高效液相方法验证
高效液相色谱仪验证
中心化验室型高效液相色谱仪验证（一）验证方案（二）验证报告药业有限公司中心化验室型高效液相色谱仪验证方案（SOP-YZ-???）方案制定人：制定日期：方案审查人：审查日期：方案审核人：审核日期：方案批准人：批准日期：药业有限公司目录1、概述2、验证目的3、验证实施小组成员及有关责任4、验证文件5、合格标准6、验证方法和步骤7、验证结果分析和综合评价8、最终评价9、验证周期10、验证记录1、概述高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。
其中LC-2010和Agilent1100型为单泵型，LC-20AB型为双泵型高效液相色谱仪。
2、验证目的检查并确认高效液相色谱仪运行性能符合要求。
3、验证实施小组成员及有关责任验证实施小组组长???负责协调及异常情况的处理；操作员??????负责验证的具体操作工作；QA???负责监督实施本方案。
4、主要验证文件高效液相色谱法（SOP-ZL-???）、中华人民共和国国家计量检定规程液相色谱仪（JJG705-2002）、UV-VIS检测器SPD-20A/SPD-20AV说明书、溶液传输单元LC-20AB说明书、中华人民共和国药典2005年版二部、LC-2010A/2010C操作说明书安装手册和维修手册。
5、合格标准6、验证方法和步骤6.1验证方法整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。
验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。
高效液相色谱方法的验证
高效液相色谱方法的验证•方法验证的目的•方法验证的内容•方法验证的项目及测定方法方法验证的目的目的：证明采用的方法适合相应检测的要求。
方法验证是实验室针对特定方法的研究过程，通过设计方案，有步骤、系统地收集、处理实验数据，最终形成文件，以证明所用试验方法准确、灵敏、专属并重现。
同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。
方法验证的内容•准确度•精密度•专属性•检测限•定量限•线性和范围•耐用性准确度定义：方法测定结果与真实值或参考值的接近程度。
一般用回收率%表示。
1. 主成分含量测定原料药：对照品或方法比对2. 制剂、中药：标准加样回收杂质定量测定：加样回收（n³9）杂质对照品方法比对回收率C-A%=´B100%杂质与主成分的相对含量A:试验供试品中被测成分的量（通常为含量测定量的50%）B: 试验供试品中加入的对照品的量（通常为±20%）C:试验测定值精密度定义：在规定测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。
一般用偏差，相对偏差和相对标准偏差1. 重复性（n 9）³2. 中间精密度3. 重复性测定：HPLC方法的精密度测试，应从样品制备开始，设计3个浓度，分别平行制备3份，以测定含量计算相对标准偏差；或同一样品平行制备6份供试品，分别进样，以峰面积计算相对标准偏差。
同一份供试品连续进样6次，计算得到的相对标准偏差只能表征进样精密度，不能作为方法精密度。
专属性定义：在其它成分可能存在下，方法能正确测定出被测物的特性。
1. 鉴别反应2. 含量测定杂质测定测定：限量检查空白制剂，模拟复方加速破坏试样测试DAD峰纯度检查检测限和定量限检测限（LOD）：供试品中被测物能被检测出的最低量。
通常采用信噪比3:1或2:1定量限（LOQ）: 供试品中被测物能被定量测定的最低量。
通常采用信噪比10:1SN=hP hbaselinenoise测定：将一对照品储备溶液，逐步稀释，分别进样分析，计算相应色谱峰高h和平均基线噪音（hp）之比。
HPLC有关物质分析方法验证
HPLC有关物质分析方法验证HPLC（高效液相色谱）是一种常用的物质分析方法，广泛应用于药品、食品、环境等领域。
为了保证分析结果的准确性和可靠性，对HPLC方法进行验证是非常必要的。
HPLC方法验证包括了准确性、精密度、线性范围、灵敏度、特异性和系统适应性等方面的评估。
首先，准确性是衡量方法是否精确地测量目标物质含量的能力。
方法准确性的验证包括添加回收试验、标准品浓度重现性试验以及样品稀释后的测试。
通过添加已知浓度的目标物质到待测样品中，在不同浓度下测定回收率，可以评估方法的准确性。
其次，精密度是衡量方法在短期内进行重复实验的一致性。
精密度的验证包括了重复测定试验以及系统精密度试验。
通过重复测定同一样品多次，计算相对标准偏差，可以评估方法的精密度。
线性范围是指方法在一定浓度范围内的目标物质含量与测定结果之间的关系。
验证线性范围时，需要测试少量目标物质的浓度，以及相对较高的浓度，测定结果在一定限度内应与浓度成比例关系。
灵敏度是指方法在检测限下测定目标物质的能力。
灵敏度的验证包括了检测限试验和定量限试验。
检测限试验是通过在基质中添加多个不同浓度的目标物质溶液，确定出检测限。
定量限试验是通过在基质中添加不同浓度的目标物质溶液，确定出定量限。
特异性是指方法所测定的目标物质与其他干扰物之间的选择性。
特异性的验证包括了干扰物试验和选择性试验。
通过加入干扰物到目标物质溶液中，然后进行测定，确定干扰物是否对结果产生影响。
选择性试验是通过测定其他可能存在的相关物质浓度，确定是否与目标物质有影响。
最后，系统适应性主要是验证HPLC仪器和设备的稳定性和可靠性。
系统适应性的验证包括了仪器精度试验和仪器稳定性试验。
精度试验是通过测定标准品溶液的浓度，评估仪器的精度。
稳定性试验是在一定时间范围内，对同一样品进行多次测定，评估仪器的稳定性。
在进行HPLC方法验证时，需要根据相关规范文件，制定详细的验证计划和方案，确保验证方法的全面性和科学性。
高效液相色谱分析技术方法认证和注意事项陈桂良.ppt
检测限
