脊髓小脑性共济失调3型的临床特征和基因诊断

ＳＡ Ｃ ３为常染色体显性遗传疾病 ， 是一种迟发 、 进展性 的神 经变性疾病 ， 临床 特征有共 济失调 、 构音 障碍 等 ， Ａ Ｃ Ｇ晕 复序列数 目的检测对于基因诊断和症状前诊断是一种 十分有效的方法。
关键词 ： 脊髓小脑性共济失调 ； 常染色体显性遗传 ； 聚合 酶链反应 ； Ａ Ｃ Ｇ重复序列 ； 遗传早现
的类 型 ， 在汉族 人群 的脊 髓 小脑 性 共 济失 调 中约 占 ５ ％ 。Ｓ Ａ ０ Ｃ ３的 临床 表 型 具 有高 度 的遗传 异 质 性 和
患者 。这是 因为 Ｃ Ｇ重复片段所在的等位基 因具 Ａ 有 多态性 的特 点 ］如 果 等位 基 因携 带有 处 于 正 常 ， 与异常之间的 Ｃ Ｇ重复数 目（ Ａ 即所谓带有中间数 目
系图： 图 １ 使用中国遗传咨询网家系图在线绘制 见 （
工具绘 制 ） 。家 系 ２遗 传 家 系 图 ： 图 ２ 使 用 中 国 见 （ 遗传 咨询 网家 系图在线绘 制工 具绘制 ） 。
均为 汉族 ， 中患者 １ 、 系 内正常人 １ 。家 其 ０例 家 ０例 系 １先 证者 （ ） 男 ，８岁 。该 家 系来 自山东 地 ： ｍ６ ， ３ 区， 家族无 近亲 结婚史 。４代 １ ７例成 员 中女 性 患 者 ２例 ， 性患 者 ４例 ， 病年 龄 ２ 男 发 ５～３ ６岁 ， 合 常染 符
ｔ ｔ ｅｌ Ｍ１９中 ， 布 平 板 （ Ｂ液 体 培 养 基 ） ３ ｅ ｌＪ ０ ｎＣ 涂 Ｌ ，７ ２３ ２个 家 系部 分 患 者 Ｓ Ａ Ｃ 扩增 产 物 基 因 ． Ｃ ３Ｐ Ｒ
测序 见 图 １ 图 ２ 图 ３ 、 、 。
℃过夜培养 ， 观察有无菌落。然后挑取不 同白色单 个菌落加入 Ｌ Ｂ液体培养基 中培养 ５ｈ以上 ， 以此菌 液为模板 ， 使用 Ｍ ３４／ ＶＭ（ １ － １－ Ｒ － Ｍ ３ ７碱基序列 ： ７ ４ Ｃ Ｃ Ｃ Ｇ Ｇ Ｔ哪 Ｃ Ｃ Ａ ＴＣ Ｃ Ｇ Ｃ；Ｒ Ｍ 碱 Ｇ Ａ Ｇ Ｃ Ｇ Ａ Ａ Ｖ—
图 １ 家 系 １ 传 家 系 图 遗
注： 第Ⅲ代 ６为家系 １ 先证者 ， 口代表男性 ， ｏ代表女性 ， 涂黑 代表患者 ， 划斜线者代表已死亡
进。髌 阵挛、 阵挛 均 阳性 。双侧 Ｈ ｆ ａｓ 阳 踝 ｏｍ ｎ 征 ｆ 性， 双侧 Ｂ ｂ ｓｉＳ 阳性 ， ａｉ ｋ’ 征 ｎ 余病理征未引出。脑膜 刺激征阴性。家系内其他部分患者可见眼球 内陷、 双侧快速眼震等体征。家系 ２ 先证者（ ６ ， ４ ： Ⅲ ）女 ６ 岁， 该家系来 自山东地区， 患者母亲、 舅舅 、 个弟弟 １ 均有类似症状 ， ４代 １ ４例成员中女性 患者 ２例 ， 男 性患者 ２ ， 例 最高发病年龄 ５ ２岁， 最低发病年龄 ４ ２
