蛋白质研究方法2018
蛋白质有关计算快速解题技巧
蛋白质有关计算快速解题技巧作者：白玉琴来源：《新课程·下旬》2018年第11期摘要：做题时能读透题目后研究解题方法，关键在于熟练掌握计算规律，尤其是高考生物中有关计算“技巧”性知识的灌输，更应注重学生日常的生物文化素养的内在积淀。
关键词：高中生物；相关的计算题；快速解题技巧；蛋白质高中生物相关的计算题，题型较多难度较大。
高分考生得益于自己长期有针对的训练，中等成绩学生花了很多时间做练习，好像学了不少招数，结果面对高考题时还是使不上力气，低分考生本来就是为做题而做题，疲于应付，当然想要提高生物成绩不是很管用，也就是说，这些做法治标不治本。
我个人认为，若学生做题时能读透题目后研究解题方法，关键在于熟练掌握计算规律，对高中生物有关的计算学习有一定的帮助。
现以生命活动的主要承担者蛋白质相关计算为例，来看看解答这类题目，有何快速解题技巧。
普通高中课程标准实验教科书生物必修一第24页练习3：胰岛素分子有A、B两条链，A 链有21个氨基酸，B链有30个氨基酸，胰岛素分子中肽键数目是个，失去水分子数个。
考点分析：首先这里有个含蓄的问题，那就是胰岛素是蛋白质，然后根据普通高中课程标准实验教科书生物必修一第22页图2—5氨基酸脱水缩合示意图。
氨基酸分子相互结合的方式是：一个氨基酸分子的氨基和另一个氨基酸的羧基相连接，同时脱去水，而连接两个氨基酸分子化学键叫做肽键。
所以可以总结规律一：肽键数=失去水分子数=氨基酸数—肽链数。
假如n 个氨基酸缩合形成m条肽链，然后由这m条肽链构成的一个蛋白质分子，则计算蛋白质分子中肽键数、失去水分子数可以用关系式n-m表示。
由此推知本题答案为：49。
变式训练一：若已知20种氨基酸的平均相对分子质量为128，则胰岛素的相对分子质量接近于_____。
考点分析：氨基酸分子相互结合的方式是脱水缩合，相对分子质量减少了，减少的部分就是失去的水。
所以可以总结规律二：蛋白质相对分子质量=氨基酸个数×氨基酸平均相对分子质量-脱水分子个数×18-其他（如形成一个二硫键）。
鸡蛋中蛋白质的研究现状
贵州农业科学 2018,46(8) :128〜130Guizhou Agricultural Sciences[文章编号]1〇〇1-36〇1(2〇18)〇8~〇3〇7-〇128_〇3鸡蛋中蛋白质的研究现状贺娟妮(陕西T.业职业技术学院化T.与纺织服装学院，陕西咸阳712000)[摘要]我国是鸡蛋生产大国，鸡蛋富含人体所需的优良蛋白质。
通过查阅国内外文献资料，对鸡蛋中蛋白质的种类、活性功能、分离提取方法及蛋白粉的制备等方面进行了综述，旨在为鸡蛋中蛋白质的后续 相关深入研究和应用开发提供参考。
[关键词]鸡蛋；蛋白貭；分离[中图分类号]S 873 [文献标识码]AResearch Status of Egg ProteinH E Juanni(School o f Chemical Engineering and Textile Clothing f Shaanxi Polytechnic Institute 9 Xianyangy Shaanxi 712000 y China')A b stract ： China is a large egg p roduction co u n try . T he egg is ric h in excellent needed protein fo r hum an body . T he k in d , active fu n c tio n , separating and extracting m ethod and protein pow der preparation o f egg pro tein are reviewed by consulting lite ra tu re in fo rm a tio n at home and abroad to provide a reference fo r fu rth e r related research , application and developm ent o f egg p ro tein .Key w ords ： egg ； p ro te in ； separation鸡蛋作为膳食结构中获取蛋白质的主要食品，深受人们的青睐[1]。
蛋白质相互作用研究
Vol.6 No.6Dec. 2020生物化工Biological Chemical Engineering第 6 卷 第 6 期2020 年 12 月蛋白质相互作用研究王芬，裴会敏，文狄，李静（黔南民族师范学院 生物与农学院，贵州都匀 558000）摘 要：蛋白质是细胞中最重要的功能元件之一，蛋白质相互作用网络是蛋白质组学研究的热点之一。
蛋白质相互作用网络的研究，不仅有助于理解蛋白质在网络中的功能，还可以解释细胞中大部分的生物功能，并为疾病诊断提供理论依据，使通过系统的理解信号转导网络治疗各种疾病成为可能。
大规模的蛋白质相互作用网络对于理解生物过程是必要的，在蛋白质相互作用网络中寻找关键蛋白，发现新药物靶标、诊断标记物和治疗靶点，可以为医治相关病症、定向开发药物提供依据，协助探究病害的发病机理。
关键词：蛋白质；相互作用网络；功能；疾病中图分类号：Q51 文献标识码：AThe Research on Protein-protein InteractionWANG Fen, PEI Huimin, WEN Di, LI Jing(The Department of Life Science and Agriculture, Qiannan Normal University for Nationalities, Guizhou Duyun 558000)Abstract: Protein is one of the most important functional components in cell. Protein interaction network is one ofthe hotspots in proteomics. Studying protein-protein interaction network not only help to understand the function of proteins, but also explain most