最新真菌药敏试验方法比较教学讲义PPT课件
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药敏试验说课教案PPT课件
药敏试验说课教案ppt课件
目录 Contents
• 药敏试验概述 • 药敏试验的步骤 • 药敏试验的临床应用 • 药敏试验的注意事项 • 药敏试验的发展趋势
01
药敏试验概述
药敏试验的定义
药敏试验
是一种检测细菌对抗生素敏感性的试 验，用于指导临床医生选择合适的抗 生素进行治疗。
定义补充
药敏试验通过测量细菌在接触不同浓 度的抗生素时生长情况的变化，来判 断细菌对抗生素的敏感程度，从而帮 助医生选择最有效的抗生素。
接种方法
将制备好的菌液均匀涂布在培养基上， 或使用定量接种环接种。
培养
培养条件
根据不同病原体设定适宜的培养 温度和时间。
培养观察
定期观察培养基上是否有细菌生长， 以及生长情况是否符合预期。
防止污染
确保培养过程的无菌操作，避免杂 菌污染。
结果解读
结果判定
根据培养结果，判断细菌是否对 某种药物敏感或耐药。
耐药性的监测
总结词
药敏试验有助于监测病原微生物的耐 药性变化，为抗生素的更新换代和临 床用药提供依据。
详细描述
随着病原微生物耐药性的不断增加， 药敏试验能够监测耐药性的发展趋势， 及时发现新的耐药菌株，为临床用药 提供更新换代的选择。
治疗效果的评估
总结词
通过药敏试验可以评估治疗效果，及时调整治疗方案，提高治愈率。
THANKS
结果记录
及时、准确地记录实验结果， 为后续数据处理和分析提供依
据。
实验后的数据处理与分析
数据处理
对实验数据进行整理、分类和 统计，确保数据准确无误。
结果分析
根据实验目的和要求，对实验 结果进行分析，得出结论。
结果报告
目录 Contents
• 药敏试验概述 • 药敏试验的步骤 • 药敏试验的临床应用 • 药敏试验的注意事项 • 药敏试验的发展趋势
01
药敏试验概述
药敏试验的定义
药敏试验
是一种检测细菌对抗生素敏感性的试 验，用于指导临床医生选择合适的抗 生素进行治疗。
定义补充
药敏试验通过测量细菌在接触不同浓 度的抗生素时生长情况的变化，来判 断细菌对抗生素的敏感程度，从而帮 助医生选择最有效的抗生素。
接种方法
将制备好的菌液均匀涂布在培养基上， 或使用定量接种环接种。
培养
培养条件
根据不同病原体设定适宜的培养 温度和时间。
培养观察
定期观察培养基上是否有细菌生长， 以及生长情况是否符合预期。
防止污染
确保培养过程的无菌操作，避免杂 菌污染。
结果解读
结果判定
根据培养结果，判断细菌是否对 某种药物敏感或耐药。
耐药性的监测
总结词
药敏试验有助于监测病原微生物的耐 药性变化，为抗生素的更新换代和临 床用药提供依据。
详细描述
随着病原微生物耐药性的不断增加， 药敏试验能够监测耐药性的发展趋势， 及时发现新的耐药菌株，为临床用药 提供更新换代的选择。
治疗效果的评估
总结词
通过药敏试验可以评估治疗效果，及时调整治疗方案，提高治愈率。
THANKS
结果记录
及时、准确地记录实验结果， 为后续数据处理和分析提供依
据。
实验后的数据处理与分析
数据处理
对实验数据进行整理、分类和 统计，确保数据准确无误。
结果分析
根据实验目的和要求，对实验 结果进行分析，得出结论。
结果报告
药敏试验科普ppt课件
药敏试验
2016.6.14
目录
一、什么是药敏试验 二、药敏试验怎么做 三、药敏试验的结果代表什么 四、常见致病菌的药敏结果
一、什么是药敏试验
药敏试验的概念
通过模拟体内环境条件，测试分离自病 人体内感染部位的病原菌对常用抗生素 的敏感性，即抗生素对目标细菌的抑制 能力，从而预测抗生素治疗效果的一种 体外试验方法。
02
常规经验治疗 效果不佳或又 较高失败风险 时
03
对感染菌的耐 药性无法估计 时
04
需要了解微生 物耐药性变迁 时
二、药敏试验怎么做
纸片扩散法
原理：
✓ 一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在涂布一定浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散 到纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠近纸片的浓度越高，反之越低。
药敏试验的目的
查出耐药，减少治疗错误，便于医生选择个体 化疗方案、节省费用
01
进行耐药监测，为医院感染控制部门提供防治 依据，为经验用药提供可靠依据。
02