中 图分 类 号 ： ７４ Ｒ ４ 文 献 标 志 码 ： Ｂ 文 章 编 号 ：０２２ ６ ２ １ ）９ ）６ －３ １０ — Ｘ（０ １ ４ ４０４０ ６
脊 髓小 脑性共 济失 调是一 种 以肢体 运动协 调 障 碍为 主要特点 的常染色 体显性 遗传疾 病 。基 因学 检 测 是 目前诊 断遗传性 脊髓 小脑 性共济 失调 （Ｃ 的 Ｓ Ａ）
２ 结 果
图 １ 家 系 １先 证 者 Ｐ Ｒ 扩增 产物 异 常基 因测 序 结 果 Ｃ
注 ：Ａ Ｃ Ｇ重复序列数为 ６ ７个
２ １ 部 分患者 琼脂 糖 凝 胶 电泳 结 果 ．
家 系 １先 证
者及 家 系 内其 他 患者 ， 均可 见一 条约 ２０ｂ 因条 ５ ｐ基
带和一条 ４０ｂ ０ ｐ异常基 因条带。因等位基因一条
来 自父 方 ， 条 来 自母 方 ， 系 ｌ先 证 者 为 父 系 遗 一 家
传， 因此 ２０ ｂ 基 因条带来 自等位基 因的母 系基 ５ ｐ 因 ，０ ｐ异 常基 因条 带来 自等位 基 因 的另 一条 父 ４ ０ｂ 系异常基 因。家 系 １正 常人 Ｓ Ａ Ｃ Ｃ ３Ｐ Ｒ产 物均 可见
通讯作者 ６ ４
图２ 家系 ２遗传家 系图
注 ： Ⅲ代 １为先证者 ， 第 口代表男性 ， ｏ代表女性 ， 涂黑者代 表患 者， 划斜线者代表 已死亡
１２ 实验 方法 ．
山东 医药 ２ １ 年第 ５ 卷 第 ４ ０１ ｌ ９期
１２ １ Ｐ Ｒ反 应 ．． Ｃ
使用 ＴＫ Ｒ Ｎ ａ ａ ａＤ Ａ提 取 试 剂 盒
扩增 产 物琼脂 糖 凝 胶 电泳 均 可 见 约 ４ ０ｂ ０ ｐ异 常 条 带 。家 系 ２正 常人 Ｓ Ａ Ｃ Ｃ ３Ｐ Ｒ产物凝 胶 电泳 扩增 条 带 均可见 约 ２０ｂ 右 正常 电泳 条带 ， ５ ｐ左 未见 异 常基 因扩增带 。 ２２ ２个 家 系 患者 发 病 特 点及 部 分 测 序结 果 ．
根据 电泳结果 回收基 因异常条 带 ， 应用 Ｔ Ａ克 隆测 序技术测序 。结 果
例患者和 １ 例症状前患者 ， 均为 Ｓ Ａ Ｃ ３亚型 ， 每代均可发病 ， 男女均可受 累， １ 第 个家系平均发病年 龄 ３ ４岁 ， ２ 第 个
家系平均发病年龄 ４ ８岁。以行走不稳 、 动作笨 拙 、 感觉障碍为主要临床表现 ，Ａ Ｃ Ｇ重 复序列为 ５ ６ 。结论 １～ ７次
约 ２０ｂ 常扩增 条 带 。先 证者 儿子 Ｐ Ｒ产物 电 ５ ｐ正 Ｃ
图 ２ 家 系 １先 证 者 儿 子 Ｐ ＣＲ 扩增 产 物 基 因测 序 图 谱
注 ：Ａ Ｃ Ｇ碱基重复序列数为 １ ３次
ｑ ｔ． ａ ｚ口ｎ ｔ ９ … ● ｑ ｊ‘ … …
泳结果 ， 未见异常 电泳条带。家系 ２ 患者 Ｓ Ａ Ｃ Ｃ ３Ｐ Ｒ
Ｔａ Ｒａ Ｋａ Ｍｉ ｉ ｎ ＢＥＳＴ Ｐｌｓ ｄ ｕ ｉ ｃ ｔｏ Ｋｉ ａ ｍｉ Ｐ ｒｆ ａｉｎ ｉ ｔ Ｖｅ ．２．０ ｒ