biological functions in cell. It can also provide theoretical basis for disease diagnosis and make it possible to treat a variety of diseases through a systematic understanding of signal transduction network. Large-scale protein interaction networks areneeded to understand biological processes. Searching hubs and find drug targets, diagnostic marker and therapeutic target can provide references for the targeted drug design and development, also assist to explore the the pathogenesis of diseases.Keywords: protein; interaction network; function; disease人类基因组计划完成之后，蛋白质组学[1]的研究方兴未艾，其是探索生物体内所有蛋白质表达模式的科学，对蛋白质相互作用网络（PPIN）[2]的探索是其中重要领域之一。
生化学研究的新成果
生化学研究的新成果生化学研究是一门相对较新的学科，它致力于研究化学物质在生物体内的作用及其反应机制。
该学科涉及到分子生物学、生物化学、细胞生物学等领域。
近年来，生化学研究获得了新的成果，为生物科学和医学领域的发展提供了有力的支持。
一、基因编辑技术引起的革命基因编辑技术是生化学研究中的重要领域，它是利用高效、准确的DNA修饰技术，对基因进行精确定点的编辑和修复，用于研究基因的功能及相关疾病的机制。
2018年，两位研究人员成功利用CRISPR-Cas9基因编辑技术对人类胚胎进行了编辑，这项技术引起了全球的关注。
基因编辑技术的涉及范围非常广泛，它不仅可以用于研究基因的功能及与疾病的关系，还可以用于生产更健康、更营养的农产品，提高养殖业的产量和质量，从而满足不断增长的人口需求。
二、蛋白质分子的解析和合成蛋白质是构成生物体大部分组织和器官的基本物质，是维持生命活动的重要物质。
2018年，天津大学研究团队成功合成了全球首个多蛋白质复合物，这项研究成果有望为癌症等疾病的治疗提供新的途径。
此外，由于人工合成蛋白质的研究不受限于自然界的限制，科学家们可以通过改造生物原材料，或者设计人工蛋白质来满足特殊需求，如制作适应于高温、低温或极限环境的蛋白质等，这一领域的研究将为新型药物、特种材料的研究开创新的途径。
三、基因组学在医学领域的发展随着高通量测序技术的发展，人们可以更加深入地了解基因组学及其在医学、医疗、疾病预测和治疗等方面的应用。
2018年，武汉大学研究团队发现了肾透明细胞癌的驱动基因，这一发现为该疾病的预防和治疗提供了新的思路。
基因组学的研究还可以用于个性化医疗的发展。
通过分析患者的基因序列，医生可以更好地预测疾病的风险和发展程度，制定更加科学的治疗方案，减轻患者的痛苦。
四、生物柴油的研究生物柴油是由植物油或动物脂肪酸酯酰基与甲醇或乙醇反应生成的燃料，是可再生能源的一种。
利用生物质资源生产生物柴油有着广阔的应用前景和开发价值。
重金属盐沉淀蛋白质的实验探究
1 问题的提出在有关蛋白质性质的教学中，教师往往是通过直观的变性蛋白质沉淀的现象，帮助学生认识到重金属盐会使蛋白质变性。
然而，一些教师在教学实验中发现，硫酸铜使蛋白质变性产生的沉淀，会溶解在过量的硫酸铜溶液中，教师对此现象难以自圆其说，陷入了非常尴尬的窘境。
本研究尝试运用多种重金属盐进行变性蛋白质沉淀实验时，发现往鸡蛋清溶液中加入过量的硫酸锌溶液或硫酸铜溶液，会使蛋白质沉淀溶解。
过量的重金属盐溶液为什么会使蛋白质沉淀溶解？对于该问题的解释，已有的文献包含理论探讨与实验研究两类：1）理论探讨的文献指出，Cu2+、Zn2+造成的蛋白质沉淀源于盐析作用而不是变性[1]；2）实验探究的文献指出，Cu2+引起蛋白质沉淀溶解的主要原因是体系pH变化影响了蛋白质的溶解度[2]。
鉴于此，本研究设计了一系列的化学实验，旨在解决以下3个问题：1）Cu2+、Zn2+的蛋白质沉淀是由于盐析还是变性?2）除Cu2+外，体系pH的变化是否会导致Zn2+、Ag+的蛋白质沉淀溶解？3）如何防止过量的重金属盐溶液使变性蛋白质沉淀溶解？2 实验方案2.1 实验仪器台秤、烧杯、玻璃棒、100mL容量瓶、试管、吸量管、力辰科技PH-100型pH测试笔。
2.2 实验试剂鸡蛋清溶液：用台秤称取5.0g鸡蛋清，加水至100.0g，搅拌，用4层纱布过滤，得到澄清透明鸡蛋清溶液（pH =9.38）。
其他试剂：浓硫酸、浓硝酸；分析纯的硫酸铜、硝酸银、硫酸锌。
2.3 正式试验实验1：探究Cu2+、Zn2+的蛋白质沉淀是由于盐析还是变性。
①取两支试管编号1、2号管，分别加入2mL 鸡蛋清溶液，1号试管中滴入3~4滴5%硫酸铜溶液，2号试管中滴入3~4滴5%硫酸锌溶液，观察到两支试管中均出现白色沉淀。
②往1、2号试管中分别加入4mL水，观察到两支试管内的沉淀均不溶解。
实验2：探究pH的变化是否会导致Cu2+、Zn2+、Ag+的蛋白质沉淀溶解。
①取三个烧杯，编号为A1、B1、C1，分别量取20mL的蛋清溶液，按表1分别加入重金属盐溶液，观察现象并测量pH。
protein synthesis analysis实验方法
protein synthesis analysis实验方法
蛋白质合成分析实验方法有多种，其中包括：
1. 免疫印迹法（Western Blot）：通过特异抗体检测蛋白质样品中的特定蛋白，常用于检测蛋白质的表达、定位和定量分析。
2. 蛋白质谱（Protein Mass Spectrometry）：通过质谱技术对蛋白质进行鉴定和定量分析，可以同时检测多种蛋白质。
3. 微阵列技术（Microarray）：通过基因芯片或蛋白质芯片检测细胞或组织中蛋白质的表达水平，可同时检测上千个蛋白质。
4. 串联质谱（Tandem Mass Spectrometry）：一种高通量的蛋白质鉴定技术，可以对蛋白质进行精细分析，包括蛋白质的修饰、剪切和变异等。
