谱仪应该放置在无尘、无水、无振动、无干扰的环境下。
养成定期清理仪器外壳和工作台面的习惯，防止灰尘和异物进入仪器内部。
2.定期检查和更换耗材：液相色谱柱是色谱仪的核心部件，需要定期检查柱子的状况，包括柱液的流量、背压、峰形等参数。
当出现异常时，需要及时检查和更换柱子。
此外，溶剂瓶、垫片、接头和密封件等耗材也需要定期检查和更换。
3.保持良好的进样系统：进样系统是色谱仪样品进入柱子的关键部件。
需要注意致样器、进样针和进样管的清洁和灵敏度。
定期检查进样系统的各个部件，保证样品进入柱子的准确性和稳定性。
4.注意溶剂和流速的选择：溶剂和流速的选择对色谱分离的质量和分析结果有很大的影响。
应该选择优质的溶剂，在使用过程中定期更换，并注意保持合理的流速。
在使用有机溶剂时，要避免过高浓度的有机溶剂对仪器造成损害。
5.定期校准和质控：定期校准色谱仪可以保证分析结果的准确性和可靠性。
常见的校准包括柱液流量校准、波长和检测灵敏度的校准等。
此外，在样品分析过程中应该加入合适的质控标准品，并定期检查质控品的回收率和重复性。
6.注意样品的准备和处理：样品的准备和处理对HPLC分析结果有直接影响。
样品准备过程中应注意去除杂质和颗粒，避免对色谱柱和检测器造成污染或损坏。
对有机样品，要避免过高浓度的有机溶剂对进样系统造成损害。
7.定期维护仪器：除了日常保养，还应定期对仪器进行维护和检修。
定期检查和更换仪器中的各种装置、阀门、泵、检测器等关键部件。
根据仪器厂家的推荐，进行润滑和清洗等维护工作，保持仪器的正常运行。
8.进行严格的记录和文档管理：在使用和维护过程中应该做好记录和文档管理。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项高效液相色谱仪（HPLC）是一种常见的分析仪器，用于分离、检测和定量化合物。
在使用和维护HPLC时，需要注意以下几点：1. 样品处理在样品处理过程中，必须避免样品受到污染，否则会影响分析的准确性。
因此，在样品的制备和处理过程中应该使用高质量的试剂和纯水，并避免使用有机溶剂和其他可能对分析产生干扰的物质。
2. 色谱柱选择选择合适的色谱柱是非常重要的，因为不同的色谱柱会对分析结果产生影响。
在选择色谱柱时，应该考虑要分析的样品和分离的目标化合物，以及柱的反相、离子交换、凝胶过滤等不同类型。
3. 溶液配制HPLC中的溶液应该严格按照配方进行配制，以确保分析结果的准确性。
溶液中可能存在的离子、杂质或气泡都会对流速、峰形和灵敏度产生影响。
4. 色谱条件在进行分析时，需要根据样品和柱的特性，选择适当的流速、洗脱剂和温度等条件。
这些条件对分析结果的准确性和分离效率都有很大的影响。
5. 维护和保养为了保证仪器的长期稳定和良好工作状态，需要定期进行维护和保养。
维护包括冷却系统、压力检测、检测器等组件的检查和清洗。
保养包括柱的定期调整和更换、溶液的更换等。
在使用和维护HPLC时，需要严格按照实验室规程操作，注意安全和环保，并做好记录和统计分析工作。
只有保证仪器操作正确、保养到位，才能获得准确、可重复的分析结果。
6. 检测器选择HPLC检测器的选择对分析结果的准确性和可重复性起着至关重要的作用。
常用的检测器包括紫外线（UV）检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
根据需要分析的化合物的性质进行选择。
7. 校正和标定在使用HPLC进行分析之前，必须进行校正和标定，以确保分析结果的准确性。
校正过程中通常涉及标准曲线的制备、内标物的选择和添加等。
8. 数据照实记录HPLC分析结果的准确性需要依赖于实验数据的准确记录。
在使用过程中应保持谨慎和可重复性，制定实验方案，不断记录实验数据，并评估结果的准确性。
超高效液相色谱安全操作及保养规程
超高效液相色谱安全操作及保养规程超高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、分析化学组分或化合物的重要技术之一。
HPLC技术已广泛应用于各种化学、生物化学、食品、医药、环保等领域。
然而，由于其操作难度大、操作步骤多等特点，HPLC的安全操作和保养工作显得尤为重要。
本文将详细介绍超高效液相色谱安全操作及保养规程，以确保实验人员在操作过程中的安全，并保障设备的正常运行。
安全操作规程1.准备工作在操作前，应认真查看设备的相关操作手册，以熟知设备的基本工作原理、技术参数、管路系统和防护装置等。
另外，操作人员需要穿戴相应的安全防护装备，如实验室常用的实验服、手套、口罩、护目镜等等。
2.试剂、溶液处理试剂、溶液处理也是HPLC操作过程中十分重要的环节，正确处理可有效提高实验结果的精确性。