利用耐药监测结果控制抗菌药物应用，减少耐 药菌株的出现，延长新药使用寿命。
03
为新药的研究和评估提供有价值的信息。
04
药敏试验什么时候做
01
分离菌是感染 菌而不是定植 菌或污染菌
常见致病菌的药敏结果
肠球菌属
✓ 药敏结果：青霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（R）；高浓度氨基糖苷类（S） ；高浓度氨基糖苷类（R） ✓ 抗生素选择： • 青霉素（S）/氨苄青霉素（S）：轻症感染可选择青霉素、氨苄青霉素；重症感染可选择高剂量青霉素或氨苄青霉素联合，
氨基糖苷类，亚胺培南。 • 青霉素（R）万古霉素（S）：其严重感染可以选择万古霉素联合氨基糖苷类抗生素。 • 青霉素（R）万古霉素（R）：可以选择新生霉素联合庆大霉素、氟喹诺酮类治疗；或利福平、四环素、氯霉素也可作为联
2016.6.14
目录
一、什么是药敏试验 二、药敏试验怎么做 三、药敏试验的结果代表什么 四、常见致病菌的药敏结果
一、什么是药敏试验
药敏试验的概念
通过模拟体内环境条件，测试分离自病 人体内感染部位的病原菌对常用抗生素 的敏感性，即抗生素对目标细菌的抑制 能力，从而预测抗生素治疗效果的一种 体外试验方法。
02
常规经验治疗 效果不佳或又 较高失败风险 时
03
对感染菌的耐 药性无法估计 时
04
需要了解微生 物耐药性变迁 时
二、药敏试验怎么做
纸片扩散法
原理：
✓ 一定药物含量的碟形抗生素纸片贴在涂布一定浓度菌液的琼脂上，过夜培养后抗生素扩散 到纸片周围的琼脂中，形成一定浓度区域，越靠近纸片的浓度越高，反之越低。
药敏试验的目的
查出耐药，减少治疗错误，便于医生选择个体 化疗方案、节省费用
01
进行耐药监测，为医院感染控制部门提供防治 依据，为经验用药提供可靠依据。
02
利用耐药监测结果控制抗菌药物应用，减少耐 药菌株的出现，延长新药使用寿命。
03
为新药的研究和评估提供有价值的信息。
04
药敏试验什么时候做
01
分离菌是感染 菌而不是定植 菌或污染菌
常见致病菌的药敏结果
肠球菌属
✓ 药敏结果：青霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（S）；青霉素（R）万古霉素（R）；高浓度氨基糖苷类（S） ；高浓度氨基糖苷类（R） ✓ 抗生素选择： • 青霉素（S）/氨苄青霉素（S）：轻症感染可选择青霉素、氨苄青霉素；重症感染可选择高剂量青霉素或氨苄青霉素联合，
氨基糖苷类，亚胺培南。 • 青霉素（R）万古霉素（S）：其严重感染可以选择万古霉素联合氨基糖苷类抗生素。 • 青霉素（R）万古霉素（R）：可以选择新生霉素联合庆大霉素、氟喹诺酮类治疗；或利福平、四环素、氯霉素也可作为联
药敏试验_PPT幻灯片
因此，在使用抗菌药物的过程中，必须加强细菌对 抗菌药物敏感性的实验室监测，为临床上合理使用 抗菌药物提供试验依据。而细菌对抗菌药物的敏感 试验，就是对抗菌药物进行实验室监测的主要手段 之一。
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
二、 几个概念
1.敏感（sensitive，S）:某菌株能被某抗菌药物常用剂 量或途径可达到的治疗浓度杀死或抑制称为敏感。 （敏感度的分级：三个程度，敏感、中敏、耐药）
马，兔等）
＊嗜血杆菌属，100ml MHA＋fildes增菌液5ml(含脱纤维羊血， 胃蛋白酶等)
培养基厚度：4mm(9cm平板倾25 ml；15cm平 板倾70 ml)
7. “抑菌商数”（Inhibitory Quotient，简称 IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液 中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌 浓度所得的商数。即：
局部组织或体液中的药物浓度
IQ =
MIC
抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之， 抑菌商数越小，抑菌效果越差。
三、血药浓度与MIC之间的关系
从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是 敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓 度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所 能达到的血药浓度）与该抗菌药物对细菌 的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定