5. 荧光共振能量转移技术（Fluorescence Resonance Energy Transfer，FRET）：通过检测荧光信号的转移效率来分析蛋白质之间的相互作用和距离，可以用于研究蛋白质的构象变化和动态行为。
6. 磷酸化分析（Phosphorylation Analysis）：通过检测蛋白质磷酸化水平来分析蛋白质的活性状态和信号转导，常用于研究细胞生长、分化、凋亡等过程。
7. 基因表达分析（Gene Expression Analysis）：通过检测特定基因的转录水平来分析蛋白质的表达和调控，可了解蛋白质在不同生理或病理条件下的变化。
这些方法各有特点，可以根据实验目的和需求选择合适的方法进行蛋白质合成分析。
美藤果蛋白的功能性质研究
中 国 油 脂
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美 藤 果 蛋 白的功 能 性 质 研 究
张雪春 ，田 景 ，王振兴 ，范方 宇 ，刘 云 ，阚 欢
（西南林业大学 轻工与食品 工程 学院，昆明 ６５０２２４）
摘要 ：以 关藤 果饼 为 原料 ，采 用碱 提 酸 沉 法制备 美藤 果 蛋 白，研 究 ｐＨ、温度 、ＮａＣ１浓度 和 蔗 糖 浓度 对美藤果蛋 白功能性质的影响。结果表 明：当 ｐＨ为 ５时，美藤果蛋 白的溶解度、乳化性能和起 泡 性均最小；随着温度的升高，美藤果蛋 白的溶解度、持水性、持 油性呈先增大后减小的趋势；加入适 量 ＮａＣ１可增 大 关藤 果 蛋 白的溶 解度 、乳化 性 能和起 泡性 能 ；加入 蔗糖使 美藤果蛋 白的起 泡性 降低 ， 而加入 适 量 的蔗糖 可增 大美藤 果蛋 白的乳化 性 能 。ｐＨ、温度 、ＮａＣ１浓度 和蔗 糖 浓 度 对 美藤 果蛋 白 的功能性质有一定影响，可通过改变上述条件 以获得 良好加工性质的关藤果蛋 白产品。 关键 词 ：美藤 果 ；蛋 白质 ；功 能性 质 ；ｐＨ；温度 中 图分 类 号 ：ＴＳ２２５．１；ＴＳ２０１．１ 文献 标识 码 ：Ａ 文章 编号 ：１００３—７９６９（２０１８）０３—００３５—０４
美 藤 果 （Ｓａｃｈａ Ｉｎｃｈｉ）又 名 印加果 、印加 花 生 、南 美油藤 ，为木质藤本植物 ，在南美洲印加地 区有上千 年 的食用历史。美藤果 中蛋 白质含量达 ３０％，脂肪 含 量达 ４５％ ，是 一 种 优 良 的油 料 作 物 和 蛋 白质 资
收稿 日期 ：２０１７—０６—３０；修 回日期 ：２０１７—１１—２０ 基金项 目：南 昌大学食 品科学 与技术 国家重点实验室开放 基 金 （ＳＫＬＦ—ＫＦ一２０１４０３）；高等教育发展专项 （５１４００６１１０） 作者简介 ：张雪 春 （１９８１），女 ，讲 师 ，博 士 ，研 究方 向 为农林 产 品开发 利用 （Ｅ－ｍ ｉｌ）ｘｕｅｃｈｕｎ＿ｚｈａｎｇ＠ １６３．ｃｏｒｎ。 通信作者 ：王振 兴 ，助理 研究 员 ，硕士 （Ｅ－ｍａｉｌ）ｗａｎｇｚｈｅｎｘｉｎｇ
蛋白质复合物相互作用的研究方法和应用
蛋白质复合物相互作用的研究方法和应用随着生物技术的发展，生命科学的研究越来越深入细致，原子级别的科学已经成为2018年诺贝尔化学奖的主题。
而蛋白质作为生命体系中至关重要的一类分子，其相互作用的研究也变得日益重要。
蛋白质复合物是由许多蛋白质分子组成的大分子复合体，其中蛋白质间复杂的相互作用是其发挥生物学功能的本质基础。
研究蛋白质复合物的相互作用不仅能够深入解读生命活动的机理，也在药物研发、生物制药等领域有广泛的应用价值。
研究蛋白质复合物相互作用的手段丰富多样，常用的有X射线晶体学、核磁共振、冷冻电镜、等温滴定、表面等温滴定、生物传感器等多种方法。
X射线晶体学是一种经典的研究蛋白质复合物结构的手段，其基本流程是将蛋白质复合物制成晶体，用X射线在晶体中找到原子排列的规律，进而推断蛋白质复合物的三维结构。
X射线晶体学有一定的局限性，需要得到制备好的高质量结晶样品，并且对于一些大分子复合物结晶难度大，或结晶后分辨率不高的情况，难以得到真实的结构信息。
核磁共振是另一种重要的研究蛋白质复合物的结构方法。
这种方法通过测定蛋白质复合物中原子的共振信号，进而推测蛋白质复合物的结构。
相比X射线晶体学，核磁共振不需要制备结晶，对于某些结晶难度大的蛋白质复合物结构研究有着很好的补充作用。
但是核磁共振的定量精度不高，结构分辨率也比较低。
冷冻电镜（cryo-EM）是一种新兴的技术，它不需要制备高质量晶体样品，相对于传统的电镜技术，冷冻电镜减轻了样品准备的要求，允许直接观察蛋白质复合物的形态和结构。
此外，今天的cryo-EM技术已经实现了原子分辨率的分子结构成像，为生命科学研究提供了新的视角。
除了结构方法外，还有一系列的动力学方法可以测量蛋白质复合物的相互作用。
其中，等温滴定法和表面等温滴定法是比较常见的动力学方法。
等温滴定法通过监测蛋白质复合物中溶质的吸附或者解离过程，反映复合体中的物质之间的互相作用。
表面等温滴定法则是在可测的界面上进行等温滴定。
蛋白质研究成功案例
蛋白质研究成功案例
蛋白质是生命体中重要的组成部分，对于人类健康和疾病的研究有着重要意义。
近年来，科学家们不断突破技术难关，成功研究出多种重要蛋白质，这些成果将为医学研究和药物开发提供新的方向和机会。
其中，2018年诺贝尔化学奖得主弗朗西斯·阿诺德和乔治·史密斯，以及2019年诺贝尔生物学奖得主威廉·凯林和格雷格·塞门托，都是以研究蛋白质为主要成果的科学家。
另外，近年来成功研究出的几种重要蛋白质包括：
1. 细胞因子IL-17A：它被发现与多种自身免疫性疾病有关，如风湿性关节炎、牛皮癣等。
研究人员通过结晶解析技术，成功研究出了IL-17A的结构，为相关药物的设计提供了参考。
2. 乳铁蛋白：这是一种存在于母乳和牛奶中的蛋白质，具有重要的营养和免疫调节作用。
科学家们成功研究出了乳铁蛋白的结构，为其功能机制的研究提供了基础。
3. 抗体：这是一类特殊的蛋白质，可以识别并结合外来物质，从而引发免疫反应。
科学家们成功研究出了多种重要抗体的结构，为疾病治疗和疫苗开发提供了新的思路。
4. 钠通道蛋白：它是一种调节神经信号传递的重要蛋白质，与多种神经性疾病有关。
科学家们通过冷冻电镜技术，成功研究出了钠通道蛋白的高分辨率结构，为药物设计和疾病治疗提供了新的方向。