在此，我们简述一下关于试剂、溶液处理的相关注意事项：•所有的试剂和溶液必须符合相关的国家标准，并应在存储前严格检验其纯度和质量。
•对于不同的试剂和溶液，应在相应的安全操作区进行，保证不同试剂之间不会相互交叉污染。
•试剂、溶液处理时，应使用审查手册所提供的相应的实验方法。
•禁止将试剂或溶液直接倾倒到下水道或其他不安全的区域中，必须遵循正确的环保处理流程。
3.技术操作HPLC操作过程中，技术操作是至关重要的一步，对于实验结果的影响也最大。
因此，在技术操作环节中，操作人员必须掌握与之相关的啤酒定律、浓度计算法、pH值等结合结果、结合实验要求进行操作。
在操作过程中，操作人员必须做到以下几点：•严格按照操作规程操作，确保操作流程的正确性。
•在使用试剂和溶液时，注意超标会对实验结果产生显著影响。
•禁止随意调节设备参数，以免对实验产生影响。
•在技术操作过程中，操作人员必须严格按照标准时间、标准方法进行操作，确保数据精确度。
4.废料处理操作人员在完成实验后，应及时对废液进行处理，防止废液对环境造成污染。
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于医药、化工、环境监测等领域。
为了确保HPLC仪器的正常运行和分析结果的准确性，保养和维护工作是至关重要的。
下面将从各个方面浅谈HPLC仪器的保养与维护。
一、日常清洁HPLC仪器在长时间使用后，会有一些污垢积聚在各个部件上，为了保证正常运行，需要经常进行仪器的清洁工作。
需要对仪器外壳进行清洁，可用棉布蘸取少量的乙醇进行擦拭，注意不要使用含有颗粒的清洁剂，以免划伤表面。
对移液器、注射器等部件进行清洁，可以用纯水或乙醇进行清洗，并用吹气枪将部件表面的水分吹干。
需对进样针、柱和检测器进行清洁，确保各个部件的表面保持干净。
二、流路清洗HPLC仪器的流路是非常关键的部件，需要经常进行清洗以保证分析结果的准确性。
需要使用纯水对流路进行冲洗，然后使用一定比例的甲醇和水混合液进行清洗，最后再用纯水进行冲洗，以确保流路内没有残留的有机溶剂。
还需要注意定期更换流路上的过滤膜和密封圈，确保流路畅通，避免堵塞和泄漏的情况发生。
三、柱的保养HPLC柱是色谱分析的核心部件，需要经常进行保养和维护以确保分析结果的准确性。
需要在柱使用前对其进行条件耐用性测试，以确定柱的性能是否符合要求。
在使用过程中，要注意避免超压和超温，避免对柱产生损害。
需要及时更换柱前的过滤器，避免杂质进入柱内影响分析结果。
需要注意柱的存放条件，避免受到光照和高温的影响，导致柱的性能降低。
四、检测器的调试HPLC仪器的检测器对分析结果的准确性有着重要影响，需要定期进行调试和校准工作。
需要对检测器进行零点漂移的校准，以确保检测器读数的准确性。
需要对检测器的灵敏度进行调节，以确保检测器对样品的响应能力。
需要注意避免检测器的震动和碰撞，避免损坏检测器内部的光学组件。
五、维护记录对HPLC仪器进行日常保养和维护工作时，需要及时记录下关键数据和操作情况，以便日后进行分析和查找问题。
高效液相色谱仪器的维护与保养—HPLC的维护
图77—04—01 手动进样器的清洗示意图 1-阀清洗接头2—注射器3—进样口
一、气相色谱仪的维护保养
2．经常使用湿润的软布擦拭进样器，特别是进样口周围。 3．若观察到进样后从进样口或排空管有液体冒出、长期压力不稳定、峰面积不稳定、 保留时间不稳定和残留严重等现象，表明手动进样器的密封圈泄漏，应进行更换。
04
色谱柱的日常维护和保养
四、色谱柱的日常维护和保养
色谱柱不能碰撞、强烈震动和弯曲；连接上色谱系统前，管路和阀件一定要清洗干净；流动 相和样液要进行处理；每天分析工作完成后要用适当的溶剂冲洗柱子。 当色谱柱长时间不使用时，存放前，应在其柱内充满溶剂，两端封死。反相色谱柱一般使
用乙腈或甲醇保存，正相色谱柱应使用有机相保存。注意一定不能用水保存，因为水易长 菌，污染色谱柱。 可在色谱柱前添加预柱，起到保护色谱柱的作用。
《色谱分析及操作》
高效液相色谱仪的维护与保养
CONTENT
01 手动进样器的日常维护和保养 02 贮液器的日常维护和保养 03 泵的日常维护和保养 04 色谱柱的日常维护和保养 05 小结 06 思考题
学习目标 TARGET
完成了本单元的学习之后，能够了解 高效液相色谱仪的维护与保养知识。
01
02
贮液器的日常维护和保养
二、贮液器的日常维护和保养
1．流动相和样液 流动相和样液使用前必须过滤，否则溶剂和样品中细小的颗粒会堵塞色谱柱、堵塞和 磨损进样阀或磨损泵内的活塞和活塞杆。不能使用存放多日的蒸馏水，因为易长菌， 进入色谱系统后会造成污染。流动相在使用前应进行脱气处理，避免增加基线的噪音， 导致灵敏度下降。
03