血药浓度与MIC之间的关系
中毒浓度
致死量 最小中毒量
极量
R
治疗安
全范围
治疗浓度
（常用剂量）
I
S 最小有效量 无效浓度
但是药物在局部组织和组织液中的浓度， 往往只有血清浓度的1/2～1/10，故在治疗 局部组织感染时，仅仅以MIC小于血清治 疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差， 应该以MIC小于血清治疗浓度的2～10倍， 才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织
《药敏试验资料》幻灯片
亚胺培南，替卡，哌拉
三级
氨曲南，头孢他啶
头孢曲松
卡那，奈替，妥布
氯霉素，奈替
四环素，氯霉素
常规测试并报告的药物分组(2)
一级 二级
三级
葡萄球菌 苯唑，青霉素 红霉素类
克林，万古 氯霉素
肠球菌 青霉素，氨苄 万古霉素
庆大
常规测流试感并嗜血报杆告菌的药肺物炎分链组球菌(3)
一级 素
氨苄，青霉素
青霉素，红霉
• 药效学药：代药物动对力机学体的和作药用效学
• 时间依赖型〔％T>MIC〕：β－内酰胺 类，大环内酯类
• 浓度依赖型〔AUC/MIC比率〕：AGS, FQ
• 这些参数可用于计算具有最正确药效的 给药方案
MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC R I
S
耐药
中介
敏感
D1
d2 抑菌圈直径（mm)
纸片扩散法－标准化
• NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Committee for Clinical Laboratory Standards)
• 每年修订更改
– 包括质控 – 新药的判定标准 – 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规
• 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控
TMP/SMZ
TMP/SMZ
二级 头孢肤肟，噻肟 氧氟，四环素
他啶，氯霉素
万古霉素
三级 平
阿奇，头孢克罗 氯霉素，利福
环丙，亚胺培南 利福平，四环 素
预报用药(一)
测试药 性 苯唑西林 四环素
红霉素 克林霉素
菌名
葡萄球菌 所有〔除葡 萄球菌和不 动杆菌〕 G＋球菌 所有
《实验三：药敏》课件
药敏实验方法
介绍药敏实验的常用方法，如纸片扩 散法、稀释法、E试验等，并比较各种 方法的优缺点。
实验步骤
实验前准备
介绍实验前的准备工作，包括实验器 材的准备、试剂配制、菌种复苏等。
实验操作步骤
详细介绍药敏实验的操作步骤，包括 接种细菌、药物敏感性试验、结果观 察和记录等。
数据分析与报告撰写
讲解如何对实验数据进行处理和分析 ，以及如何撰写规范的实验报告。
了解误差范围，判断实验结果的 可靠性。
结果分析与应用
分析耐药机制
分析耐药菌株的耐药机制，为临 床用药提供参考。
指导临床用药
根据药敏结果，选择敏感的药物用 于临床治疗。
监测耐药趋势
监测细菌耐药性的变化趋势，为抗 菌药物的研发和合理使用提供依据 。
CHAPTER 05
实验总结与反思
实验收获与体会
知识理解深化
实验室安全与注意事项
强调实验室安全的重要性，提出在实 验过程中应注意的事项和突发情况的 应急处理措施。
CHAPTER 02
实验材料
实验器材
01
培养皿
用于培养细菌，观察其生长情 况。
02
接种环
用于转移细菌。
03
04
显微镜
用于观察细菌形态。
药敏试纸
用于测试细菌对不同药物的敏 感性。
实验试剂
生理盐水
培养实验素养
在实验过程中，培养学生 的实验素养，包括实验操 作规范、实验记录、实验 结果分析等方面的能力。
实验原理
微生物药敏实验原理
药敏实验结果解读
介绍微生物药敏实验的基本原理，包 括药物作用机制、细菌对药物的敏感 性和耐药性机制等。
讲解如何正确解读药敏实验结果，包 括抑菌圈大小、MIC值等指标的测量 和意义。
药敏试验报告的解读PPT课件
48
（二）微生物检验标本采集和处理
1、血液及骨髓标本