通过以上几个成功案例，我们可以看到，蛋白质研究的成果不仅
对于基础科学研究具有重要意义，也对于医学和药物开发有着重要的应用价值。
相信在未来的科研中，蛋白质研究将继续成为重要的研究领域，为人类健康和疾病治疗提供新的突破。
GPI锚定蛋白的研究进展
GPI锚定蛋白的研究进展摘要】糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白（GPI-APs）是一类通过自身羧基末端糖基-磷脂酰肌醇结构锚定在真核细胞膜表面但不穿过磷脂膜双层的蛋白质。
它们具有广泛的功能，涉及细胞识别、生长、分化和程序性死亡等重要的生命过程，并与许多疾病有一定的关系。
现在普遍认为，GPI-APs与膜上脂筏的连接在信号转导和其他功能方面具有重要意义。
本文就GPI-APs的生物特征及功能进行综述。
【关键词】GPI锚定蛋白；膜蛋白；信号传递；疾病检测【中图分类号】R379 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）19-0010-02糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白(glycosylphosphatidy-linositol-anchored protein，GPI-APs)是一类通过其羧基末端的GPI结构锚定于细胞膜表面而不跨越其磷脂双层结构的蛋白。
[1]在脊椎动物，真核生物，植物，软体动物，昆虫，血吸虫病，真菌和原生动物中发现了大量的GPI-AP[2]。
目前，GPI-AP主要用于细胞生物学，分子生物学及相关疾病的研究。
例如，IL-12基因与GPI信号肽序列的融合为初步制备肾癌疫苗奠定了基础[3]；B7-1和GPI-AP的剪接和相关细胞的融合可以促进T细胞的活化。
从而介导肿瘤细胞凋亡以达到治疗目的[4]。
GPI-APs还可锚定CD等细胞因子，促进T细胞活化，从而介导抗肿瘤[5]。
1.GPI-APs的分子结构GPI锚定蛋白的基因位于第19号染色体，基因跨度大于40kbp，包括18个内含子，17个外显子[6],全长蛋白约56kD，是一个与多种疾病相关的多功能蛋白。
GPI-APs广泛分布于各类生物体内，它含有大约20个氨基酸的组成的特殊C末端序列，该序列即为膜钩连接的标志，从而能将蛋白质锚定于细胞膜表面，但不跨越膜结构，从而不干涉细胞内信号传递[7]。
研究认为[8]，GPI-APs和其他脂化蛋白是与脂质相关联的，这些蛋白质大部分分布于细胞膜的脂筏上，可看作是膜相关的含脂双层脂筏域的蛋白质。
专题06 实验
1.(2018·江苏卷,17)关于还原糖、蛋白质和DNA的鉴定实验,下列叙述正确的是( D )A.在甘蔗茎的组织样液中加入双缩脲试剂,温水浴后液体由蓝色变成砖红色B.在大豆种子匀浆液中加入斐林试剂,液体由蓝色变成紫色C.提取DNA时,在切碎的洋葱中加入适量洗涤剂和食盐,充分研磨,过滤并弃去滤液D.将DNA粗提物溶解在2 mol/L NaCl溶液中,加入二苯胺试剂,沸水浴后液体由无色变成蓝色解析:甘蔗茎的组织样液中含有大量的蔗糖,蔗糖属于非还原糖,与斐林试剂在50~65 ℃的水浴加热条件下不会产生砖红色沉淀。
大豆种子的匀浆液中含有大量的蛋白质,鉴定蛋白质时应使用双缩脲试剂,双缩脲试剂在常温下能与蛋白质发生反应,生成紫色的络合物。
提取DNA时,植物细胞需要先用洗涤剂溶解细胞膜。
在切碎的洋葱中加入适量的洗涤剂和食盐,进行充分的研磨,过滤后收集滤液。
在沸水浴条件下,DNA与二苯胺试剂反应溶液由无色变成蓝色。
2.(2014·海南高考·T1)下列植物细胞中,适合观察细胞有丝分裂的是( )A.蚕豆叶肉细胞B.洋葱鳞片叶表皮细胞C.蚕豆根尖分生区细胞D.洋葱根尖伸长区细胞解析：选C。
本题主要考查的是植物细胞有丝分裂的相关知识。
A项中,植物的叶肉细胞是高度分化的细胞,不能进行有丝分裂,故A项错。
B项中,洋葱鳞片叶表皮细胞为高度分化的细胞,不能进行有丝分裂,故B项错。
C项中,根尖分生区细胞具有分裂能力,故C项正确。
D项中,伸长区细胞不分裂,开始分化,故D项错。
3.(2018·北京卷,4)以下高中生物学实验中,操作不正确的是( A )A.在制作果酒的实验中,将葡萄汁液装满整个发酵装置B.鉴定DNA时,将粗提产物与二苯胺混合后进行沸水浴C.用苏丹Ⅲ染液染色,观察花生子叶细胞中的脂肪滴(颗粒)D.用龙胆紫染液染色,观察洋葱根尖分生区细胞中的染色体解析:在制作果酒的实验中,将葡萄汁液装入发酵装置中时,要预留约1/3的空间,其目的是:①让酵母菌先进行有氧呼吸,快速繁殖,耗尽瓶内的氧气后再进行酒精发酵;②暂时储存发酵产生的CO2,防止发酵液溢出导致杂菌污染。
-蛋白质结构
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p43
(4) 相邻肽平面构成二面角 ：一个Cα原子相连的 两个肽平面，由于N1-Cα和Cα-C2(羧基碳)两个键 为单键，肽平面可以分别围绕这两个键旋转，从而 构成不同的构象。 一个肽平面围绕N1-Cα(氮原子与α-碳原子)旋 转的角度，用Φ表示。另一个肽平面围绕CαC2(α-碳原子与羧基碳)旋转的角度，用Ψ表示。这 两个旋转角度叫二面角(dihedral angle)。通常二 面角(Φ,Ψ)确定后，一个多肽链的二级结构就确定 了
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5.牛催产素与加压素：均为九肽，分子中含有一对二硫键，两 者结构类似。前者可刺激子宫的收缩，促进分娩。后者可促进 小动脉收缩，使血压升高，也有抗利尿作用，参与水、盐代谢 的调节。
牛催产素 : 牛加压素 :
S S Cys· Tyr· Ile· Gln· Asn· Cys· Pro· Leu· Gly-NH2
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Gly Glu
Gln Asn Val Phe
Phe Phe Gly Arg
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五、 蛋白质的构象和维持构象的作用力
p40-41
构型（configuration):立体异构体分子中取代原子或 基团在空间的取向，如几何异构体和旋光异构体。 构型互变需要共价键的断裂。