泵的日常维护和保养
三、泵的日常维护和保养
定期检查排液阀的滤芯。检查方法为拧开排液阀，以水作 流动相，流速控制在5mL/min，若压力大于10bar，则须立 即更换（如图77—04—02）。操作方法是用工具拧下排液 阀，用镊子将脏的滤芯夹出，换上新滤芯，复原，即可。
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于化学、生物和环境领域的分析仪器。
它具有分离效果好、分析速度快、分析精度高等优点，因此在实验室中被广泛使用。
为了保证HPLC仪器长期稳定运行，保养和维护工作显得尤为重要。
本文将就HPLC的保养和维护进行浅谈，希望能够帮助大家更好地使用和维护HPLC仪器。
一、常规保养1.仪器清洁HPLC仪器在使用过程中会产生一些杂质和废液，这些杂质和废液会堵塞管道、阀门等部件，降低仪器的分析性能，因此定期清洁HPLC仪器显得尤为重要。
清洁主要包括仪器表面的擦拭、管道和阀门的冲洗等。
在清洁过程中需要使用一些特定的清洁剂，同时要注意清洁过程中的安全和操作规范。
2.零部件更换HPLC仪器中的零部件会因为长期使用而产生磨损，定期更换这些零部件是HPLC保养的重要内容之一。
需要注意的是，更换零部件需要使用与仪器相适应的零部件，并且更换过程中需要按照操作手册进行操作，以防止更换错误导致仪器故障。
3.系统校准HPLC仪器的系统校准是保证仪器分析性能的一个重要环节。
系统校准包括进样量、流速、检测灵敏度等参数的校准，通过系统校准可以保证HPLC仪器的分析结果的准确性和可靠性。
二、特殊保养1.溶剂使用HPLC仪器在分析过程中需要使用各种溶剂，不同的溶剂对仪器的影响也是不同的。
因此在使用溶剂时需要选择与仪器相适应的溶剂，并且在使用过程中要注意溶剂的纯度和保存条件，以免溶剂的杂质和化学成分对仪器产生不良影响。
2.灵敏度和分辨率的保持HPLC仪器在长时间使用后，其灵敏度和分辨率会逐渐下降，因此需要定期对灵敏度和分辨率进行检测，并根据检测结果进行相应的调整和校准，以保证分析结果的准确性和可靠性。
三、维护注意事项1.操作规范使用HPLC仪器必须严格按照操作手册的要求进行操作，包括开机、进样、流速调节、检测参数设置等，任何操作都不能随意更改或操作。
华谱高效液相色谱仪安全操作及保养规程
华谱高效液相色谱仪安全操作及保养规程引言高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）技术是一种高效、快速、灵敏和准确的离子分离技术。
与其他分析化学方法相比，它具有灵敏度高、分离效果好、可靠性强的优点。
华谱高效液相色谱仪是一种高性能的液相色谱仪器，广泛应用于生命科学、药学、化学、环境监测等领域。
然而，在使用高效液相色谱仪时需要注意一些安全操作和保养规程，以确保实验的顺利进行并延长仪器的使用寿命。
本文旨在介绍华谱高效液相色谱仪的安全操作及保养规程。
仪器的基本结构华谱高效液相色谱仪主要包括进样器、泵系统、分离柱、检测器和数据处理系统五个部分。
进样器用于样品的加入，泵系统用于向色谱柱内加入流动相，分离柱用于分离样品中的化合物，检测器用于检测出样品中的目标分子，数据处理系统用于处理、分析检测结果。
安全操作规程实验前准备在进行任何实验之前，必须了解华谱高效液相色谱仪的基本结构、操作原理以及所需试剂和仪器的性能和使用方法。
在实验开始之前，需要完成以下准备工作：1.处理样品。
按照样品处理方法进行样品的预处理操作。
2.准备色谱柱。
安装好色谱柱及关联的装置，并确认柱位置是否正确。
3.准备流动相。
按照实验设计合理配置所需的流动相。
4.开启仪器。
按照操作手册的指示开机，并确保仪器正常。
实验中的操作1.进样操作。
进样时必须按照操作手册的指示进行操作，并注意不要强行移动进样器头部。
2.流动相操作。
在操作流动相时，要注意不要擅自停止泵的运转，以免对仪器造成损害，还要确保所选用的流动相性质合适。
3.检测器操作。
使用检测器时，要调试检测器的灵敏度，确保信号清晰、准确。
4.数据处理操作。
在数据处理时，要考虑到真实性、前处理、定量方法等。
要按照操作手册进行设置和操作。
实验后操作1.关机时，先关闭流量计和流量阀。
2.分离柱彻底冲洗，以便存放。
小柱可不彻底冲洗再封上管塞，大柱可用超纯水洗至中性或清水放置。
高效液相色谱系统安全操作及保养规程
高效液相色谱系统安全操作及保养规程高效液相色谱（HPLC）是一种用于化学分析的常用技术，涉及到高压、有机溶剂和其他化学试剂，因此，安全操作和保养需要特别注意。
本文将介绍一些关键的安全操作和保养规程。
安全操作环境安全确保HPLC系统被放置在安全、稳定的环境中，离火源和其他危险品足够远。
同时，加强通风条件，以确保操作环境的空气流通。