• 非仪器分析目视法(用已知浓度的被测 物，试验出能被可靠地检测出的最低 浓度或量);信噪比法(用于能显示基线 噪音的分析方法，即把已知低浓度试 样测出的信号与空白样品测出的信号 进行比较，算出能被可靠地检测出的 最低浓度或量。一般以信噪比为3∶1 或2∶1时相应浓度或注入仪器的量确 定检测限)。
• 对于①法的要求是：除检测限和精密 度指标不必要求外，对准确度、选择
性、线性与范围、定量限、耐用性等 均应有所要求；
• 对于②法的要求是：只对检测限、选 择性和耐用性三项指标有所要求，其 余均无需要求。
• 用于溶出度测定的方法及药物释 放度测定的方法，只有精密度和 耐用性有所要求，其余项目可不 作要求。
其他影响因素
• 实验条件如避光，pH值或流动相组 份比，温度，衍生化反应时间，进 样温度等要进行论证评估。
灵敏度
• 检测限和定量限，在仪器设置在最 高灵敏度时可检出注入样品的最小 量。最小检出量通常是指分析样品 量产生的响应大于噪声的2~3倍，灵 敏度可用检出限度或定量限度来表 示，检出限度或定量限度越小，该 方法灵敏度越高。
药品质量标准分析方法验证的目的
• 证明采用的方法适合于相应检测要 求。在起草药品质量标准时，分析 方法需经验证；在药物生产方法变 更、制剂的组分变更、原分析方法 进行修订时，则质量标准分析方法 也需进行验证。方法验证过程和结 果均应记载在药品标准起草或修订 说明中。
需验证的分析项目
• 鉴别试验，杂质定量或限度检查， 原料药或制剂中有效成分含量测定， 以及制剂中其他成分(如降解产物、 防腐剂等)的测定。药品溶出度、释 放度等功能检查中，其溶出量等测 试方法也应作必要验证。
色谱条件与系统适用性试验
• 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以0.01mol/ml十二烷基硫酸钠溶液 （用磷酸调节pH值至2.5）-乙腈 （60：40）为流动相；检测波长为 254nm。理论板数按醋酸可的松峰计 算应不低于2500，醋酸可的松峰与 盐酸四环素峰的分离度应不小于3.0。
WATERS高效液相色谱仪验证方案
WATERS高效液相色谱仪验证方案名称：WATERS高效液相色谱仪验证方式：检验设备测试确认验证编号：目录1.设备的基本情况1.1.概述1.2.文件资料1.3.维修服务1.4.基本情况2.验证目的3.职责4.验证内容4.1.安装确认4.2.高压泵4.3.2489紫外检测器4.4.2424蒸发光散射检测器5.再确认6.验证周期7.验证确认8.验证结果确认9.附件1.设备的基本情况1.1.概述本仪器由美国WATERS公司生产，由1525泵、2489紫外检测器、2424蒸发光检测器、1500系列柱温箱及电脑系统组成。
主要用于我公司生产所需的各种原料药、中间体及成品的含量测定。
1.2.文件资料1.3.维修服务供货单位名称：本地维修站联系人：电话：1.4.基本情况2.验证目的为确认高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，能符合检验产品需求，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行。
3.职责QC：负责验证方案的起草及具体实施。
QC负责人：负责按验证方案组织实施验证工作，协助验证方案的起草，组织协调验证工作，总结验证结果，出具验证报告。
质量部经理：负责验证方案和验证报告的审核、以及对验证工作的管理。
负责验证数据及结果的审核，负责验证报告的审批，负责再验证周期的确定。
质量授权人：负责验证方案和验证报告批准。
4.验证内容4.1.安装确认4.2.高压泵4.2.1.流量准确度可执行标准：＜±3%（0.97ml/min～1.03ml/min，以蒸馏水为标准）测试方法：将输液系统、进样器、色谱柱（两通）和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，分别设定1.0、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0ml/min六段，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集10分钟，称重，查表，即得。
4.2.2.流量精确度可执行标准：＜±0.3%（0.997ml/min～1.003ml/min，以蒸馏水为标准）测试方法：将输液系统、进样器、色谱柱（两通）和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，设定流量为1.0ml/min，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集10分钟，称重，查表，即得，共收集5次。
lc20at高效液相色谱仪验证方案
高效液相色谱仪验证方案（一）、验证方案首页(二)、概述型高效液相色谱仪为岛津公司生产的产品，我司在购买前对该产品的性能、价格、外观和售后服务进行了广泛地调查研究，在同类产品中价格适中、性能稳定、美观且售后服务好。
购买该产品的目的是为今后新产品研制、开发、生产。
为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，也为了确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，计划对该仪器进行必要的验证。
(三)、验证目的确认高效液相色谱仪的安装、运行、性能确认符合中国药典标准，为日常检验提供准确的检测结果。
(四)、验证依据及标准《药品生产验证指南》年版《型高效液相色谱仪标准操作规程》7-0002-00《中国药典》年版二部附录(五)、验证判断标准：．安装确认判断标准：仪器应具备的技术资料齐全，仪器安装后符合设计要求。
．运行确认判断标准：安装确认认可后，在不使用试样的条件下，确认该仪器运行正常。