构象(conformation)：取代基团当单键旋转时形成不同 的立体结构。 构象有无数种，交叉型最稳定，重叠型最不稳定。
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三级结构形成后，生物学活性必需基团靠近， 形成活性中心或部位，即蛋白质分子表面形成了 某些发挥生物学功能的特定区域。
吐温与蛋白质相互作用的研究进展
于蛋 白质 的作 用形成 了稳 定乳 状液 ，影 响 了其 出油 要较 高 的能量 。而表 面活性 剂有 助于 蛋 白质分子 通
率 『２】。吐温 为 聚氧 乙烯类 非离 子表 面活性 剂 ，和蛋 过 能量 壁垒 ，使蛋 白质分 子继 续折 叠 ，得 到天 然构
白质一样 ，也 是一 种两 亲分子 ，亲水 基 为聚氧 乙烯 象 。随着 表 面活性剂 疏水 性 的增加 ，其对 蛋 白质分
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｗ ｅｅｎ ｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｍ ｕｌｓｉｏｎ ｗａｓ
ｍ ａｉｎｌｙ ｓｕｍｍ ａｒｉｚｅｄ．Ｍ ｏｒｅｏｖｅｒ，ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｍ ｅｃｈａｎｉｓｍ ｓ ｏｆ ｔｗ ｅｅｎ ａｎｄ
链 ，疏 水基 为碳 氢链 ，常温下 为黏稠 液体 至膏 状物 。 子折叠的影响显著。但随着表面活性剂疏水性的进
吐温是一种亲水性水包油 （Ｏ／Ｗ ）型乳化剂 ，具有 一 步提高 ，表面活性剂与蛋白质分子会形成复合物
很好的热稳定性和水解稳定性 ，且其临界胶束浓度 导致折叠无法完成 『６］。宋九华等 比较吐温 ８０和
（ＣＭＣ）较 低 ，增 溶 能 力 较 强 ［３］。 由 于 吐温 是 无 牛胰蛋白酶混合液的紫外吸收波长 ，结果表明吐温
毒 的原 料 ，相溶 性好 ，毒性 和溶 血作用 小 ，不易 受 ８０与 牛胰 蛋 白酶 的相 互 作 用 引起 了牛 胰 蛋 白酶 吸
电解 质 和溶 液 的影 响 ，能 与大多 数药 物蛋 白配伍 ， 收 波长 的改 变 ，说 明吐 温 ８０与 牛胰 蛋 白酶 的相 互
冷冻电子显微镜技术在蛋白质结构研究中的进展
冷冻电子显微镜技术在蛋白质结构研究中的进展冷冻电子显微镜（Cryo-EM）技术，作为一种重要的生物结构研究工具，近年来在蛋白质结构领域取得了巨大的进展。
通过将生物样品快速冷冻至极低温，并利用电子显微镜观察样品的高分辨率图像，Cryo-EM技术能够解析出生物大分子的结构信息，揭示蛋白质的复杂三维结构和功能机制。
本文将对Cryo-EM技术在蛋白质结构研究中的进展进行简要介绍。
首先，Cryo-EM技术在高分辨率结构分辨率方面的进展是显著的。
随着电子显微镜技术的不断发展，研究人员已经成功解析出许多高分辨率的蛋白质结构信息。
例如，2017年，Jacobs等人解析了离子通道蛋白的结构，其分辨率达到了2.2Å，这一成果被认为是Cryo-EM技术的一次重要突破。
其次，Cryo-EM技术在蛋白质复合物研究中的应用也取得了显著的进展。
蛋白质复合物是由多个蛋白质相互作用形成的大分子复合物，对于揭示生命活动的机制具有重要意义。
Cryo-EM技术通过冷冻样品、获取高分辨率图像、进行三维重构，能够解析出蛋白质复合物的空间结构，从而揭示其功能和相互作用的机制。
例如，2013年Venien-Bryan等人利用Cryo-EM技术解析了核糖体的结构，该研究对于理解蛋白质合成的机制具有重要意义。
此外，Cryo-EM技术也在解析膜蛋白结构中发挥了重要作用。
膜蛋白是一类和细胞膜相互作用的蛋白质，对于维持细胞的正常功能起着重要的作用。
然而，由于膜蛋白的结构特殊性，其结构研究一直是一个难题。
Cryo-EM技术通过冷冻样品并进行三维重构，克服了膜蛋白X射线晶体学和NMR技术的局限性，为膜蛋白的结构研究提供了一种新的选择。
例如，2016年Dubochet等人利用Cryo-EM技术解析了受体配体复合物的结构，该研究为研发新型药物和治疗疾病提供了重要的依据。
另外，Cryo-EM技术在动态结构研究中的应用也有所突破。
传统的蛋白质结构研究方法往往不能解析出生物大分子的动态结构信息，而Cryo-EM技术可以通过观察不同时间点的冷冻样品图像，获取到生物大分子在不同结构状态下的结构信息，从而揭示其动态变化过程。
应激诱导蛋白Sestrin2研究进展
Ｓｅｓｎ２通 过 激 活 ＡＭＰＫ（ＡＭＰａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉ ｎａｓｅ）和 ＴＳＣ２（ｔｕｂｅｒｏｕｓｓｃｌｅｒｏｓｉｓ２）磷酸化对 ｍＴＯＲ （ｍａｍｍａｌｉａｎｔａｒｇｅｔｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎ）信号通路起负性调 控作用。基于 ｍＴＯＲ在调控细胞自噬过程中的关 键作 用，间 接 提 示 Ｓｅｓｎ２与 自 噬 密 切 相 关。 Ｈｏｕ 等［１２］通过鱼藤酮诱导的帕金森病（ＰＤ）细胞模型观 察到，Ｓｅｓｎ２基 因 和 蛋 白 表 达 水 平 均 显 著 上 调；ｓｉＲ ＮＡ干扰 Ｓｅｓｎ２则降低模型细胞中自噬标志性蛋白 ＬＣ３ＩＩ（ｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ３Ⅱ）的蛋白含量，并抑制了 ＡＭＰＫ Ｔｈｒ１７２的 磷 酸 化 激 活，而 Ｓｅｓｎ２过 表 达 能 上 调 ＡＭＰＫＴｈｒ１７２的磷酸化激活；敲除 Ｓｅｓｎ２或者抑制 ＡＭＰＫ可明显降低自噬活性和恶化鱼藤酮介导 α 突 触 核 蛋 白 聚 集 与 细 胞 死 亡。 同 样，Ｓｅｓｎ２敲 除 会 恶 化 肥 胖 诱 导 的 ｍＴＯＲＣ１ｐ７０Ｓ６Ｋ（ｐ７０ｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｓ６Ｋｋｉｎａｓｅ）活化，糖耐量下降和胰岛素抵抗。所有 这些现象均可被 ＡＭＰＫ活化所逆转，但其确切机制 有待进一 步 探 讨［１３］。 上 述 结 果 表 明，Ｓｅｓｎ２参 与 了 细胞自噬调控并可能与 ＡＭＰＫ磷酸化密切相关。