最常用的方法为血液增菌培养法。成人每瓶需8-10ML,儿 童每瓶需1-3ML。另外，脑脊液和胸腹水也可用儿童血液 培养瓶增菌，采集量同血液。 （1）为了提高阳性率，应在抗生素治疗前，病人寒战或高 热时严格无菌静脉采血后注入血培养瓶。 （2）于已用抗生素不能停用时，可于48小时内分别于下次 用抗生素之前，采取3份血液标本(要求双管双侧）立即送 检，如不能立即送检，应放置室温保存，但不能超过8-9 小时。 （3）必要时可取骨髓1-2ML，无菌注入血培养瓶中送检。 注意：应严格无菌操作避免污染。一般病人在发病初期1-2 天或发热高峰时采集血液保本。
– 细菌对A组抗生素耐药 – 病人对A组抗生素过敏 – 严重感染或多部位、多种细菌混合感染 – 控制传染病流行
--C组：备选抗生素，在下列情况下使用
– 对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染 – 对不常见菌感染的治疗 – 控制传染病的流行
--U组：包含某些仅用于或首选治疗泌尿道感染的抗 菌药物
26
与临床沟通中常见问题
）、美罗培南天然耐药。
28
细菌的天然耐药
• ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药 • ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然
耐药。
• ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 • ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 • ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿
莫西林棒酸、复方新诺明、头孢1代、头孢2代 天然耐药。
下面就以上几种情况分别解读
9
10
11
12
铜绿假单胞菌
13
产ESBL大 肠埃希菌
14
15
16
17
18
（二）微生物检验标本采集和处理
1、血液及骨髓标本
最常用的方法为血液增菌培养法。成人每瓶需8-10ML,儿 童每瓶需1-3ML。另外，脑脊液和胸腹水也可用儿童血液 培养瓶增菌，采集量同血液。 （1）为了提高阳性率，应在抗生素治疗前，病人寒战或高 热时严格无菌静脉采血后注入血培养瓶。 （2）于已用抗生素不能停用时，可于48小时内分别于下次 用抗生素之前，采取3份血液标本(要求双管双侧）立即送 检，如不能立即送检，应放置室温保存，但不能超过8-9 小时。 （3）必要时可取骨髓1-2ML，无菌注入血培养瓶中送检。 注意：应严格无菌操作避免污染。一般病人在发病初期1-2 天或发热高峰时采集血液保本。
– 细菌对A组抗生素耐药 – 病人对A组抗生素过敏 – 严重感染或多部位、多种细菌混合感染 – 控制传染病流行
--C组：备选抗生素，在下列情况下使用
– 对一个或多个首选药耐药的地区流行株感染 – 对不常见菌感染的治疗 – 控制传染病的流行
--U组：包含某些仅用于或首选治疗泌尿道感染的抗 菌药物
26
与临床沟通中常见问题
）、美罗培南天然耐药。
28
细菌的天然耐药
• ⑶肺炎链球菌：对氨基糖苷类抗生素天然耐药 • ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌：对头孢西丁天然
耐药。
• ⑸克柔念珠菌：对氟康唑天然耐药。 • ⑹肺炎克雷伯菌：对氨苄西林天然耐药。 • ⑺铜绿假单胞菌：对氨苄西林、阿莫西林、阿
莫西林棒酸、复方新诺明、头孢1代、头孢2代 天然耐药。
下面就以上几种情况分别解读
9
10
11
12
铜绿假单胞菌
13
产ESBL大 肠埃希菌
14
15
16
17
18
抗菌药物敏感性试验(药敏试验)PPT课件
治疗对基本药物过敏的患者
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，
抗菌药物敏感性试验(药敏 试验)
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
治疗少见菌的感染
流行病学调查为目的向感染控制部门报告
试验方法—纸片扩散法
改良Kirby-Bauer法(K-B法)
试验材料
培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，
抗菌药物敏感性试验(药敏 试验)
目的
指导临床医生针对各类临床感染患者选择 最佳抗菌药物
一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐 药的微生物流行病学资料
根据细菌对药物敏感谱进行菌种鉴定
药敏试验原理
纸片扩散法
把含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测 试细菌的琼脂平板上