．性能确认判断标准：符合《中国药典》年版二部附录要求。
(六)、验证人员(七)、验证内容、安装确认安装确认所需文件及资料安装场地单项结论：检测人：日期：年月日复核人：日期：年月日运行确认：严格按《高效液相色谱仪标准操作规程》进行操作，对仪器进行运行试验，确认其运转性能，并将检查结果填于下表中。
单项结论：检测人：日期：年月日复核人：日期：年月日．性能确认高压恒流泵3.1.1流量准确度可执行标准：＜±（以蒸馏水为标准）测试方法：将输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，分别设定、、、、和六段，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集分钟，称重，查表，即得。
结论：3.1.2流量精确度可执行标准：＜±（～，以蒸馏水为标准）测试方法：将输液系统、进样器、色谱柱和检测器连接好，以蒸馏水为流动相，将流速稳定后，设定流量为，在流动相排出口用已恒重的比重瓶收集流动相，同时计时收集分钟，结论：3.1.3压力范围可执行标准：±设定值测试方法：在进样阀的出口接一个两通，再将两通的另外一端用的盲管封住。
高效液相色谱仪验证方案
高效液相色谱仪验证方案引言高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，它在药物分析、环境监测、食品安全等领域具有广泛的应用。
为了确保HPLC仪器的准确性和可靠性，以及测试结果的可信度，对HPLC仪器进行验证是非常重要的。
本文将介绍一种高效液相色谱仪验证方案，以确保仪器的正常运行和测试结果的准确性。
1. 验证目的HPLC仪器验证的主要目的是评估仪器是否满足预定的性能要求，包括准确性、精密度和线性范围等指标。
通过验证，可以确保仪器在正常使用过程中能够提供准确和可靠的测试结果，以满足相关的法规和质量标准要求。
2. 验证内容HPLC仪器验证的内容包括以下几个方面：2.1 仪器安装和传感器校准在验证之前，首先需要确保HPLC仪器已正确安装，并且各个传感器和检测器已进行校准。
校准过程应按照仪器的操作手册进行。
2.2 仪器性能参数验证仪器性能参数验证是验证HPLC仪器在运行过程中是否符合规定的性能要求。
主要包括以下几个方面：•准确性验证：通过添加已知浓度的标准溶液，并测定其浓度来评估仪器的准确性。
•精密度验证：通过重复测定同一样品，评估仪器的精密度。
可以使用相对标准偏差（RSD）来评估测量结果的一致性。
•线性范围验证：通过逐渐增加样品浓度，测定仪器的线性范围。
应选取不同浓度的标准溶液进行测试，并绘制曲线来评估仪器的线性关系。
2.3 方法验证方法验证是验证HPLC方法是否可用于定量分析的过程。
主要包括以下几个方面：•特异性验证：通过检测样品中其他成分的干扰来评估方法的特异性。
可以使用纯溶液和样品添加物进行测试。
•精密度和重复性验证：通过重复测定同一样品，评估方法的精密度和重复性。
可以使用RSD来评估测量结果的一致性。
•准确性验证：通过添加已知浓度的标准溶液，并测定其浓度来评估方法的准确性。
3. 验证计划为了有效进行HPLC仪器的验证，需要制定详细的验证计划。
验证计划应包括以下几个方面：3.1 验证目标和范围明确验证的目标和范围，确定需要验证的仪器性能参数和方法。
高效液相测甘草酸释放量的可靠性评价及验证方法探索
高效液相测甘草酸释放量的可靠性评价及验证方法探索一、引言甘草酸是一种天然的药物成分，具有广泛的药理作用和临床应用价值。
在制药领域中，准确测定甘草酸的释放量对于药物质量控制非常重要。
本文将探索高效液相法测定甘草酸释放量的可靠性评价和验证方法。
二、方法1. 准备样品首先，收集不同批次的含有甘草酸的样品。
将样品粉碎并均匀混合，取样量一致。
2. 高效液相测定采用高效液相色谱仪进行甘草酸的测定。
优化色谱条件，选取适当的柱和流动相。
设置合适的检测波长，并根据样品特性确定合适的进样量和检测时间。
3. 可靠性评价为了评估高效液相测定甘草酸释放量的可靠性，我们可以采取以下措施：- 重复性：在相同的条件下，重复测试同一批次的样品。
重复测定应该具有较小的变异系数，以确保测定结果的稳定性。
- 中间精确度：在不同的实验室和不同的操作员之间进行测试，并计算出不同实验室之间的变异系数，以评估该方法的可重复性和可移植性。
- 限制的可靠性：确定方法的检测限和定量限，并评估测定结果的精确度和准确度。
4. 验证方法对于高效液相测定法，我们还应该进行方法的验证，以确保其可靠性和准确性。
主要的验证参数包括：- 线性范围：确定甘草酸浓度的线性范围，验证方法是否适用于不同浓度的样品。
- 精密度：通过重复测定同一样品的甘草酸含量，评估方法的精密度。
- 准确度：将高效液相测定结果与参考方法进行比较，评估方法的准确度。
- 选择性：测试其他可能存在的干扰物质对甘草酸测定的影响，并评估方法对干扰物质的选择性。
三、结果分析根据可靠性评价和验证方法的结果，我们可以获得高效液相测定甘草酸释放量的可靠性评价和验证结果。
通过重复性和中间精确度的评估，我们可以得到测定结果的稳定性和可重复性。
通过限制的可靠性评价，我们可以判定高效液相测定法的精确度和准确度。
四、结论本研究探索了高效液相测定甘草酸释放量的可靠性评价和验证方法。
通过评估重复性、中间精确度和限制的可靠性，我们可以验证该方法的可靠性。
岛津高效液相色谱仪验证方案
岛津高效液相色谱仪验证方案一、引言高效液相色谱仪是一种广泛应用的分析仪器，用于分离、鉴定和测定复杂混合物中的化合物。
为确保色谱仪的准确性和可靠性，在购买和使用新仪器之前，需要进行一系列的验证实验。
本文将提出一种岛津高效液相色谱仪的验证方案。
二、验证目标1.确保色谱仪的性能符合规格要求。
2.验证色谱仪的方法准确性和可靠性。
3.验证色谱仪的稳定性和重复性。
三、验证项目1.系统准确性验证：通过使用标准物质进行色谱分析，验证色谱仪的峰面积准确性和重复性。