三、Ｓｅｓｔｒｉｎ２的细胞功能 （一）Ｓｅｓｎ２与细胞自噬 细胞自噬是细胞基本 的代谢过程，它能通过降解细胞内的蛋白和功能障 碍的细胞器，来维持细胞的生存和组织自稳。现已 明确，自噬 缺 陷 与 许 多 人 类 疾 病 密 切 相 关，包 括 癌 症、老化、感 染 性 疾 病 和 神 经 退 行 性 疾 病 等［９］。 越 来越多的证据表明，细胞自噬在抗细菌感染和某些 自身免疫疾病中起着重要作用。 早期资料显示，在富含 ｐ５３而非 ｐ５３缺陷的细 胞中，Ｓｅｓｎ２作 为 一 种 自 噬 新 型 正 调 节 因 子 参 与 自 噬的诱导，且 ｓｉＲＮＡ干扰 Ｓｅｓｎ２可抑制由多种刺激 诱导的自噬 。 ［１０］ Ｂｕｄａｎｏｖ等 通 ［１１］ 过对鼠成纤维细 胞和多种人癌细胞系研究发现，ｐ５３靶基因 Ｓｅｓｎ１和
2018研究生蛋白质结构与功能
5目4 录
内在因素
（一）氨基酸侧链和肽链的二级结构 1.氨基酸侧链影响肽链二级结构形成。 2.二硫键的形成和脯氨酸残基酰胺键的顺
反异构化是折叠过程的关键反应。 3.形成a-螺旋的起始阶段是慢反应。 4.单个结构域作为独立单位进行折叠。
目录
• （二）细胞内环境 1.细胞内生物大分子拥挤效应影响多肽链
③ 能识别变性的白质，避免或消除蛋白变性后因 疏水基团暴露而发生的不可逆聚集，并帮助其 复性，或介导其降解。
2020年10月14日9时42分
5目7 录
1．热激蛋白70(Hsp70)家族
热激蛋白(heat shock protein，Hsp)也称热 休克蛋白，是通过热激作用诱导表达增加，以尽量 减少热变性对蛋白质损害的一类蛋白分子。
目录
（三）β-转角
肽链出现180°回折的转角处的结构
目录
Ω-环
• 形态象希腊字母Ω，结构类似转角，常在 球形蛋白表面，含亲水基团。
目录
（四）无规卷曲
没有确定规律性的肽链构象
H2N
COOH
目录
（五）超二级结构-----模体（motif）
在多肽链内顺序上相互邻近的 二级结构常常在空间折叠中靠近， 彼此相互作用，形成规则的二级结 构聚集体
GrpE
核糖体
GrpE
核糖体
GrpE
核糖体
目录
2．热激蛋白60(Hsp60)家族
许多蛋白质分子折叠过程，还需要Hsp60家族 的辅助。Hsp60并非都是热激蛋白，故称伴侣素或 分子伴素（chaperonins）。
成员： Hsp60和Hsp10(大肠杆菌为GroEL和GroES)。
Hsp60家族主要作用是为提供能折叠形成天然空 间构象的微环境；据估计E.coli中约10％～20％蛋 白质折叠需要这一家族辅助。
alphafold预测蛋白结构方法
alphafold预测蛋白结构方法AlphaFold是一种用于预测蛋白质结构的方法，它在2018年由DeepMind团队开发并持续改进。
蛋白质是生物体中非常重要的分子，它们在细胞内担任着各种功能和角色，如催化化学反应、传递信号和提供结构支持等。
因此，了解蛋白质的结构对于理解生物过程和研究疾病机制非常关键。
在过去的几十年中，科学家们一直致力于开发方法来预测蛋白质的结构，因为实验方法往往耗时费力且成本高昂。
AlphaFold的出现引起了广泛关注，因为它在预测蛋白质结构方面取得了重大突破。
AlphaFold的核心思想是将蛋白质结构预测问题转化为一个机器学习问题。
它利用神经网络来学习从蛋白质序列到其三维结构的映射关系。
具体而言，AlphaFold使用了一个双向残差卷积神经网络，该网络从蛋白质序列中提取信息，并将其转化为蛋白质的结构表示。
通过训练这个神经网络，AlphaFold能够学习到蛋白质序列和结构之间的复杂关系，并用于预测未知蛋白质的结构。
为了训练这个神经网络，DeepMind团队使用了大量的已知蛋白质结构数据。
他们从公开数据库中收集了数百万个蛋白质序列和结构的配对，并使用这些数据来训练神经网络。
在训练过程中，AlphaFold 通过最小化预测结构与实际结构之间的差距来优化网络的参数。
通过这种方式，AlphaFold能够逐渐提高其预测蛋白质结构的准确性。
AlphaFold的突破性之处在于它能够在几天内预测出高精度的蛋白质结构，这通常需要数年的实验工作才能完成。
此外，AlphaFold 还能够预测出那些以前没有解析出结构的蛋白质，这为科学家们提供了宝贵的研究工具。
然而，尽管AlphaFold在蛋白质结构预测方面取得了巨大进展，但它仍然存在一些限制。
首先，它对于序列相似性较低的蛋白质预测效果较差。
此外，AlphaFold对于大型蛋白质和多蛋白质复合物的预测也面临一定的挑战。
因此，科学家们仍然需要进一步改进和发展这一方法，以提高其预测的广泛适用性和准确性。
线粒体蛋白质组学在衰老中的研究进展
作者简介 ：第一作者 ：赵娜（1989-），女，成都中医药大学硕士
研究生，研究方向为针灸调节神经内分泌免疫系统。
等鉴定技术 [13]；(3) 蛋白质相互作用及作用方式研究：如亲和 层析技术、酵母双杂交系统以及蛋白质芯片技术等。近年来， 对线粒体蛋白功能研究主要集中在线粒体蛋白质翻译后修 饰。目前，在线粒体蛋白翻译后修饰中最为常见要属磷酸化 修饰。研究人员采用多种方法富集磷酸化蛋白特异性沉淀 与液相色谱质谱技术联用鉴定了 77 个磷酸化修饰的线粒体 蛋白 [14]。线粒体蛋白翻译后修饰中乙酰化修饰也较为常见。 研究发现，在核编码的 39 个亚基中有 14 个亚基存在翻译后 修饰，其中 13 个为乙酰化修饰 。 [15]
让病毒成为蛋白质分子的“展柜”——2018年诺贝尔化学奖简介之噬菌体展示技术
让病毒成为蛋白质分子的“展柜”——2018年诺贝尔化学奖简介之噬菌体展示技术葛逸盟;张玉莹;林怡婷;姚义凡;王雪珩;王月丹【摘要】2018年,美国科学家乔治·史密斯及英国科学家格雷戈里·温特尔爵士分别因对噬菌体展示技术的研究工作,与酶定向进化的实现者美国科学家弗朗西斯·阿诺德分享了诺贝尔化学奖.其中,噬菌体展示技术是利用基因工程方法,将外源性基因片段插入到噬菌体的基因组中,使其编码的蛋白或多肽与噬菌体衣壳蛋白形成融合蛋白,并展示于噬菌体表面的技术.噬菌体展示系统目前已被广泛应用于抗体工程、疫苗研发和多种疾病的诊断与治疗,是现代生物医学研究与应用中最为重要的科学工具之一.【期刊名称】《生物学通报》【年(卷),期】2018(053)012【总页数】4页(P5-8)【关键词】噬菌体展示技术;抗体药物;疫苗;诺贝尔奖;化学【作者】葛逸盟;张玉莹;林怡婷;姚义凡;王雪珩;王月丹【作者单位】北京大学基础医学院免疫学系北京 100191;北京大学基础医学院免疫学系北京 100191;北京大学基础医学院免疫学系北京 100191;北京大学基础医学院免疫学系北京 100191;北京大学基础医学院免疫学系北京 100191;北京大学基础医学院免疫学系北京 100191【正文语种】中文【中图分类】R392.92018年10月30日，瑞典皇家科学院宣布，将2018年诺贝尔化学奖的一半奖金授予美国科学家乔治·史密斯（G. Smith）及英国科学家格雷戈里·温特尔爵士（Sir G. Winter），以表彰他们在发明及应用噬菌体（phage）展示技术中作出的贡献［1］。