质量控制在开始使用HPLC之前，要检查实验室的质量控制记录，以确保所用的试剂和化学品的纯度达到了所需的标准。
同时，对于复杂的试剂，建议提前进行样品测试以确保其质量合格。
个人安全在操作HPLC时，应戴好手套、护目镜、实验室外套和其他个人防护装备。
这些防护装备可以帮助保护人们免受化学品的伤害，同时也可以物理上阻隔任何有害化学物质。
禁忌事项操作HPLC时，应该避免进食、喝水或在实验室环境中吸烟。
同时，禁止实验室环境内玩耍或就床。
这些都可能导致不必要的安全风险，同时对于实验和样品也可能造成严重的影响。
处理危险废物根据实验室的安全规程，处理所有的危险废弃物。
这些可能包括有机溶剂、化学活性试剂、标准溶液、实验中产生的废液等等。
确保将这些废物用正确的方式处理或存储，避免对环境和个人造成伤害。
保养规程常规清洁定期清洁HPLC系统的各个组件，注意清理流量计、泵头、管道、进样器等所有部件。
清洁的频率和方法需要根据实验室条件和使用方式而定，但需要注意通风和样品污染。
检查和维护泵头泵头是HPLC系统的重要组件，因此要定期检查它们是否正常工作，并进行必要的维护。
这些可能包括更换密封件、摩擦补偿、润滑等。
检查和维护检测器检测器是HPLC系统中另一个重要组件。
定期检查检测器的响应时间和灵敏度，并进行必要的维护。
一些常见问题包括背景信号、传感器清洁和光源稳定性以及系统调整和对准等等。
检查和更换管道和附件管道和附件是HPLC系统中不可或缺的组件，同时也是安全风险的来源。
定期检查管道和附件，确保它们可以与其他组件正确连接且没有裂纹或其它损坏。
液相色谱仪的使用与维护
液相色谱仪的使用与维护液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离、检测和定量分析化学物质。
下面我将从使用和维护两个方面来回答你的问题。
一、使用液相色谱仪：1. 样品准备，首先，需要准备好待测样品，并根据需要选择适当的溶剂进行溶解。
确保样品的浓度适中，以避免进样量过大或过小。
2. 仪器设置，根据分析要求，设置合适的流速、柱温和检测器参数。
确保流速适宜，以保证分离效果和分析速度；柱温的选择要考虑样品的性质和分离要求；检测器参数的设置要根据待测物的特性进行调整。
3. 进样与分离，将样品通过进样器引入色谱柱中，控制好进样量和进样速度。
根据样品的特性和分离要求，选择合适的色谱柱和流动相进行分离。
在分离过程中，注意监控色谱图的变化，以确保分离效果和峰形。
4. 数据分析与结果解释，根据检测器输出的信号，进行数据分析和结果解释。
可以使用色谱软件进行峰面积计算、峰识别和定量分析。
根据分析目的，对结果进行解释和评估。
二、维护液相色谱仪：1. 定期保养，按照仪器的操作手册，定期进行保养和维护工作。
包括清洁色谱柱、更换流动相和进样器的零件、检查和校准检测器等。
保持仪器的良好状态，以确保准确可靠的分析结果。
2. 储存条件，在使用完毕后，要储存好色谱柱和溶剂，避免受到湿气和光线的影响。
色谱柱应放置在干燥的环境中，避免柱内残留物的积累和柱效的降低。
3. 检测器维护，定期检查和校准检测器，确保其正常工作。
根据仪器要求，定期更换检测器的灯管、流动相流量计等关键零部件，以保证检测器的灵敏度和稳定性。
4. 质量控制，定期进行质量控制实验，检查仪器的性能和分析结果的准确性。
可以使用标准物质进行校准和验证，以确保仪器的准确性和可靠性。
总结起来，使用液相色谱仪需要准备样品、设置仪器参数、进行进样与分离、数据分析与结果解释。
维护液相色谱仪需要定期保养、储存、检测器维护和质量控制。
这些措施能够确保液相色谱仪的正常运行和准确分析。
高效液相色谱培训(HPLC使用与维护)
常见故障排除
流动相不流动
检查泵密封圈是否磨损或损坏， 管路是否堵塞，流动相是否足够。
峰形异常
检查进样器是否堵塞，色谱柱是否 受损或污染，检测器是否正常工作。
基线漂移
检查流动相是否纯净，检测器是否 正常工作，仪器是否处于良好状态。
仪器保养与校准
01
02
03
定期校准
按照厂商推荐的时间间隔 和校准方法，对HPLC进 行校准，以确保仪器性能 和测量精度。
详细描述
HPLC技术在化学领域中广泛应用于有机化合物、无机化合物的分离和测定。在生物领域，HPLC用于 蛋白质、核酸等生物大分子的分离和纯化。在医学领域，HPLC用于药物分析、临床检验、毒物分析 等方面，为医学研究和诊断提供重要的技术支持。
HPLC的优点与局限性
总结词
HPLC具有高分离效能、高灵敏度、高选 择性等优点，但也存在一些局限性，如 对样品的前处理要求高、对流动相的纯 度要求高等。
考察学员在遇到问题时能否迅速、准确地 判断并采取有效措施解决问题。