选择具有不同保留时间和峰面积的标准物质，进行3次测定，计算相对标准偏差（RSD），要求在规定范围内。
2.方法准确性和可靠性验证：使用已验证的方法，分析已知浓度的化合物，通过计算回收率和相对误差，评估方法的准确性和可靠性。
要求回收率在90-110%之间，相对误差在±2%之内。
3.仪器稳定性验证：将标准物质连续注入色谱仪，连续分析5次，观察峰形和峰面积是否保持稳定，计算相对标准偏差（RSD），要求在规定范围内。
4.重复性验证：使用相同条件下的标准物质进行多批次分析，通过计算相对标准偏差（RSD），评估色谱仪的重复性。
要求RSD在规定范围内。
四、验证步骤1.系统准确性验证：a.准备不同浓度的标准物质溶液。
b.通过色谱仪进行测定，重复3次。
c.计算每个峰的相对标准偏差（RSD）。
2.方法准确性和可靠性验证：a.选择已知浓度的化合物，准备标准品溶液。
b.通过已验证的方法进行测定，重复3次。
c.计算每个峰的回收率和相对误差。
3.仪器稳定性验证：a.选择一个相对稳定并具有较大信号的峰，通过连续注入标准物质进行测定，重复5次。
b.观察峰形和峰面积的变化，计算每个峰的相对标准偏差（RSD）。
4.重复性验证：a.准备多批次的标准物质溶液。
b.通过相同条件进行测定，重复3次。
c.计算每个峰的相对标准偏差（RSD）。
五、结果分析通过对上述验证项目的实验数据进行分析，得出以下结论：1.系统准确性验证结果：峰面积的相对标准偏差在规定范围内，说明色谱仪具有良好的峰面积准确性和重复性。
LC-20ATvp高效液相色谱仪验证方案
LC-20A高效液相色谱仪验证方案1.主题内容与适用范围本方案规定了LC-20A高效液相色谱仪验证的内容、过程和方法。
本方案适用于LC-20A高效液相色谱仪验证。
2.相关文件《岛津LC-20A高效液相色谱仪使用说明书》《中国药典》2010年版二部《药品检验仪器操作规程》2010年版岛津LC-20A高效液相色谱仪的操作及维护保养SOP编号：EMO-R353.验证目的为确认LC-20A高效液相色谱仪能够达到仪器性能指标，能符合检验产品需求，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。
4.职责5.验证内容与方法.预确认.设备基本情况本仪器由日本岛津公司生产，由2台LC-20AT泵、1台SPD-20A检测器、1台CBM-20A控制器,1台CTO-10ASvp柱温箱，岛津LC solution双通道色谱工作站组成。
主要用于各种进厂原料、成品药的含量测定及新方法的开发及其验证。
设备名称：高效液相色谱仪型号：LC-20A生产厂家：日本岛津公司安装日期：2008.4使用部门：研究开发中心.安装确认项目要求：充分通风，附近无火源（当使用易燃或有毒的溶剂作为流动相时，房间应充分通风；当使用易燃溶液时，严禁室内使用明火或其它火源）；安装场所环境温度4-35℃，日温度变化要小（不超过2℃）；湿度保持在45～85%，无灰尘及腐蚀性气体；没有阳光直射、远离强磁场及振源、安有空调；电源功率220±10V，50HZ；供电电源应有良好的接地；线路连接各接口连接正确；管线连接各接口连接正确。
5.2.硬件认证硬件认证检查LC系统是否运转正常，仪器是否适用于准备进行的分析，在LC安装、操作和性能鉴定过中进行认证，此后还要定期检查，随着时间的推移，由于易损部件的磨损，LC系统的性能会下降。
因此，从系统安装时起直到系统报废时止，必须定期进行硬件认证。
.柱温箱温度准确度检查检查温度是否控制在设定的温度，特别是，测量柱箱内部热传感器附近的温度，并与设定温度相比较。
LC20AT高效液相色谱仪验证方案设计
LC20AT高效液相色谱仪验证方案设计为了验证LC20AT高效液相色谱仪（HPLC）的性能和可靠性，可以设计以下验证方案：1.仪器准备验证：首先确认LC20ATHPLC仪器是否符合规范要求。
检查仪器是否完好无损，关键部件的性能是否正常，仪器是否校准和清洁。
2.色谱柱验证：选取一种合适的色谱柱，通过检查其尺寸、填充物、理论板数、分辨率和重复性等参数来验证色谱柱的性能。
3.峰对称性验证：选择一个相关的测试样品并进行注射，用于评估仪器在高效液相色谱过程中峰的对称性。
检查主峰和杂质峰的形状和峰宽，确保峰对称性符合规定要求。
4.峰面积准确性验证：使用一个已知浓度的标准溶液，进行一系列稀释操作，然后使用LC20ATHPLC测定其峰面积。
通过比较实测峰面积和理论峰面积的差异，评估LC20ATHPLC的峰面积准确性。
5.精密度和重复性验证：使用相同的样品，连续进行多次测定，评估LC20ATHPLC测定结果的精密度和重复性。
计算相对标准偏差（RSD）以评估仪器的稳定性和重复性。
6.线性范围验证：选择一个适当的标准物质，制备一系列不同浓度的标准溶液。
使用LC20ATHPLC测定各个浓度的标样，并绘制峰面积与浓度之间的线性关系图。
通过计算相关系数和回归方程来评估仪器的线性范围。
7.灵敏度验证：使用一个已知浓度的标准物质，逐渐提高浓度，并记录检测到的最低浓度。
通过计算信噪比和限制检测限（LOD）和定量限（LOQ）来评估LC20ATHPLC的灵敏度。
8.方法适用性验证：进行一项适用性验证实验，使用LC20ATHPLC测定真实样品中的目标成分，并与已知方法进行比较。
通过比较结果的准确性和一致性来评估该仪器的方法适用性。
9.数据系统验证：验证LC20ATHPLC所使用的数据分析和处理软件的准确性、稳定性和可靠性。
包括数据导入和导出、结果计算和报告生成等功能。
10.系统适应性验证：对LC20ATHPLC进行一系列系统适应性验证，例如温度影响、流速影响、流量调节等。
HPLC方法验证
HPLC方法验证高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于药物、食品、环境、生物和化学分析等领域的分离和定性定量分析方法。
HPLC方法验证是确保所采用的分析方法能够稳定、准确地进行分析的过程。