什么是噬菌体展示技术？这个技术对人类的重要性究竟有多大？1 噬菌体与噬菌体展示技术的发明从字面含义上看，噬菌体是指能“吃掉”细菌的病毒，即一类能感染细菌、真菌、放线菌及螺旋体等微生物的病毒的总称［2］。
噬菌体的体积很小，形态因种类不同而存在差异，一般多为蝌蚪形，也可呈微小的球形或细长杆状。
北京航空航天大学-招收学历硕士研究生考试-701基础医学综合考试大纲(2018版)
701基础医学综合考试大纲（2018版）
考试内容包括生理学、细胞生物学、细胞生物学、微生物学和免疫学五大部分，所占比例分别为25%、25%、25%、15%和10%。
第一部分生理学 (25%)
一. 人体组织结构
1. 生命化学：生命体的基本元素，组织液。
3．细胞的结构和功能：细胞的生物电现象。
4．人体组织：上皮组织，结缔组织，肌肉组织及神经组织的功能。
二. 表皮系统
皮肤及附属器的功能。
三. 运动系统
骨骼肌的组织结构特点，骨骼肌的收缩机制。
四. 神经和内分泌系统
1．神经系统功能，神经细胞、神经胶质细胞的功能，神经突触的结构与功能，反射弧的构成与功能。
2．脑脊液的产生与循环，中枢神经系统的血液供应，自主神经的特点与功能。
3．下丘脑垂体与甲状腺：下丘脑、腺垂体、甲状腺与甲状旁腺分泌的激素及功能。
4．肾上腺与胰腺：肾上腺、胰腺分泌的激素及其功能。
5.下丘脑-腺垂体-靶腺轴的调控方式、负反馈调节机制。
五．感受器
1．味觉和嗅觉：味蕾的分布与功能；味觉和嗅觉的传导途径。
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一、分配定律
➢ 假设有两种互不混溶的溶剂S和M，将A物质溶于一
定量的S溶剂中，再加入一定量的M溶剂
➢ A物质在两相中相互扩散
➢ A物质在两相中达到了平衡(在同一时间内，进出两
相的A物质的分子数完全相等)时，其分配系数为常数
➢ 分配定律表明：
CAS CAM
=
K
❖ 一定的条件下，一定的物质其K值不变
➢1厘米的层析柱最少有50个理论塔板，那么， 在一根20厘米的层析柱上最少可以进行1000 次分配。
6. 蛋白质的检测和鉴定
光谱学特性 210 nm
280 nm
电泳检测 SDS-PAGE IEF
分子量测定 凝胶过滤层析 沉降平衡超速离心
动态弹性光散射 孔径梯度电泳 质谱
氨基酸序列测定
用抗体检测蛋白质 蛋白质免疫印迹
基因工程表 达重组蛋白
捕获相应蛋白质
二、经典的细胞蛋白质分离纯化流程：
清洗组织或细胞 裂解细胞
离心除去膜组分等获得可溶性蛋白质 离心、层析、电泳等进一步纯化 获取产物蛋白
1. 细胞的破碎
各种组织和细胞的常用破碎方法
细胞破碎方法
旋刀式匀浆 手动式匀浆 高压匀浆 研磨 高速珠磨 酶溶 去垢剂渗透 有机溶剂渗透 超声破碎 低渗裂解 冻融裂解
Analysis for SDS-PAGE electrophoresis
第五节
蛋白质的免疫印迹分析
印迹技术 (blotting)是指将存在于凝胶中 的生物大分子转移（印迹）于或直接放在 固定化介质上并加以检测分析的技术
1975年，Edwen Southern提出了分子印 迹(渍)的概念
目前这种技术已被广泛用于DNA、RNA 和蛋白质的检测
SDS作用：与蛋白牢固结合，当其浓度大 于1 mmol/L 时，SDS与蛋白质的结合比例为 1.4g SDS/1g蛋白质，由于十二烷基硫酸根带 负电荷，使得样品中各种蛋白质与SDS形成 的SDS-蛋白质复合物都带有相同密度的负电 荷，掩盖了蛋白质分子间天然的电荷差异
SDS-蛋白质复合物分子构型也几乎相同(雪茄 烟形的长椭圆棒状的复合物)，而且具有相同的 荷质比，因此在SDS-PAGE中，SDS-蛋白质复 合物的电泳迁移率只与其分子量有关，而不再 受所带电荷及分子形状的影响，且在一定条件 下，迁移率与分子量呈对数线性关系
4. 不连续系统原理概要 在不连续电泳系统中，含有三种离子，两
种不同孔径的凝胶，两种或两种以上不同pH 的缓冲溶液
所谓不连续就是指凝胶浓度不一样，缓冲 液离子成分及pH不一样
在不连续电泳系统中，有三种物理效应，即 样品的浓缩效应、分子筛效应及电荷效应
由于这三种物理效应，使样品分离效果好， 分辨率高
1. 盐析 (salting out) 2. 离子交换层析 3. 凝胶过滤层析 4. 亲和层析
层析的基本理论
1906年 M.Tswett Adsorption Chromatography 1941年 Martin and Synge Partition Chromatography
Plate theory Rate theory
组织种类
大多数动、植物组织 柔软的动物组织 细菌、酵母、植物细胞 细菌、植物细胞 细胞混悬液 细菌、酵母 组织培养细胞 细菌、酵母 细胞混悬液 红细胞、细菌 培养细胞
2. 去污剂处理溶解膜蛋白
去污剂为双极性(amphipathic)脂类分子， 可在水中溶解。通常由线性或带有分枝的碳氢 化合物尾部和结构各不相同的亲水性头部组成
用于核酸
电转移示意图
电转移装置
4. 靶蛋白的免疫学检测
➢ 封闭
— 对转移膜上的潜在结合位点进行封 闭 ，防止抗体非特异性结合在膜上， 降低背景颜色
BSA、脱脂奶粉
➢ 与第二抗体反应
第二抗体一般是针对第一抗体的免疫球蛋 白，可用同位素或非同位素物质进行标记
酶标抗体常用酶： 碱性磷酸酶( alkaline phosphatase，AKP ) 辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，
Co-IP工作示意图
Co-immunoprecipitation