实践操作与考核经验分享
严格遵守操作规程
在实践操作过程中，务必遵循正确的操 作规程和安全规范，确保实验结果的准
确性和可靠性。
团队协作与沟通
积极参与团队协作，与团队成员保持 良好的沟通，共同解决问题，提高工
作效率。
充分准备与复习
在考核前，充分复习理论知识，熟悉 实验操作流程和仪器设备的使用方法。
HPLC仪器操作流程
准备工作
检查仪器各部件是否正常，流动相是否充足 ，确保电源和气源连接正常。
流动相制备
根据实验要求配制流动相，并进行过滤和脱气 。
仪器启动
打开电源和气源，启动仪器，进行系统冲洗和平 衡。
维护高效液相色谱的方法
维护高效液相色谱的方法
高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物和制药领域的分离分析技术。
为了确保HPLC系统的性能和准确性，需要对其进行定期维护。
以下是一些维护高效液相色谱的方法：
1. 定期检查系统密封性：确保系统密封良好，防止流动相和样品泄漏。
检查所有的管路连接、密封圈和阀门是否正常。
2. 保持泵清洁：定期清洗泵内部，以防止残留物对柱塞和密封圈造成磨损。
使用适当的溶剂清洗泵，并确保其干燥。
3. 定期更换滤芯：为了防止流动相中的颗粒物对泵和检测器造成损害，需要定期更换滤芯。
根据实际情况，按照仪器制造商的推荐进行更换。
4. 维护检测器：根据检测器的类型，进行适当的维护操作。
例如，对于紫外-可见光检测器，定期清洗光路和检测池；对于荧光检测器，定期清洁激发和发射滤光片。
5. 校准流动相和波长：确保流动相的准确性，避免对分析结果造成影响。
同时，定期校准检测器的波长，确保其准确性。
6. 清洗色谱柱：为了保持色谱柱的性能和延长其使用寿命，需要定期进行清洗和维护。
根据色谱柱的类型和实际使用情况，采用适当的清洗方法。
7. 保持仪器干燥：保持仪器内部的干燥，以防止金属部件生锈和橡胶部件老化。
定期运行仪器以排出湿气，并避免在潮湿环境中长时间停机。
8. 记录维护日志：为了跟踪仪器的维护历史和维护状态，建议记录维护日志。
记录每次维护操作的时间、内容、操作者等信息，以便日后参考和跟踪。
总之，高效液相色谱的维护对于确保其性能和准确性至关重要。
通过定期检查、清洁和更换部件，可以延长仪器的使用寿命和提高分析结果的可靠性。
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护高效液相色谱仪（HPLC）是一种常见的分析仪器，在实验室中广泛应用。
为了确保HPLC的正常运行和准确性，需要进行定期的保养和维护。
下面就针对HPLC的保养和维护进行简要讲解。
保养和维护包括以下几个方面：1.纯水和溶液使用在使用HPLC的过程中，纯水和溶液是经常使用的。
因此，使用同行评审流程纯化水时，应选择高纯度的水。
同时，在准备溶液时，应严格按照配方准确混合。
此外，需要注意避免留下化学物质残留，如酸、碱、盐等。
这些杂质会影响系统的准确性和稳定性。
2.样品制备样品制备是影响HPLC分析结果的关键因素之一。
样品的制备包括溶解和过滤。
为了保证样品制备的质量，需要选择合适的溶剂和过滤器。
在进行制备过程时，需要注意防止空气进入和避免任何杂质附着样品。
3.列柱清洗和保养列柱是HPLC系统中最易受污染和损坏的部分，因此需要定期清洗保养。
清洗柱应使用相应的清洗液，并按照厂家的建议进行清洗。
同时，需要避免过度清洗，以免破坏柱内填充物。
4.泵和检测器保养HPLC系统中的泵和检测器是其他重要部件。
在平时的维护过程中，需要定期检查泵和检测器，确保它们保持良好的工作状态。
在使用HPLC前，需确保泵和检测器的正常运行以及峰形、背景和噪声的稳定性。
此外，在每次使用后需要定期更换陈旧废弃的部件和消耗品。
5.注意人员操作和安全措施在操作HPLC时，需要遵守必要的安全措施，如穿戴防护手套、护目镜等，并在操作前仔细查看用户手册。
此外，操作人员需要接受培训并定期进行相关知识的更新。
在总结上述内容时，可以看出，HPLC的保养和维护至关重要。
仅仅花费一些时间定期清洁和保养设备，就可以保证仪器的顺畅运行并得到准确的分析结果。
同时，人员的操作技术和合理使用设备也能最大程度地延长其使用寿命。
高效液相色谱仪校准安全操作及保养规程
高效液相色谱仪校准安全操作及保养规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于生化、医药、环保等领域。
为确保HPLC的准确度和稳定性，需要经常进行校准和保养。
本文将针对HPLC的校准和保养过程中的安全操作规程进行介绍。
一、HPLC校准HPLC校准是确保HPLC测试值准确度和精度的必要步骤。