下面将以1200字以上的篇幅介绍HPLC方法验证的步骤、参数和标准。
HPLC方法验证通常包括以下步骤：系统适应性、选择性、线性性、准确性、精密度和重复性。
首先是系统适应性验证，目的是确保所选的HPLC系统可以满足所需的分析要求。
这一步骤通常涉及校准和校准曲线的建立，通过检查稳定性、重复性和灵敏度等参数来评估系统的性能。
选择性验证是指检测方法对目标分析物的选择性，确保所选择的分析方法能够清楚地分离目标分析物，而不会受到其他干扰物的影响。
这通常涉及方法的优化和杂质检测。
线性性验证是评估方法在一定浓度范围内的线性关系，即样品浓度与峰面积的关系。
这一步骤涉及建立标准曲线，并通过回归分析来评估方法的线性性。
准确性验证是确定方法对目标分析物的准确性和恢复率。
这通常涉及测量已知浓度的标准样品，并与理论值进行比较，以确定方法的准确性。
精密度和重复性验证是评估方法在同一实验室内和不同实验室之间的可重复性和精密度。
这一步骤涉及对同一样品的重复测量，并计算相对标准偏差（RSD）。
在HPLC方法验证中，除了上述步骤外，还需要根据相关准则和标准来设计验证实验，并记录和分析实验结果。
例如，美国食品药品管理局（FDA）和国际药典（USP）提供了一些关于HPLC方法验证的指南和标准，如FDA的ICHQ2(R1)和USP1225章节。
根据这些准则和标准，HPLC方法验证需要满足一些特定的参数和标准。
例如，在线性性验证中，通常要求相关系数（r）大于等于0.99，而在准确性验证中，通常要求恢复率在80%至120%之间。
精密度和重复性验证通常要求相对标准偏差（RSD）不超过2%或2.5%。
高效液相色谱法检验方法
分发部门：1 目的建立高效液相色谱法检验程序2 范围本程序适用于高效液相色谱法检验标准操作3 职责3.1QC人员：严格按本程序操作3.2QC主管：严格按本程序检查4 内容4.1 定义及概述4.1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。
由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。
4.1.2 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。
有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。
常用的色谱柱填充剂有：硅胶用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱离子交换填料，用于离子交换色谱，是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。
4.1.3 仪器的组成和一般要求：4.1.3.1 仪器的组成：高压输液泵、色谱柱、检测器、积分仪、打印机。
4.1.3.2 对仪器的一般要求：——所用的仪器为高效液相色谱仪。
色谱柱的填充剂和流动相的组分按各品种项下的规定。
常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学健合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂用于分子排阻色谱等。
除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。
——在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法项下对溶剂的要求。
（紫外分光光度法项下对溶剂的要求：用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白（即空白光路中不置任何物质），测定其吸收度。
高效液相验证方案
注：以上人员签字后方可实施本草案高效液相色谱仪验证方案目录1.0再确认目的2.0再确认项目及结果2.1 仪器各单元开机性能确认2.2 四元泵的确认2.2.1 泵流量的确认2.2.2 梯度准确度的确认2.3自动进样器确认2.3.1进样器精密度的确认2.3.2进样器线性的确认2.4检测器确认2.4.1波长准确度测试2.4.2 检测器线性的确认2.4.3 最小检测浓度的确认第1页共5页高效液相色谱仪再确认方案1.0再确认目的通过验证来确认此台仪器各项性能是否符合要求。
2.0再确认项目2.1仪器各单元开机性能确认2.2 四元泵的确认 2.2.1 泵流量的确认2.2.1.1 测试条件：流动相：超纯水 色谱柱：4.6mm ×250mm 温度：室温 2.2.1.2 测试方法：启动仪器，以水为流动相，待压力稳定后，在流动相出口处用称重过的10ml 容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集5分钟流出的流动相，精密称定，每个流速测定3次，记录测试温度，按下式计算流量设定值误差Ss 和流量稳定性误差S R 。
%100)(⨯-=S S m S F F F S %100)(min max ⨯-=m R F F F S式中：F m ——F m =（W 2－W 1）/（ρ·t ），流量实测值，ml/min ；W 2——容量瓶＋流动相的质量，g ； W 1——容量瓶的质量，g ；ρ——试验温度下水的密度，g/ml ；t ——收集流动相的时间，min ；m F ——同一组测量值的算术平均值，ml/min ；F s ——流量设定值，ml/min ；F max ——同一组测量中流量最大值，ml/min ；第2页 共5页F min ——同一组测量中流量最小值，ml/min 。
2.2.1.3 测试标准：2.2.2 梯度准确度的确认2.2.2.1测试条件：流动相：0.3%丙酮-水检测波长：254nm流速：1.000ml/min 柱温：30℃2.2.2.2 测试方法：按下表设置梯度洗脱程序，以两通代替色谱柱连接管路，先用超纯水冲洗系统，待基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。