Y Y
binding
wash
elution
利用western blot 确定捕获蛋白
通过质谱确定捕获的蛋白
蛋白质的研究方法
• 第一节 蛋白质提取
目的蛋白研究基本流程
分离纯化蛋白质 测定蛋白质分子质量
蛋白质结构分析 蛋白质生物学活性分析
探索结构与功能的关系
一、蛋白质样品的提取
目的蛋白的获取
直接从生物 体内获取
基因组测序 基因组测序进行推导
获取部分肽段氨基酸序列 获取蛋白质的编 码序列 (cDNA) 采用免疫学方法获取相关抗体
免疫共沉淀
一、SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子量 1. 不连续系统原理 2. SDS-PAGE凝胶的制备
制备分离胶 制备浓缩胶 装板 加样 电泳 卸板并进行凝胶染色
3. SDS-PAGE基本原理
➢ 影响迁移率的因素
➢ SDS 十二烷基硫酸钠 (Sodium Dodecyl Sulfate) 十二烷基磺酸钠 (Sodium Dodecyl Sulfonate )
HRP)
胶体金标记、125I标记标记
➢ 显色
— AKP可催化底物5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸 (bromochloroindolyl phosphate，BCIP)与氮蓝四唑 (niro-blue tetrazolium，NBT)发生反应，产生深蓝 色化合物，显示出蛋白质所在的位置。
— HRP可催化底物显色生成棕色化合物，显 示出蛋白质所在的位置
— HRP可催化底物W发a出tc荧h 光pr，o显ce示du出r蛋e 白质
所在的位置
四、免疫印迹注意事项
➢ SDS-PAGE凝胶的浓度 ➢ 膜的选择 ➢ 电转移（方向、电流、转移效率） ➢ 充分封闭和洗膜 ➢ 抗体的使用（稀释比例、分装） ➢ 免疫检测（显色）
免疫共沉淀 （Co-Immunoprecipitation）
印迹技术的类别及应用
➢ DNA印迹技术 (Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析
➢ RNA印迹技术 (Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析
➢ 蛋白质的印迹分析 (Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究 由于蛋白质常用抗体来检测，因此也被称为 免疫印迹技术 (immunoblotting)
➢ 细胞内有许多种还原成分，一旦细胞破碎 由于和氧的接触以及稀释作用而使抗氧化 成分减少，导致许多蛋白质被氧化而失去活 性，如巯基蛋白
常用的还原剂 抗坏血酸 巯基乙醇(mercaptoethanol) 二硫苏糖醇(dithiothreitol, DTT)
➢ 蛋白质的环境因素
表面效应 温度 储存
4. 离心去除细胞碎片 5. 目标蛋白的纯化
❖ 条件改变其K值随之改变
❖ K值大于1，物质在S相中的浓度大于其在M相中浓度
二、分配层析的机理
假设有两种物质，在一定的条件下，它们的分配 系数K不同，则通过一根分配层析柱可以将它们分离。 为了便于讨论，我们做如下几个假设：
（1）层析柱可分成许多层， M是流动相， S是固定
相，M和S是互不混溶
（2）分配层析柱中，每一层左右相通，层与层之间 互不相通，也就是说在层析柱中只有横向扩散而无纵 向扩散
A和B物质在层析柱中
1. 分配10次；2. 分配20次；3.分配30次
理论曲线和实际洗脱曲线是否相符？
二者之间总是存在着一定的偏差，这是因为： 层析柱中总是或多或少地存在着纵向扩散 层析过程不可能在绝对分配平衡的情况下进行
因此，通常实际的洗脱曲线都比理论曲线低而宽
一根分配层析柱上到底能进行多少次分配？
2. 蛋白的相互作用是在自然状态下进行的， 可以避免人为的影响；
3. 可以分离得到天然状态的相互作用蛋白 复合物。
缺点
1. 可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质 －蛋白质相互作用
2. 两种蛋白质的结合可能不是直接结合， 而可能有第三者在中间起桥梁作用；
3. 如用western blot检验，必须在实验前 预测目的蛋白是什么，以选择最后检测 的抗体，若预测不正确，实验就得不到 结果。
原理
原理：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细 胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被 保留了下来。如果用A蛋白质的抗体免疫沉淀， 那么与A在体内结合的B蛋白质也能沉淀下来。 这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内 结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用 靶蛋白。
优点
1. 相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的， 处于天然状态；
实验的关键
1. 抗体的性质。抗体不同和抗原结合能力也不同，免染 能结合未必能用在IP反应。建议仔细检查抗体的说明 书，特别是多抗的特异性是问题。
2. 为防止蛋白的分解，修饰，溶解抗原的缓冲液必须加 蛋白酶抑制剂，低温下进行实验。
3. 考虑抗体/缓冲液的比例。抗体过少就不能检出抗原， 过多则就不能沉降在beads上，残存在上清。缓冲剂 太少则不能溶解抗原，过多则抗原被稀释。
SDS Triton X-100 NP-40 Tween-20
3. 蛋白质分子的稳定
目的：保证蛋白质的生物活性
➢ 在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑 制剂以防止蛋白水解
PMSF (35 ug/ml) EDTA (0.3 mg/ml) Pepstatin (0.7 ug/ml) Leupeptin (0.5 ug/ml) Aprotinin(5 00unit/ml)
分配层析柱理论塔板示意图
（3）在分配层析柱中，溶质在两相中达到分配平 衡的速度很快，并且A物质的存在不影响B物质的 分配性质，反之亦然