（ ｏｅ Ｎ ． Ｄ ８ １ Ｃ ｄ ｏ Ｖ ０ Ａ）提 取 质 粒 。 在 Ａ ＩＰ ＩＭ Ｂ ＲＳ
３３ Ｘ １０ Ｌ型全 自 Ｄ Ａ测序仪上使用 Ｒ 动 Ｎ Ｖ Ｍ引物对 质粒 测序 。
１ 亚型 。家 系 ２患者 症状 相 对较 轻 ， 病 晚 ， 有 种 起 伴 周 围神 经病变 为其 特点 ， 属于第 ３种 亚型 。 关于 Ｓ Ａ Ｃ ３亚 型 发 病 机 制 ， 究 表 明 系 由突 变 研 的 Ｃ Ｇ重 复碱 基 片段 编 码 含 有多 聚 谷 氨 酰胺 片段 Ａ 的蛋 白所 致 病 Ｊ 正 常人 与 患 者 的 主 要 区别 表 现 。 在 Ｃ Ｇ重 复 数 目的不 同 ， 常人 Ｃ Ｇ重 复 数 目一 Ａ 正 Ａ 般为 ｌ ４ ２～ １次 ， 者 ６ ８ 。 国内谢 秋 幼报 道 ， 患 ２— ４次
的 Ｃ Ｇ重 复 片段 ， Ａ 国外 报 道 Ｓ Ａ Ｃ ３一 般 为 ４ ８～５ １ 次 ） 由于 Ｃ Ｇ重 复 片段 的不 稳 定 性 ， 下 一代 ， Ａ 在 中 Ｃ Ｇ重复 易发生 新 的突变发 病 ， 其在 父系 遗传 Ａ 尤 中更 明显 。因此推测 家 系 ２的 Ｉ （ 男性 ，５岁时 去 ３ ７
色体显性遗传规律。先证者体征 ： 构音不清 ， 偶有饮 水呛咳， 向右 注视 时可见 慢眼动 ， 向左 注视 时可见 快
速眼震 。双 上肢 近端 肌 肉 、 双侧 胸 锁 乳 突 肌 明显 萎 缩 ， 上肢肌 力 Ｖ级 ， 下肢肌力 Ⅳ级 。可 见肌 肉束 双 双 颤 。四肢肌 张力 增 高 。指 鼻试 验 、 手 轮替 运 动 均 双 不稳 准 ， 右侧 重 于左侧 。双上 肢肱 二头肌 反射 、 肱三 头肌 反射 均 活跃 ， 下 肢 膝 腱 反 射 、 腱 反 射 均 亢 双 跟
世） 可能携 带有 中间数 目的 Ｃ Ｇ重复 片段 。 Ａ
临床变异性 ， 根据 目前研究 ， 大致分为 ５ 种不同临床
亚型 ， 据此 种 分 型 ， 系 １患 者 病 情 严 重 ， 根 家 发
病 年龄 较早 ， 主要表 现为 小脑 体征 ， 同时伴 有严重 的
锥体系和锥体外系症状 ， 部分患者可见突眼， 属于第
基序 列 ： Ａ Ｇ Ｔ Ｃ Ｔ Ｃ Ａ Ｇ Ｇ Ｇ Ｃ Ｇ Ａ Ａ Ａ Ａ Ａ ｒＴ Ａ Ｃ Ｃ Ａ Ｇ）
引物进行 Ｐ Ｒ扩增 ， Ｃ 电泳检 测 。并 同时 移板 （ Ｂ液 Ｌ
臌
体培养基 ） 挑选 阳性克 隆子进行基 因序列 测定。 ， 将选定 的含 有 阳性 克隆 的单菌落 进行 植菌 ， 利用
山东 医药 ２ １ ０ １年第 ５ 卷第 ４ １ ９期
脊 髓 小 脑性 共 济 失 调 ３型 的临床 特 征 和基 因诊 断
王子 峰 李 连平 曲立 贞 苏 ， ， ， 净 李 季春 曹 ， ， 霞
（ １济 宁 医学院 附属 高唐县人 民 医院 ， 东高唐 ２ ２ ０ ２济南军 区总 医院 ） 山 ５ ８０；
表 １ 。 ３ 讨论
