薄层板的制备及应用

薄层板的制备及应用

先将称好的CMC-Na(羧甲基纤维素钠)加入所需水量的8/10,让其充分溶涨后,再加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入.这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短.溶液的浓度0.3-0.7%比较合适，实际操作中0.4％～0.5％最为实用，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时会很紧张，容易出洞.0.5%CMC-Na与水溶涨至充分，搅拌溶涨，如果不好溶涨，可在溶涨前加几滴乙醇，比较好溶，但是尽量不加，因为加入乙醇后使CMC-Na的粘合性降低。需注意：

1）CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几天以后就会变绿，起霉。注意放置时间太长的CMC-Na溶液可能会发黄，而且可能有霉菌出现，绝对不能再使用。

2）如果有抽滤装置可以直接把CMC-Na溶液滤过，就可以不必等它沉淀再取上清液了（还有两个好处一是节省CMC-Na溶液，二是抽滤过的CMC-Na溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来了！）。有个办法过滤CMC-Na溶液，就是在布氏漏斗上平铺薄薄的一层脱脂棉，用蒸馏水润湿脱脂棉，启动真空泵，抽紧后就可以放心大胆的倒CMC-Na溶液了，保证滤过的溶液澄清透明，而且长时间放置不沉淀。

3）CMC-Na是一种高分子材料,而高分子材料的溶解必然都会有一个溶涨、溶解的过程,所以配制的时候,应该将称好的CMC-Na少量的撒在水的表面,让其自然沉降,注意要散开平铺,这样能够充分浸润,

使其溶胀,之后可以置于水浴锅内加热溶解,当然如果不是很急着用的话也完全可以,直接用水泡着放那,估计十天半月的也可以用了.

在CMC-Na的溶解过程中，也可以使用可进行加热操作的磁力搅拌器，大概搅拌5小时，应该可得到满意的效果。而且这样就可以使CMC-Na溶解，并且溶液更澄清。CMC-Na的处理也可进行离心，5000rpm 离心20min。倒出上清液，（非常清，也同时消除了过滤过程中可能发生的污染。）更难能可贵的是，可以收集下面没有充分溶解的CMC-Na。继续加到水中，还可以继续配制。

关于薄层板的要求：

1.载板要求平滑清洁，没有划痕，在使用前可用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净。

2. 怎么样的玻璃算是干净：用洗洁精浸泡也好，用酸浸泡也好，当你觉得洗干净的时候，拿在手上立起来，如果发现水不是呈股流下，而是呈瀑布状态流下，那么说明你的玻璃板已经洗干净了。其实真正洗干净的玻璃，很快就可以晾干的。

3．怎样清洗用过后的薄层板：试着用了洗衣粉、洗洁精，反复洗了数遍，仍然挂水珠。铺制薄层板要求玻璃板干净、整洁、不挂水珠的。建议用洗液泡，如果还解决不了那就只好放弃这块玻璃板了，有说可以用盐酸的。

关于研磨及铺板要求：

1. 硅胶的研磨，当然是一个方向了，可以适量的加入一定量的无水乙醇或丙酮来消泡，也可以适当搅拌后在干净容器内超声，效果

都是不错的。手工铺硅胶的用量一般10*20的约3～4克，硅胶和CMC-Na的用量一般是1：2.8～3，具体根据要铺板子的厚度和CMC-Na 的浓度决定。

2．依据薄层板使用需要，将适量研好的吸附剂倒到薄层板上，先用小锤将吸附剂荡匀，倾斜薄层板，使吸附剂流至薄层板一侧，待吸附剂蓄积一定量后，再反向倾斜薄层板，使吸附剂回流然后是另外两个方向，重复操作，后轻颠几下薄层板即可。

3. 将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。铺板时，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入小气泡。如有需要，可以双手10个指头托住玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶分布匀称。尤其是载板的四个角，容易高出玻璃板其他部位，所以要格外注意。颠好的板，表面看上去要光滑平整，没有气孔。薄层板铺好后一定要放置在平的台面上，否则难保证板面硅胶的厚度均匀。

4. 铺制好的薄层板先让其稍干后,即看不出有明显的水印,放入烘箱内用50度以下的温度鼓风干燥30分钟,再升温干燥至干,注意升温过快在使用的过程中有可能发生起层的现象不利于分离。

关于裂板：

板子会裂口，一则可能是因为硅胶的比例太大，二则可能是板子要在常温下晾干后，才能在烘箱中活化。如果铺完不久就在较高温度下，裂口的几率就比较高的。关于活化出现裂板、爆板的问题，我