高效液相检定方法
LC-10AD型高效液相色谱仪检定规程1.适用范围适用于岛津LC-10AD型高效液相色谱仪的检定。
2.职责检验员：严格按照检定规程进行周期检定。
QC主管：监督检查检定规程执行情况。
3.检定项目和技术要求3.1.输液系统3.1.1.泵流量设定值误差：Ss＜±2%；流量稳定性误差：＜±2%3.1.2.定性测量重复性误差（5次定量管进样）：RSD≤1.5%3.1.3.定量测量重复性误差（5次定量管进样）：RSD≤1.5%3.2.紫外检测器性能3.2.1.可调波长紫外—可见光检测器波长示值误差：＜±2nm；重复性误差：＜±1nm3.2.2.基线漂移：≤5×10-3（AU/h）；基线噪声：≤5×10-4(AU)3.2.3.最小检定浓度（静态）：4×10-8g/ml（萘的甲醇溶液）4.检定条件4.1.环境温度为10～30℃，8小时内温度波动不超过±3℃，相对湿度低于65%。
4.2.电源电压：220±22V，电源频率：50±0.5Hz。
4.3.检定设备4.3.1.秒表：分度值小于0.1s。
4.3.2.分析天平：最大称量200g，最小分度值0.1mg。
4.3.3.容量瓶4.3.4.微量注射器4.3.5.标准物质和试剂5.检定方法5.1.泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差S R的检定。
将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为液动相，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10～25分钟，称重，按下式计算Ss和S R。
Ss=（Fm—Fs）/Fs×100%S R=（Fmax—Fmin）/F×100%式中Ss为流量设定值误差（%）；Fm=（W2—W1）ρt·t为流量实测值；W2：容量瓶+流动相的重量（g）；W1：容量瓶的重量（g）；Fs：流量设定值（ml/min）；ρt：实验温度下流动相的密度（g/cm3）；t：收集流动相的时间（min）；S R：流量稳定性误差（%）；Fmax：同一组测量中流量最大值（ml/min）；Fmin：同一组测量中流量最小值（ml/min）；F：同一组测量中的算术平均值（ml/min）。
HPLC验证方案
HPLC验证方案HPLC（高效液相色谱）是一种常用的分析测试技术，广泛应用于各个行业，包括制药、化工、环境监测、食品安全等领域。
为了确保HPLC的可靠性和准确性，需要进行验证实验。
1.仪器验证：验证仪器的性能是否符合要求。
包括泵的流量准确性、进样系统的精密度和准确性、检测器的灵敏度和线性度等方面。
可以使用标准样品进行验证，比较测试结果与标准结果的偏差。
2.HPLC柱验证：验证柱的性能是否符合要求。
柱的选择对于HPLC分析测试非常重要，柱的质量直接影响分析结果的准确性和重复性。
柱验证可以通过一系列的测试来完成，比如测试分离效果、压力、回收率等指标。
3.方法验证：验证分析方法的准确性和可靠性。
分析方法验证是确保分析结果的准确性和可靠性的重要环节。
常用的方法验证包括线性性、准确性、精密度、重复性、特异性、检出限和定量限等。
4.校准曲线的建立：建立标准曲线，用于定量分析未知样品。
标准曲线是通过一系列已知浓度的标准溶液测定其响应后得到的，可以用于测定未知样品的浓度。
5.系统适用性：检验该分析方法对所需测定物质的准确性和可靠性。
可以进行类似方法验证的测试，比如线性性、准确性、精密度等。
6.选择合适的峰区和背景区：峰区应选在不邻近拐点和峰尾上升区域，以避免与其他成分重叠；背景区应选在物质浓度较低处，以避免与干扰物质重叠。
以上是HPLC验证方案的主要内容，具体实施时需要根据实际情况进行调整。
验证实验的结果应进行分析和总结，确保验证结果的可靠性和准确性。
并且，验证实验应定期进行，以便及时发现和解决问题，确保测试的可靠性和准确性。
高效液相色谱仪验证方案与报告
文件编码：立项部门立项题目验证要求及目的检验仪器与方法验证小组LC-05P 高效液相色谱仪验证方案申请日期类别年月日检验仪器为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设置的性能指标，对该仪器进行必要的验证。
立项部门负责人签名：年月日主管部门意见签名：年月日生产技术部门意见签名：年月日品质部意见签名：年月日技术副总意见签名：年月日备注审批程序起部门品质部生产技术部品质部验证领导小组技术副总负责人签名日期年月日年月日年月日年月日年月日备注草批准验证计划1、概述LC-05P 高效液相色谱仪为******分离科学技术公司生产的产品，我司在购买前对该产品的性能、价格、外观和售后服务进行了广泛地调查研究，在同类产品中价格适中、性能稳定、美观且售后服务好。
购买该产品的目的是为今后新产品研制、开辟、生产。
为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，也为了确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，计划对该仪器进行必要的验证。
2、验证目的为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设置的性能指标，对该仪器进行必要的验证。
3、职责分工职务(职称)验证分工姓名所在部门4、验证时间安排验证开始时间：年月日验证结束时间：年月日验证项目名称验证起讫日期负责验证部门参加部门参加部门检验部门验证结果报告概要：说明：位置不够用时可另附页LC－05P 高效液相色谱仪验证人员人员人员人员验证工作LC －05P 高效液相色谱仪验证为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，确认该仪器的各项指标能达到 该仪器所设置的性能指标，对该仪器进行必要的验证。
