1)蛋白质的形成分两个阶段

一、填空

1）蛋白质的形成分两个阶段，第一阶段是：；第二阶段是，其中第二阶段目前尚不清楚其机制。

2）蛋白质修饰的化学途径包括和。

3）蛋白质设计分为基于及全新蛋白质设计或蛋白质从头设计。

4）定位突变可以在蛋白质中。可以进行3类突变：，，替换或取代一个或多个氨基酸残基。

5）设计一个新奇的蛋白质结构的中心问题是。要达到这个目标需要克服的基本障碍是线性聚合链的构象熵。可以采用不同的策略达到这个目标。最主要是使相互作用的强度与数目达到最大。另一个策略是通过共价交叉连接减小折叠的构象熵。

6）根据基因突变技术待点，可将基因突变分为两大类：和。位点特异性突变又可大体分为三种类型：一类是通过寡核苷酸介导的基因突变；第二类是盒式突变或片段取代突变；第三类是。

7）在基因水平上对蛋白质进行改造，按改造的规模和程度可以分为三种：，即个别氨基酸的改变和一整段氨基酸序列的删除、置换或插入；，即蛋白质分子的剪裁，如结构域的拼接；从头设计合成新型蛋白质。

8）蛋白质修饰的化学途径包括功能基团的特异性修饰、。

9）按照结构域分类，将蛋白质的域结构划分为、、、α＋β型结构、无规型/富含二硫键和金属离子型。

10）蛋白质工程的化学方法通常是产生半合成的结构．在此结构中一个天然的多肽与一个人造(或化学修饰)的多肽相缔合。产生这种缔合的方法主要有、产生二硫键、、产生非天然型的共价键连接。

二、名词解释

1）蛋白质工程

2）蛋白质结构域

三、判断

1）由于空间排斥较小，蛋白质的重叠构象比交错构象稳定。（）

2）二硫键的形成需要一个氧化环境，因此它一般并不存在于细胞内蛋白质中，其形成可以稳定蛋白质的三维结构。（）

3）许多蛋白质作为完整的活性分子，是两条以上的多肽链组成，它们各自以独特的一级、二级、三级结构域相互以非共价作用联结，共同构成完整的蛋白质分子。（）4）蛋白质中的螺旋结构有α螺旋、β螺旋、310螺旋和κ螺旋（）

5）计算蛋白质设计包括能量表达、能量优化、残基分类、侧链构象的离散化、功能位点设计、专一性、稳定性及序列空间的稳健性预测等方面内容。（）

6）热力学分析可以用于测量突变蛋白质的热稳定性及化学变化自由能，并可作为构象整体性的检测。X射线晶体学及NMR谱可以直接提供突变蛋白的高分辨率结构及评估结构整体性。（）

7）根据基因突变技术待点，可将基因突变分为两大类：位点特异性突变和随机突变。（）8）设计一个新奇的蛋白质结构的中心问题是设计一个具有稳定及独特的三维结构的序列。要达到这个目标需要克服的基本障碍是线性聚合链的构象熵。可以采用不同的策略达到这个目标。最主要是使相互作用的强度与数目达到最小。另一个策略是通过共价交叉连接增大折叠的构象熵。（）

四、选择

1）下列（）不是蛋白质功能残基的鉴定方法。

A．根据结构信息确定残基的突变

B．随机突变、删除分析等实验方法可用于鉴定功能残基

C．利用蛋白质同源性鉴定功能残基

D．应用气相色谱技术鉴定功能残基

2）按照结构域分类，将蛋白质的域结构划分为（）等。

A.α型结构B．β型结构C．α/β型结构D．α＋β型结构

E．无规型/富含二硫键和金属离子型

3）在蛋白质的各种分离方法中利用其带电性质及带电荷多少的不同分离的方法有（）。

A．离子交换色谱B．电泳技术C．疏水色谱D．双水相萃取

E．亲和色谱

4）在多肽链折叠形成蛋白质的天然结构中的非共价作用力有( )。

A．范德华力B．氢键

C．离子相互作用D．肽键

E．疏水效应

5）蛋白质工程的化学方法通常是产生半合成的结构．在此结构中一个天然的多肽与一个人造(或化学修饰)的多肽相缔合。产生这种缔合的方法主要有（）：A．非共价缔合B．产生二硫键

C．形成肽键D．产生非天然型的共价键连接。

E．酶解反应

五、问答思考题

1）蛋白质突变体的设计包括哪几个步骤？请简述蛋白质设计原理。

2）蛋白质结构的从头设计方法主要有哪些？

3）蛋白质工程改造的策略有哪些？请总结至少三点

4）重组蛋白的表达系统有哪些组成？

5）原核表达系统有什么优点和缺点？真核表达系统的必要性及优势有哪些？

6）蛋白质工程自问世以来，短短十几年的时间，已取得了引人瞩目的进展。请结合你的理解，举例说明什么是蛋白质工程？

7）蛋白质工程的基本步骤可以分为哪五步？一定要对经过改造的蛋白质进行功能性测定吗？

8）蛋白质分离纯化的原则有哪些？主要的分离纯化技术及其依据是什么？

9）葡萄糖异构酶最适pH为碱性，在80℃稳定，而在碱性条件下，80℃时使高果糖浆焦化产生有害物质，反应只能在60℃进行。如果将葡萄糖异构酶分子中酸性氨基酸(Glu 或Asp)集中的区域置换为碱性氨基酸(Arg或Lys)，就可使葡萄糖异构酶的最适pH值变为酸性，即可在高温下进行反应。请结合蛋白质工程，分析如何可以完成此项突变工作。10）Nisin是乳酸球菌分泌的有较强抗菌作用的小分子肽，可用于罐头食品、乳制品、肉制品的保藏。以Nisin为例，说明改变通过蛋白质工程改变氨基酸的序列，对这种食品防腐剂稳定性、溶解度和抑菌谱的影响。