纸片中药物吸收琼脂水分溶解后通过弥散 作用形成递减的浓度梯度
纸片周围一定距离范围内试验菌生长受抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌环。
抑菌环大小反映测试菌对测定药物的敏感 程度
抑菌环大小除与细菌的敏感性有关外还与 其它诸因素相关。
稀释法
定量测定抗菌药物活性 抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合稀释后
种入试验细菌，孵育过夜。 以能抑制细菌生长的最低浓度为最低抑菌
变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物 的抑菌环内，故在明显抑菌环内有薄膜状 爬行生长可以忽略。
加贴纸片
将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干 燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸 收。
用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻 压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距 ≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。 直径90mm的平板最好贴6张。
15min内将平板倒置放温箱孵育。
注意
纸片一旦贴下就不可再挪动位置，因纸 片中的药物已扩散到琼脂中。 需要时应在适当的地方贴新纸片
药敏试验PPT资料PPT课件
在感染初期或症状明显时 采集样本，以提高检出率。
采集部位
选择病原体含量较高的部 位进行采集，如痰液宜选 自肺部。
样本处理
样本保存
样本量
采集后的样本应尽快送至实验室进行 检测，如不能及时送检，应妥善保存。
保证足够的样本量，以满足后续实验 需求。
样本处理方法
对采集的样本进行适当的处理，如离 心、过滤等，以去除杂质和无关细胞。
结果判断
根据病原体的生长情况，判断其对不同药物的敏 感程度。
报告发布
将实验结果及时报告给临床医生，为治疗提供参 考依据。
04
药敏试验的应用
抗生素选择
抗生素选择
药敏试验能够确定病原体对各种 抗生素的敏感程度，帮助医生选 择最有效的抗生素进行治疗，提 高治愈率并减少耐药性的产生。
耐药性检测
通过药敏试验可以检测病原体对 抗生素的耐药性，了解耐药机制 和传播情况，为制定防控策略提 供科学依据。
在琼脂平板上接种细菌，然后滴 加抗生素溶液，观察抑菌圈的大 小，判断细菌对药物的敏感性。
稀释法
将不同浓度的抗生素与细菌混合培 养，观察细菌的生长情况，确定药 物的最小抑菌浓度（MIC）。
纸片扩散法
将含有一定量抗生素的纸片贴在琼 脂平板上，观察纸片周围抑菌圈的 大小，判断细菌对药物的敏感性。
02
药敏试验的种类
详细描述
E试验法是一种新型的药敏试验方法，通过在药敏试纸上施加连续变化的压力，使药物浓度与细菌生 长曲线呈线性关系，从而快速准确地判断细菌对药物的敏感程度。该方法操作简便，结果准确可靠。
03
药敏试验的步骤
样本采集
采集方法
根据感染部位和病原体类 型，选择合适的采集方法， 如咽拭子、痰液、尿液等。
采集部位
选择病原体含量较高的部 位进行采集，如痰液宜选 自肺部。
样本处理
样本保存
样本量
采集后的样本应尽快送至实验室进行 检测，如不能及时送检，应妥善保存。
保证足够的样本量，以满足后续实验 需求。
样本处理方法
对采集的样本进行适当的处理，如离 心、过滤等，以去除杂质和无关细胞。
结果判断
根据病原体的生长情况，判断其对不同药物的敏 感程度。
报告发布
将实验结果及时报告给临床医生，为治疗提供参 考依据。
04
药敏试验的应用
抗生素选择
抗生素选择
药敏试验能够确定病原体对各种 抗生素的敏感程度，帮助医生选 择最有效的抗生素进行治疗，提 高治愈率并减少耐药性的产生。
耐药性检测
通过药敏试验可以检测病原体对 抗生素的耐药性，了解耐药机制 和传播情况，为制定防控策略提 供科学依据。
在琼脂平板上接种细菌，然后滴 加抗生素溶液，观察抑菌圈的大 小，判断细菌对药物的敏感性。
稀释法
将不同浓度的抗生素与细菌混合培 养，观察细菌的生长情况，确定药 物的最小抑菌浓度（MIC）。
纸片扩散法
将含有一定量抗生素的纸片贴在琼 脂平板上，观察纸片周围抑菌圈的 大小，判断细菌对药物的敏感性。