在进行校准之前，应做好以下准备工作：1.准备好标准溶液：根据需要的物质准备好标准溶液。
例如，若需要校准氨基酸分析，应准备标准氨基酸溶液；2.准备好HPLC系统：按照操作手册的步骤进行，启动HPLC系统并等待稳定；3.准备好校准参数：参数包括流速、检测器波长、温度等。
在进行HPLC校准时，需要遵守以下安全操作规程：1.告知其他人员：在进行校准之前，需要告知实验室其他人员，以免发生意外伤害；2.戴手套和防护眼镜：在校准时需要戴手套和防护眼镜，以免校准液体溅入眼睛或皮肤；3.清洁工作台：要确保操作台面干净，并进行消毒，以免污染标准溶液；4.注意标准品的浓度：标准品的浓度应选择合适的范围，以免操作过程中出现误差；5.记录参数：在校准过程中应记录参数，以便查验和复查。
二、HPLC保养HPLC作为一台动力学仪器，需要经常进行维护和保养，才能保持稳定性和准确度。
下面介绍HPLC保养时的安全操作规程：1.清洗样品针头：样品针头是HPLC中易出现问题的部件之一，需要经常清洗和更换。
在清洗时需要戴手套和防护眼镜，在清洗时，用溶液清洗样品针头，并用水冲洗干净；2.更换柱：在使用一段时间后，柱子会产生变形和酸化，需要及时更换。
在更换时，应先停止运行HPLC，并关闭系统。
在更换柱子时，需要戴手套和防护眼镜，同时将管路清洗干净；3.保养检测器：检测器是HPLC的核心部件之一，需要经常维护和更换。
在保养检测器时，应戴手套和防护眼镜，关闭HPLC并将检测器拆卸，清洗并更换检测器洗涤液。
在以上操作完成后，还需要注意以下几点安全操作规程：1.打开机箱前需要断电，以免触电或引发电火灾；2.感应器需要定期校准，以保持准确度；3.定期检查管路是否有泄漏，以保证检测结果的准确性；4.植物油润滑泵需要使用专门的润滑油。
高效液相色谱法培训PPT课件
注意事项与常见问题解答
样品处理注意事项
01
避免样品污染、损失或变质，确保处理过程的准确性和可重复
性。
常见问题及解决方法
02
针对样品处理过程中可能出现的问题，如回收率低、干扰物质
多等，提供相应的解决方法。
安全与防护
03
注意有毒有害试剂的使用安全，做好个人防护和环境保护工作。
04 方法开发与优化策略
梯度洗脱程序设计思路
初始比例确定
根据待测组分的极性差异，选 择合适的初始流动相比例。
梯度斜率设置
根据组分的分离情况，调整梯 度斜率，使各组分在合适的保 留时间内洗脱出来。
梯度时间设置
确保梯度洗脱过程中，各组分 能够充分分离，同时避免过长 的分析时间。
梯度曲线类型
根据实际需求选择合适的梯度 曲线类型，如线性梯度、凹形
梯度或凸形梯度等。
方法验证内容及标准
精密度
准确度
通过添加回收率试验，验证方法 的准确度，确保测定结果可靠。
考察方法的重复性和中间精密度， 确保测定结果的稳定性。
线性范围
确定方法的线性范围，确保待测 组分浓度在该范围内时，测定结 果准确可靠。
专属性
考察方法对待测组分的选择性， 确保其他共存物质不干扰测定。
长期稳定性
考察样品在规定的储存条件下放置一定时间后的稳定性，以确定 样品的保质期和储存条件。
方法学考察
对分析方法本身进行稳定性考察，包括方法的耐用性、重复性和 中间精密度等指标的评估。
质量控制图绘制和应用
质量控制图绘制
根据长期稳定性考察数据，绘制质量控 制图，包括平均值、标准差和控制限等 指标。
VS
发展历程及应用领域
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
基本原理和特点 液相色谱仪器部件 实验操作与应用 日常维护
基本原理和特点
➢ 基本原理：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固 定相时,由于与 固定相(stationary phase)发生作用(吸附,分 配,离子吸引,排阻,亲和)的大小,强 弱不同,在固定相中滞留 时间不同,从而先后从固定相中流出.
2.1 x 50 2.1 x 30 2.1 x 15
柱内 体积 (Vm)
0.10 mL 0.06 mL 0.03 mL
平衡时间 流速
0.2 mL/min
5 min 3 min 1.5 min
单次样品运行时间 = 分析时间 + 色谱柱平衡时间 色谱柱平衡时间 = 10倍柱内体积 ÷ 流速
1.0mL/min
• 理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过 0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气
等。
过滤与脱气
过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使