从没有遇上过。活化我是这样处理的，不要等到温度达到100度，而是设好温度后就将板子放在干燥箱，然后再通电加热，达到最高温度后停留5分钟左右即可。这样水分是慢慢由内而外散发，而不是由外向内散发，避免了表面成膜，里面还在散发水气，岂有不裂、不爆的道理！

关于展开剂：

分离的样品酸性比较大，一般在展开剂中加酸。加甲酸是因为该样品是酸性的，加酸的量和该物质的酸性成正比关系，加水可能是因为样品是苷类的用酸水做一下缓冲，目的就是让斑点圆滑，不脱尾，展距良好。饱和非常重要，边缘效应很严重的不妨用下端浸在展开剂中的滤纸上，贴在展开缸的内壁，这样饱和效果会好一些。

1）在层析缸口涂适量凡士林，增加密封性；

2）以展开剂边缘效应的大小，确定展开剂平衡时间的长短，一般平衡时间在30分钟即可。

3）展开剂比如氯仿：甲醇：氨水（10:1:0.6），有机溶剂的极性，甲醇>氯仿，因此在这个展开剂中，如果极性略大，可适当降低甲醇比例；如极性太小，可适当增大甲醇比例。氯仿：甲醇：氨水10:1:0.6 和20：2：1.2 极性肯定是相同的。另外还有一个问题，这个展开剂中，甲醇用量较小，而甲醇又易挥发，容易产生边缘效应，要特别注意展开剂的平衡和层析缸的密封。不同的展开系统意思是其中至少应该有一种溶剂不同（最好是不同类组的溶剂），而不是比例不同。或者使用不同的固定相。

关于点样：

点样管点样时食指放在其上端，当点样管的下端与硅胶板接触的瞬间轻轻松动上端的食指，溶液自然从点样管出来，迅速提起点样管，就这样反复操作点出的斑点既小又均匀。但要提出样品溶液不能太浓，浓度太大，点下的样品不能被硅胶很好的吸收，不利于分离。

便宜的进样器（大约10几块钱吧，10μl即可），可将针尖打磨圆滑，用锉一点一点锉，这样点样的时候样品溶液不容易沿针尖上行（甲醇溶液都这样），并且针尖不会刺破已经铺好的薄层板。当然，点样的时候手不能抖动。动作要轻，这些要领在于意会，逐渐锻炼。要磨平微量进样器的针尖，简单的方法就是，在展开缸的盖子上轻磨（当然是靠近中间部分），就很快能解决问题，且很平滑。

关于展开：

TLC中样品拖尾现象是什么原因，该如何解决?TLC中样品跑成几乎为一条线,斑点没有清晰的分离,这是什么原因造成的，一般情况下该如何解决?

造成问题的原因基本相同： a、对于一些具有酸碱性的化学成分，在溶液中部分电离，事实上展开时存在分子、离子两种状态，以中性的有机试剂展开必然会出现两种层析行为，造成脱尾甚至是一条线。

b、展开剂选择不当

c、点样量过大。

样品超载解决办法：a、在展开剂中加几滴甲酸或冰醋酸； b、展开时以氨水饱和 c、减少点样量 d、参考文献，调整展开剂种类比例。

二次展开是依据样品定的，但肯定要在第一次展开后，将板晾干或吹干，再放入另一种展开剂中展开，有的样品二次展开还要换展开方向，和原方向垂直。所以要以实际分离样品需要而定。一般是因为样品成分多，极性差别大。

关于显色：

在工作中研究过用硫酸乙醇显色作定量分析的品种，但凡加了CMC-Na的板都易糊，尤其是温度高于100度时，要严格控制加热显色的时间。后改用不加CMC-Na辅的水板来作，就不会有烘糊现象，故也可推论CMC-Na易于与硫酸起糊化反应。感觉辅水板关键是硅胶G与水的比例要达1：3.5左右，而且研磨后要尽快涂布，不然易于凝固而难于涂布。但不加CMC-Na辅的板又太软，点样时容易点出洞，有个好办法是将CMC-Na的浓度调至0.1%，这样就不易烘黑的。

附：

1. 吸附层析的基本原理是什么？

吸附层析是将吸附剂涂布于玻璃板或金属板上成为一薄层（0.25～1mm），待分离的试液点在薄层的一端，离边缘一定距离处，然后在层析缸中用适宜的展开剂展开。由于吸附剂对不同物质具有不同的吸附能力，因此当展开剂流过时，不同物质就在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附，解吸，再吸附，再解吸。吸附力强的物质相对地移动得慢些，吸附力较弱的物质则相对地移动得快些，这样经适当时间后，试样组分就彼此相互分离了。