02
药敏试验的种类
详细描述
E试验法是一种新型的药敏试验方法，通过在药敏试纸上施加连续变化的压力，使药物浓度与细菌生 长曲线呈线性关系，从而快速准确地判断细菌对药物的敏感程度。该方法操作简便，结果准确可靠。
03
药敏试验的步骤
样本采集
采集方法
根据感染部位和病原体类 型，选择合适的采集方法， 如咽拭子、痰液、尿液等。
药敏试验PPT资料
肠杆菌科 一级 二级 南 头孢肤肟，头霉 替卡/克 噻肟，曲松，环丙 亚胺培南，替卡，哌拉 氨曲南，头孢他啶 卡那，奈替，妥布 四环素，氯霉素 妥布，磺胺 头孢曲松 氯霉素，奈替 环丙，亚胺培南， 氨苄 唑林，庆大 阿米卡星 氨苄/舒，阿莫/克 绿脓和非肠杆菌科 头孢他啶 庆大，替卡，哌拉 阿米卡星 吡肟，哌酮，氨曲
纸片扩散法－影响因素
• • • • • • MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
纸片扩散法－标准化
• NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Committee for Clinical Laboratory Standards) • 每年修订更改
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(一)
• • • • 每个系统特有的局限性 （快生长菌〕 培养基（成分、厚度、pH、离子浓度） 各种材料的正确保存 (纸片－20℃) 操作步骤
– 纯菌、35℃、16－28h – 葡萄球菌、肠球菌 24h
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(二)
• 体内、体外试验的不一致性 • 某些菌测某些药，结果有误
– 包括质控 – 新药的判定标准 – 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规 NCCLS的法规
• 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控 • 规定常规测试报告的抗生素 • 不同的药判定标准不同 • 不同的菌判定标准也不同
常规测试并报告的药物分组(1) 常规测试并报告的药物分组(1)
Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213–217
24-hr AUC/MIC 24Correlation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility) of an organism
纸片扩散法－影响因素
• • • • • • MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
纸片扩散法－标准化
• NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Committee for Clinical Laboratory Standards) • 每年修订更改
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(一)
• • • • 每个系统特有的局限性 （快生长菌〕 培养基（成分、厚度、pH、离子浓度） 各种材料的正确保存 (纸片－20℃) 操作步骤
– 纯菌、35℃、16－28h – 葡萄球菌、肠球菌 24h
药敏试验的错误来源( 药敏试验的错误来源(二)
• 体内、体外试验的不一致性 • 某些菌测某些药，结果有误
– 包括质控 – 新药的判定标准 – 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规 NCCLS的法规
• 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控 • 规定常规测试报告的抗生素 • 不同的药判定标准不同 • 不同的菌判定标准也不同
常规测试并报告的药物分组(1) 常规测试并报告的药物分组(1)
Craig. Diagn Microbiol Infect Dis 1996; 25:213–217
24-hr AUC/MIC 24Correlation of serum pharmacokinetics with MIC (susceptibility) of an organism
药敏试验方法简介 ppt课件
2021/3/30