用无机盐配制的缓冲液。 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：
1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动
pH变化值 0.1
RS变化值 1.6
2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分 按极性分：极性、弱极性、非极性 按使用方式分：等度洗脱和梯度洗脱
对溶剂的要求
水：
去离子水 自动纯水仪
纯净水
商品瓶装水
溶剂:
色谱纯（甲醇，乙腈，乙醇，丙酮，异丙醇）
试剂: 分析纯
• 不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要 求越高放置时间越短。
色谱柱柱内体积和平衡时间
色谱柱 尺寸
(mm)
4.6 x 50 4.6 x 30 4.6 x 15 4.6 x 150
柱内 体积
(Vm)
0.5 mL 0.3 mL 0.15 mL 1.54 mL
平衡时间 流速
1.0 mL/min
5 min 3 min 1.5 min 15 min
色谱柱 尺寸 (mm)
测量通过溶液后的紫外或可见光光强度的损失 吸光度与样品浓度呈线性关系 在被测物的最大吸收波长处检测时灵敏度最大
吸光度检测器（UV/Vis）－ 优点
这种检测器简单、可靠 多数人熟悉并喜欢这种技术 可以作梯度实验并且是非破坏性的 大多数有机化合物有一定程度的吸光度 一般来说灵敏度还可以
AU
Parabens at 254 nm
0.15
0.10
0.05
0.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
5.50
6.00
Minutes
吸光度检测器（UV/Vis）－ 缺点
由于不是所有化合物都有吸光度，因此不是通用检测器 对某些化合物的检测灵敏度不及其他检测器 样品中不同化合物的最大吸收波长不同时，需要使用多波
染；
柱的保养：
柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 要注意流动相的脱气； 避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 进样样品要提纯； 严格控制进样量； 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品； 每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；
图1；好的梯度系统 图2；一般的二元梯度系统 图3；一般的四元梯度系统
为何如此重要？
五个小肽的5ng进样，好的色谱系统非常容易鉴别出所有 峰。在不好的色谱系统中，第一个峰则消失在基线噪音中。
基线噪音对积分的影响
Caffeine @ 271 nm
1.183
1.183
1.224
维护流程图 线路过滤器
线路过滤器
流动相
线路过滤器 压力传感器
排液阀
故障：堵塞 现象：系统压力波动大或压力
偏高 措施：5％稀硝酸，超声波清洗 判断依据：关闭排液阀，断开出
口管路，设定流速1mL/min， 如压力>3kgf/cm2，则堵塞。
泵的保养：
使用流动相尽量要清洁； 进液处的砂芯过滤头要经常清洗； 流动相交换时要防止沉淀； 避免泵内堵塞或有气泡； 每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污
灵敏度：信噪比
灵敏度是信号与噪音的比值；即峰高与基线噪音的比值
（S/N）
6:1
检测限（LOD）：S/N = 2~4
定量限（LOQ）：S/N = 8~10
好的信噪比有利于：
更好的色谱峰确认
S
更好的定量
更好地完成色谱峰纯度/均一性
N
吸光度（Absorbance UV/Vis）检测
目前实验室中最流行的选择 多数公司约75%的检测器是吸光度检测器（其中50% 是多波长，25%是PDA）
灯的保养：
在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成 后，马上关闭检测器。
样品池要保养
谢谢！
高效液相色谱仪组成
输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据记录处理系统
液相色谱流程图
溶剂
HPLC色谱柱
数据处理系统
自动进样器 色谱泵
检测器
废液
液相色谱的流动相
液相柱---保留值与pH的关系
色谱柱：Zorbax StableBond C18 4.6*250mm,5um
流动相：27%甲醇：73%磷酸 pH： 2.5&2.6 温度： 50℃ 流速： 1.0mL/min.