LC －05P 高效液相色谱仪验证报告当影响仪器的关键性备件等发生重大变化时须进行再验证。
验 证 项 目验证要求及目的验证报告编号验证报告名称有 效 期 至备 注 结论：验证小组负责人签名：验 证 小 组 成 员 会 签生产技术部意见：负责人签名：验证领导小组意见：负责人签名：技术副总意见：签名：备 注：年 月 日年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日 年 月 日年 月 日 年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日该验证项目已按验证方案进行验证，各项验证结果均符合标准要求且对验证报告已审核无误，予以批准。
高效液相色检验方法验证方案
型高效液相色谱仪测定川芎含量检验法验证案文件编号S-YF-013〔01〕起草人英南日期2021年08月26日审核人日期2021年08月31日批准人立新日期2021年08月31日生效日期2021年09月01日验证工程申请单文件编号：SMP.QA-YG-001-01验证工程方案书文件编号：SMP.QA-YG-001-02验证案审批表目录1再确认目的2再确认围3再确认责任4容4.1 概述4.2再确认容4.2.1再确认小组4.2.2 预确认4.2.3 安装确认4.2.4 运行确认4.2.5 性能确认4.2.6 结果分析与评价4.2.7再确认期目的确认经设备确认高效液相，按药典检验法测定生产品种含量，验证其检验结果科学性、准确性、精细性等，满足检验结果正确性需要，有效控制产品质量。
提供必要的文件以证实本设备的操作与所预期的完全一致。
根据本案的验证，确认按检验操作规程操作，能有效的保持本设备于确认状态下，能稳定地、恒定地达成其所预期的功能。
围质量标准、检验操作规程文件的聚集。
验证设备用于含量测定检验法的准确性在标准围验证设备用于含量测定检验法的精细度可靠性验证设备用于含量测定检验法，在设计的围，测试结果与供试品中被测物尝试直接呈正比关系的程度。
验证设备用于含量测定检验法具有专属性。
验证设备用于含量测定检验法在到达一定精细度、准确度和线性时，其测定值上下限在可控围。
验证设备用于含量测定检验法的耐用性。
责任质量管理部负责验证案的起草，申请审批，验证过程的监视、资料的存档，再确认案的执行及再确认结果的评估。
化验室负责实验的操作，原始记录、报告的填写。
验证小组负责验证报告的审核。
容1概述：本设备由P3000高压输液泵和UV3000可变波长紫外/可见分光检测器组成。
P3000高压输液泵是以CPLD技术为核心，由单片机控制的高精细输液泵系统。
它基于全数字的频率发生系统、先进的马达驱动系统及友好的人机显示页面似的该设备的操作及控制很便。
高效液相色谱质检方法
高效液相色谱质检方法
高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于分析和分离化学物质的技术。
以下是一些高效液相色谱质检方法的步骤：
1. 准备样品：将待测样品进行前处理，如过滤、萃取、浓缩等，以确保样品适合进行HPLC 分析。
2. 选择色谱柱：根据待测物质的性质和分离要求选择合适的色谱柱，如反相柱、正相柱、离子交换柱等。
3. 选择流动相：根据待测物质的性质和色谱柱的要求选择合适的流动相，如有机相、水相、缓冲液等。
4. 设定仪器参数：根据色谱柱和流动相的要求设定仪器参数，如流速、柱温、检测波长等。
5. 进样：将待测样品注入HPLC 系统，通常使用微量注射器或自动进样器。
6. 分离和检测：待测物质在色谱柱中进行分离，并通过检测器进行检测。
常用的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、示差折光检测器等。
7. 数据分析：根据检测结果进行数据分析，如计算峰面积、保留时间、分离度等。
高效液相色谱是一种高灵敏度、高分辨率的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域的质量控制和分析检测。
高效液相方法验证资料
HPLC Trouble-shooting
Contaminated solution 溶液受到污染 Bad reagents 不合格的试剂 Carry-over 残留物 Detector Cell 检测池
– Sources of ghost peak：鬼峰的原因
Method Optimization 方法优化
Method Development 方法开发 – HPLC Column 色谱柱
Reversed phase: C18(USP L1), C8(L7) 反相：C18(USP L1), C8(L7) Normal phase: Silica, CN, and NH2 Silica, CN, and NH2 Ion-Exchange: Dionex column 离子交换： Dionex column Ion pair Chromatography: C18/C8/CN 离子对色谱法： C18/C8/CN Size Exclusion Chromatography 排阻色谱法 Chiral separation 手性分离
Simple 简，不复杂 Short 短（时） Sensitive 灵敏 Suitable 适合
Method Development 方法开发 – method optimization sample 方法优化举例
柱 Column: Waters Symmetry C18 4.6 mm x 25 cm, 5 µ m 柱温 Column temperature: 20˚C 流动相 Mobile phase A: 0.01% HAC in water 流动相 Mobile phase B: 0.01% HAC in ACN 流速 Flow Rate: 0.8 mL/min 进样量 Injection Volume: 5 µ L 检测器 Detector: UV at 203 nm