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5. 35℃孵育16～24小时，量 取抑菌圈直径；
6. 根据抑菌环的直径，按照 CLSI标准判读，报告敏感、 中介、耐药。
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24
CLSI对K-B法的标准化规定 纸片药物含量、细菌接种浓度、培养基、
平皿厚度、孵育时间、环境、判定标准、 质控方法等；常规测试、报告的抗生素。
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Phoenix工作流程
将肉汤倒入检测板，盖盖子。检测板
已准备好，可以上机检测。
巧 妙 的 重 力 加 样 技 术
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Phoenix工作流程
扫描板条，输入资料
2021/3/30
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Phoenix工作流程
将检测板放入仪器（随意位置）
2021/3/30
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配套试剂
u 仅需区别革兰氏染色即可选板 u 板条种类齐全：
104 cfu/ml
mg/ml 4 2 1 0.5 0.25 0.12 0
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微量肉汤稀释法
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2不能有气泡产生
静置培养
培养温度；35℃
气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置大 气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌置微 需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2 培养时间：18小时
A6 DGUA B6 LPYR C6 LYALD
A7 DMLB B7 LPROB C7 GUGAH
A8 LARA B8 LARGH C8 GLPRB
A9 MBGU B9 FLR_CTL C9 FLR_CTL
A10 NGA B10 LPHET C10 GLYB
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。37℃。37℃
64 32 16 8 4 2 1 .5 .25 .125 ＋ －
35 ℃
新型隐球菌72小时 ， 其余菌株 48小时读取MIC结果
200ul菌悬液 200ulRPMI汤
酵母菌的NCCLS M27-A各药物折点
粘膜及系统性感染： 氟康唑（除克柔念珠菌）
粘膜感染： 伊曲康唑
粘膜及系统性感染： 5-氟嘧啶
31-42 28-37
－
16-25
ROSCO纸片扩散法
ROSCO纸片扩散法：
1. 克柔念珠菌： 0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀释
菌液为5×105CFU/ml
2. 隐球菌属：
1 麦氏浊度
3. 其它酵母菌： 0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释
菌液为2.5×106CFU/ml
将稀释好的菌液涂布在改良的SHADOMY（ PH7.0）培 养基上
其它操作同细菌。
Rosco纸片扩散法药敏结果判定
读取抑菌环直径近似到mm 在大约80%抑制区为测量边界 在抑菌环内个别细小或中等大小的菌落， <15可
忽略不计
两种纸片扩散法的比较
Rosco纸片扩散法 检测菌种 念珠菌属，隐球菌属
NCCLS纸片扩散法 检测菌种 念珠菌属，隐球菌属
培养基 改良SHADOMY琼脂，PH7.0
常量稀释法：用RPMI1640液体稀释2000倍
接种浓度约为0.5~2.5×103CFU/ml
微量稀释法：用RPMI1640液体稀释1000倍
接种浓度约为1～5×103CFU/ml
E-test法和NCCLS纸片扩散法：用菌液浊度为0.5麦氏单位。
Rosco纸片扩散法：
1. 念珠菌：
0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀(1~5×105CFU/ml)