2. 薄层板的涂布要求是什么，为什么要这样做？

首先制备薄层板所用的玻璃板必须表面光滑，洁净不带油腻，并晾干。然后在硅胶G中加入适量的蒸馏水研磨成均匀无气泡的薄浆状溶液，迅速倒在玻璃板上，随即轻轻摇动玻板，把硅胶涂布均匀，使它无气泡，并保持在水平位置上阴干，若涂布不均匀或有气泡，待干燥后，就会产生高低不平，或在活化时气泡破裂，形成小空洞，这样都影响展开和分离。

3. 薄层板为何要进行“活化”？

吸附剂的活性和含水量有密切关系，含水较多，吸附能力就大为减弱，因此通常总把吸附剂在一定温度下烘一定时间，以驱除水分，增强吸附能力，改善薄层板的分离效果，即所谓的“活化”。

4. 点样的要求是什么，为什么要这样做？

点样时用玻璃毛细管吸取试液适量，垂直地轻微接触薄层板表面（注意防止损坏硅胶层）。样品溶液扩展开来的斑点直径应小于5mm，二相邻斑点中心间距应大于15mm。若斑点易扩散，则可先点上少许试液，待斑点干后，再点第二次，因为点样斑点大，会引起分离后的斑点扩散，影响展开后的分离度。若二斑点中心间距太小，展开中可能产生相邻斑点的相互重叠。点样点的起始线应在距玻璃板底边2cm处，防止因点样太低而原点直接浸入展开剂中。点样斑点离板边距离应大于1.5cm，否则会因边缘溶剂的挥发，使斑点随之偏离而产生边缘效应。

5. 层析缸为何要先用展开剂饱和？

若层析缸未先为展开剂饱和，则由于展开剂中各种溶剂的挥发度不同，在层析过程中，随着展开剂的不断挥发，会使缸内展开剂组成不断改变，而使展开剂的极性发生改变，从而使各种组分的R

值发生改变，分离受到影响。

f

附:

实验方法与步骤

1.薄层板的制备

（1）硅胶（G）薄层板的制备

【调浆】取硅胶G或硅胶GF（吸附剂）1份，置烧杯中加水约5份混合成均匀的膏状.

【涂布】用药匙取一定量，分别倒在一定大小、洁净、干燥的玻璃板上（或倒入涂布器中，调节涂布器的高度，推动涂布），均匀涂布成0.25-0.5 mm厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀。

【干燥】室温下在水平位置放置，待薄层发白近干。

【活化】将凉干的薄层板置于烘箱中105℃活化0.5-1 h，冷后贮于干燥器内备用。活化温度和时间可依需要调整，一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。

本实验采用下述简易操作涂布薄层：取表面光滑，直径统一的玻璃一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在玻璃棒两端套上厚度为0.3-1 mm的塑料圈或金属环，并在玻璃棒一端一定距离处套上较厚的塑料圈或金属环，以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将吸附剂均均地铺在玻璃板上，匀速向前推动。

铺板的加水量及活化时间

薄层板类型吸附剂：水的量活化温度（℃）活化时间（h）活度

氧化铝G

氧化铝-淀粉硅胶G

硅胶-CMC-Na 硅胶-淀粉

硅藻土1：2

1：2

1：2或1：3

1：2（0.7%CMC-Na液）

1：2

1：2

250

150

105

110

110

105

4

4

0.5

0.5

0.5

0.5

Ⅱ

Ⅲ-Ⅴ

（2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层板的制备

取羧甲基纤维素（粘结剂）0.2 g，溶于25 ml水中，在水浴上加热搅拌使完全溶解，倒入烧杯中，加薄层层析用硅胶（颗粒度10-40 μm的约6-8 g）混合成均匀的稀糊，按照硅胶G薄层涂布法制备薄层，或取0.8 %（羧甲基纤维钠1 0 ml，倒入广口瓶（高约10-12 cm）中，然后逐步加入薄层层析用硅胶3.3 g，不断振摇成均匀的稀糊，把两块载玻片面对面结合在一起，这样每片只有一面与硅胶糊接触，使薄片浸入硅胶稀糊中，然后慢慢取出，分开二块薄片，将未粘附硅胶糊的那一面水平放在一张清洁的纸上，让其自然阴干，105 ℃下活化30 min。冷后置于干燥器内备用。未消耗的硅胶稀糊可贮存在广口瓶内，以供再用。