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Method Development – HPLC Column (cont.) 色谱柱
Col mm x 15 cm 4.6 mm x 10 cm
Particle Diameter: 粒径 10 µm, 5 µm, 3.5 µm, 1.8 µm Pore size, Surface area, End capping 孔径，表面积，封尾
Method Development 方法开发
– HPLC Column (cont.)色谱柱
Guard Column 预柱 Column Wash 柱子冲洗 Column Temperature (35 ˚C - 60 ˚C) 柱温 （ 35 ˚C - 60 ˚C ） Column Storage 柱子的储存
Method Development 方法开发 – HPLC Column 色谱柱
Reversed phase: C18(USP L1), C8(L7) 反相：C18(USP L1), C8(L7) Normal phase: Silica, CN, and NH2 Silica, CN, and NH2 Ion-Exchange: Dionex column 离子交换： Dionex column Ion pair Chromatography: C18/C8/CN 离子对色谱法： C18/C8/CN Size Exclusion Chromatography 排阻色谱法 Chiral separation 手性分离
封尾
Method Development 方法开发
– HPLC Mobile Phase 流动相
Strong solvent component: 强溶剂组份 Methanol 甲醇 Acetonitrile 乙腈 Tetrahydrofuran 四氢呋喃 Weak solvent component: 弱溶剂组份 Water 水 Buffer 缓冲液 Diluted acid (0.1% H3PO4)
Method Development 方法开发 – Resource Planning & Gathering 资源计划收集
Solvents and reagents 溶剂和试剂 Placebo materials 安慰剂 Individual formulation components 各个处方成分 Related substance standards 有关物质标准品 API Reference Standards 活性成分标准品 Accelerated stress sample 强降解样品
Method Development 方法开发 – HPLC column selection summary 色谱柱选择：总结
C18 Column: first choice C18柱：首选 Short length: 10 cm or 15 cm 短柱： 10 cm or 15 cm Small diameter: 3.5 µ m or 5 µ m 小的粒径： 3.5 µ m or 5 µ m End-capped
Method Development – HPLC Mobile Phase: Buffer 流动相：缓冲液
Method Development 方法开发 – HPLC Column色谱柱：考考你 ???
Particle Size 粒径Length长度 Expected N 要求 3.5 µm 5 cm 4200 3.5 µm 10 cm ??? 5 µm 25 cm 12000 10 µm 25 cm ??? Particle Size粒径 Length长度 Resolution分离度 3.5 µm 5 cm 1.5 3.5 µm 10 cm ???
Analytical Method Development and Validation
分析方法的建立和验证 28 March 2008
Outline总纲
HPLC Method Development
高效液相方法建立 HPLC Trouble-shooting Guide HPLC问题解答 Method Optimization 方法优化 Method Validation 方法验证 System Suitability Requirements 系统适应性要求 GMP “Mind-set” GMP理念
Method Development 方法开发 – Useful Information 有用的信息
Chemical structure and MW 化学结构和分子量 Solvent solubility 溶剂中的溶解度 pKa and pH solubility 酸性解离常数和PH溶解度 UV spectrum 紫外光谱 Process impurities 工艺杂质 Possible degradation impurities 可能的降解杂质 Literature References 参考文献 MSDS – Material safety data sheets 安全数据表
Method Development – Method Classification 方法开发－分析方法分类 Assay Method 含量方法 Impurity Profile 杂质情况 - Related Substances 有关物质 Chiral Purity 手性纯度 Content Uniformity 含量均一性 Dissolution Cleaning Validation 清洁验证 Identity – Fingerprint 鉴别－指纹 法