HPLC检测器应提供的功能
对样品有响应并有一个输出信号 应该提供在检测器响应值与样品浓度之间的线性关系；并
且所设计的校正技术应该促进这种关系
理想的HPLC检测器
高灵敏度；可忽略的基线噪音 宽的线性范围 独立于流动相及操作参数的响应
对压力、温度及流速等变化不敏感 长时间操作的稳定性 低死体积 非破坏性 选择性
单向阀
检测器 柱塞密封圈 进样器
吸滤头
吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时 单向阀－－定期清洗，压力波动大时 泵－－自动清洗 在线过滤器－压力大时清洗
吸滤头
材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％稀硝酸，超声波清洗，
再用蒸馏水清洗
单向阀
故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施： 打开排液阀，以异丙醇为流动相输液 拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗
60 sec 36 sec 18 sec
色谱柱清洗保存
反相色谱柱：用20%甲醇溶液清洗10个柱体积，保存在 90%的甲醇溶液中。
分子筛色谱柱：用纯水清洗10个柱体积，保存在5%叠氮 化钠水溶液中。
离子色谱柱：用0.02M盐，pH6.5溶液清洗10个柱体积， 保存在含5%叠氮化钠0.02M盐，pH6.5溶液中。短期保存 在低盐的流动相中。
流动相的保存
有机溶剂流动相：
室温下密封，避光保存
缓冲盐流动相：
当日现配现用： 低温下密封保存，一般不超过3天 防止微生物生长
有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相：
低温密封保存 防止有机相的挥发
选用适宜的容器
1．梯度洗脱的特点
（1）改善分离, 加快分析速度； （2）改善峰形, 减少拖尾, 有利于痕 量组分的检测； （3）增加峰容量； （4）强烈滞留的组分不容易残留在 柱上, 保持柱性能长期良好； （5）下次分析时, 流动相需要一段平 衡时间；不同溶剂的UV吸收程度稍有 差异, 可能会引起基线漂移
200.00
UV Spectrum of Eluents with 0.1% TFA Against HPLC Grade H2O Blank
H20 with 0.1% TFA
50% ACN with 0.1% TFA
210.00
220.00
230.00
240.00
250.00 nm
260.00
270.00
长检测，或使用折衷的波长 受流动相组成的影响：
用截止波长以上至少5～10nm作为工作波长 缓冲盐、离子对试剂、胺改性剂也会有影响
背景吸收对紫外检测器噪音的影响
AU
1.50 1.40 1.30 1.20 1.10 1.00 0.90 0.80 0.70 0.60 0.50 0.40 0.30 0.20 0.10 0.00
保留时间
液相色谱的色谱柱
色谱柱的连接
Stop_depth长度不合适造成柱前死体积
色谱柱的连接
锥箍锥度不合适造成渗漏
可能提高柱效的方法
除去柱上端固定相变色部分 (约3mm左右)，再补充新的 固定相。
色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适 的溶剂进行洗净。
采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体 积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再 生。
➢ 特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动 化。
流动相 脱气装置
四元泵
一些商品化仪器
检测器 柱温箱 样品盘
控温箱
启动液相色谱仪器的流程
开启HPLC系统各个设备的电源 打开泵、自动进样器、检测器电源，
待设备通过自检后，打开计算机启动 色谱管理软件 准备流动相
过滤，脱气 色谱泵排气
用新配制的流动相灌注泵
滞后体积变化的影响
设计不好的HPLC系统，滞后体积随反压变化 滞后体积随反压变化的后果：
梯度的准确性不好，造成：方法的适应性不好 用静态梯度混合器；固定滞后体积可明显改善梯度特性