培养基 Mueller-Hinton 琼脂中补充2% 的 葡萄糖和0.5μg/ml的美蓝
对于深部的真菌感染，抗真菌药物敏感性试验同临 床治疗的相关性还有待进一步证实
体外敏感试验没有考虑到真菌对抗真菌药物在体内 的动力学和复杂的生物学作用
菌液制备
将受试菌在沙保罗培养基上转种，以保证其纯度和活性。用0.85%的盐 水制成酵母菌悬液，调整其浊度达到0.5麦氏比浊标准（约为 1~5×106CFU/ml）。
缺点：1.价格太高 每片40-50元 2. 吡咯类MIC终点不好确定
酵母菌纸片扩散法敏感试验
NCCLS M44-P. 2003
培养基： Mueller-Hinton琼脂
补充 2％
Glucose
0.5ug/ml Methylene blue dye
PH7.2-7.4
优点：有较好的重复性和稳定性
操作简便，价廉
酵母菌纸片扩散法敏感试验
NCCLS M44-P. 2003
氟康唑对标准菌株 24h抑菌环直径（mm)的质控允许范围
标准菌株
氟康唑25ug 沃尔康唑1ug
白念珠菌 ATCC90028 近平滑念珠菌 ATCC22019 热带念珠菌 ATCC750 克柔念珠菌 ATCC6258
28-39
22-33 26-37 －
酵母菌纸片扩散法敏感试验
NCCLS M44-P. 2003 氟康唑解释标准和相应的最小抑菌浓度
抑菌环直径 （mm)
MIC （ug/ml)
敏感（S)
>=19
<=8
剂量依赖性敏感 （SDD) 耐药（R)
15-18 <=14
16-32 >=64
S＝Susceptible SDD=Susceptible－Dose Dependent R=Resistant
4
2 1 0.5 .25 .125 ＋
－
前10管： 0.2ml氟康唑＋1.8ml菌液
念珠菌属 35 ℃孵育48小时 新型隐球菌 72小时
读取MIC结果
2ml菌液 1.8ml1640
常量稀释法
药敏结果判定
氟康唑，伊曲康唑，两性霉素为100%抑制 其他唑类药物为80%抑制
（取0.2ml的生长对照菌液加入0.8mlRPMI液体培养基的菌液浓度）
2. 隐球菌属：
1.0麦氏浊度
3. 其它酵母菌： 0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释
常量肉汤法(M27-A)
先将氟康唑粉末溶于蒸馏水，然后用配制好的RPMI1640液倍比稀释， 使其起始浓度为640µg/ml, 终末浓度为1.25µg/ml，分装无菌洁净的 12mm×75mm试管：
64 32 16 8
质控株
克柔念珠菌ATCC 6258 近平滑念珠菌ATCC 22019 白念珠菌ATCC 90028 白念珠菌ATCC 24433
微量肉汤法
氟康唑的稀释方法同常量法，但起始浓度为2×常量法的 浓度（即128µg/ml ），终浓度为0.25µg/ml 。
氟康唑：1-10孔分别为 100ul 菌悬液：1-10孔分别为 100ul
敏感：
中介： 耐药：
敏感：
中介： 耐药：
敏感：
中介： 耐药：
≤ 8µg/ml
－ ≥64µg/ml
≤0.125µg/ml
－ ≥1µg/ml
≤4µg/ml
8~16µg/ml ≥32µg/ml
酵母菌E-test法
瑞典AB Biodisk MIC
优点：有较好的重复性和稳定性
E-test法
0.5麦氏比浊液 （约为1~5×106CFU/ml）。
菌悬液均匀涂布于药敏板上
35 ℃培养24小时读取结果
光滑念珠菌 新型隐球菌 等生长较慢的菌种需适当延长培高,且操作简便 E-test法得到的MIC值在某些菌种中要低于NCCLS
推荐的常量肉汤稀释法测得的MIC 20%浓度CO2的环境中，可使此方法的结果更真实
反映药物对致病菌的敏感性
真菌药敏试验方法比较
真菌药敏试验临床难以开展的原因
1.按照NCCLS推荐的稀释法,操作繁琐 2.有些药只能用于某种菌的抗菌活性测定 3.纸片法试验未得到NCCLS 认可 4.E试验价钱太贵 5.药敏孵育时间因菌种而不同
体外敏感试验与临床治疗相关性
真菌体外药敏试验结果与口咽部真菌感染结果相关 性好
缺点：目前只限氟康唑
NCCLS纸片扩散法
0.5麦氏比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。
菌悬液均匀涂布于药敏板上 步骤同细菌敏感试验操作一致， 35～37℃孵育18～24小时， 对于生长缓慢的菌株如新型隐球菌，菌液需 调至
1麦氏单位，孵育48小时， 光滑念珠菌也需孵育48小时读取抑菌环直径。