图 ３ 家系 ２先证者 Ｐ Ｒ扩增产物基 因测序 图谱 Ｃ
注 ：Ａ Ｃ Ｇ碱基重 复序列数为 ５ 次 ４
６ ５
２０ ８ ２０ ９ ３０ ０ ３０ １ ３０ ２ ３０ ３ ３０ ４ ３０ ５
见
脊髓小脑性共济失调 ３ 型是 Ｓ Ａ中最为常见 Ｃ
山东 医药 ２ １ ０ １年第 ５ １卷第 ４ ９期
表１ ２个 家系患者发病特点及部分测序结果
（ 大连 宝生 物 工 程 有 限 公 司 提供 ） 取 患 者 静 脉 血 提 中 Ｄ Ａ。Ｓ Ａ Ｎ Ｃ ３亚 型 引物 的 Ｐ Ｒ参 照 文 献 。２ 琼 Ｃ ％ 脂 糖凝 胶 电泳后 紫外灯 下 观察 ．Ｃ Ｐ Ｒ扩 增产 物 ， 现 发 ２个 家 系 Ｓ Ａ Ｃ ３引物 Ｐ Ｒ扩 增 均 发 现异 常条 带 ， Ｃ 考 虑为 ＳＡ Ｃ ３亚 型 。使 用 ＴＫ Ｒ ｇｒｓ ｅ Ｄ Ａ ａ ａ ａＡ ａｏｅＧ ｌ Ｎ Ｐ ｒ ａｏ ｉＶ ｔ２ ０琼 脂糖凝 胶 Ｄ Ａ 回收试 剂盒 ｕｉ ｔ ｎＫｔ ｅ． ． ｉ ｆｉ Ｎ （ 大连宝 生物 工程 有 限公 司 提供 ）回收 Ｄ Ａ。 Ｎ
岁， 平均 发病 年龄 ４ ６岁先证 者 体 征 ： 神志 清 楚 ， 言语 清 晰 ， 颅神 经 检查 未 发现异 常 ， 四肢肌 力 Ｖ级 ， 张 力正 常 ， 日难 证 肌 闭
金标准。近 １ 年来 ， 本研究对其临床特征及基 因诊 断方 面 的特 征进 行 了探 讨 。现报告 如下 。
摘要 ： 目的
方法
研究脊髓小脑性共济失 调 ３型 （ Ｃ ３ 的临床特征 和基 因诊 断方法 ， ＳＡ ） 探讨 Ｓ Ａ Ｃ ３的基 因诊断程序 。 在 ２个家 系内 ４代 ２ 成员 中共榆 出 １ ０例 ０
选取 ２个家 系内患者及家系 内正常人血样 ， 提取基 因组 Ｄ Ａ， Ｎ 应用 Ｓ Ａ Ｃ ３亚 型引物 ， 分别进行 聚合 酶链反应 ，
１２２ Ｐ Ｒ产物克隆及测序 ．． Ｃ
家系 １ 先证者 Ｓ Ａ Ｃ３
引物 Ｐ Ｒ产 物 电泳 结 果 ， 见 ４ ０ｂ Ｃ 可 ０ ｐ大 小 异 常 条 带， 回收此 条 带 Ｄ Ａ进 行 纯 化 。将 已纯 化 Ｐ Ｒ产 Ｎ Ｃ
物使用 ＴＫ Ｒ Ｎ ｉ ｔｎＫｔ ｅ ２０ Ｃ ｄ ｏ ａ ａ ａＤ ＡＬｇ ｉ ｉＶ ｒ ．（ ｏｅ ． ａｏ ． Ｎ Ｄ ０２ 中的 Ｓｌ ｉ 直接和载体 ｐ Ｄ ８Ｔ Ｃ ｄ ６２ ） ｏ ｔｎ Ｉ ｕｏ Ｍ １． （ ｏｅ Ｎ ．Ｄ１ １ 连接 ， ｏ ０ Ａ） 连接 产物 热转 化至 Ｅ ｃｌＣ ｍ ｅ ．ｏｉ ｏ ｐ ．
１ 资料 与方法
征 （ ， 以下 痛觉减 退 ， ＋）Ｔ 双下肢 末 端触 觉减 退 ， 双
侧膝关节以下振动觉减退 ， 双侧腱反射对称减弱 ， 病
理 征未 引出 ， 颈软 ， 膜刺激 征 阴性 。家系 １ 脑 遗传 家
１１ 临床资 料 ．
收集 临床 诊 断为 Ｓ Ａ家 系 ２ Ｃ ０例 ，